Intraduktale Lieferung an die Kaninchen Brustdrüse

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, wässrige Lösungen in den Milchgang des Kaninchens zu bringen und die intraduktale Entbindung durch Ultraschallbildgebung zu visualisieren. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Brustbiologie zu beantworten, z. B. wie Therapeutika im Vergleich zu anderen Verabreichungsstellen anders mit der duktalen Umgebung der Brust interagieren. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das bildgebende Kontrastreagenz oder alle potenziellen Therapeutika, die untersucht werden sollen, lokal an das Gewebe verabreicht werden können, in dem Brustläsionen auftreten.

Amelia Clark, eine Technikerin in meinem Labor, wird die Technik vorführen. Um mit diesem Verfahren zu beginnen, rasieren Sie vorsichtig den kaudalen Bauch eines betäubten Kaninchens im Bereich um das dritte und vierte Paar der Leistensauger. Nachdem der Großteil der Haare entfernt ist, tragen Sie die Haarentfernungscreme auf die rasierten Stellen auf und entfernen Sie die Creme 10 Minuten nach dem Auftragen mit einem feuchten, mit warmem Wasser angefeuchteten Papiertuch.

Wischen Sie dann den Bereich mit alkoholgetränkten Mullpads ab, um die Injektionsstelle zu reinigen. Legen Sie das Kaninchen auf den Rücken in einen V-förmigen Trog, der mit einer zirkulierenden warmen Wasserdecke in einem saugfähigen Pad ausgekleidet ist. Zur Herstellung des Kontrastmittels rekonstituieren Sie es gemäß den Anweisungen des Herstellers.

Schütteln Sie dann das Fläschchen vorsichtig, um es zu mischen. Das hier verwendete Kontrastmittel ist nach der Rekonstitution vier bis sechs Stunden bei Raumtemperatur stabil. Bei diesem Verfahren wird das dritte und vierte Paar der zu injizierenden Leistensauger lokalisiert.

Laden Sie dann 0,2 Milliliter sterile 0,9-Liter-Kochsalzlösung in eine Ein-Milliliter-Luer-Lock-Tuberkulinspritze mit einer 22-Gauge-Nadel. Entsorgen Sie die 22-Gauge-Nadel, sobald sich die Kochsalzlösung in der Spritze befindet, und ersetzen Sie sie durch eine sterile 25-Gauge-Nadel. Wischen Sie anschließend den Bereich vorsichtig mit 85%igem Isopropylalkohol auf einem Guaze-Pad ab.

Mit der Fase der Nadel nach oben und der Spritze parallel zum Körper des Tieres führen Sie die Nadel in die Seite des Saugers ein und injizieren Sie langsam 0,1 bis 0,2 Milliliter Kochsalzlösung, um eine bessere Visualisierung der Kanalöffnungen zu ermöglichen. Laden Sie anschließend 0,2 Milliliter Injektionslösung in eine Ein-Milliliter-Luer-Lock-Tuberkulinspritze. Halten Sie den Sauger vorsichtig mit Daumen und Zeigefinger fest und heben Sie ihn für die intraduktale Injektion leicht an.

Während Sie die angehobene Position des Saugers beibehalten, kanülieren Sie den interessierenden Kanal vorsichtig mit einer 25-Gauge-Nadel mit stumpfer Spitze. Drehen Sie nach der Kanülierung die Luer-Lock-Spritze vorsichtig auf die Nabe der Infusionsnadel mit stumpfer Spitze, bis sie einrastet. Heben Sie den Sauger an und injizieren Sie die Lösung langsam, um mögliche Schäden durch sich schnell bewegende Flüssigkeiten im Kanal zu minimieren.

Tragen Sie nun eine großzügige Menge zentrifugiertes Ultraschallgel auf die Haut des interessierenden Bereichs auf. Stellen Sie sicher, dass sich keine Blasen im Gel befinden, da diese die Bildqualität beeinträchtigen. Stellen Sie als Nächstes die Abbildungstiefe auf sechs Millimeter ein.

Platzieren Sie den 21-Megahertz-Schallkopf in Kontakt mit dem Gel und scannen Sie den interessierenden Bereich im B-Modus. Beobachten Sie das Kontrastmittel im gescannten Bereich, einschließlich der Kanalöffnung und im gesamten Kanal, um eine erfolgreiche intraduktale Abgabe zu bestätigen. Nehmen Sie dann das Bild auf und speichern Sie es.

Entfernen Sie das Ultraschallgel mit Mullkissen von der Haut des Tieres. Untersuchen Sie anschließend die Injektionsstelle und stellen Sie sicher, dass es keine Anzeichen eines Traumas im Zitzenbereich oder im umgebenden Gewebe gibt. Eine Schwellung im Bereich um den Sauger deutet wahrscheinlich eher auf eine Brustfettpolsterinjektion als auf eine erfolgreiche intraduktale Injektion hin.

Das Kontrastreagenz wird unmittelbar nach der Verabreichung lokalisiert und 30 Minuten nach der Verabreichung und 45 Minuten nach der Entbindung visualisiert. Die Persistenz des Reagenzes im Brustgang ermöglicht eine Visualisierung während der gesamten Dauer dieses Prozesses. Dieses Bild zeigt das äußere Erscheinungsbild nach der intraduktalen Injektion von 0,2 Millilitern Evansblau-Lösung.

Beim Öffnen der Haut ermöglicht Evans-Blau die Visualisierung des gesamten Milchgangbaums und bestätigt die intakte duktale Struktur. Und dieses Bild zeigt das gesamte Aufnahmeexemplar einer Region der Leistendrüse nach der Fixierung und Färbung mit Karminalaun. Sobald diese Technik gemeistert ist, kann sie in etwa 15 Minuten durchgeführt werden, ohne die Zeit, die erforderlich ist, damit die Anästhesie wirken kann.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, den Sauger anzuheben, um die Kanäle während der intraduktalen Entbindung zu begradigen. Befolgen Sie zu jeder Zeit die Tierschutzrichtlinien Ihrer Institution. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden wie fortschrittliche Bildgebung oder Endpunktgewebeanalysen wie eine Lizelle oder Immunhistochemie durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zur Pharmakodynamik oder zu morphologischen Veränderungen auf Gewebeebene zu beantworten, die durch die Verabreichung des Therapeutikums induziert werden.

Nach ihrer Entwicklung ebnet diese Technik Forschern in der Brustbiologie den Weg, um in Zukunft die Verabreichung von bildgebenden Wirkstoffen sowie Therapeutika im Milchgang zu erforschen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine intraduktale Verabreichung an die Brustdrüse des Kaninchens durchführen.