Messung der G-Protein-gekoppelten Rezeptorsignalisierung über radioaktiv markierte GTP-Bindung

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, zelluläre Membranen zu isolieren, die G-Protein-gekoppelte Rezeptoren oder GPCRs enthalten, und die GPCR-Pharmakologie anhand eines funktionellen GTP-Bindungsaufsatzes zu untersuchen. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im Bereich der Biochemie zu den pharmakologischen Eigenschaften etablierter oder verwaister G-Protein-gekoppelter Rezeptoren zu beantworten. Die Hauptvorteile sind, dass es einfach und schnell ist und das nächstgelegene Ereignis in der Signalübertragung von G-Protein-gekoppelten Rezeptoren misst.

Zuerst werden humane embryonale Nierenzellen auf eine 10 Zentimeter große Gewebekulturplatte in 10 Millilitern vollständigem DMEM aufgebracht. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid, bis eine Konfluenz von 70 % bis 80 % erreicht ist. Nach der Inkubation transfizieren Sie die Zellen mit HAMOR1 unter Verwendung eines geeigneten Transfektionsreagenzes gemäß den Richtlinien des Herstellers.