Name: Beurteilung der räumlichen Gedächtnisstörung in einem Mausmodell der traumatischen Gehirnverletzung unter Verwendung eines Radialwasserlaufstreifens (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Lernen Sie die räumliche Gedächtnistestung im Radialwasserlaufstreifen für traumatische Gehirnverletzungen bei Mäusen. Diese schwimmfreie Methode ermöglicht kognitive Bewertung bei Tieren mit motorischen Defiziten.

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Diese Forschung wurde unterstützt durch das Institut für Translational Health Sciences Pilotprojekt Zuschuss Gelegenheit (UL1TR000423), die University of Washington Zentrum für menschliche Entwicklung und Behinderung, und die University of Washington Animal Behavior Core und Brain Imaging Core. Wir möchten Dr. Warren Ladiges für seine Rolle bei der Entwicklung und Verbreitung des ursprünglichen Radial Water Tread Labyrinthdesigns und Protokolls, das hier vorgestellt wird, anerkennen. Wir danken auch Toby Cole für seine Unterstützung bei diesem Projekt.

Alle Verfahren und Tierhandhabung wurden in Übereinstimmung mit den Tierpflege-Richtlinien von den National Institutes of Health und von der University of Washington Animal Care and Use Committee durchgeführt. 1. Chirurgie <ol><li> Anästhesieren Sie die Maus bei 5% Isofluran in einer Induktionskiste bis unbewusst. Bestätigen Sie die Anästhesie durch eine Verringerung der Atemfrequenz und das Fehlen eines Rückzugsreflexes nach Zehensperre. </li><li> Pflegen Sie die Anästhesie über Nasenkegel bei 2-2,5% während der Operation. Überwachen Sie die Atemfrequenz während der Operation, um sicherzustellen, dass die Maus unbewusst bleibt. </li><li> Legen Sie die Maus anfällig auf ein Heizkissen und positionieren Sie die Maus in die stereotaktische Gerät mit Ohrbügel, so dass der Kopf sicher und flach ist. </li><li> Haare aus der Kopfhaut mit Haarentfernungscreme entfernen. Spülen Sie die Kopfhaut gründlich mit Kochsalzlösung. </li><li> Reinigen Sie die chirurgische Stelle mit einem abwechselnden Jod und 70% Ethanol waschen. </li><li> AdministeRa-subkutane Injektion von Lidocain und Bupivacain (1 mg / kg) an der Kopfhaut. </li><li> Mit chirurgischen Scheren, machen eine Längsschnittlinie Einschnitt, und ziehen Sie die Haut, um den Schädel zu enthüllen. </li><li> Mit einer 5 mm Trephinsäge-Vorform eine Kraniotomie über die linke frontoparietale Kortex mit Mittelpunkt bei 2,5 mm hinter Bregma und 2,5 mm links von der Mittellinie. Entfernen Sie vorsichtig den Kreis des Knochens, um das Gehirn freizulegen. </li><li> Stellen Sie das Impaktorgerät auf eine Geschwindigkeit von 6 m / s und 200 ms Verweilzeit ein. </li><li> Positionieren Sie die Impaktor-Vorrichtung, bis die 3 mm konvexe Schlagspitze die Oberfläche des Gehirns bei 2,5 mm hinter Bregma und 2,55 mm links von der Mittellinie leicht berührt. Ziehen Sie die Aufprallspitze ein und senken Sie um 1 mm (Aufpralltiefe). Wenn bereit, schießen Sie das Gerät, wodurch die gewünschte Wirkung. </li><li> Decken Sie die Kraniotomie mit einer sterilen Polypropylen-Scheibe zementiert, um die Haut mit Gewebe Klebstoff zementiert, und Naht der Einschnitt geschlossen. </li><li> Entfernen Sie die Maus aus der Anästhesie und geben Sie die IP-Injektion von BuprEnorphin (0,5 mg / kg). </li><li> Lassen Sie die Maus in einem sauberen Käfig erholen, erwärmt von einem Heizkissen. Die Maus sollte während der nächsten 24 Stunden auf Anzeichen von Schmerzen oder Bedrängnis überwacht werden. HINWEIS: Scheinkontrollen sollten eine identische Behandlung wie oben erhalten, wobei die Schritte 1.8-1.9 weggelassen wurden. </li></ol> 2. Radiale Wasser-Lauffläche Maze Bau <ol><li> Bore 9 Ausstiegslöcher, groß genug, um 1-1 / 2 Zoll ABS DWV SPG x SJ Trap Adapter, in gleichen Intervallen um den Umfang einer 32 Zoll Durchmesser galvanisierten Stahlwanne unterzubringen. Zentrieren Sie diese Austrittslöcher etwa 2-1 / 4 Zoll über dem Boden der Wanne. </li><li> Setzen Sie einen 1-1 / 2 Zoll ABS DWV SPG x SJ Fangadapter in jede der Austrittslöcher und sichern Sie mit den mitgelieferten Ringmuttern. </li><li> Mit Gummistopfen, Kappe acht der neun Ausgänge aus dem Äußeren des Gerätes. Die endgültige, unbeschlossene Ausfahrt dient als Fluchtweg. Es spielt keine Rolle, welcher Ausgang als Fluchtweg bezeichnet wird. </li><li> Befestigen Sie ein 90 ° ABSEllenbogen zum äußeren Ende des verbleibenden Ausstiegs. Die 90 ° -Biegung dient dazu, die Versuchspersonen daran zu hindern, den richtigen Fluchtweg aus dem Inneren des Labyrinths visuell zu bestimmen. </li><li> Konstruieren Sie die Fluchtkiste aus jeder opaken Box, die in der Lage ist, saniert zu werden und ungefähr 30 cm x 15 cm x 15 cm groß zu sein. Schneiden Sie ein Loch auf der Seite der Box, direkt über dem Boden, groß genug, um die 90 ° ABS Ellenbogen unterzubringen. </li><li> Bringen Sie den Fluchtkasten an der Klemmende des 90 ° ABS Ellenbogens an. </li><li> Ziehen Sie den Fluchtkasten (weniger als einen Zoll) über die Oberfläche des Bodens. Dies ermöglicht genügend Platz für ein elektrisches Heizkissen oder eine andere Heizquelle, die unter dem Fluchtkasten platziert werden soll. </li><li> Drucken und Laminieren mindestens 5 einzigartige, visuelle Hinweise. Verwenden Sie einfache, kontrastreiche Bilder, die man leicht aus dem Gerät heraus erkennen kann. Schwarz-Weiß-Clipart-Formen (Dreieck, Quadrat, Kreis) werden empfohlen. </li><li> Mit Magneten, haften die visuellen Hinweise auf die Innenwände derGerät. Cues sollten ungefähr gleich weit entfernt sein, um den Umfang des Gerätes herum. </li></ol> 3. Radiales Wasser-Laufflächen-Labyrinth-Protokoll HINWEIS: Wasser-Labyrinth-Tests sollten erst beginnen, nachdem die chirurgische Stelle geheilt wurde (etwa eine Woche nach der Operation). <ol><li> Vorbereitung zum Testen. <ol><li> Lassen Sie Mäuse mindestens 30 Minuten vor dem Testen auf den Prüfraum einwirken. </li><li> Das Gerät mit einem 70% igen Ethanol-Spray reinigen. </li><li> Füllen Sie das Gerät mit ca. 1 Zoll kaltes (12-14 ° C) Wasser. </li><li> Legen Sie einen elektrischen Heizkissen oder eine andere Heizquelle direkt unter die Fluchtbox. Halten Sie die Fluchtbox dunkel und warm während der Dauer der Prüfung. </li><li> Positionieren Sie eine helle Lichtquelle über das Gerät. HINWEIS: Wenn Sie eine Lampe verwenden, die für die Forschung von Tieren aus dem Gerät selbst sichtbar ist, achten Sie darauf, dass die Lampe in der gleichen Position platziert wirdJeden Tag. Die Lampe selbst könnte ein weiteres visuelles Stichwort für die Mäuse darstellen, um die Fluchtkiste zu finden und sie drastisch von Tag zu Tag zu bewegen, könnte die Ergebnisse komplizieren. </li></ol></li><li> Testprotokoll <ol><li> Entfernen Sie die Maus aus dem Käfig vorsichtig am Schwanz und legen Sie sie in die Mitte des Gerätes. </li><li> Sobald das Tier im Apparat ist, beginnen Sie mit dem Timing. </li><li> Sobald das Tier den richtigen Ausgang gefunden hat und den Escape-Box gefunden / eingegeben hat, stoppen Sie das Timing und notieren Sie die Anzahl der Sekunden, die benötigt werden, um den richtigen Pfad zu finden. </li><li> Wenn das Tier versucht, in ein abschließendes Loch zu klettern und nicht spontan wieder in das Labyrinth nach 10 s zurückzukehren, führen Sie das Tier zurück in die Mitte des Labyrinths von Hand. </li><li> Wenn das Tier den richtigen Weg zur Fluchtbox innerhalb von 3 min (180 s) nicht findet, schätzt man den Prozeß als Ausfall und notiert als 180 s. Führen Sie das Tier sorgfältig auf den richtigen Weg von Hand. </li><li> Erlaube dieMaus, um in der Fluchtbox für eine 1 min zu bleiben, inter-trial Rest. </li><li> Sobald die 1 min Ruhe vergangen ist, entfernen Sie das Tier aus dem Fluchtkasten und kehren Sie zu seinem Hauskäfig zurück. </li><li> Die Fluchtkiste gründlich abwaschen und mit einem 70% igen Ethanol-Spray ausstoßen, um zu verhindern, dass die Maus mit olfaktorischen Cues den richtigen Fluchtweg findet. Dieser Schritt sollte nicht mehr als ein paar Sekunden dauern. </li><li> Bringe die Maus zum Labyrinth für den nächsten Versuch. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 3.2.1-3.2.9, bis die Maus insgesamt drei Versuche abgeschlossen hat, und hat sich entweder dreimal in die Escape-Box gelegt. </li><li> Nach der letzten 1 min Rest, die Maus zu seinem Hauskäfig zurückkehren. </li><li> Ablassen und ersetzen Sie das Wasser in den Apparat zwischen den Tieren, um eine gleichbleibende Temperatur während der Prüfung zu gewährleisten. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 3.2.1-3.2.12 für jede zu testende Maus. </li><li> Am folgenden Tag wiederholen Sie die Vorbereitungsschritte 3.2.1-3.2.5. Achten Sie besonders darauf, dass visuelle Hinweise bleibenIn konsequenten Positionen zwischen Testtagen. </li><li> Testen Sie die Tiere mit dem obigen täglichen Testprotokoll für drei Versuche pro Tag für vier Tage (Trainingsphase), mit einem endgültigen Drei-Test-Test für Speicher-Retention am fünften Tag. Ein sechster Drei-Test-Test (Long Term Memory Retention) kann am zweiten Tag gegeben werden. </li><li> Führen Sie keine Tests zwischen den Testtagen fünf und zwölf durch. </li></ol></li><li> Analyse <ol><li> Wenn eine Maus das Labyrinth in unter 180 s während einer zwei-tägigen Periode nicht abschließen kann ( dh insgesamt aufeinanderfolgende 6 Versuche, die alle auf 180 s gezählt wurden), betrachten Sie die Maus unzureichend durch die Testbedingungen motiviert und entfernen Sie die Analyse. </li><li> Berechnen Sie die mittlere Latenz, um das Labyrinth für jedes Fach durch das Testen des Datums durch Mittelung ihrer drei täglichen Versuche für diesen Tag abzuschließen. </li><li> Erhalten Sie Gruppenunterschiede in der Speichererhaltung mit Standard-T-Tests, um Gruppen am fünften Tag Test und Langzeit-Speicher Testdatum zu vergleichen. Wenn mErz als zwei Gruppen verglichen werden, sollte eine einseitige ANOVA, gefolgt von einer angemessenen Post-Hoc-Analyse (wie Tukey-Test), um jede mögliche Bedeutung zu verfolgen, stattdessen verwendet werden. </li><li> Erwerben Sie Gruppenunterschiede in der Erfassungsperiode (Tage 1-4) durch wiederholte Messungsanalyse der Varianz. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Das hier vorgestellte RWT-Labyrinth-Protokoll unterscheidet erfolgreich zwischen CCI-induzierten TBI-Mäusen und Sham-Kontrollen und stellt eine durchführbare, mauszentrische Alternative zum MWM- und Barnes-Kreis-Labyrinth dar. Während die hier gemeldeten Ergebnisse nur über die Verwendung des RWT-Labyrinths in einem TBI-Mausmodell sprechen, wurde dieses Gerät erfolgreich in alten und transgenen Modellen eingesetzt, bei denen eine stressbedingte Nichteinhaltung durch schwimmende Tests mit dem MWM unpraktisch <sup class="...

Gedächtnisstörungen gehören zu den häufigsten Symptomen, die von Patienten nach traumatischen Hirnverletzungen (TBI) 1 , 2 berichtet wurden . Eine genaue Identifizierung und Bewertung von analogen Speicherdefiziten in Tiermodellen von TBI ist daher für unser Verständnis dieser Bedingung und ihrer Verwaltung unerlässlich. Hier stellen wir ein Protokoll vor, um räumliches Gedächtnis in einem Mausmodell von TBI unter Verwendung eines Radial Water Tread (RWT) Labyrinths zu testen. Dieses Gerät wurde bisher gezeigt, um kognitive Defizite in Mausmodellen von kontrollierten kortikalen Auswirkungen (CCI) -induzierten TBI 3 zu bewerten und stellt eine mögliche Alternative zu Ratten-validierten, schwimmen-basierten Tests der Kognition dar. Die zunehmende Vielfalt und Verfügbarkeit von transgenen Mausmodellen hat zu einer jüngsten Zunahme der Verwendung von Mäusen gegenüber Ratten in der wissenschaftlichen Forschung geführt 4 . Trotz dieser Verschiebung verlassen sich die Forscher weiterhin auf VerhaltensweisenKognitive Aufgaben, die ursprünglich für die Rattengebrauch entworfen und validiert wurden. Die häufigsten Tests, die zur Beurteilung der Erkenntnis bei Mäusen, dem Morris Water Maze (MWM) und dem Barnes Circular Labyrinth verwendet wurden, wurden speziell entworfen, um auf instinktive Verhaltensweisen, die bei Ratten 5 , 6 gefunden wurden, zu profitieren. In Anbetracht der genetischen, neuroethologischen und kognitiven Unterschiede, die zwischen diesen beiden Arten 4 bestehen , ist es nicht überraschend, dass Mäuse sich konsequent diesen Aufgaben unterziehen 7 , 8 . Speziesabhängige Unterschiede in der Prüffähigkeit sind insbesondere bei schwimmenden kognitiven Tests wie dem MWM zu berücksichtigen. Während sowohl Ratten als auch Mäuse kompetente Schwimmer sind, haben Forscher mehrere Mausstämme identifiziert, die bemerkenswert schlecht auf schwimmenden kognitiven Aufgaben 9 , 10 , </Sup&gt; 11 , 12 , 13 . Sogar bei Wildtyp-Tieren übertreffen Ratten in der Regel Mäuse 7 , 8 . Während dies als Spezies-spezifischer Unterschied im Raumgedächtnis interpretiert werden konnte, zeigten analoge Folgeuntersuchungen mit einem Trockenland-Labyrinth keine speziesabhängigen Unterschiede in der kognitiven Leistungsfähigkeit 8 . Eine Reihe von Faktoren, die nicht mit der Erkenntnis in Zusammenhang stehen, könnte für diesen Befund verantwortlich sein, einschließlich artenabhängiger Unterschiede in der Schwimmfähigkeit oder der Suchstrategie. In der Tat zeigen die Faktorenanalyse von mausspezifischen Suchstrategien im MWM, dass nicht-kognitive Faktoren (insbesondere Thigomotaxis und Passivität [ dh Floating]) eine bedeutendere Rolle bei der MWM-Leistung spielen können als das räumliche Lernen 14 . Hier zeigen wir den Einsatz eines kognitiven Tests, der darauf abzielt,Stinktuales Verhalten von Mäusen, und die kein Schwimmen erfordert, um die räumliche Gedächtnisstörung in einem Mausmodell von CCI-induziertem TBI zu messen. Während das RWT-Labyrinth ( Abbildung 1 A-B ) als neuartiges Hybrid aus dem MWM- und Barnes-Kreis-Labyrinth konzipiert wurde, wurde es speziell entworfen, um das thigmotaktische Verhalten instinktiv für die Mäuse 15 , 16 zu nutzen . Die Apparatur besteht aus einer galvanisierten Stahlwanne mit einem Durchmesser von 32 Zoll, in der sich neun gleichmäßig beabstandete Austrittslöcher gebohrt haben. Die Löcher sind 2-1 / 4 Zoll über dem Boden der Wanne zentriert und sind so bemessen, dass sie häufig vorhandene 1-1 / 2 Zoll ABS DWV SPG x SJ Fangadapter passen. Acht der Ausgänge sind von außen verschlossen und bis zu einer Tiefe von 1 Zoll mit Gummistopfen verblendet. Der Neunte ist durch ein 90 ° Acrylnitril-Butadien-Styrol (ABS) -Ellbogen mit einer opaken Plastikbox verbunden, aus der die Maus nach dem Testen leicht entfernt werden kann. Im Laufe einesKurze Erfassungsperiode, wird die Maus trainiert, um die einzigartigen visuellen Cues zu verwenden, die das Labyrinth auskleiden, um diese Fluchtbox zu lokalisieren. Während des Testens wird das Labyrinth mit einem Zoll kaltes Wasser (12-14 ° C) gefüllt, das ausreichend aversiv genug ist, um die Flucht zu fördern, aber nicht tief genug, dass die Maus zum Schwimmen benötigt wird. Das RWT-Labyrinth stellt eine kostengünstige, wartungsarme Alternative zum MWM dar und wurde erfolgreich bei alten und transgenen Mäusen 15 , 17 , 18 , 19 und CCI-induzierten Mausmodellen von TBI 3 eingesetzt . Das hier skizzierte Protokoll stellt eine einfache und effektive Methode zur Messung der räumlichen Gedächtnisstörung dar, die keine Vorverletzungstraining erfordert und sich leicht an die Bedürfnisse eines Forschungslabors anpassen lässt.

<table><tbody><tr><td>35 Gal. Feuergetauchte Stahl-Rundwanne</td><td>Home Depot</td><td>Internet #206638142</td><td>Benötigt: 1</td></tr><tr><td>1-1/2 Zoll ABS DWV SPG x SJ Trap Adapter</td><td>Home Depot</td><td>Internet #100344703, Store SKU #188956</td><td>Benötigt: 9</td></tr><tr><td>1-3/4 Zoll x 1-7/16 Zoll Schwarzer Gummistopfen</td><td>Home Depot</td><td>Internet #100114974 Store SKU #755844</td><td>Benötigt: 8</td></tr><tr><td>1-1/2 Zoll. ABS DWV 90 Degree Hub x Hub Elbow</td><td>Home Depot</td><td>Internet #100346663 Store SKU #188603</td><td>Benötigt: 1</td></tr><tr><td>HDX 10 Gal. Storage Tote</td><td>Home Depot</td><td>Internet #202523587 Store SKU #258804 Store SO SKU #258804</td><td>Benötigt: 1</td></tr><tr><td>Impact One Stereotaxic Impactor für CCI</td><td>Leica Biosystems</td><td>39463920</td><td>Benötigt: 1</td></tr><tr><td>Vernier Stereotaxic mit manuellem Feinantrieb Stereotaxisches Instrument für Kleintiere</td><td>Leica Biosystems</td><td>39463001</td><td>Benötigt: 1</td></tr></tbody></table>

beurteilung der räumlichen gedächtnisstörung in einem mausmodell der traumatischen gehirnverletzung unter verwendung eines radialwasserlaufstreifens

Assessing Spatial Memory Impairment in a Mouse Model of Traumatic Brain Injury Using a Radial Water Tread Maze

Trotz der jüngsten Zunahme der Verwendung von Mausmodellen in der wissenschaftlichen Forschung, Forscher weiterhin kognitive Aufgaben, die ursprünglich entworfen und validiert wurden für Ratte verwenden. Der Radial-Wasser-Schritt (RWT) Labyrinth-Test des Raumgedächtnisses (speziell für Mäuse entworfen und kein Schwimmen erforderlich) wurde bisher gezeigt, um erfolgreich zwischen kontrollierten kortikalen Schlag-induzierten TBI-Mäusen und Scheinkontrollen zu unterscheiden. Hier wird ein ausführliches Protokoll für diese Aufgabe vorgestellt. Das RWT-Labyrinth nutzt die natürliche Tendenz von Mäusen, um offene Flächen zugunsten der Umarmung der Seiten eines Apparates (Thigmotaxis) zu vermeiden. Die Wände des Labyrinths sind mit neun Fluchtlöchern versehen, die über dem Boden des Apparates platziert sind, und Mäuse sind ausgebildet, um visuelle Hinweise zu verwenden, um das Fluchtloch zu finden, das aus dem Labyrinth herausführt. Das Labyrinth ist mit einem Zoll kaltes Wasser gefüllt, genug, um die Flucht zu motivieren, aber nicht tief genug, um zu verlangen, dass die Maus schwimmt. Die Erwerbszeit beträgt nur vier SchulungenTage, mit einem Test der Gedächtnisretention am Tag fünf und ein Langzeitgedächtnistest am Tag 12. Die hier gemeldeten Ergebnisse deuten darauf hin, dass das RWT-Labyrinth eine machbare Alternative zu Ratten-validierten, schwimmenden kognitiven Tests bei der Beurteilung von räumlichen ist Speicherdefizite in Mausmodellen von TBI.

Das RWT-Labyrinth ( Abbildung 1 ) wurde verwendet, um verletzungsabhängige räumliche Gedächtnisdefizite bei Mäusen zu untersuchen, die zufällig zugeordnet wurden, um entweder kontrollierte kortikale Schlag-induzierte TBI- oder Sham-Chirurgie zu erhalten. Die Verletzung erfolgte mit einem solenoidgetriebenen kortikalen Aufprall mit einer 3 mm konvexen Spitze und den folgenden Verletzungsparametern: 6 m / s Schlaggeschwindigkeit, 1 mm Eindringtiefe und 200 ms ...

Hier stellen wir ein Protokoll für einen mausspezifischen Test der Kognition vor, der kein Schwimmen erfordert. Dieser Test kann verwendet werden, um kontrollierte kortikale Auswirkungen-induzierte traumatische Hirnverletzung Mäuse von Scheinkontrollen erfolgreich zu unterscheiden.

Beurteilung der räumlichen Gedächtnisstörung in einem Mausmodell der traumatischen Gehirnverletzung unter Verwendung eines Radialwasserlaufstreifens

Despite the recent increase in use of mouse models in scientific research, researchers continue to use cognitive tasks that were originally designed and ...

Das übergeordnete Ziel dieses radialen Wasser-Tret-Labyrinths-Protokolls besteht darin, das räumliche Gedächtnis in einem Mausmodell einer traumatischen Hirnverletzung mithilfe einer mauszentrierten kognitiven Aufgabe zu testen, die kein Schwimmen erfordert. Diese Methode kann besonders nützlich sein, um die Kognition bei Mausmodellen zu untersuchen, bei denen motorische Defizite und/oder mangelnde Motivation schwimmgestützte kognitive Testverfahren wie das Morris-Wasser-Labyrinth unpraktisch machen. Obwohl diese Methode Einblicke in Gruppenunterschiede und kognitive Leistungen in einem Modell des kontrollierten kortikalen Traumas bei Mäusen ermöglichen könnte, eignet sie sich auch zur Messung der Kognition bei alternden sowie transgenen Mausmodellen, die bekanntermaßen in schwimmgestützten Tests schlecht abschneiden.Führen Sie an allen Testtagen die folgenden Vorbereitungsschritte durch. Lassen Sie die Mäuse zuerst mindestens 30 Minuten lang in ihren Heimkäfigen an den Versuchsraum akklimatisieren. Das runde Labyrinth weist visuelle Hinweise entlang der Innenwände auf.Die bewegliche Fluchtkiste wird an einem von neun verschiedenen Ausgangslöchern positioniert. Während sich die Mäuse akklimatisieren, desinfizieren Sie die Ausgänge und die Kiste mit einem 70 %igen Ethanol-Spray. Füllen Sie anschließend das Labyrinth mit etwa einem Zoll kaltem Wasser.Es ist sehr wichtig, die Wassertemperatur zwischen den Versuchen konstant zu halten. Messen Sie daher genau und passen Sie sie bei Bedarf an. Platzieren Sie nun die Fluchtkiste an einem der neun Ausgangslöcher.Verwenden Sie eine Wärmequelle, um die Box warm zu halten, idealerweise eine Heizplatte. Dichten Sie die Box außerdem gegen Licht ab. Die Fluchtkiste sollte stets dunkel, warm und relativ geruchlos sein.Die Lichtquelle ist ebenfalls wahrscheinlich ein Hinweisreiz, daher sollte ihre Position zwischen den Versuchen nicht verändert werden. Entnehmen Sie die Testmaus vorsichtig am Schwanz aus ihrem Käfig und platzieren Sie sie in die Mitte der Apparatur. Starten Sie dann unverzüglich die Zeitmessung, wie lange es dauert, bis die Maus den Ausgang findet.Wenn eine Maus in ein Endloch klettert und das Labyrinth nach 20 Sekunden nicht spontan erneut betritt, beenden Sie den Versuchsdurchlauf nicht. Leiten Sie die Maus stattdessen von Hand zurück in die Mitte des Labyrinths, und lassen Sie die Maus den Versuchsdurchlauf beenden. Wenn die Maus nach drei Minuten das Labyrinth noch nicht verlassen hat, werten Sie den Versuchsdurchlauf als Fehlschlag aus und notieren Sie die Zeit mit drei Minuten.Dann führen Sie das Tier von Hand vorsichtig entlang des geradesten Weges zum Ausgang. Sobald es sich in der Fluchtkiste befindet, lassen Sie die Maus dort eine Minute lang verweilen. Anschließend bringen Sie sie zurück in ihren Heimkäfig, während das Labyrinth zurückgesetzt wird.Zwischen den Durchläufen das Fluchtkästchen und die Ausgänge gründlich mit einer 70 %igen Ethanol-Spray-Lösung desinfizieren, um zu verhindern, dass die Maus alte olfaktorische Hinweise zur Auffindung des korrekten Fluchtwegs nutzt. Dies kann ziemlich schnell erfolgen. Wiederholen Sie den Durchlauf an derselben Maus noch zweimal, sodass insgesamt drei aufeinanderfolgende Durchläufe durchgeführt werden.Jeder Testtag besteht aus drei Versuchen pro Maus. Nicht mehr und nicht weniger. Zusätzlich zur Desinfektion muss das Labyrinth entleert und das Wasser zwischen den Tests an verschiedenen Mäusen erneuert werden.Stellen Sie sicher, dass die Wassertemperatur zwischen 12 und 14 Grad Celsius liegt. Verwenden Sie Behälter mit Eis oder heißem Wasser mit niedrigerer Temperatur, um die Temperatur des Leitungswassers in diesen Bereich einzustellen. Zwischen den Testtagen ist es wichtig, dass die visuellen Hinweise im Labyrinth und im die Anlage umgebenden Raum unverändert bleiben.Ein vollständiges Testverfahren umfasst fünf aufeinanderfolgende Testtage, die alle auf die gleiche Weise durchgeführt werden. Der fünfte Tag gilt als Maß für die Gedächtnisspeicherung. Sofern zwischen Tag sechs und elf keine Tests durchgeführt werden, kann ein Test am zwölften Tag zur Messung des Langzeitgedächtnisses verwendet werden.Das radiale Wasserlabyrinth wurde verwendet, um verletzungsabhängige Defizite im räumlichen Gedächtnis bei Mäusen zu untersuchen, die entweder eine traumatische Hirnverletzung durch kontrollierten kortikalen Impact oder eine Scheinverletzung erhielten. Die TBI-Chirurgie ist im Textprotokoll und in einem JoVE-Artikel von Romin, Gao und Chen aus dem Jahr 2014 ausführlich beschrieben. Kurz gesagt, wurde die Verletzung mittels eines elektromagnetisch betriebenen kortikalen Impacts mit einer drei Millimeter durchmessenden konvexen Spitze erzeugt.Die Scheinoperationen wurden durchgeführt, aber das Gerät hatte keine Wirkung. 35 Tage nach der Operation wurde das beschriebene Testverfahren durchgeführt. Alle Mäuse bestanden den Kriterientest für das Verlangen, das Labyrinth zu verlassen.Alle wurden somit in die Analyse eingeschlossen. Die Ergebnisse zeigen einen deutlichen Unterschied zwischen den TBI-Mäusen und den Schein-behandelten Kontrollen. Die Fluchtlatenz war bei verletzten Mäusen am ersten Trainingstag sowie an beiden Tagen der Gedächtnistests signifikant länger.Daher beeinträchtigte das beschriebene TBI die Lernfähigkeit des Tieres. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man kognitive Tests mit einem mausspezifischen Test der räumlichen Kognition korrekt durchführt. Sobald die Technik beherrscht ist, kann sie bei richtiger Anwendung in weniger als 15 Minuten pro Tier durchgeführt werden.Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig zu beachten, dass die Positionierung der visuellen Hinweise und die Wassertemperatur über alle Versuche hinweg konstant bleiben müssen.

assessing-spatial-memory-impairment-mouse-model-traumatic-brain

Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Das Morris Water Maze ist ein Verhaltens-Aufgabe Hippocampus-abhängigen Lernen und Gedächtnis zu testen. Es wurde weithin in das Studium der Neurobiologie, Neuropharmakologie und neurokognitiven Störungen in Nagetier-Modelle verwendet.

Morris Water Maze-Test für Lern-und Gedächtnisstörungen bei Alzheimer-Modell Mäuse

In diesem Video beschreiben wir den Morris-Wasserlabyrinth-Test mit Plattformverlagerung, eine Navigationsaufgabe, die zur Untersuchung des Arbeitsgedächtnisses bei Nagetieren verwendet wird.

Das Wasserlabyrinth mit Plattformverlegung: Eine Methode zur Bewertung des Arbeitsgedächtnisses

Das achtarmige radiale Wasserlabyrinth wurde entwickelt, um die Referenz- und Arbeitsgedächtnisleistung gleichzeitig zu bewerten, indem von den Probanden verlangt wird, Extra-Labyrinth-Signale zu verwenden, um Fluchtplattformen zu lokalisieren und die Einschränkungen zu beheben, die bei landgestützten radialen Armlabyrinth-Designs beobachtet wurden.

Verwendung eines achtarmigen radialen Wasserlabyrinths zur Beurteilung des Arbeits- und Referenzgedächtnisses nach einer Hirnverletzung bei Neugeborenen

Um die komorbiden Alzheimer-Krankheit (AD) und Schlaganfall Zustand in einem neuen Modell zu untersuchen, werden drei Verhalten Aufgaben beschrieben, die sowohl die Motorsteuerung und kognitive Verhalten beurteilen. Zu diesen Aufgaben gehören die Strahl zu Fuß Aufgabe, Zylinder Aufgabe und Morris-Wasserlabyrinth.

Motor und Hippokampus-Dependent Spatial Learning und Referenz-Gedächtnis-Bewertung in einem transgenen Mausmodell der Alzheimer-Krankheit mit Schlaganfall

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung einer modifizierten T-maze lernen/Funktionsgedächtnis in Asphyxie Herzstillstand-induzierte zerebraler Ischämie zu bewerten.

Unter Verwendung der modifizierten T-Maze um Funktionsgedächtnis Ergebnisse nach Herzstillstand zu bewerten

Hierin wird ein Protokoll zur Durchführung der Morris-Wasserlabyrinthtests beschrieben, um die Fähigkeit des Lernens und Gedächtnisses von Alzheimer-Modellmäusen zu bewerten und die Wirkung der manuellen Akupunktur für ihre Behandlung zu bewerten.

Analyse der Lern- und Gedächtnisfähigkeit in einem Alzheimer-Mausmodell mit dem Morris Water Maze

Traumatische Hirnverletzungen (TBI) sind häufig mit Gedächtnisstörungen verbunden. Hier stellen wir ein Protokoll zur Bewertung des räumlichen Arbeitsgedächtnisses nach TBI über eine metrische Aufgabe vor. Ein Metriktest ist ein nützliches Werkzeug, um räumliche Arbeitsgedächtnisstörungen nach TBI zu untersuchen.

Ein metrischer Test zur Beurteilung des räumlichen Arbeitsgedächtnisses bei erwachsenen Ratten nach traumatischer Hirnverletzung

In dieser Arbeit stellen wir ein Rattenmodell mit geschlossenem Schädel-Hirn-Trauma (mTBI) und dessen Validierung vor, das eine bemerkenswerte Ähnlichkeit mit dem menschlichen mSHT in Bezug auf Verhaltensmanifestationen während der akuten und subakuten Stadien aufweist.

Rattenmodell für leichte traumatische Verletzungen mit geschlossenem Kopf und seine Validierung

Dieses Protokoll stellt ein modifiziertes Mausmodell für repetitive milde traumatische Hirnverletzungen (rmTBI) vor, die über eine geschlossene Kopfverletzungsmethode (CHI) induziert werden. Der Ansatz zeichnet sich durch ein verdünntes Schädelfenster und eine Flüssigkeitsperkussion aus, um die Entzündung zu reduzieren, die häufig durch die Exposition von Hirnhäuten verursacht wird, sowie eine verbesserte Reproduzierbarkeit und Genauigkeit bei der Modellierung von rmTBI bei Nagetieren.

Modifiziertes Mausmodell für repetitives leichtes Schädel-Hirn-Trauma mit verdünntem Schädelfenster und flüssiger Perkussion

Die meisten Verhaltensexperimente für Nagetiere wurden ursprünglich für Ratten entwickelt. Aufgrund der Verhaltensunterschiede zwischen Ratten und Mäusen sind bei Mäusen manchmal Modifikationen erforderlich. Wir stellen eine Methode vor, um das räumliche Arbeitsgedächtnis bei Mäusen zu testen und den Stress während der Arbeitsgedächtnisaufgabe zu minimieren.

Eine appetitive räumliche Arbeitsgedächtnisaufgabe für Mäuse in einem halbautomatischen 8-Arm-Radiallabyrinth, die die ängstliche Gedächtnisassoziation im Labyrinth reduziert

Lernen Sie die räumliche Gedächtnistestung im Radialwasserlaufstreifen für traumatische Gehirnverletzungen bei Mäusen. Diese schwimmfreie Methode ermöglicht kognitive Bewertung bei Tieren mit motorischen Defiziten.

Beurteilung der räumlichen Gedächtnisstörung in einem Mausmodell der traumatischen Gehirnverletzung unter Verwendung eines Radialwasserlaufstreifens (Video) | JoVE Journal

Beurteilung der räumlichen Gedächtnisstörung in einem Mausmodell der traumatischen Gehirnverletzung unter Verwendung eines Radialwasserlaufstreifens

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