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DOI: 10.3791/56014-v
Prabesh Bhattarai1, Alvin Kuriakose Thomas2, Mehmet Ilyas Cosacak1, Christos Papadimitriou1, Violeta Mashkaryan3, Yixin Zhang2, Caghan Kizil1,3
1German Centre for Neurodegenerative Diseases (DZNE) Dresden within Helmholtz Association, 2B CUBE, Center for Molecular Bioengineering,Technische Universität Dresden, 3Center for Regenerative Therapies Dresden (CRTD),TU Dresden
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Dieses Protokoll beschreibt die Synthese, Charakterisierung und Injektion von Monomeren Amyloid-β42 Peptide zur Erzeugung von Amyloid Toxizität in Erwachsenen Zebrafisch, eine Alzheimer-Krankheitsmodell, gefolgt von histologische Analyse und Erkennung von Aggregationen.
Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, Amyloid-Beta-42-Peptide zu synthetisieren und sie in das Gehirn des erwachsenen Zebrafisches zu injizieren, um ein bestimmtes Modell von Amyloid-Dosen zu erzeugen, wie es bei der Alzheimer-Krankheit beobachtet wird. Diese Methode kann uns helfen, wichtige Fragen im Bereich der Neurowissenschaften zu beantworten, wie z. B. die Wirkung der Amyloid-Toxizität auf neurale Stammzellen und wie wir die Verjüngungsreaktion unter solch schädlichen Bedingungen hervorrufen können. Die Hauptvorteile dieser Technik sind ihr Bericht, ihre Reproduzierbarkeit und die Phänotypen, die wir erhalten, erinnern stark an die Alzheimer-Krankheit im menschlichen Gehirn.
Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie der Alzheimer-Krankheit, da sie ein natürliches Wirbeltiermodell darstellt, das in der Lage ist, neuronale Stammzellen im Krankheitszustand zu aktivieren, so dass der Zebrafisch uns lehren kann, wie wir die Neurodegeneration wiederherstellen können. Um Amyloid-Beta-42-Peptid herzustellen, beladen Sie einen automatisierten Peptidsynthesizer mit 500 Milligramm FMOC-geschütztem Harz als feste Phase. Laden Sie dann 0,5 molare gelöste FMOC-geschützte Aminosäuren in das erforderliche Volumen, wie für den jeweiligen Synthesizer berechnet.
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