Name: Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Erfahren Sie die Einrichtung einer primären Kultur aus patientenstammigen Weichteilsarkomen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der Pathophysiologie und therapeutischer Reaktionen in einem vollständig humanen präklinischen Modell.

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Die Autoren möchten Gráinne Tierney für redaktionelle Unterstützung bedanken.

STS-Zellen sind isoliert von einem Tumor Masse chirurgisch herausgeschnitten von Patienten mit STS. Das Protokoll wurde von der lokalen Ethikkommission genehmigt und erfolgt nach den Leitlinien zur guten klinischen Praxis und der Deklaration von Helsinki. Alle Patienten gaben schriftliche Einwilligungserklärung, an der Studie teilzunehmen. Die chirurgische Exemplare sind durch einen erfahrenen Sarkom Pathologen analysiert und verarbeitet innerhalb 3 Stunden nach der Operation.
1. Tumor Probengewinnung und Verarbeitung:
<ol><li>Sammeln Sie Tumor Proben mit Hilfe von einem Sarkom Pathologen in einem 100 mL sterilen Urin-Behälter mit 50 mL DMEM niedrige Glukose Medium mit einer Paraffin-Folie versiegelt.</li>
	<li>Speichern Sie die Proben bei 4 ° C für maximal 3 h nach der Tumor-Resektion.</li>
	<li>Führen Sie die folgenden Schritte unter einer sterilen Gewebekultur-Haube.<ol>
<li>Sterilisieren Sie die Haube mit 70 % Ethanol und tragen Sie sterile Handschuhe zu.</li>
		<li>Stahl Inox Pinzette mit 70 % igem Ethanol (verwenden Sie ein steriler Gaze) zu sterilisieren.</li>
		<li>Paraffin-Film aus dem Urin-Behälter entfernen und entsorgen.</li>
		<li>Aussenansicht des Behälters Urin mit 70 % Ethanol zu waschen.</li>
		<li>Öffnen Sie eine quadratische Petrischale.</li>
		<li>Öffnen Sie den Urin-Container und übertragen Sie die Tumor-Exemplare in die quadratische Petrischale mit der sterilisierten Stahl Inox Pinzette.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Zweimal waschen Sie die Tumor Proben mit PBS.</li>
	<li>Öffnen Sie einen sterilen chirurgischen Skalpell.<ol>
<li>Zerkleinern Sie fein die Tumor-Exemplare in 1 – 2 mm3 Stücke.</li>
		<li>Sammeln Sie ein Viertel der gesamten Stichprobe in der 2-mL-Tube.</li>
		<li>Fügen Sie 1 mL Trizol Reagenz (gekauft), um das Rohr und sofort Einfrieren bei-80 ° C (im Beispiel wird in der nachfolgenden Analyse für die Ausdrucksauswertung STS gen verwendet werden).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sammeln Sie den Rest der das fein zerkleinerte tumormaterial in eine 15-mL-Tube.<ol>
<li>Fügen Sie 4 mL Kollagenase Typ-I-Lösung (Kollagenase Typ ich aufgelöst in PBS, bei einer Konzentration von 4 µg/mL).</li>
		<li>Verdünnen Sie die Kollagenase Typ-I-Lösung mit 4 mL DMEM hohe Nährmedien (Endkonzentration von Kollagenase Typ I ist 2 µg/mL).</li>
		<li>Das 15-mL-Röhrchen verschließen und Abdichten mit Paraffin Film.</li>
		<li>Setzen Sie die 15-mL-Tube in einem sanften Shaker im Brutschrank bei 37 ° C unter Rühren Bedingungen für 15 min um die Verdauung zu aktivieren.</li>
		<li>Bewahren Sie nach 15 min das Rohr in den rollenden Shaker unter Rühren Bedingungen bei Raumtemperatur über Nacht auf.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Am folgende Tag legte der 15-mL-Tube unter der sterilen Haube.</li>
	<li>Filtern Sie sanft die Zellsuspension durch eine 100 µm Sterilfilter an der Oberseite einen 50-mL-Tube befestigt.</li>
	<li>Waschen Sie den Filter mit DMEM hohe Nährmedien mit fötalen Rinderserum 10 %, 1 % Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin ergänzt.</li>
	<li>Entsorgen Sie die 100 µm Sterilfilter, schließen Sie die 50-mL-Tube und Zentrifuge bei 225 X g für 5 Minuten bei Raumtemperatur.</li>
	<li>Verwerfen des Überstands durch das Rohr zu invertieren.</li>
	<li>Aussetzen Sie die Zellen mit 1-2 mL DMEM hohe Nährmedien mit fötalen Rinderserum 10 %, 1 % Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin ergänzt wieder. Hinweis: Die Lautstärke hängt die Höhe der tumorprobe verarbeitet.</li>
	<li>Zählen Sie die Zellen mit einer Neubauer-Kammer.<ol>
<li>Verdünnen Sie die Probe 1:2 in Trypan blau und verwenden Sie 10 µL der Verdünnung, um Zellen zu zählen.</li>
		<li>Zählen Sie mindestens zweimal und berechnen Sie den Mittelwert der Wiederholungen zu wissen, die durchschnittliche Gesamtzahl der Zellen gesammelt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Platte Zellen in einer standard Monolayer Kultur bei einer Dichte von 80.000 Zellen/cm2. Hinweis: Immer enthalten Sie Steuerelemente in Experimenten. Führen Sie mindestens 3 Technische Wiederholungen für jede Bedingung. Führen Sie mindestens 2 biologische repliziert. Für präklinische Pharmakologie, Genexpression und Protein-Expressionsanalysen sollte innerhalb von 30-45 Tagen der Zelle Aussaat zu verlieren Krebs Zelle Phänotypen Experimente mit einer geringen Anzahl von Kultur Passagen durchgeführt.</li>
	<li>Zytologische Probenvorbereitung.<ol>
<li>Sammeln Sie 100.000 Zellen in 200 µL DMEM hohe Nährmedien mit fötalen Rinderserum 10 %, 1 % Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin ergänzt.</li>
		<li>Pipette die Lösung (200 µL Pipette) in einen Einweg-Trichter mit einem Filter ausgestattet und mit einem Objektträger montiert.</li>
		<li>Öffnen Sie die Cytocentrifuge und legen Sie die Proben.</li>
		<li>Laufen Sie die Cytocentrifuge bei 18,6 x g für 20 min.</li>
		<li>Verwerfen Sie den Trichter mit Filter ausgestattet.</li>
		<li>Befestigen Sie die Folien in Aceton für 10 min, gefolgt von Chloroform für 5 min.</li>
		<li>Speichern Sie die Folien bei-20 ° C. Hinweis: Auftauen und Hydrat die Proben vor der Färbung und führen die Färbung nach den Anweisungen des Herstellers. Bereiten Sie mindestens 3 Technische repliziert.</li>
	</ol>
</li>
</ol>(2) STS Zellkulturen:
<ol><li>Wechseln Sie Medium einmal pro Woche (DMEM hohe Nährmedien mit fötalen Rinderserum 10 %, 1 % Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin ergänzt).<ol>
<li>Entsorgen Sie das Kulturmedium mit einer 200-1.000 µL Pipette.</li>
		<li>Fügen Sie neue frisches Medium mit einer 200-1.000 µL Pipette.</li>
		<li>Zelle Passage:<ol>
<li>Zellen zu trennen, wenn die Mündung rund 90 %: Hinweis: STS Zelle Kultur Verstärkung sollte einmal wöchentlich auf der Grundlage der Kultur durchgeführt werden.</li>
			<li>Medium zu verwerfen, mit PBS waschen und 2-3 mL Trypsin 1 X mit PBS-Puffer Hinweis: Das Volumen von Trypsin verwendet hängt von der kultivierten Zellen erhalten.</li>
			<li>Inkubieren Sie Zellen für 3-5 min bei 37 ° c</li>
			<li>Sammeln Sie freistehende Zellen von der Platte mit einer 200-1.000 µL Pipette.</li>
			<li>Pipette die freistehenden Zellen in ein 15-mL-Röhrchen und 4 mL DMEM hohe Kultur Medien ergänzt mit fötalen Rinderserum 10 %, 1 % Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin, die enzymatische Reaktion zu stoppen.</li>
			<li>Zentrifugieren Sie bei 225 X g für 5 min bei Raumtemperatur.</li>
			<li>Verwerfen Sie den überstand.</li>
			<li>Wieder aussetzen der Zelle Pellet durch Zugabe von 1 mL DMEM hohe Nährmedien mit fötalen Rinderserum 10 %, 1 % Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin ergänzt.</li>
			<li>Samen der Zellen in eine neue Kultur-Platte oder eine Flasche mit einem Endvolumen gemäß den Anweisungen des Herstellers. Hinweis: Nicht teilen Sie, Zellen mehr als 1:3.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>(3) nachgeschalteten Analysen:
Hinweis: Eine Vielzahl von verschiedenen Experimenten kann mit Hilfe dieses Modells (siehe unten) durchgeführt werden. Deshalb ist es wichtig, während der Design-Phase der Studie entscheiden, welche Untersuchungen durchgeführt werden werden, so dass eine ausreichende Anzahl von Proben und Wiederholungen vorbereitet werden kann.
<ol><li>Verbreitung-Assays wie MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromid</li>
	<li>Apoptotische Assays wie terminal Deoxynucleotidyl-Transferase (TdT) nick Ende Kennzeichnung (TUNEL) assay</li>
	<li>Immunhistochemische Analysen</li>
	<li>Genanalyse Ausdruck</li>
	<li>Western-Blot Analyse</li>
	<li>ELISA-assay</li>
	<li>Fluoreszenz-aktivierte Zelle Sortieren (FACS) Analyse</li>
	<li>
In Vivo Xenograft-Modell</li>
</ol>

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<li>De Vita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+classification%2C+treatment+options%2C+and+new+perspectives+in+the+management+of+adipocytic+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Onco+Targets+Ther%22%5BJournal%5D)">Current classification, treatment options, and new perspectives in the management of adipocytic sarcomas.</a> Onco Targets Ther. 9 (12), 6233-6246 (2016).</li>
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<li>Ducimetière, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+sarcoma+histotypes+and+molecular+subtypes+in+a+prospective+epidemiological+study+with+central+pathology+review+and+molecular+testing%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Incidence of sarcoma histotypes and molecular subtypes in a prospective epidemiological study with central pathology review and molecular testing.</a> PLoS One. 6 (8), 20294(2011).</li>
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</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenlegen.

Gut definierte präklinische Modellen genügen, um den molekularen Hintergrund von Tumoren zu erhellen, schlechten Prognose Vorhersagen und neue therapeutische Strategien zu entwickeln, für Krebspatienten. Dies ist besonders wichtig für seltene Tumoren wie STS, deren hohe Heterogenität in Bezug auf die Morphologie, aggressives Potenzial und klinischen Verhalten fordert unser Verständnis von STS-Biologie und Patientenmanagement21. Darüber hinaus einige kommerzielle Sarkom-Zell-Linien zur Verfügung pr...

Weichgewebe Sarkome (STS) umfassen ein Spektrum von heterogenen Läsionen des mesenchymaler Herkunft einen Anteil von 1 % aller soliden Tumoren1,2, und die neue Klassifikation der Weltgesundheitsorganisation (WHO) erkennt das Vorhandensein von mehr als 50 Subtypen3. Unter diesen sind die am häufigsten verwendeten Histotypes Adipocyte Sarkom oder Liposarcoma und Leiomyosarcoma, einem Anteil von 15 % und 11 % aller Erwachsenen m., jeweils4,5. Obwohl STS in verschiedenen Teilen des Körpers entwickeln können, sind die Extremitäten und Retroperitoneum die häufigsten Lokalisationen, in 60 % und 20 % der Fälle, bzw.6auftreten.
Die Eckpfeiler der Therapie für die lokalisierten Krankheit ist Breite chirurgische Resektion, während die Vorteile der adjuvanten und neoadjuvanten Chemotherapie noch unklar sind und nur in ausgewählten Fällen7 gelten. In der metastasierten Einstellung Chemotherapie ist die Standardbehandlung zeigt aber begrenzte Ergebnisse8. Ein besseres Verständnis der molekularen Biologie der STS würde dazu beitragen, verbessern die aktuellen Differentialdiagnose, die verfügbaren Behandlungen zu optimieren und neue Ziele für die Therapie zu identifizieren.
In diesem Zusammenhang wurde die Krebsforschung seit vielen Jahren mit verewigt Zelle Linien9durchgeführt. Diese experimentelle Modelle sind normalerweise in standard Monolage unterstützt kultiviert oder eingepflanzt immungeschwächte Nagetiere, in Vivo Xenograft10Modelle zu etablieren. Immortalisierte Zelllinien repräsentieren eine überschaubare und einfach zu speichern Material, mit der zahlreiche Forschung Experimente durchgeführt werden kann. Sie sind in der Tat, die am wenigsten teuer und am weitesten verbreitete Tool in präklinischen Studien11.
Jedoch Zelllinie basierte Krebs Modelle haben auch einige Einschränkungen, z.B. verlängerte Kultur in einem Monolayer-System zusammen mit einer zunehmenden Anzahl von Passagen induziert phänotypischen und Gendrift, machen Zellen weniger wahrscheinlich zu wichtigen Tumor rekapitulieren Funktionen. Darüber hinaus fehl Linie Zellkulturen, die Zell-Zell-Interaktion und Signalisierung Molekül Übersprechen, die das biologische Verhalten von Tumoren zu imitieren und zu charakterisieren, der Tumor Mikroumgebung zu reproduzieren. Diese Fragen bilden die Grundlage des Spaltes zwischen präklinischer und klinischer Ergebnisse12.
Angesichts des oben genannten, stieg das Interesse an Patienten abgeleitet Primärkulturen13. In der Tat reduziert die Exzision von bösartigen und normalen Gewebe das Risiko von Krebs Zelle Phänotyp und Heterogenität, bietet somit Ausgangsmaterial, die repräsentativ für die Tumor-Mikroumgebung zu verlieren. Darüber hinaus ermöglicht die Verwendung von frischen Tumor Proben von Patienten, die eine chirurgische Resektion geerntet uns einzelne Tumoren untersuchen und vergleichen Sie verschiedene Läsionen aus dem gleichen Teil des Patienten Körper14. Aus den genannten Gründen Gewebe abgeleitet Zellkulturen zur Verfügung stellen eines wertvollen Materials um Tumor Pathophysiologie und Pharmakologie15,16,17, vor allem im STS in die im Handel erhältlichen Sarkom-Zelllinien zu studieren sind nur18. Wir optimieren damit eine Methode, um einen Patienten abgeleitet STS Primärzelle ab chirurgisch besteuerte Tumor Gewebe13,19,20zu etablieren. Unsere Methode besteht aus disaggregieren der Tumor-Probe in kleinen gewebefragmente gefolgt von Übernachtung enzymatische Gewebe Dissoziation, eine einzelne Zelle Suspension zu erhalten. Am nächsten Tag die enzymatische Verdauung wird durch Zugabe von frischen Nährmedien gestoppt und die erhaltene Suspension wird gefiltert, um gewebefragmente, Zelle-Aggregate und überschüssige Matrixmaterial oder Fremdkörper zu entfernen. Zu guter Letzt ist ein Bruchteil von isolierten Tumorzellen Cytospinned auf Objektträger fixiert und für nachgelagerte Analyse bestätigt die Gründung des STS Primärkultur abzielen, durch zytomorphologischen, immunhistochemische und molekularen zytogenetische Auswertung gespeichert (z.B. FISH-Analyse von MDM2 Verstärkung steht für den standard Differentialdiagnose für eine gut differenzierte Liposarcoma und dedifferentiated Liposarcoma) 4. die verbleibenden Zellen in eine standard Monolayer Kultur für profiling und pharmakologischen genexpressionsstudien ausgesät werden. Alles, was die Experimente durchgeführt werden mit niedrigen Durchgang Primärkulturen, die Auswahl der spezifischen Krebs-Subclones zu vermeiden und durch einen erfahrenen Sarkom Pathologen analysiert. Damit haben wir ein vollständig humaner STS Ex-Vivo Modell13,19,20geschaffen. Dieser vielseitig, einfach zu Griff Modell könnte ein nützliches Werkzeug für verschiedene Arten von präklinischen Forschung, z.B. um neue molekulare Marker für die Diagnose und Prognose zu identifizieren oder um ein tieferes Verständnis für die Aktivität und Mechanismen zu gewinnen stellen Wirkung von Standard- und neue Medikamente bei der Verwaltung von STS.

<table><tbody><tr><td>DMEM High Glucose</td><td>EuroClone</td><td>ECB7501L</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>EuroClone</td><td>ECS0180D</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd 4% wässrige Lösung, EM-Qualität</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>157-4-100</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Triazol Reagenz</td><td>Ambion Life-Technologies</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>EuroClone</td><td>ECB3052D</td><td></td></tr></tbody></table>

einrichtung einer primären kultur des patienten abgeleitet weichteilsarkomen

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Weichgewebe Sarkome (STS) decken ein Spektrum von heterogenen Tumoren mit einer schwierigen Diagnose, Klassifikation und Management. Bis heute wurden mehr als 50 histologische Subtypen dieser seltenen soliden Tumoren identifiziert. So ist unser Verständnis für die Biologie dieser Tumoren aufgrund ihrer außerordentlichen Vielfalt und niedrige Inzidenz, noch begrenzt. Patienten-abgeleiteten Kulturen repräsentieren die ideale Plattform, STS-Pathophysiologie und Pharmakologie zu studieren. Wir entwickelt somit ein menschliches Präklinisches Modell STS ab Tumor Proben von Patienten, die eine chirurgische Resektion geerntet. Patienten abgeleitet STS Zellkulturen wurden aus der chirurgischen Proben von Kollagenase Verdauung und isoliert durch Filtration. Zellen wurden gezählt, ausgesät, und Links für 14 Tage in standard Monolayer-Kulturen und dann durch nachgeschaltete Analyse verarbeitet. Bevor Sie Molekulare oder pharmazeutische Analysen durchführen, die Einrichtung von STS Primärkulturen wurde bestätigt durch die Evaluierung zytomorphologischen Merkmale und, wenn vorhanden, immunhistochemischen Marker. Diese Methode stellt ein nützliches Werkzeug (1), die Naturgeschichte dieser schlecht erforschten maligner Erkrankungen zu studieren und 2) so testen Sie die Auswirkungen von verschiedenen Drogen in einer Bemühung, mehr über ihre Wirkmechanismen zu erfahren.

Wir haben eine einfache Methode, um zu erhalten die Errichtung einer Primärkultur von Weichteilsarkomen Patienten abgeleitet und Berichten hier ein Beispiel für Ergebnisse, die auf einem bestimmten STS Histotype13entwickelt. Das Protokoll wurde für die Errichtung von Primärkulturen von verschiedenen STS Histotypes einschließlich gut differenzierte Liposarcoma, entdifferenzierten myxoid Liposarcoma, pleomorphes Liposarcoma, Liposarcoma, Myxofibrosarcoma, undifferenz...

Das folgende Protokoll konzentriert sich auf die Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen (STS). Dieses Modell könnte uns helfen, besser zu verstehen, die molekularen Hintergründe und pharmakologischen Profil von diesen seltenen Tumoren und könnte einen Ausgangspunkt für die weitere Forschung zur Verbesserung der STS Management darstellen.

Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Das übergeordnete Ziel dieses präklinischen Modells am Menschen, das aus chirurgisch reseziertem Tumorgewebe gewonnen wurde, ist die Etablierung einer Primärkultur von patienteneigenen Weichteilsarkomen. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen zur Pathophysiologie des Weichteilsarkoms zu beantworten und stellt ein wichtiges präklinisches Instrument zur Vorhersage des Ansprechens auf die Therapie dar. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es sich um ein vollständig humanes präklinisches Modell handelt.Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie des Weichteilsarkoms, da dieses präklinische Modell mit herkömmlichen innovativen Medikamenten getestet werden kann, um deren Aktivität und Wirkmechanismus zu untersuchen. Obwohl diese Methode Einblicke in das Weichteilsarkom geben kann, kann sie auch auf die Untersuchung der Interaktion von Weichteilzellen mit Krebszellen angewendet werden. Personen, die neu in dieser Methode sind, werden aufgrund der Heterogenität des Tumorgewebes und der Isolierung von Tumorzellen Schwierigkeiten haben.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da die anfängliche Auswahl der Weichteils

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Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Dieser Artikel beschreibt die Herstellung von frisch gewonnenen Melanomgewebe in primären Zellkulturen und wie Kontaminationen von Erythrozyten und Fibroblasten von den Tumorzellen zu entfernen. Schließlich beschreiben wir, wie...

Patienten abgeleitet Zellkultur und Isolierung von CD133<sup&gt; +</sup&gt; Mutmaßliche Cancer Stem Cells von Melanoma

Methoden, um menschliche 3D-Tumorgewebe als Testsysteme zu erstellen beschrieben. Diese Techniken basieren auf einer dezellularisierten Biologische Vaskularisierte Gerüst (BioVaSc), primäre menschliche Zellen und einer Tumor-Zellinie, die unter statischen als auch unter dynamischen Bedingungen in einer Strömungs Bioreaktor kultiviert werden können, basieren.

Tissue Engineering eines Menschen 3D<em&gt; In-vitro-</em&gt; Tumor-Testsystem

Es wird ein Protokoll zur Extraktion primärer menschlicher Zellen aus chirurgischem Dickdarmtumor und normalem Gewebe beschrieben. Die isolierten Zellen werden dann auf weichen, elastischen Substraten (Polyacrylamid-Hydrogelen) kultiviert, die durch ein extrazelluläres Matrixprotein funktionalisiert und mit fluoreszierenden Mikrokügelchen eingebettet sind. Die Traktionszytometrie wird durchgeführt, um zelluläre kontraktile Spannungen zu beurteilen.

Isolierung von primären humanen Colon Tumorzellen von Surgical Gewebe und Kultivierung sie direkt auf weiche elastische Substrate für Traction Cytometry

Das Vorhandensein von Krebsstammzellen (KSZ) in Knochensarkomen kürzlich ihrer Pathogenese in Verbindung gebracht worden. In diesem Artikel stellen wir die Isolierung des CSCS aus primären Zellkulturen aus humanen Biopsien herkömmlicher Osteosarkom (OS) mit der Fähigkeit des CSCS erhalten unter nichtadhärenten Bedingungen zu wachsen.

Gründung der Krebszellkulturen von Human Konventionelle Osteosarkom Stem

Kutane Tumoren werden oft nach Mohs mikrographischen Chirurgie verworfen. Hier wird ein Protokoll beschrieben, das es dem klinischen Hilfspersonal ermöglicht, kutane Tumor- ( zB Plattenepithelkarzinom-, Basalzellkarzinom- und Melanom-) Proben für nachgeschaltete Laboranwendungen effektiv zu verarbeiten und zu speichern, ohne die klinischen Operationen zu beeinträchtigen.

Errichtung eines klinischen Biorepositorys

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll zur Isolierung tumorinitiierender Zellen aus humanen Sarkom-Patienten-patienten-abgeleiteten Xenografts durch Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung, unter Verwendung des humanen Leukozyten-Antigens-1 (HLA-1) als negativem Marker, und für die weitere Validierung und Charakterisierung dieser HLA-1-negativen tumorinitiierenden Zellen.

Isolierung und Charakterisierung tumorinitiierender Zellen aus Sarkom-Patienten-abgeleiteten Xenografts

Wir stellen eine Methode zur Energieerzeugung, Anbau und systematische Analyse der organotypischen Scheiben aus murinen Lungentumoren abgeleitet. Wir beschreiben auch für Scheibendicke optimieren und das Medikament Konzentrationen zur Behandlung von Tumor-Scheiben auswählen.

Einrichtung und Analyse der Tumor Slice Explants als Voraussetzung für diagnostische Tests

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Erzeugung von 3D-Tumorkulturmodellen aus primären Krebszellen und die Bewertung ihrer Empfindlichkeit gegenüber Medikamenten unter Verwendung von Zellviabilitätsassays und mikroskopischen Untersuchungen.

Etablierung von 3-dimensionalen Sphäroiden aus patienteneigenen Tumorproben und Bewertung ihrer Empfindlichkeit gegenüber Medikamenten

Hier wird ein detailliertes Protokoll für die Etablierung von humanen Brustorganoiden aus patienteneigenen Brusttumorresektionen oder normalem Brustgewebe bereitgestellt. Das Protokoll enthält eine umfassende Schritt-für-Schritt-Anleitung zum Kultivieren, Einfrieren und Auftauen von Brustorganoiden aus menschlichen Patienten.

Etablierung und Kultivierung von patienteneigenen Brustorganoiden

Tumor-Organoide haben die Krebsforschung und den Ansatz der personalisierten Medizin revolutioniert. Sie stellen ein klinisch relevantes Tumormodell dar, das es Forschern ermöglicht, dem Tumor in der Klinik einen Schritt voraus zu sein. Dieses Protokoll etabliert Tumor-Organoide aus frischen Gewebeproben des Pankreastumors und von Patienten stammenden Xenotransplantaten aus dem Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse.

Etablierung von Pankreaskrebs-abgeleiteten Tumororganoiden und Fibroblasten aus frischem Gewebe

Das Protokoll beschreibt eine Methode zur Erstellung eines von Patienten stammenden Darmkrebs-Organoidmodells (CRC), das mit tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs) kokultiviert wird, um deren Wechselwirkungen und therapeutisches Potenzial zu untersuchen. Dieses Modell bietet eine präklinische Plattform zur Erforschung von Immunantworten in der Tumormikroumgebung und zur Vorhersage der Wirksamkeit einer TIL-basierten Therapie für eine personalisierte Darmkrebsbehandlung.

Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs)

Erfahren Sie die Einrichtung einer primären Kultur aus patientenstammigen Weichteilsarkomen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der Pathophysiologie und therapeutischer Reaktionen in einem vollständig humanen präklinischen Modell.

Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen

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