Name: Maus-Modellen der Helicobacter -Infektion und Magen-Erkrankungen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Lernen Sie Methoden zur Untersuchung von Helicobacter-Infektionen in Mäusen. Diese Techniken ermöglichen histopathologische Analysen und liefern wertvolle Erkenntnisse über Magenerkrankungen und potenzielle Therapieansätze.

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Die Autoren möchten Frau A. De Paoli und Frau Georgie Wray-McCann für technische Unterstützung danken. Die Autoren erkennen Nutzung der Einrichtungen und technische Unterstützung von Monash Histologie Plattform, Institut für Anatomie und Entwicklungsbiologie, Monash University. Das Labor wird unterstützt durch Mittel aus der National Health and Medical Research Council (NHMRC) für RLF (APP1079930, APP1107930). RLF wird von einem Senior Research Fellowship von NHMRC (APP1079904) unterstützt. KD und MC sind beide von Monash Graduate Stipendien unterstützt. KD wird unterstützt vom Zentrum für angeborene Immunität und infektiöse Erkrankungen, Hudson Institute der medizinischen Forschung, während MC ein International Postgraduate Stipendium von der Fakultät für Medizin, Pflege und Gesundheitswissenschaften, Monash University hat. Forschung am Hudson Institute of Medical Research wird von der Staatsregierung betriebliche Infrastruktur Support-Programm unterstützt.

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Die Autoren haben nichts preisgeben.

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung von einem in-Vivo -Mausmodell für Helicobacter -Infektion. Die entscheidenden Schritte des Verfahrens sind die: 1) Vorbereitung der Helicobacter Inokula, lebensfähige und bewegliche Bakterien; (2) Lieferung der entsprechenden Zahl von Bakterien an die Maus über eines-Magensonde; (3) Nachweis von bakteriellen Infektionen durch koloniezahlbestimmung und/oder PCR; und 4) Verarbeitung von Magen Gewebe ermöglichen die Beurteilung der Histopathologie in infi...

Helicobacter Pylori ist eine spiralförmige, Gramnegative, menschlichen Magen Erreger vorhanden in allen Bevölkerungsgruppen auf der ganzen Welt, mit Infektionsraten in den Entwicklungsländern, die voraussichtlich in der Größenordnung von 80 %1. Obwohl die meisten H. Pylori-infizierte Personen asymptomatisch sind, einige schwere Krankheiten, Magenkrebs2von Verdauungs-Geschwüre bis zu entwickeln. H. Pylori-assoziierten Krebsarten im großen und ganzen zeichnen sich durch bösartige Veränderungen in Epithelzellen (GECs) oder durch die Bildung von extra nodal lymphatischen Gewebe im Magen, wodurch Magen Adenokarzinom oder Schleimhaut-assoziierten lymphatischen Gewebe (MALT) Lymphom, beziehungsweise. H. Pylori ist sehr angepasst, um zu überleben in der rauen ökologische Nische des Magens durch die Anwesenheit von verschiedenen Virulenzfaktoren und Mechanismen, die Erleichterung der Einhaltung, Wachstum und Stoffwechsel in dieser Nische. Insbesondere besitzen virulente Stämme von H. Pylori 40 kb Cag Pathogenität Insel (CagPAI), die ungefähr 30 Gene für die Produktion einer Typ 4-Sekretion System (T4SS)3,4 erforderlichen kodiert . CAG PAI-positiven H. Pylori -Stämme sind verbunden mit der Induktion von höheren Ebenen der chronischen Entzündung in der Hostie, die als ein wesentlicher Vorläufer der Magen Adenokarzinom5verwickelt hat.
In Vivo Tiermodellen, insbesondere Mäuse wurden dadurch, dass Forscher untersuchen die relativen Beiträge der Host, bakterielle und umweltbedingten Faktoren auf H. Pylori -Infektion und Krankheit Ergebnis6sehr informativ. Studien haben bisher gezeigt, die verlängerte H. Pylori Infektion der Mäuse C57BL/6 genetischen Hintergrund Ergebnisse bei der Entwicklung von chronischer Gastritis und Drüse verkümmert, beide Kennzeichen von H. Pylori -Infektion-7. Infektion mit den verwandten Bakterienarten Katze/Hund, H. Felis, ist darüber hinaus nachweislich induzieren Malz Bildung bei Mäusen mit ähnlichen Pathologie und Fortschreiten der Krankheit wie im menschlichen MALT-Lymphom8,9zu sehen. Die am häufigsten verwendeten H. Pylori Isolat in Studien an Mäusen Kolonisation ist die "Sydney Sorte 1" (SS1) Belastung10, die CagPAI+ , sondern hat ein nicht-funktionale T4SS (T4SS−)11. Andere weit verbreiteten Sorten sind H. Pylori B128 7.13 (CagPAI+/T4SS+)12 und X47-2AL (CagPAI–/T4SS−)13. Für H. Felis Infektionen, die Belastung CS1 ("Cat Spirale 1", CagPAI–/T4SS−) ist in der Regel verwendete14.
Hier bieten wir ein Protokoll beschreibt die Vorbereitung der Helicobacter Impfkulturen für in-Vivo -Infektion, das Verfahren für die eines-Magensonde von Mäusen, sowie Methoden für die Verarbeitung von Gewebe für die Untersuchung von histopathologischen Veränderungen in den Magen. Insbesondere konzentriert sich dieser Artikel auf die histologischen Methoden zur bakteriellen Besiedelung zu visualisieren und histopathologische Veränderungen, einschließlich der Malz-Bildung in der Magenschleimhaut von infizierten Mäusen zu beurteilen. Einige der hier beschriebenen Methoden kann das Studium der andere Darm-Erreger wie S. angepasst werden. Typhimurium oder C. Rodentium.

<table><tbody><tr><td><stark>bakteriologische Reagenzien</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxoid Blut Agar Base Nr.2</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>CM0271B</td><td>Vor der Sterilisation in deeinonisiertem Wasser auflösen</td></tr><tr><td>Premium defibriniertes Pferdeblut</td><td>Australian Ethical Biologicals</td><td>PDHB100</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Brain Heart Infusion Broth</td><td>BD Bioscience</td><td>237500</td><td>Vor der Sterilisation in deeinonisiertem Wasser auflösen</td></tr><tr><td>CampyGen Gaspackungen</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>CN0035A/CN0025A</td><td></td></tr><tr><td>Histologische Reagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Formalin, neutral gepuffert, 10%Sigma</td> <td>Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>absoluter Alkohol, 100% denaturiert</td><td>ChemSupply</td><td>AL048-20L-P</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol (2-Propanol)</td><td>Merck</td><td>100995</td><td></td></tr><tr><td>Xylol (schwefelfrei)</td><td>ChemSupply</td><td>XT003-20L</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Amber Scientific</td><td>MH-1L</td><td>Filter vor Gebrauch</td></tr><tr><td>Eosin, wässriger Fleck</td><td>Amber Scientific</td><td>EOCA-1L</td><td>Filter vor Gebrauch</td></tr><tr><td>Wright-Giemsa Stain, modifiziert</td><td>Sigma Aldrich</td><td>WG80-2.5L</td><td>Vor Gebrauch verdünnen (20 % Giemsa, 80 % deionisiertes Wasser)</td></tr><tr><td>Histolene</td><td>Grale Scientific</td><td>11031/5</td><td></td></tr><tr><td>DPX Eindeckmedium</td><td>VWR</td><td>1.00579.0500</td><td></td></tr><tr><td>Reagenzien für die Molekularbiologie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA BR Assay Kit</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>Q32850</td><td></td></tr><tr><td>Oligonukleotide</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>Die Glühtemperatur von ureB Primern, die in dieser Studie verwendet wurden, beträgt 61 μd; C</td></tr><tr><td>GoTaq Flexi DNA Polymerase</td><td>Promega</td><td>M8291</td><td>Kit enthält 10x PCR-Puffer und Magnesiumchlorid</td></tr><tr><td>dNTPs</td><td>Bioline</td><td>BIO-39028</td><td>Vor Gebrauch in sterilem nukleasefreiem Wasser auf 10 mM verdünnen</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Bioline</td><td>BIO-41025</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydrogencarbonat</td><td>Univar (Ajax Fine Chemicals)</td><td>A475-500G</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium Sulfat-Heptahydrat</td><td>Chem-Supply</td><td>MA048-500G</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotics</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vancomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V2002-1G</td><td>In deionisiertem Wasser auflösen</td></tr><tr><td>Polymyxin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4932-5MU</td><td>In deionisiertem Wasser auflösen</td></tr><tr><td>Trimethoprim (&ge; 98% HPLC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7883</td><td>Auflösen in 100% (absolutem) Ethanol</td></tr><tr><td>Amphotericin</td><td>Amresco (Astral Scientific)</td><td>E437-100MG</td><td>Auflösen in deionisiertem Wasser</td></tr><tr><td>Bacitracin aus Bacillus licheniformis</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B0125</td><td>Auflösen in deionisiertem Wasser</td></tr><tr><td>Naladixinsäure</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N8878</td><td>Auflösen in deionisiertem Wasser</td></tr><tr><td>Sonstige Reagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methoxyfluran (Pentrhox)</td><td>Medizinische Entwicklungen International</td><td>Nicht anwendbar</td><td></td></tr><tr><td>Paraffinwachs</td><td>Paraplast Plus, Leica Biosystems</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>Geräte und Kunststoffe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxoid Anaerobe Dosen</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>HP0011/HP0031</td><td></td></tr><tr><td>COPAN Pasteurpipetten</td><td>Interpath Services</td><td>200CS01</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5810R Zentrifuge</td><td></td><td></td><td>Sammeln von Bakterienpellets durch Zentrifugation bei 2.200 U/min für 10 Minuten bei 4 &/min; C</td></tr><tr><td>23 g Präzisions-Gleitkanüle</td><td>BD Bioscience</td><td>301805</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Bemis, VWR</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Portex Polyethylenschlauch mit feiner Bohrung</td><td>Smiths Medical</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>Zuführkatheter aus Kunststoff</td><td>Instech&nbsp; Laboratories</td><td>FTP20-30</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Tuberkulin Luer Slip Einwegspritzen</td><td>BD Bioscience</td><td>302100</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Mikrostößel für 1,2 - 2 mL</td><td>Röhrchen Sigma Aldrich</td><td>Z317314</td><td>Autoklavierbare Polypropylen-Stößel für die Magenhomogenisierung</td></tr><tr><td>GentleMACs Dissoziator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>Verwenden Sie ein voreingestelltes gentleMACS Programme für Magengewebe von Mäusen</td></tr><tr><td>M Röhrchen (orangefarbene Kappe)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>30-093-236</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorometer</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Kunststoffschlaufe</td><td>LabServ</td><td>LBSLP7202</td><td></td></tr><tr><td>Kühlplatte, Leica EG1160 Einbettungssystem</td><td>Leica Biosystems</td><td>Nicht zutreffend</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Base Mould System, Base Mold 38 x 25 x 6</td><td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td><td>4124</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek III Uni-Casette System</td><td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td><td>4170</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom, Leica RM2235</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Charged SuperFrost Plus Objektträger</td><td>Menzel Glaser, Thermo Fischer Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr></tbody></table>

maus-modellen der helicobacter -infektion und magen-erkrankungen

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Helicobacter Pylori ist ein Magen-Erreger, die in der Hälfte der Weltbevölkerung vorhanden ist und ist eine wesentliche Ursache für Morbidität und Mortalität beim Menschen. Mehrere Maus-Modellen der Magen Helicobacter -Infektion wurden entwickelt, um die molekularen und zellulären Mechanismen zu untersuchen, wobei die H. Pylori -Bakterien besiedeln den Magen des menschlichen Wirte und Krankheiten verursachen. Hier beschreiben wir Protokolle: 1) bereiten Sie bakterielle Aufhängungen für die in-Vivo -Infektion von Mäusen über eines-Magensonde; (2) bestimmen Sie bakterienbesiedlung in Maus Magen Gewebe, durch Polymerase-Kettenreaktion (PCR) und tragfähige zählen; und 3) krankhafte Veränderungen durch Histologie zu beurteilen. Um Helicobactäh Infektion bei Mäusen zu etablieren, bestimmten Pathogen-freies (SPF) Tiere sind zunächst mit Suspensionen (mit ≥105 koloniebildenden Einheiten KBE) der Maus besiedeln entweder Helicobacter Pylori -Stämme beimpft oder andere Magen Helicobacter spp. von Tieren, wie z. B. Helicobacter Felis. Zu den entsprechenden Zeitpunkten nach der Infektion sind Mägen ausgeschnitten und seziert sagittal in zwei gleich gewebefragmente, jeweils bestehend aus den Regionen Antrum und Körper. Eines dieser Fragmente wird verwendet für tragfähige zählen oder DNA-Extraktion, während die anderen histologischen Verarbeitung unterliegt. Bakterielle Besiedlung und histopathologische Veränderungen im Magen können routinemäßig im Magen Gewebeschnitte gebeizt mit Warthin-Starry, Giemsa oder Hämatoxylin und Eosin (H & E) Flecken, entsprechend bewertet werden. Zusätzliche immunologische Analysen darf auch von Immunohistochemistry oder Immunfluoreszenz auf Maus Magen Gewebeschnitte vorgenommen werden. Die nachfolgend beschriebenen Protokolle sind speziell für die Beurteilung bei Mäusen der gastrischen Krankheiten ähnlich denen in Mensch-im Zusammenhang mit H. Pylori ermöglichen Krankheiten, einschließlich Entzündung, Atrophie der Drüse und lymphoide Follikel Bildung. Das Inokulum Vorbereitung und eines-Magensonde Protokolle können auch an die Pathogenese der anderen magensaftresistenten humanpathogene Erreger zu studieren, die Mäuse, wie Salmonella Typhimurium oder Citrobacter Rodentiumbesiedeln angepasst werden.

Dieses Protokoll beschreibt eine orale Magensonde Technik um eines-Infektion mit H. Pylori oder H. Felis in murinen Mausmodellen (Abbildung 1) zu erreichen. Nach Euthanasie Mägen sind entfernt, gewogen und geteilt in 2 gleiche Hälften bestehend aus Antrum, Körper und nicht-Drüsen Regionen der Magen Gewebe (Abbildung 2). Nicht glanduläre Region wird entfernt, bevor Sie irgendwelche Analysen durchführen.
Erfolgreiche B...

Mäuse sind ein unschätzbares in Vivo -Modell, Infektionen und Krankheiten, die durch Magen-Darm-Mikroorganismen zu studieren. Hier beschreiben wir die Methoden zur Untersuchung der bakteriellen Besiedelung und histopathologische Veränderungen in Mausmodellen von Helicobacter Pylori-Krankheiten.

Maus-Modellen der Helicobacter -Infektion und Magen-Erkrankungen

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Gastroenterologie über die Auswirkungen der Mitglieder der Mikrobiota, insbesondere die der Gattung Helicobacter, auf Entzündungen und Krebs zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass es die Untersuchung von Helicobacter-Infektion und seine Auswirkungen auf den Magen unter physiologischen Bedingungen ermöglicht. Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf die Entwicklung von Therapien zur Vorbeugung oder Eliminierung von Helicobacter-Infektionen oder deren Folgen, einschließlich Antibiotika, Medikamenten oder Impfstoffen.Diese Methoden liefern Spezifische Einblicke in die Pathogenese der Helicobacter-Infektion. Jedoch, mehrere der Techniken können an die Untersuchung von anderen Magen-Darm-Erregern angepasst werden. Im Allgemeinen, Personen neu zu dieser Methode wird mit der Vorbereitung eines bakteriellen Inokulum in der Lage, eine Infektion bei Mäusen zu etablieren kämpfen.Es ist zwingend erforderlich, dass die Helicobacter Isolate bekannt sind Maus-kolonisierende Stämme, die nicht umfangreiche Subkultur in vitro durchlaufen haben. Darüber hinaus sollte die Anzahl der In-vitro-Subkulturen für diese Stämme erfasst werden. Fügen Sie 15-Milliliter-Polystyrol-Röhren bakterielle Suspensionen hinzu und übertragen Sie mit einer Kunststoffschlaufe ein 10-bis 20-Mikroliter-Tröpfchen aus jeder Kultur auf einzelne Glasmikroskop-Dias.Bewerten Sie dann die Lebensfähigkeit und Beweglichkeit der Bakterien unter Phasenkontrastmikroskopie bei einer 100-fachen Vergrößerung. Verwenden Sie die H.pylori-Inocula nur, wenn die Mehrheit der Bakterien eine bacilläre Form hat. H.felis Inocula sollte in erster Linie helical-förmige Bakterien enthalten.Und laden Sie die Inocula in einzelne Einweg- und Ein-Milliliter-Spritzen. Legen Sie jede Spritze mit einer 23-Spur-Nadel aus und verwenden Sie Eine Kunststoff-Paraffinfolie, um einen Einweg-Polyethylenkatheter an jeder Nadel zu befestigen. Als nächstes halten Sie eine sechs bis acht Wochen alte spezifisch pathogenfreie und helicobacterfreie Maus manuell an Hals und Schwanz zurück und legen Sie einen Katheter in die Mitte des offenen Kiefers ein.Führen Sie den Katheter in einem Kaudal in Richtung der Speiseröhre, den Hals der Maus zu verlängern, um einen einfachen Zugang zum Magen durch die Speiseröhre und weg von der Luftröhre zu ermöglichen, bis der größte oder der gesamte Katheter nicht mehr sichtbar ist und ein Widerstand zu spüren ist. Dann, liefern Sie mindestens ein mal 10 an die fünften Bakterien, um eine optimale Besiedlung und Krankheitspathologie zu gewährleisten. Verwenden Sie am Ende des Experiments eine feine, gekrümmte Schere, um die Bauchhöhle für die Exzision des Magens zu öffnen.Schneiden Sie den Magen entlang der größeren Krümmung, und waschen Sie das Organ vorsichtig zwei Mal in einem 50-Milliliter-Rohr mit frischem PBS pro Wäsche, um Restnahrung zu entfernen. Nach der zweiten Wäsche das Gewebe in eine geteerte, sechs Zentimeter große Petrischale aus Kunststoff legen, um das Nassgewicht aufzuzeichnen. Nach der Abflachung des Magens, bisect die Probe sagittal in zwei gleiche Gewebefragmente, die die Antrum, Körper, und nicht-drüsense Vorstomach Regionen.Entfernen Sie den nichtdrüsenseen Bereich und wiegen Sie die Hälfte jedes Magens, bevor Sie das Gewebestück in der geeigneten Lösung für die geplante nachgelagerte Analyse aufbewahren. Fügen Sie die andere Hälfte des Magengewebes in ein 15-Milliliter konisches Rohr mit 10% Formalin, Abflachen des Gewebes gegen die Oberseite der Röhren nach 10 Sekunden. Wenn das Gewebe an den Rohrwänden befestigt wurde, tauchen Sie die Proben für mindestens 24 Stunden wieder in das Formalin ein.Um die Anzahl der lebensfähigen H.pylori im Magen nach der Infektion zu zählen, homogenisieren Magenproben in BHI gespeichert, und führen doppelte serielle Verdünnungen der resultierenden Magenhomogenate in frischer, steriler Brühe. Vorgetrocknete Pferdeblutagar oder HBA, Platten mit zusätzlichen Antibiotika ergänzt in drei oder vier Segmente, und fügen Sie mit einer Anpassung der Miles und Misra Technik 10 bis 100 Mikroliter jedes Magen homogenate Verdünnung auf ein Segment jeder Agarplatte. Die Homogenate mit sterilen Kunststoffschlaufen verteilen und die Platten trocknen lassen.Legen Sie die Platten dann in eine umgekehrte Position in anaerobe Gasgefäße, die eine Petrischale mit Wasser und eine Gaspackung enthalten. Dann bebrüten die Gläser bei 37 Grad Celsius für vier bis sieben Tage. Wenn Kolonien beobachtet werden können, zählen Sie die Segmente auf, die zwischen 10 und 100 isolierte Kolonien enthalten.Nach der Euthanasie wird der Magen von den Tieren geerntet und gewogen. Der nichtdrüsensee Bereich wird entfernt, und der Magen ist in zwei gleiche Hälften unterteilt, die das Antrum und den Körper umfassen. Eine erfolgreiche Kolonisation wird in der Regel durch eine lebensfähige Zählung und nachfolgende Aufzählung einzelner Kolonien aus Magenhomogenaten bestätigt, die auf HBA-Platten gestreift sind.Beachten Sie, dass das Vorhandensein von kontaminierenden Bakterien aus der Magenmikrobiota der Maus oder einer großen Anzahl von H.pylori-Kolonien die Aufzählung von H.pylori KBE erschweren kann. Alternativ kann PCR verwendet werden, um Infektionen mit spezifischen validierten Primern zu überprüfen, die auf eine 325-Basis-Paarregion der H.felis- und H.pylori ureB-Gene gerichtet sind. In diesem repräsentativen Experiment zeigten Wildtyp C57 Black-6-Mäuse moderate Anzeichen einer Entzündung, einschließlich Hyperplasie und Drüsenatrophie bei sechs Monaten nach der Infektion mit H.felis, sowie zelluläre Infiltration der Submucosa.Schwerere Entzündungen werden bei Knockout-Mäusen gleichzeitig beobachtet, wobei die zusätzliche Anwesenheit von Lymphfollikel in unmittelbarer Nähe der zellulären Infiltrate beobachtet wird. H.felis Bakterien können auch in Giemsa-befleckten Abschnitten des infizierten Mausmagengewebes visualisiert werden. Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie quantitative PCR, Immunhistochemie oder Immunfluoreszenz durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über die Arten von Wirtsreaktionen zu beantworten, die während einer Helicobacter-Infektion induziert werden.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Mikrobiologie und Gastroenterologie, um die ursächliche Rolle von Helicobacter pylori bei Magenerkrankungen beim Menschen zu erforschen. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie Mäuse mit Helicobacter-Arten reproduzierbar infizieren und die mit der Infektion verbundene Pathologie untersuchen können. Vergessen Sie nicht, dass die Helicobacter-Stämme, die in diesem Protokoll verwendet werden, infektiös sind, und daher sollten Standard-Biosicherheitsverfahren immer bei der Arbeit mit diesen Bakterien befolgt werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt die Etablierung einer Helicobacter pylori-Infektion durch die intragastrische Sondentechnik in einem Mausmodell. Die bakterielle Suspension wird über einen Katheter verabreicht, der durch den Mund in den Magen eingeführt wird. Geimpfte Bakterien siedeln sich an und etablieren eine Infektion im Magen, mit der die Wirt-Erreger-Interaktion untersucht werden kann.

Eine intragastrische Sondentechnik zur kontrollierten Helicobacter-Infektion bei Mäusen

In diesem Video beschreiben wir ein Protokoll zur Quantifizierung der Helicobacter pylori-Belastung im Magengewebe von Mäusen nach der Infektion, um seine Besiedlung zu bestätigen.

Quantifizierung der Helicobacter pylori-Last in einem infizierten Mausmagen

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Etablierung eines Magenorganoid-Infektionsmodells durch Mikroinjektion des Magenpathogens Helicobacter pylori in das Lumen der Organoide. Dieses Modell hilft bei der Untersuchung infektionsinduzierter Veränderungen in Magenzellen.

Etablierung eines Infektionsmodells durch Mikroinjektion von Magenorganoiden mit pathogenen Bakterien

Hier beschreiben wir eine Methode zur Visualisierung der onkogenen Bakterienorganelle, die als Cag Type IV Secretion System (Cag-T4SS) bekannt ist.  Wir stellen fest, dass das Cag-T4SS auf der Oberfläche von H. pylori als Reaktion auf unterschiedliche Bedingungen der Eisenverfügbarkeit unterschiedlich produziert wird.

Hohe Auflösung Elektronenmikroskopie der Helicobacter pylori Cag Typ IV-Sekretionssystem Pili Produziert in variierenden Bedingungen von Iron Verfügbarkeit

Dieser Artikel demonstriert chirurgische Verfahren des gastroösophagealen Reflux bei Mäusen. Diese Modelle sind nützliche Werkzeuge für die Forschung zu Mechanismen und Behandlung der gastroösophagealen Refluxkrankheit und potenziell des Barrett-Ösophagus und des Speiseröhrenadenokarzinoms.

Chirurgische Modelle aus gastroösophagealen Reflux mit Mäusen

Aus Stammzellen gewonnene Kulturen bergen ein enormes Potenzial zur Modellierung von Infektionskrankheiten. Hier wird die Kultur von mausischen und menschlichen Magenorganoiden beschrieben, die aus adulten Stammzellen gewonnen werden. Den Organoiden wird der Magenerreger Helicobacter pylori mikroinjiziert.

Organoide als Modell für Infektionskrankheiten: Kultur von humanen und murinen Magen Organoide und Mikroinjektion von Helicobacter Pylori

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Einrichtung und Kultivierung von Mensch und Maus abgeleitet 3-dimensionale (3D) Magen Organellen und die Methode für die Übertragung von 3D Organellen auf eine 2-dimensionale monomolekularen Film. Die Verwendung von Magen epithelialen Monolage als eine neuartige Kratzer-Wunde-Assay für Regeneration Studien wird ebenfalls beschrieben.

Abgeleitet von Maus und Mensch primäre gastrische Epithelzellen Monolayer Kultur for the Study of Regeneration

Hier führten wir eine systematische Bewertung von Patienten durch, bei denen eine niedriggradige intraepitheliale Neoplasie des Magens durch vorherige endoskopische Biopsie diagnostiziert wurde, und erhielten eine pathologische Diagnose durch vollständige Resektion der Läsion durch endoskopische submuköse Dissektion (ESD), wobei Faktoren analysiert wurden, die das Risiko einer pathologischen Eskalation potenziell erhöhen.

Etablierung und Bewertung eines Risikovorhersagemodells für die pathologische Eskalation einer niedriggradigen intraepithelialen Neoplasie des Magens

Dieses Protokoll beschreibt eine Immunfärbungsmethode für den ganzen Magen, die von der ursprünglich für den Mausdarm entwickelten "Swiss Roll"-Technik abgewandelt wurde.

Verbesserte räumliche Abbildung der Magenmuskelschichten der Maus mit einer modifizierten Swiss Roll-Technik

Dieses Video demonstriert Methoden zur transurethral induzieren Maus Harnwegsinfektionen und zu quantifizieren, das Ausmaß der daraus resultierenden Infektionen.

Transurethrale Induktion von Maus Harnwegsinfekt

Lernen Sie Methoden zur Untersuchung von Helicobacter-Infektionen in Mäusen. Diese Techniken ermöglichen histopathologische Analysen und liefern wertvolle Erkenntnisse über Magenerkrankungen und potenzielle Therapieansätze.

Maus-Modellen der Helicobacter -Infektion und Magen-Erkrankungen

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