Name: Retroductal Nanopartikel Injektion an der murinen mandibulären Drüse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-03T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Lernen Sie die retroduktale Nanopartikel-Injektion an der murinen mandibulären Drüse. Diese Methode ermöglicht gezielte Wirkstoffabgabe bei Speicheldrüsenfunktionsstörungen nach Strahlentherapie.

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Forschung berichtet in dieser Publikation wurde durch das nationale Institut des Dental und Craniofacial Forschung (NIDCR) und das National Cancer Institute (NCI) der National Institutes of Health Award Anzahl R56 DE025098, UG3 DE027695 und F30 CA206296 unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und nicht unbedingt die offizielle Meinung der National Institutes of Health. Diese Arbeit wurde auch von der NSF-DMR-1206219 und der IADR-Innovation in Oral Care Award (2016) unterstützt.
Wir möchten Jayne Gavrity Danke für ihre Unterstützung bei der Durchführung von IVIS Experimenten. Wir möchten Danke Karen Bentley für ihren Input und Unterstützung bei der Durchführung von EM. Wir möchten Pei-Lun Weng danken für Unterstützung mit IHC. Wir möchten danken Matthew Ingalls für seine Unterstützung bei der Vorbereitung der Figur. Wir möchten Dr. Elaine Smolock und Emily Wu für kritische Lektüre des Manuskripts danken.

Alle in-Vivo -Verfahren unten beschriebenen stimmten die Universität vom Tier Ressourcen an der University of Rochester, Rochester, NY.
1. Vorbereitung
<ol><li>Schneiden Sie 32G intrakraniellen Katheter Schlauch mit Draht 3 cm des Schlauches eine abgeschrägte Ende, ca. 45° zur Längsachse zu bilden. Bestätigen Sie, dass der Draht mindestens 1 cm länger als die Röhre.</li>
	<li>Laden Sie 50 µL PSMA Nanopartikel Lösung (Abbildung 1), oder einem anderen Injektionsmaterial in eine Hamilton-Spritze. Verringerung der Wahrscheinlichkeit von Barotrauma beim Einspritzen, befestigen Sie den Katheter Schlauch mit der Mandrin entfernt, an der Spritze und vertreiben Sie Totvolumen zu.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Injektionslösung um sicherzustellen, dass die Nanopartikel voll SOLVATISIERTE duktale Behinderung nach der Verabreichung zu verhindern ist.</li>
	<li>Bereiten Sie Atropin Lösung 0,1 mg/ml. Hinweis: Da Atropin lichtempfindlich ist und nimmt im Laufe der Zeit, diese Lösung sollte am Tag der Injektion, und lichtgeschützt bis verabreicht.</li>
</ol>(2) den Zugriff auf und Visualisieren von duktalen Einstiegspunkt
<ol><li>Wiegen Sie C57/BL6 Mäuse mit einer Analysenwaage.</li>
	<li>Mit einer 0,5 mL Spritze mit 29 x ½" Nadel, Betäuben Sie Mäuse mit einem intraperitoneal injizierten steriler Kochsalzlösung von 100 mg/kg Ketamin und 10 mg/kg Xylazin. Fahren Sie mit dem folgenden Schritt fort, wenn die Maus reagiert nicht mehr auf Reize, die in der Regel innerhalb von 5 bis 10 min nach der Injektion auftritt. Hinweis: Dieses Verfahren auch unter Isofluran durchgeführt werden, sondern erfordert eine benutzerdefinierte bugnase, die Zugriff auf die Mundhöhle ermöglicht.</li>
	<li>Um Trockenheit während des Verfahrens zu verhindern, gelten Sie Schmiermittel für Augen und platzieren Sie den Mauszeiger in Bauchlage auf einer benutzerdefinierten Bühne. Hinweis: Um angemessene Bedingungen für Intra-orale Verfahren beizubehalten, Werkzeuge sollten nicht desinfiziert oder vor jedem Gebrauch sterilisiert.</li>
	<li>Öffnen der Mundhöhle durch die Sicherung der Oberkiefer-Schneidezähne über einen metallischen Strahl, und verwenden Sie eine elastisches Band, nach unten gerichtete Spannung hinter den Unterkiefer Schneidezähne (Abbildung 2A) anzuwenden.</li>
	<li>Richten Sie die Maus unter dem sezierenden Mikroskop, so dass die Unterseite des Kiefers visualisiert wird.</li>
	<li>Um den Mund zu verbreitern, verwenden Sie einen benutzerdefinierte, geschwungenen Stahl Retraktor Spannung die bukkale Schleimhaut auf bilateraler Ebene zuweisen.</li>
	<li>Um die submandibulären Papillen zu visualisieren, greifen Sie und heben Sie vorsichtig die Zunge aus dem Boden der Mundhöhle mit stumpfen Pinzette. Hinweis: Die Papillen erscheinen als zwei blasse Ausbuchtungen unter der Zunge (Abb. 2 b).</li>
	<li>Um die Visualisierung und weitere Manipulation in der Mundhöhle zu erleichtern, legen Sie Baumwolle zwischen der Zunge und die bukkale Schleimhaut.</li>
</ol>(3) duktale Kanülierung und Linie Platzierung
<ol><li>Mit feinen, greifen gebogenen Pinzette Katheter Schlauch mit der Draht-Einschub. Richten Sie für eine optimale manuelle Steuerung während Kanülierung den Schlauch mit der Krümmung der Zange (Abb. 3A).</li>
	<li>Bewegen Sie mit dem sezierenden Mikroskop die Zange und Draht in das Blickfeld. Hinweis: Das Kabel sollte aus den Rohren herausragt.</li>
	<li>Sanft Druck in den unteren Teil einer mandibulären Papille mit dem Draht eingelassen um eine kleine, oberflächlich, Schleimhaut Punktion (0,076 mm Durchmesser) zu produzieren, die später den Katheter Schlauch (0,25 mm Durchmesser) ermöglichen wird. Wenn Widerstand gestoßen ist, schneiden Sie frische abgeschrägte Tipps, Schläuche und Kabel Einschub mit scharfen sezierenden Schere.</li>
	<li>Zurückziehen Sie nach dem Einstieg der Mandrin, und bestätigen Sie das sezierenden Mikroskop das Vorhandensein von Speichel auf die Einstichstelle. Vermeiden Sie kraftvoll oder plötzliche Bewegung (Rückzug oder einfügen) der das Stilett, das möglicherweise dazu führen, dass Blutungen oder duktale Integrität.</li>
	<li>Ziehen Sie das Stilett innerhalb der Schläuche (Abb. 3 b).</li>
	<li>Um sicherzustellen, dass die Injektion Schläuche in Wharton Kanal öffnen passt, legen Sie Schläuche, enthält das Stilett als starre Leitfaden in der zuvor erstellten Punktion (Abbildung 2 C). Hinweis: Wenn nicht rasch durchgeführt werden, kann lokale Schwellung Wiedereinfügen verhindern.</li>
	<li>Um Gegendruck von längeren duktale Obstruktion zu verhindern, zurückziehen der Schläuche. Überprüfen Sie um sicherzustellen, dass eine Öffnung, unter Mikroskopie, sichtbar in der mandibulären Papille gesehen werden kann. Wenn sichtbare Blutung auftritt, entfernen Sie das Stilett und erneut ab Schritt 3.2 auf der gegnerischen mandibulären Papillen.</li>
	<li>Verwalten Sie, ohne die Maus zu bewegen, intraperitoneale Injektion von 1 mg/kg Atropin Lösung, Speichelfluss während des Verfahrens zu reduzieren. Warten Sie ca. 5-10 Minuten.</li>
	<li>Fassen Sie das Ende der Spritze Schlauch, und legen Sie in der Öffnung das sezierenden Mikroskop (Abbildung 3). Wenn Widerstand gestoßen ist, schneiden Sie eine frischen abgeschrägte Ende Schlauch und Reattempt.</li>
	<li>Sobald der Schlauch innerhalb der mandibulären Papille ist, langsam vorwärts 3-5 mm in den Kanal. Lassen Sie den Schlauch aus der Zange.</li>
	<li>Um die Dichtung zwischen der Rohrleitung und der mandibulären Papille zu verbessern, trocknen Sie die Schnittstelle durch sanft abtupfen mit Gaze für 1 min.</li>
	<li>Überprüfen Sie um sicherzustellen, dass die Position des Schlauches während der Trocknung nicht verschoben hat.</li>
</ol>4. Injektion
<ol><li>Material mit einer Rate von 10 µL/min. Inspect zu bestätigen, dass die Maus sediert bleibt und keine Zeichen der Bedrängnisses (Abb. 2D zeigt) zu injizieren. Hinweis: Injektionen von 15-50 µL sind gut verträglich. Injektion von größeren Mengen kann Barotrauma führen.</li>
	<li>Behalten Sie im Anschluss an die Injektion Spritze Druck für 5 min um die Beibehaltung des Materials innerhalb Whartons Luftkanal und SMG (Abbildung 4) zu verbessern. Überprüfen Sie die submandibulären Papille regelmäßig, um sicherzustellen, dass die Schläuche die ductal Öffnung nicht beendet wird.</li>
	<li>Mit feinen Pinzette, fassen und vorsichtig den Schlauch vom mandibulären Papillen zurücktreten. Hinweis: Es ist normal, einige Flüssigkeit Austritt aus den Papillen zu beobachten.</li>
	<li>Entfernen Sie die Aufrollvorrichtung und Baumwolle aus der Mundhöhle vor dem Bewegen der Maus von der Bühne. Hinweis: Das Tier sollte nicht unbeaufsichtigt gelassen werden bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat. Darüber hinaus stellen Sie sicher, dass die Maus nicht mit anderen Mäusen bis vollständig erholt untergebracht ist.</li>
</ol>5. Überprüfung und Analyse
Hinweis: Eine in-Vivo Imaging System (IVIS) kann verwendet werden zur Aufbewahrung von eindringmittel beschrifteten Nanopartikel nach Injektion (wie gezeigt 1 h und 24 h nach der Injektion in Abbildung 5) zu beurteilen.
<ol><li>Um Fluoreszenzsignal innerhalb der SMG durch die Haut sichtbar zu machen, entfernen Sie das ventrale Fell über die SMGs entweder durch rasieren oder mit einem chemischen Enthaarungsmittel. Hinweis: Nach Euthanasie, SMG Gewebe kann auch geerntet werden, wurde behoben (Übernachtung in 4 % Paraformaldehyd) und gebeizt verwenden Immunohistochemistry zur Bestätigung der Persistenz von eindringmittel beschrifteten NP einen Tag nach der Injektion (Abbildung 6).</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Retroductal Injektion ist entscheidend für lokalisierte Drug-Delivery, die Speicheldrüse. Diese Technik findet Anwendung in screening-Therapeutika für Bedingungen einschließlich der Sjögren-Syndrom und RIH9,10,28. Direkte Medikamentenabgabe in der SMG durch Retroductal Injektion bietet einen entscheidenden Vorteil gegenüber systemischen Verabreichung in seinem Potential, Ziel-Effekte, darunter Immunaktivierung1...

Speicheldrüse Dysfunktion hat viele Ursachen, einschließlich Sjögren Syndrom, eine Autoimmun vermittelte Verlust von sekretorischen Funktionsgewebe und Strahlung induzierte endodontischen (RIH), eine gemeinsame Sequella von Kopf und Nacken Krebs Strahlentherapie1. Speichel Funktionsverlust aufgrund entweder Bedingung prädisponiert zu mündlichen und systemische Infektion, Karies, Verdauungs- und schlucken Dysfunktion, Sprachstörungen und schweren Depressionen1,2,3Personen. Infolgedessen leidet der Lebensqualität erheblich, mit Interventionen zur Linderung der Symptome, anstatt Heilung4begrenzt. Um neuartige Therapien in Vivozu untersuchen, ist es von Interesse, bioaktive Verbindungen, die direkt auf die Speicheldrüse zu verwalten.
Retroductal Injektion ist eine wertvolle Methode, um liefern bioaktive Verbindungen direkt an die Speicheldrüsen und die Wirksamkeit zu testen, bei Krankheit, Verletzung, oder unter normalem Gewebe Homöostase. Die drei großen Speicheldrüsen sind der Parotis (PG), der mandibulären (SMG) und der Sublingual (SLG), alle welche leer in die Mundhöhle durch Ausscheidungsorgane Kanäle. Die Anatomie der Murine SMG ermöglicht direkten Zugang durch Kanülierung der Wharton Kanal, befindet sich in dem Boden der Mundhöhle unter der Zunge5. Anschluss an die Kanülierung SOLVATISIERTE Drogen kann direkt an die SMG verabreicht werden. Nach Retroductal Lieferung beschränkt sich extra glanduläre Diffusion durch die umliegenden Gewebe Kapsel regelt den Austausch von Material mit den umliegenden Strukturen6. Die SMG seinen Kanal sind beim Menschen ähnlich strukturiert und werden routinemäßig bei SMG Chirurgie und Sialoendoscopy7aufgerufen. In Mensch und Maus ist das PG ebenfalls über Stensen Rohr in die bukkale Schleimhaut8erreichbar.
In murinen Modellen der RIH wurde SMG Retroductal Injektion zur liefern Therapeutika wie Wachstumsfaktoren, Primärzellen, adenovirale Vektoren, Zytokine und antioxidativen Verbindungen zu modulieren die zelluläre Reaktion auf eine Verletzung, und reduzieren Sie die daraus resultierenden Gewebe Schaden5,9,10,11,12,13,14,15,16. Die wichtigste klinische Erfolg Retroductal Injektion ist die Verwaltung von adenoviralen Vektor direkten Ausdruck von einem Wasserkanal (Aquaporin-1; AQP1) bei Patienten nach der Strahlentherapie bei Kopf-Hals-Krebs-17.
Zuvor haben wir entwickelt und gezeigt, die Wirksamkeit eines Retroductally injiziert Polymeren Nanopartikel-SiRNA-Systems zum Schutz der Speicheldrüse Funktion von RIH11,18,19,20. Als Erweiterung unserer bisherigen Arbeit zeigen hier, wir, unser Protokoll für Retroductal SMG Injektion mittels eindringmittel beschrifteten Nanopartikel (NP) laden und liefern sonst schwerlösliche21,22, Medikamente 23.
Wir haben die NP aus einem Diblock Copolymers bestehend aus Poly (Styrol-Alt-Maleinsäure anhydride)-b-poly(styrene) (PSMA) durch reversible Addition Kette Fragmentierung (FLOß) Polymerisation, wie zuvor beschrieben21. synthetisiert. Durch lösungsmittelaustausch zusammensetzen selbst dieser Polymere spontan in Micelle NP Strukturen mit einem hydrophoben innen- und hydrophilen außen21. Die NPs sind mit Texas-rot Fluorophore, die Überprüfung der NP-Lieferung in den Drüsen zu gestatten, ohne das Tier gekennzeichnet. Live Animal Imaging und SMG Immunohistochemistry zeigt sich bei 1 h und 1 Tag nach der Injektion.
Dies aktualisiert und reproduzierbare Kanülierung Protokoll sollte damit andere Retroductal Injektion zu erreichen. Wir erwarten, dass diese raffinierte Technik für in Vivo Studien und therapeutische Entwicklung24,25von entscheidender Bedeutung.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpin Hydrochlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpin</td></tr><tr><td>Student Vannas Federschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Federschere für Tracheostomie</td></tr><tr><td>Sterile Kochsalzlösung</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Dumont #7 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Gebogene Pinzette</td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Gerade Pinzette</td></tr><tr><td>mit Standardmuster</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Stumpfe Pinzette</td></tr><tr><td>Feine Schere - Wolframkarbid</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Sezierschere</td></tr><tr><td>Mikrohämatokrit Heparinisierte Kapillarrohre</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Kapillarrohre</td></tr><tr><td>Gleitmittel Augensalbe</td><td>Aktualisieren</td><td>N/A</td><td>Aktualisieren Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Ziege polyklonales Anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antikörper</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole, Dihydrochlorid)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism GraphPad</td><td></td><td>ver6.0</td><td>Statistische Software</td></tr><tr><td>Applikator mit Wattespitze</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applikator für Augensalbe</td></tr><tr><td>0,5cc Insulinspritze, 29G x 1/2"</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Spritze für die intraperitoneale Injektion</td></tr></tbody></table>

retroductal nanopartikel injektion an der murinen mandibulären drüse

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Zwei gemeinsame Ziele der Speicheldrüse Therapeutika sind Vorbeugung und Heilung von Gewebe Dysfunktion nach entweder autoimmune oder Strahlung Verletzung. Durch die Bereitstellung von bioaktiver Verbindungen, die lokal auf die Speicheldrüsen, können mehr Gewebe Konzentrationen sicher im Vergleich zu systemischen Verabreichung erreicht werden. Darüber hinaus können Effekte aus extra glanduläre Anhäufung von Material aus Zielgewebe drastisch reduziert werden. In diesem Zusammenhang ist Retroductal Injektion eine weit verbreitete Methode für die Untersuchung von Speicheldrüse Biologie und Pathophysiologie. Retroductal Gabe von Wachstumsfaktoren, Primärzellen, adenovirale Vektoren und niedermolekulare Medikamente hat sich gezeigt, zur Unterstützung der Drüse Funktion in der Umgebung der Verletzung. Wir haben zuvor gezeigt, die Wirksamkeit einer Retroductally eingespritzt Nanopartikel-SiRNA Strategie zur Drüse Funktion nach Bestrahlung aufrecht zu erhalten. Hier ist eine sehr effektive und reproduzierbare Methode Nanomaterialien an der murinen mandibulären Drüse durch Wharton Leitung Verwaltung detailliert (Abbildung 1). Wir beschreiben den Zugriff auf die Mundhöhle und die notwendigen Schritte zur cannulate Wharton gelegt werden, mit weiteren Beobachtungen dienen als Qualitätskontrollen während des Verfahrens zu skizzieren.

Retroductal Injektion einsetzbar, NPs auf der murinen SMG (Abbildung 1) zu verwalten. Hier liefern wir 50 µg PSMA NPs mit Texas Red Fluorophore beschriftet.
Die richtige Platzierung der Maus ermöglicht einfachen Zugang und Visualisierung von dem Boden der Mundhöhle (Abbildung 2A-B). Die submandibulären Papillen sind als zwei fleischigen Ausbuchtungen un...

Lokalen Drug-Delivery, die submandibulären Drüsen ist Interesse an Verständnis Speicheldrüse Biologie und für die Entwicklung neuer Therapeutika. Wir präsentieren Ihnen eine aktualisierte und detaillierte Retroductal Injektion Protokoll, entworfen, um Lieferung Genauigkeit und experimentelle Reproduzierbarkeit zu verbessern. Die enthaltenen Anwendung ist die Lieferung von Polymeren Nanopartikel.

Retroductal Nanopartikel Injektion an der murinen mandibulären Drüse

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Nanomaterialien direkt in die submandibuläre Drüse der Maus zu verabreichen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine direkte Abgabe von Verbindungen an die Unterkieferdrüse unter Umgehung des systemischen Kreislaufs erreicht. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie der Speicheldrüsenfunktionsstörung nach einer Strahlenbehandlung bei Malignomen des Kopfes und Halses.Im Allgemeinen können Individuen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, durch die Lokalisierung und Kanülierung des Ductus submandibularis herausgefordert werden, während das Tier sediert wird. Um diesen Vorgang zu beginnen, schneiden Sie drei Zentimeter eines 32-Gauge-Hirnkatheterschlauchs mit eingesetztem Draht ab, um ein abgeschrägtes Ende von etwa 45 Grad zur Längsachse zu bilden. Vergewissern Sie sich, dass der Draht mindestens einen Zentimeter länger ist als der Schlauch.Das Schaffen einer abgeschrägten Kante am Schlauch erleichtert die Kanülenbildung. Wenn der Schlauch während des Eingriffs verbogen wird, sollte eine frische abgeschrägte Kante geschnitten werden. Laden Sie anschließend 50 Mikroliter PSMA-Nanopartikellösung oder anderes Injektionsmaterial in eine Hamilton-Spritze.Um die Wahrscheinlichkeit eines Höhlentraumas während der Injektion zu verringern, befestigen Sie den Katheterschlauch an der Spritze und stoßen Sie das Totvolumen aus. Untersuchen Sie die Injektionslösung, um sicherzustellen, dass das Nanopartikel vollständig solvatisiert ist, um eine duktale Obstruktion zu vermeiden. Bereiten Sie dann Atropinlösung mit 0,1 Milligramm pro Milliliter vor.Um den duktalen Eintrittspunkt zu visualisieren, platzieren Sie eine anästhesierte Maus in Bauchlage auf einer benutzerdefinierten Bühne. Tragen Sie dann Salbe auf die Augen auf, um Trockenheit während des Eingriffs zu vermeiden. Befestigen Sie anschließend die Schneidezähne des Oberkiefers über einem Metallbalken und üben Sie mit einem Gummiband eine Spannung nach unten hinter den Unterkieferschneidezähnen aus.Richten Sie die Maus unter dem Präpariermikroskop aus, um die Basis des Kiefers sichtbar zu machen. Um das Maul zu erweitern, verwenden Sie einen speziell gebogenen Stahlretraktor, um die Wangenschleimhaut bilateral zu spannen. Um die submandibuläre Papille sichtbar zu machen, greifen Sie die Zunge und heben Sie sie mit einer stumpfen Pinzette vorsichtig vom Mundboden an.Legen Sie ein Stück Watte zwischen die Zunge und die Wangenschleimhaut, um eine weitere Manipulation in der Mundhöhle zu ermöglichen. Um eine duktale Kanülierung und Leitungsplatzierung durchzuführen, fassen Sie den Katheterschlauch mit einem Drahteinsatz an. Für eine optimale manuelle Kontrolle während der Kanülierung richten Sie den Schlauch an der Krümmung der Pinzette aus.Bewegen Sie mit dem Präpariermikroskop die Pinzette und den Draht in das Sichtfeld. Üben Sie mit dem Drahteinsatz vorsichtig Druck auf die Basis einer submandibulären Papille aus, um eine kleine oberflächliche Schleimhautpunktion zu erzeugen, die den späteren Eintritt in den Katheterschlauch erleichtert. Wenn Sie auf Widerstand stoßen, schneiden Sie mit einer scharfen Präparierschere frische, abgeschrägte Spitzen sowohl am Schlauch als auch am Drahteinsatz ab.Nach dem Eintritt ziehen Sie das Mandrin zurück und bestätigen dann mit dem Präpariermikroskop das Vorhandensein von Speichel an der Einstichstelle. Ziehen Sie anschließend das Mandrin weiter in den Schlauch ein. Vermeiden Sie gewaltsame oder plötzliche Bewegungen des Mandrettes, die zu Blutungen führen oder die Integrität der Ductus beeinträchtigen können.Um sicherzustellen, dass der Injektionsschlauch in die Kanalöffnung des Wharton passt, führen Sie den Schlauch, der das Mandrin als starre Führung enthält, in die zuvor vorgenommene Punktion ein. Um zu verhindern, dass der Gegendruck zu einer duktalen Obstruktion führt, ziehen Sie den Schlauch zurück. Achten Sie unter dem Mikroskop darauf, dass eine Öffnung in der submandibulären Papille zu sehen ist.Wenn sichtbare Blutungen auftreten, entfernen Sie das Mandrin und wiederholen Sie die Eingriffe an der gegenüberliegenden submandibulären Papille. Verabreichen Sie anschließend ohne Bewegung der Maus intraperitoneal ein Milligramm pro Kilogramm Atropinlösung, um die Erhöhung während des Eingriffs zu reduzieren. Warten Sie dann fünf bis 10 Minuten.Führen Sie unter dem Präpariermikroskop den Spritzenschlauch in die Öffnung ein. Wenn Sie auf Widerstand stoßen, schneiden Sie ein frisches, abgeschrägtes Ende am Schlauch ab und versuchen Sie es erneut. Sobald der Schlauch in der submandibulären Papille sitzt, schieben Sie ihn langsam drei bis fünf Millimeter in den Kanal vor.Lösen Sie dann den Schlauch von der Pinzette. Um die Abdichtung zwischen dem Schlauch und der submandibulären Papille zu verbessern, trocknen Sie die Grenzfläche, indem Sie sie eine Minute lang vorsichtig mit Gaze abtupfen. Überprüfen Sie, ob sich die Position des Schlauchs während des Trocknens nicht verschoben hat.Bei diesem Verfahren injizieren Sie das Material mit einer Geschwindigkeit von 10 Mikrolitern pro Minute. Stellen Sie sicher, dass die Maus sediert bleibt und keine Anzeichen von Stress zeigt. Halten Sie nach der Injektion den Spritzendruck fünf Minuten lang aufrecht, um die Materialretention im Wharton-Kanal und in der Unterkieferdrüse zu verbessern.Untersuchen Sie die submandibuläre Papille regelmäßig, um sicherzustellen, dass der Schlauch nicht aus der duktalen Öffnung austritt. Die Aufrechterhaltung des Injektionsdrucks erhöht die Wirksamkeit der retroduktalen Verabreichung. Mit einer feinen Pinzette den Schlauch aus der Unterkieferpapille greifen und vorsichtig herausziehen.Entfernen Sie den Retraktor und die Watte aus der Mundhöhle, bevor Sie die Maus vom Tisch wegbewegen. Um die Verabreichung von Nanopartikeln zu verifizieren, zeigt das In-vivo-Bildgebungssystem eine Stunde nach der Injektion die Lateralisierung des roten Fluoreszenzsignals auf die behandelte Seite der Maus. Und dieses Bild zeigt, dass das Nanopartikelsignal 24 Stunden nach der Injektion deutlich abgenommen hat.Um die Persistenz der Nanopartikel in den Unterkieferdrüsen 24 Stunden nach der Injektion zu bestätigen, wurden sie geschnitten und durch Fluoreszenzbildgebung betrachtet. Hier sind die nicht injizierten Kontrolldrüsen submandibulärer Drüsen zu sehen, die mit Aquaporin 5 und Keritin fünf gefärbt sind und die sekretorischen Acini- bzw. Ductalzellen markieren. In retroduktalen Nanopartikeln, die submandibuläre Drüsen injiziert werden, zeigen Aquaporin-Fünf- und Keritin-Fünf-Färbungen eine normale Drüsenmorphologie und Nanopartikel, die sowohl in den Acini als auch in den Gängen aufgenommen werden.Einmal gemeistert, kann diese Technik in 20 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, Fremdbewegungen zu vermeiden, die die Kanüle lösen oder die Abdichtung zwischen dem Schlauch und der submandibulären Papille stören könnten. Im Anschluss an das Verfahren können weitere Methoden wie Immunfärbung, RNA-Extraktion oder Durchflusszytometrie durchgeführt werden, um die Genexpression oder die Lokalisierung von Nanomaterialien in der Unterkieferdrüse zu bewerten.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Speicheldrüsenforscher, um Verbindungen zur Xerostomieprävention zu untersuchen und zu testen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Nanomaterialien direkt an die submandibuläre Drüse der Maus durch Kanülierung des Wharton-Kanals verabreicht werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Ein Protokoll für die Kanülierung der Maus Glandula Speicheldrüse über die Wharton-Gang beschrieben. Für dieses Experiment ist die Trypanblau-Lösung als Färber verwendet werden, um zu demonstrieren, wie diese Technik effektiv liefert Infusionen in die gezielte Drüse, und die Zuverlässigkeit dieses neuen Ansatzes als potenzielle klinische Arzneimittelentwicklung / Zelltherapie für die Regeneration der Speicheldrüsen vorschlagen.

Kanülierung der Maus Submandibular Speicheldrüsen über die Wharton-Gang

Dieses Video beschreibt eine intraduktale Injektionstechnik, bei der wir Injektionsmischung in die Kanäle der Brustdrüsen von Mäusen einbringen.

Intraduktale Injektion: Abgabe der Injektionsmischung in die Kanäle der Brustdrüse der Maus

Das Video zeigt eine ultraschallgesteuerte Injektionstechnik zur Verabreichung von therapeutischen Medikamenten in die Speicheldrüsen eines menschlichen Patienten.

Eine ultraschallgesteuerte Injektion von therapeutischen Medikamenten in die menschlichen Speicheldrüsen

Ein Protokoll für die nicht-invasive intraductal Lieferung von wässrigen Reagenzien zu der Brustdrüse der Maus beschrieben. Die Methode nutzt lokalisierte Injektion in den Brustwarzen der Brustdrüsen Targeting Milchgänge speziell. Diese Technik ist für eine Vielzahl von Verbindungen, einschließlich siRNA, chemotherapeutischen Mitteln und kleinen Molekülen anpaßbar.

Intraduktale Injection für Lokalisierte Drug Delivery auf die Maus Milchdrüse

Lymphknoten sind die immunologischen Gewebe, die die Immunantwort orchestrieren und ein kritisches Ziel für Impfstoffe sind. Biomaterialien wurden eingesetzt, um Lymphknoten besser anzusprechen und die Abgabe von Antigenen oder Hilfsstoffen zu kontrollieren. Dieser Artikel beschreibt eine Technik, die diese Ideen kombiniert, um biokompatible Polymerpartikel in Lymphknoten zu injizieren.

Intra-Lymphknoten-Injektion von biologisch abbaubaren Polymerpartikeln

Unterfunktion der Speicheldrüsen, eine schwerwiegende Nebenwirkung der Kopf- und Hals-Strahlentherapie, verringert die Lebensqualität eines Patienten. Der Nachweis der Wirksamkeit neuer Therapien im Tiermodell ist eine Voraussetzung für den klinischen Übergang. Dieses Protokoll beschreibt die retroduktale Verabreichung und lokale Bestrahlung der submandibulären Drüsen der Ratte.

Retroductal Submandibulardrüse Einträufeln und Lokalisierte fraktionierten Bestrahlung in einem Rattenmodell von Speichel- Unterfunktion

Wir beschreiben ein Protokoll zur chirurgisch freizulegen und Stabilisierung der murinen mandibulären Speicheldrüse intravitalen Bildgebung mit aufrechten intravitalen Mikroskopie. Dieses Protokoll ist leicht anpassbar an anderen therapeutisches Drüsen von Kopf und Hals-Bereich der Mäuse und andere kleine Nagetiere.

Vorbereitung der murinen mandibulären Speicheldrüse aufrecht Intravitalen Mikroskopie

Speicheldrüsen wurden als Gewebezielstelle für die Gentherapie vorgeschlagen, insbesondere im Bereich der Impfung durch Gentransfer. Wir demonstrieren die Genabgabe in einem nicht-menschlichen Primatenmodell mit retrograder Ohrspeicheldrüseninfusion.

Retrograde Ohrspeicheldrüseninfusion durch Stensen-Kanal in einem nicht-menschlichen Primaten für vektorierte Genabgabe

Im vorliegenden Protokoll wurde die endotheliale Barrierefunktion der submandibulären Drüse (SMG) durch Injektion verschiedener molekulargewichteter Fluoreszenztracer in die Winkelvenen von Versuchstiermodellen in vivo unter einem Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskop bewertet.

Im lebenden Organismus Nachweis der vaskulären Permeabilität in der submandibulären Drüse der Maus

Die immunfluoreszierende Bildgebung ist durch die Fähigkeit eingeschränkt, komplexe, zeitabhängige biologische Prozesse in nur einer einzigen Momentaufnahme zu beobachten. Diese Studie skizziert einen Live-Imaging-Ansatz, der an präzisionsgeschnittenen Unterkieferdrüsenschnitten von Mäusen durchgeführt wird. Dieser Ansatz ermöglicht die Echtzeitbeobachtung von Zell-Zell-Interaktionen während der Homöostase und der Regenerations- und Reparaturprozesse.

Untersuchung von Zell-Zell-Interaktionen in der Speicheldrüse mittels ex vivo Lebendzell-Bildgebung

Hier beschreiben wir das Protokoll für die in vivo Verabreichung von magnetischen Eisenoxid-Nanopartikeln, die RNA-Oligomere tragen, an metastasierenden Brustkrebs in Tiermodellen und bieten damit einen klinisch praktikablen Ansatz für das therapeutische Silencing von onkogenen Nukleinsäuren.

Überwachung der Akkumulation von Nanomedikamenten in Brustkrebsmetastasen bei Mäusen

Lernen Sie die retroduktale Nanopartikel-Injektion an der murinen mandibulären Drüse. Diese Methode ermöglicht gezielte Wirkstoffabgabe bei Speicheldrüsenfunktionsstörungen nach Strahlentherapie.

Retroductal Nanopartikel Injektion an der murinen mandibulären Drüse

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