Name: Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Lernen Sie die ultraschallgeführte Injektion von Neuroblastomzellen in die Nebenniere von Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Erstellung biologisch relevanter orthotoper Xenotransplantate für präklinische Krebsforschung und Arzneimittelentwicklung.

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Diese Arbeit wurde von der Robert Wood Johnson Foundation/Amos medizinische Fakultät Entwicklung Programm, Taubman Research Institute, und die Sektion für Kinderchirurgie, der University of Michigan unterstützt. Die Autoren möchten Kimber Converso-Baran und Dr. Marcus Jarboe danken für die Unterstützung bei der Ultraschall-Injektionsverfahren und imaging Plattform. Wir danken Paul Trombley für seine Unterstützung bei der Abbildung Grafiken. Gewähren Sie wir danken auch die Abteilung für Radiologie an der University of Michigan für den Einsatz des Center für Molekulare Bildgebung und der Tumor-Imaging-Kern, die teilweise durch umfassende Cancer Center NIH unterstützt werden, P30 CA046592. Der University of Michigan Physiologie Phänotypisierung Kern, der teilweise durch Zuschüsse von der NIH (OD016502) und Frankel Cardiovascular Center unterstützt wird. Zelle Zeile Authentifizierung erfolgte bei IDEXX RADIEN Bioresearch Einrichtungen, Columbia, MO. Wir danken Tammy Stoll, Dr. Rajen Mody und Mott solide Tumor-Onkologie-Programm. Unsere Patienten und Angehörigen sind dankbar für ihre Inspiration, Mut und kontinuierliche Unterstützung unserer Forschung anerkannt.

Alle Arbeit erfolgte in Übereinstimmung mit der University of Michigan Institutional Review Board (HUM 00052430) und entspricht den Verfahren, die von der Universität Ausschuss für Gebrauch und Pflege von Tieren (UCUCA) genehmigt. Die Einheit für Labor von Tier Medizin (ULAM) beaufsichtigte Tierpflege.
Alle Arbeit wurde mit Genehmigung von der University of Michigan Institutional Review Board (HUM 00052430) getan und alle Humanforschung Ethik Komitee Vorschriften entspricht. Menschliche Zellen gelten als potenziell biogefährliches Material sein, also folgen alle Vorsichtsmaßnahmen und entsprechende Biosafety-Praktiken, die von Ihrer Institution erforderlich sind. NSG-Mäuse sind stark immungeschwächten und anfällig für Krankheiten, verursacht durch Bakterien in der Umwelt weit verbreitet. Verwenden Sie immer strengen sterilen Technik, bei der Vorbereitung der Materialien für die Implantation und die Injektionen durchführen.
(1) Zellkultur
<ol><li>Etablierten menschlichen NB Zelllinien (SH-SY5Y, SK-N-BE2 und IMR32) in minimaler wesentliches Medium wachsen mit 10 % fötalen Rinderserum, 2 mM Glutamin, 100 Einheiten/mL Penicillin und 100 μg/mL Streptomycin ergänzt. IMR32 Zellen weiter mit 1 mM Pyruvat und 0.075 % Nahco33zu ergänzen. Halten Sie alle Zellen bei 37 ° C, 5 % CO2 und 70-80 % Zusammenfluss.
</li>
	<li>Wachsen Sie menschliche ES Zelllinien (TC32, A673 CHLA-25 und A4573) in RPMI Medium mit 10 % fötalen Rinderserum und 6 mM L-Glutamin ergänzt. Halten Sie alle Zellen bei 37 ° C, 5 % CO2 auf 70-80 %.
</li>
	<li>Senden Sie alle Zelllinien für die Authentifizierung. Hinweis: Zelle Authentifizierung erfolgt bei einer Außenanlage, verweisen wir auf Bestätigungen.</li>
</ol>2. Vorbereitung des Patienten abgeleitet Primärtumor Zellen
<ol><li>Mit Zustimmung des Patienten und Zustimmung verworfen Ernte menschlichen NB Tumorgewebe von Patienten, die eine chirurgische Resektion für lokale Kontrolle und Transport ins Labor in Gewebe Speicherlösung für Erhaltung. Hinweis: Alle Patientenproben de identifiziert und entsprechend den Institutional Review Board Richtlinien behandelt.</li>
	<li>Generieren Sie einen einzigen Patienten abgeleitet Krebs Zellsuspension (UMNBL001, UMNBL002) aus Tumorgewebe mit einem Tumor Dissoziation-Kit. Transfer ca. 0,5 g des Tumors zum einen 100 mm Zelle Kulturschale mit 5 mL RPMI Puffer, 200 µL Enzym H, 100 µL Enzym R und 25 µL Enzym A aus dem menschlichen Tumor-Dissoziation-Kit.</li>
	<li>Hacken den Tumor in kleine Stücke (2-4 mm) mit Schere und Zange Gewebe. Mischen Sie diese Fragmente mit den Lösungen im Schritt 2.2.</li>
	<li>Pipette die Tumor-Mischung in ein Dissociator Rohr und das Röhrchen verschließen. Invertieren der Röhre und auf der Hülle der Gewebe Dissociator befestigen. Führen Sie auf Programm h_tumor_01.</li>
	<li>Inkubieren Sie die Tumor-Zellsuspension oben erhaltenen bei 37 ° C für 1 h auf einem drehbaren Gestell mit intermittierenden Verreibung alle 15 min.</li>
	<li>Übertragen der Zellsuspension auf eine neue konische Rohr 50 mL und 10 mL RPMI. Zentrifugieren Sie die Zellsuspension bei 314 X g für 5 min.</li>
	<li>Den überstand zu entfernen und das Pellet in 5 mL RPMI auszusetzen. Diese Lösung durch ein 40 µm Zelle Sieb passieren und die angespannte Lösung in ein frisches 50 mL konische Röhrchen sammeln. Waschen Sie dieses Sieb einmal mit 5 mL RPMI Medien und Zentrifugieren Sie die Mischung bei 314 X g für 5 min, ein Pellet zu sammeln.</li>
	<li>Messen Sie die Zelldichte mit einem Hemacytometer15. Aussetzen der Pellets von oben erwarb RPMI, eine Endkonzentration von 4 × 105 Zellen/10 µL zu erhalten. Nehmen Sie 5 µL dieser Zellsuspension und 5 µL Matrigel 10 µL der Zelle Lösung für jede Injektion zu machen. Hinweis: RPMI verwendet hängt die Zelle Dichtemessung. Beispielsweise wenn die gemessenen Zelldichte des erhaltenen Pellets 4 x 105 Zellen ist, aussetzen Sie, das Pellet in 10 µL RPMI.</li>
</ol>(3) Luciferase Tagging von Krebszellen
<ol><li>Machen Sie 10 mL der Transduktion Medien mit viralen überstand EF1a-Luc2-IRES-mCherry 5 mL und 5 mL Stammzell-Medien. Fügen Sie 7,5 µL 1 X Polybrene.</li>
	<li>Mix 5 × 106 Krebszellen in Transduktion Medien und Platte in 100 mm ultra-niedrigen Befestigungsplatte. Inkubation bei 37 ° C und 5 % CO2 über Nacht. Hinweis: Da niedrige anbauplatten verwendet werden, werden Zellen nicht Platte eingehalten.</li>
	<li>Bringen Sie nach 24 h 100 mm Platte Zellen unter Gewebekultur Haube zu, und übertragen Sie die Mischung in ein 15 mL konische Röhrchen. Zentrifugieren der Zellsuspension bei 314 X g für 5 min. zu Fuß die Zelle Pellet. Waschen Sie die Zelle Pellet einmal mit 1 mL 1 x Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS) und Aussetzen der Zelle Pellet in 1 mL HBSS, enthält 1 % fetalen bovine Serum (FBS).<ol>
<li>Sortieren Sie Luciferase Zellen basierend auf GFP-positiven Signal auf Fluoreszenz-aktivierte Zelle Sortieren (FACS) Analyse. Platte der sortierten Zellen auf 100 mm Gewebekultur behandelt-Speise- und pflegen auf 70-80 % Zusammenfluss, 37 ° C und 5 % CO2 bis erforderlich.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Luciferase Signal mit Luciferase Assay Kit zu bestätigen. Platte 10 x 104 sortiert Zellen pro Bohrloch in ein Illuminometer kompatibel 96 gut Platte und inkubieren Sie Zellen über Nacht bei 37 ° C und 5 % CO2. Nach 24 h 96-well-Platte auf Raumtemperatur bringen und kultivierten Medien in Brunnen im Verhältnis 1:1 Steady-Glo Reagenz hinzuzufügen. Können Sie Zellen lysiert für 5 min und Lumineszenz im Spektralphotometer zu lesen.</li>
	<li>Bringen Sie die 100 mm Schale unter einer Gewebekultur Haube. Verwerfen Sie die überstand Medien. Waschen Sie die Zellen einmal mit 2 mL 1 X PBS.</li>
	<li>Fügen Sie 2 mL 0,25 % Trypsin und 100 Millimeter-Teller in den Inkubator für 2-3 min zurück. Nach 2-3 min verdrängt Zellen unter dem Mikroskop suchen Sie und 8 mL RPMI, Trypsin zu deaktivieren.</li>
	<li>Sammeln Sie die Zellsuspension in einem 15 mL konische Rohr und Zentrifuge bei 314 X g für 5 min. zu Fuß ein Pellet. Verwerfen Sie den überstand. Waschen Sie die Zelle Pellet mit 1 mL 1 X PBS, auszusetzen Sie, das Pellet in 5 mL RPMI und bestimmen Sie die Zelldichte mit einem Hemacytometer15. Zentrifugieren Sie Yhe verbleibende Zelle Lösung bei 314 X g für 5 min um eine Kugel zu erhalten.</li>
	<li>Hängen Sie das Pellet in RPMI, eine Konzentration von 4 x 105 Zellen/10 µL zu erhalten. Nehmen Sie 5 µL Zellsuspension und 5 µL Matrigel 10 µL der Zelle Lösung für jede Injektion zu machen.</li>
</ol>4. Ultraschall geführte Nebenniere (NB) oder renale Sub-Kapsel (ES)-Implantation
Hinweis: Alle Ultraschall-Verfahren werden mit einer hohen Auflösung in Vivo imaging-System durchgeführt. Für die beschriebenen Verfahren wurde die Wandler, hat eine Mittenfrequenz von 40 MHz und eine Bandbreite von 22-55 MHz verwendet.
<ol><li>6-8-Woche-alten immundefiziente NSG Mäuse für alle Injektionsverfahren zu nutzen.</li>
	<li>Chill Matrigel und autoklaviert Hamilton Spritzen ausgestattet mit einer 27G Nadel (1,25") und 22G Katheter (0,9 mm Außendurchmesser, Länge 25 mm) über Nacht bei 4 ° c</li>
	<li>Legen Sie die Zelle Lösung in Schritt 3 auf Eis zubereitet.</li>
	<li>Betäuben Sie die Mäuse in einer Induktion Kammer mit 2 % Isofluran O2 bei 2 L/min geliefert. Hinweis: Ausreichende Anästhesie wird mit der Mangel an Bewegung und die Erhaltung der Spontanatmung bestimmt.</li>
	<li>Sobald betäubt, enthaaren Sie den Rücken und die Flanken der Tiere mit Haarwasser entfernen (z. B. Nair) und einen Rasierer.</li>
	<li>Das Tier zum Übertragen der imaging Plattform mit Bauch Seite nach unten, wo die Nase des Tieres in eine Nosecone platziert und sicherte sich beim Einatmen Isofluran</li>
	<li>Setzen Sie optische Salbe in das Tier Augen Austrocknen zu verhindern. Kleben Sie die Maus um eine unbeabsichtigte Bewegung zu verhindern.</li>
	<li>Identifizieren der murinen Leber, Vena Cava, Milz, linke Niere und angrenzenden linke Nebenniere mit Ultraschall Visualisierung.</li>
	<li>Sterile Handschuhe, Maske und Mütze für persönlichen Schutz und Pflege der sterilen Bedingungen zu verwenden. Unter Ultraschallkontrolle sanft legen Sie 22G Katheter durch die Haut und sichern Sie Muskel direkt in der linken Nebenniere für zelluläre Injektion einen Kanal zu. Entfernen Sie die Nadel und verlassen Sie den Katheter im Ort zu.</li>
	<li>Last einer gekühlten Hamilton-Spritze mit einer KK Nadel mit 10 µL der Zelle-Lösung ausgestattet, dann führen Sie die Spritze hierbei durch den Katheter positioniert in der Mitte der Nebenniere.</li>
	<li>Injizieren Sie die Zellen in den Nebennieren Zielgewebe. Belassen der Nadelöhrs für 1-2 min erlauben die Matrigel festlegen. Langsam ziehen Sie die Nadel, gefolgt von der Entfernung des Katheters.</li>
	<li>Setzen Sie die Mäuse wieder in ihren Käfig und sicherstellen Sie, dass die Maus ausreichend zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wieder zu sich kommt. Hinweis: aufgrund des minimal-invasiven Charakters dieser Technik, post prozeduralen Schmerz ist minimal, aber immer noch überwacht auf einer täglichen Basis mit Mäusen Gesundheit Kontrollen. "befolgt werden mit einem Satz:" Wenn unerwartete Zeichen von Schmerz oder Stress im Verlauf gekennzeichnet sind ein Experiment wenden Sie sich bitte mit Ihrem institutionellen tierärztliche Unterstützung Gerät Informationen zur Analgesie oder andere medizinische Versorgung. 
</li>
</ol>

<ol><li>Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+optimal+murine+models+to+investigate+immune+checkpoint+blockers+and+their+combination+with+other+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies.</a> Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).</li>
<li>Fidler, I. J., Hart, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+diversity+in+metastatic+neoplasms%3A+origins+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications.</a> Science. 217 (4564), 998-1003 (1982).</li>
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<li>Hakky, T. S., Gonzalvo, A. A., Lockhart, J. L., Rodriguez, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Ewing+sarcoma+of+the+kidney%3A+a+symptomatic+presentation+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Ther+Adv+Urol%22%5BJournal%5D)">Primary Ewing sarcoma of the kidney: a symptomatic presentation and review of the literature.</a> Ther Adv Urol. 5 (3), 153-159 (2013).</li>
<li>Cheng, H., Clarkson, P. W., Gao, D., Pacheco, M., Wang, Y., Nielsen, T. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Antibodies+Targeting+CSF1+Impede+Macrophage+Recruitment+in+a+Xenograft+Model+of+Tenosynovial+Giant+Cell+Tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Antibodies Targeting CSF1 Impede Macrophage Recruitment in a Xenograft Model of Tenosynovial Giant Cell Tumor.</a> Sarcoma. 2010, 174528(2010).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Using a Hemacytometer to Count Cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology%22">Basic Methods in Cellular and Molecular Biology</a>. , JoVE. Cambridge, MA. (2018).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Angaben.

Ultraschall-geführte Implantation von NB und ES Zellen ist eine effiziente und sichere Methode, um zuverlässige murinen Xenotransplantate für präklinische Studien in der Krebsbiologie zu etablieren. Entscheidend für den Erfolg des Ultraschall-geführte Gewebe gezielt Implantation ist die Präsenz und Verfügbarkeit von geschultem Personal mit Fachwissen in anatomisch Lokalisierung der Orgel von Interesse und Stereotaktische Injektion von Tumorzellen.
Die Dissoziation des Tumorgewebes erwies sich ...

Tierische Xenograft Modelle sind unverzichtbare Werkzeuge für präklinische Studien neuartiger Anti-Krebs-Therapien. Standard murinen Xenotransplantate setzen auf subkutane Flanke Implantation von Zellen, die vorsieht, dass einer effiziente und leicht zugänglichen Website Überwachung Tumorwachstum. Der Nachteil der subkutanen Modelle ist ihr Mangel an Tumor-spezifische biologische Merkmale, die ihr Potenzial metastasize1eingeschränkt werden kann. Solche Einschränkungen sind durch den Einsatz von orthotopen Xenotransplantate in welchem, die Tumor Zellen bei nativen Gewebe, die relevanten Mikroumgebung mit metastasierendem potenzielle2aufgeprägt sind. Orthotopen Xenograft Modelle erhalten ursprüngliche biologischen Eigenschaften und bieten zuverlässige Modelle für präklinische Drug Discovery3,4. Die Krebszellen genutzt für die Implantation unter der Regie von Gewebe sind etablierte Zelllinien oder Patienten gewonnenen Zellen von Patienten Tumoren. Gegründet von Krebszelllinien Xenotransplantate können hohe genetische Abweichung von den primären Tumor im Vergleich zu Patienten abgeleiteten Xenotransplantate5aufweisen. Angesichts dieser Tatsache ist die Einrichtung des Patienten abgeleitet orthotopen Xenotransplantate bevorzugter Standard für das Testen neuen Therapeutika in der Drogeentdeckung Krebs geworden.
In der pädiatrischen Krebs Neuroblastom (NB) orthotopen Xenograft Modelle rekapitulieren Primärtumor Biologie und Metastasen zu typischen Sehenswürdigkeiten der NB verteilt6,7zu entwickeln. NB entwickelt in der Nebenniere oder entlang der paravertebralen Grenzstrang. Die am häufigsten verwendeten Methoden der orthotopen Implantation erfordern offene Trans abdominale chirurgische Eingriffe. Solche Methoden sind oft langweilig, haben hohe Tier Morbidität und komplexe Erholungsphasen. Hochauflösende Ultraschall wurde vor kurzem für Gewebe gerichtet Implantation von Tumorzellen in der Entwicklung von mehreren murinen Modellen für Krebs Forschung8,9genutzt. Die Technik ist zuverlässige, reproduzierbare, effizient und sicher für die Einrichtung von entsprechenden metastasiertem Tumor Xenografts10,11.
Die Einrichtung der pädiatrischen Krebs Xenotransplantate durch Ultraschall-geführte Ziel Orgel Lokalisierung und Nadel Implantation von Zelllinien und Patienten abgeleitet Tumorzellen ist nachgewiesene11. Die Technik war für NB gezielt an der murinen Nebenniere genutzt. Ewing Sarkom (ES) ist überwiegend ein knöcherner Krebs, häufig in den langen Röhrenknochen wie Femur und Beckenknochen12zu sehen. Fallberichte haben gezeigt, dass um festzustellen, ob eine überwiegend knöcherner Krebswachstum in renal Gewebe machbar ist, eine renale Sub Kapsel Lage für orthotopen Implantation13gewählt wurde. Renal Sub Kapsel Zelle Implantation von Tumorzellen ist als ein zukunftsträchtiges Modell, spontane Metastasen für ES14zu studieren verwendet worden.

<table><tbody><tr><td>Mäuse</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NOD-SCID</td><td>Charles River</td><td>394</td><td></td></tr><tr><td>NSG</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Cell Line&nbsp; <</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>strong>NB</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>IMR-32</td><td>ATCC</td><td>CCL-127</td><td>Etablierte humane Neuroblastom-Zelllinie</td></tr><tr><td>SH-SY5Y</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td>Etablierte humane Neuroblastom-Zelllinie</td></tr><tr><td>SK-N-Be2</td><td>ATCC</td><td>CRL-2271</td><td>Etablierte humane Neuroblastom-Zelllinie</td></tr><tr><td><stark>ES</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TC32&nbsp;</td><td></td><td></td> COGcell.ORG <td>Etablierte humane Ewing-Sarkom-Zelllinie</td></tr><tr><td>A673</td><td>COGcell.ORG</td><td></td><td>Etablierte humane Ewing-Sarkom-Zelllinie</td></tr><tr><td>CHLA-25</td><td>COGcell.ORG</td><td></td><td>Etablierte humane Ewing-Sarkom-Zelllinie</td></tr><tr><td>A4573</td><td>COGcell.ORG</td><td></td><td>Etablierte humane Ewing-Sarkom-Zelllinie</td></tr><tr><td>Zelllinie media </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD BioSciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Dissoziation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissektionswerkzeuge</td><td>KentScientific</td><td>INSMOUSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>Dissoziationskit für menschliche Tumore&nbsp;</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-095-929</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Dissoziator</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS C Röhrchen</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>Zellsieb</td><td>Corning</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td>Luciferase Tagging</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lenti-GFP1 Virus</td><td>Universität of Michigan, Vector Core</td><td></td><td>Luciferase Virus</td></tr><tr><td>Steady Glo-Luciferase Assay Kit</td><td>Promega</td><td>E2510</td><td></td></tr><tr><td>Bioluminescence Imaging</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ivis Spectrum Imaging System</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Promega</td><td>E160X</td><td></td></tr><tr><td>Anästhesie</stark> </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inhaliertes Isofluran&nbsp;</td><td>Piramal Critical Care Inc</td><td>66794-0017-25</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound Guided Injection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 High Resolution Imaging</td><td>Vevo</td><td>2100</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Spritzen (27 Gauge Nadel)</td><td>Hamilton</td><td>80000</td><td></td></tr><tr><td>22 Gauge Angiokatheter</td><td>BD Biosciences</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>Optische Salbe</td><td>Große Pharmaunternehmen</td><td>301909</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Church & Dwight Co</td><td></td><td>Haarentfernungsmittel</td></tr><tr><td>Aquasonic 100 Ultraschall Transmission Gel</td><td>Parker</td><td></td><td>Ultraschall gel</td></tr><tr><td>Histology</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD99</td><td>DAKO</td><td>M3601</td><td>Primärer Antikörper</td></tr><tr><td>Tyrosin Hydroxylase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2928</td><td>Primärer Antikörper</td></tr><tr><td>Sekundärer HRP-Polymer Antikörper</td><td>Biocare</td><td>BRR4056KG</td><td></td></tr><tr><td>Miscelleneous</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL Pipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-676-10J</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Pipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-676-10H</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>P1000 Pipette</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td>3120000062</tr><tr><td>P200 Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>P1000 Pipettenspitzen</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-375E</td><td></td></tr><tr><td>P200 Pipettenspitzen</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-375D</td><td></td></tr><tr><td>Tragbare Pipettierhilfe</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>digitale Tierwaage</td><td>KentScientific</td><td>SCL-1015</td><td></td></tr><tr><td>Messschieber</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-664-16</td><td></td></tr><tr><td>6well niedrige Aufsatzplatten</td><td>Corning</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Mit Gewebekulturen behandelte Schalen</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012924</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TR-1003-G</td><td></td></tr></tbody></table>

nutzung von ultraschall geführte gewebe gerichtet zellulären implantation für die einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem tumor xenografts

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Präklinische Tests von Anti-Krebs-Therapien setzt auf relevante Xenograft-Modelle, die die angeborenen Tendenzen des Krebses zu imitieren. Vorteile des standard subkutane Flanke Modelle sind prozedurale Leichtigkeit und die Fähigkeit, Monitor Tumorprogression und Antwort ohne invasive Bildgebung. Solche Modelle sind oft widersprüchlich in translationalen klinischen Studien und eingeschränkten biologisch relevante Merkmale mit geringer Neigung, Metastasen, zu produzieren wie eine native Mikroumgebung fehlt. Im Vergleich dazu zeigten orthotopen Xenograft Modelle an native Tumor Standorten zu imitieren den Tumor Mikroumgebung und wichtige Erkrankung Merkmale wie Ferne Metastasierung zu replizieren. Diese Modelle erfordern oft mühsame Operationsverfahren mit Narkose längere Zeit und Erholung. Um dieses Problem anzugehen, haben Krebsforscher kürzlich Ultraschall-geführte Injektionstechniken zu Krebs Xenograft Modelle für präklinische Experimente, ermöglicht eine schnelle und zuverlässige Einrichtung unter der Regie von Gewebe murinen Modellen genutzt. Ultraschall-Visualisierung ermöglicht auch eine nicht-invasive Methode zur longitudinalen Beurteilung der Tumor Engraftment und Wachstum. Hier beschreiben wir die Methode für die Ultraschall-gesteuerte Injektion von Krebszellen, unter Verwendung der Nebenniere für NB und renale Sub Kapsel für ES. Diese minimal-invasive Ansatz überwindet mühsam offene Operation Implantation von Krebszellen im Gewebe-spezifische Standorte für Wachstum und Metastasierung und morbide Erholungsphasen nachlässt. Wir beschreiben die Verwendung von etablierten Zelllinien und Patienten abgeleitete Zellinien zur orthotopen Injektion. Vorgefertigte kommerziellen Kits sind erhältlich für Tumor Dissoziation und Luciferase tagging von Zellen. Injektion von Zellsuspension mit Bildführung bietet eine minimalinvasive und reproduzierbare Plattform für die Erstellung von präklinischen Modellen. Diese Methode wird genutzt, um zuverlässige präklinischen Modellen für andere Krebsarten wie Blase, Leber und Bauchspeicheldrüse Veranschaulichung seiner ungenutzte Potenzial für zahlreiche Krebs-Modelle zu erstellen.

Mit den beschriebenen Verfahren vorgestellt, erfolgte Ultraschall-geführte Implantation von NB-Zellen in der Nebenniere in einem speziellen Verfahren Raum verfügt über eine beheizte OP-Tisch. Arm und Fuß-Pads stellte für die Überwachung der murinen Herztätigkeit (Abbildung 1A). Das Tier blieb unter kegelkonus Inhalation mit Isofluran betäubt. Mit einer hochauflösenden Ultraschallsonde, wurde die linke Niere mit Nebenniere nur cranial der Niere (<strong class=...

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Ultraschall-gesteuerte Injektion von Neuroblastom (NB) und Ewing Sarkom (ES) Zellen zu nutzen (gegründet Zelllinien und Patienten abgeleitet Tumorzellen) an biologisch relevanten Standorten erstellen zuverlässigere präklinische Modellen für Krebs Forschung.

Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Ziel dieser Methode ist es, biologisch relevante krebsorthotope Xenotransplantate für präklinische Studien zu etablieren. Vom Patienten stammende Neuroblastomzellen werden durch Ultraschallkontrolle in die Nebenniere der Maus injiziert, ohne dass eine offene Operation oder eine längere Genesung erforderlich ist. Diese Methode kann helfen, kritische Fragen in der Krebsbiologie und in der translationalen Forschung zu beantworten, wie z.B. Studien zur Tumorevolution, zu therapeutischen Reaktionen in der nativen Mikroumgebung und zu Metastasen.Ein solches Wissen würde die Zuverlässigkeit präklinischer Studien erheblich verbessern und die Wirkstoffforschung erleichtern. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie von Patienten stammend, gewebegerichtet, effizient und zuverlässig bei der Herstellung eines orthotopen xenographischen Modells für die Krebstherapieforschung ist. Die kritischen Schritte des Verfahrens werden von Sahiti Chukkapalli, einem leitenden Techniker und unserer Laborleiterin, zusammen mit Tina Thomas, einer wissenschaftlichen Mitarbeiterin in unserem Labor, demonstriert.Generieren Sie eine einzelne, vom Patienten stammende Krebszellsuspension aus Tumorgewe

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In diesem Video werden vom Menschen stammende Melanomzellen subkutan in die Flankenregion einer immungeschwächten Maus implantiert. Das PDX-Modell ermöglicht die präklinische Untersuchung von Melanomzellen, die die in  vivo beobachtete Tumorheterogenität und Melanomaggressivität besser rekapitulieren.

Patienten-abgeleitete Xenotransplantat-Modellierung: Eine Technik zur Generierung von Melanom-Mausmodellen

Die etablierte Technik, um primäre invasive orthotopen Blasenkrebs Xenografts impfen erfordert Laparotomie und Mobilisierung der Blase. Dieses Verfahren verursacht eine signifikante Morbidität auf Mäuse, ist technisch anspruchsvoll und zeitaufwendig. Wir haben deshalb eine hohe Präzision, die perkutane Ansatz verwendet Ultraschallkontrolle.

Minimal Invasive Gründung von murinen orthotopen Blasen Xenografts

Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung von orthotopischen Xenograft-Modellen durch intravesische Instillation hochwertiger urotheliaaler Zellkarzinomzellen oder intrarekt injizierende Darmkrebszellen in nicht-fettleibige diabetische/schwere kombinierte Immundefizienz (NOD/SCID) Mäuse für primäres Tumorwachstum und spontane Metastasen unter dem Einfluss von Lymphknoten-Stromalzellen, die das Fortschreiten menschlicher metastasierender Erkrankungen imitieren.

Patientenabgeleitete orthotopische Xenograft-Modelle für humanes Urotheliale Zellkarzinom und Kolorektalkrebs-Tumorwachstum und spontane Metastasierung

Orthotopische humane Leber metastasierenuvealmelanom xenograft MausModelle wurden mit chirurgischen orthotopischen Implantationstechniken mit Patienten-abgeleiteten Tumorstück und Nadelinjektionstechniken mit kultivierten menschlichen uvealen Melanom-Zelllinien erstellt.

Generierung einer Leber orthotopischen Human Enuveal Melanom Xenograft Plattform bei immundefizienten Mäusen

Wir beschreiben ein Protokoll für die ultraschallgeführte Implantation von murinabgeleiteten duktodrischen Adenokarzinom-Zelllinien direkt in die native Tumorstelle. Dieser Ansatz führte zu Pankreastumoren, die durch Ultraschall-Scanning innerhalb von 2-4 Wochen nach der Injektion nachweisbar waren, und reduzierte den Anteil der Tumorzellsaatierung an der Peritonealwand im Vergleich zur chirurgischen orthotopischen Implantation signifikant.

Ultraschallgeführte orthotopische Implantation von murine Pankreas-Ductalsocarcinom

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um die Wirksamkeit gezielter Therapien zu testen, die auf der Grundlage der genomischen Zusammensetzung eines Tumors ausgewählt wurden. Das Protokoll beschreibt die Identifizierung und Validierung struktureller DNA-Umlagerungen, die Einplage von Patiententumoren in Mäuse und die Erprobung von Reaktionen auf entsprechende Medikamente.

Testen von gezielten Krebstherapien mit struktureller DNA-Alterationsanalyse und patientenabgeleiteten Xenografts

Knochenmetastasenmodelle entwickeln Metastasen nicht gleichmäßig oder mit einer 100%igen Inzidenz. Die direkte intraossäre Injektion von Tumorzellen kann zu einer Embolisation der Lunge führen. Wir stellen unsere Technik zur Modellierung von primären Knochentumoren und Knochenmetastasen mittels solider Tumortransplantatimplantation in den Knochen vor, was zu reproduzierbarem Transplantat und Wachstum führt.

Modellierung von primären Knochentumoren und Knochenmetastasen mit Implantation eines soliden Tumortransplantats in den Knochen

Metastasierung des Zentralnervensystems PDX-Modelle repräsentieren die phänotypischen und molekularen Merkmale der humanen Metastasierung und sind damit hervorragende Modelle für präklinische Studien. Hier wird beschrieben, wie PDX-Modelle erstellt werden und welche Inokulationswege am besten für präklinische Studien verwendet werden.

Die Etablierung und Nutzung von patientenabgeleiteten Xenograft-Modellen der Metastasierung des Zentralnervensystems

Wir präsentieren ein Protokoll zur Erstellung eines minimalinvasiven orthotopen Bauchspeicheldrüsenkrebsmodells durch ultraschallgesteuerte Injektion menschlicher Bauchspeicheldrüsenkrebszellen und die anschließende Überwachung des Tumorwachstums in vivo durch Ultraschallbildgebung.

Generierung eines orthotopen Xenografts von Bauchspeicheldrüsenkrebszellen durch ultraschallgeführte Injektion

Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente, nicht-chirurgische Methode zur orthotopen Implantation von Xenotransplantaten von Brustkrebspatientinnen bei Mäusen. Die Technik beinhaltet eine enzymatische Tumordissoziation, gefolgt von einer direkten Injektion in die Brustfettpolster, was eine Hochdurchsatzimplantation ermöglicht. Die umfassende Validierung gewährleistet die Modelltreue und ermöglicht strenge Studien über verschiedene Brustkrebs-Subtypen hinweg.

Hochdurchsatz-Dissoziation und orthotope Implantation von Xenotransplantaten von Brustkrebspatientinnen

Ziel dieses Protokolls ist es, Forschern eine hochgradig reproduzierbare Technik für intrakranielle Implantationen bereitzustellen.

Stereotaktische intrakranielle Implantation von Glioblastom-Patienten-abgeleiteten Xenograftzelllinien bei Mäusen

Lernen Sie die ultraschallgeführte Injektion von Neuroblastomzellen in die Nebenniere von Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Erstellung biologisch relevanter orthotoper Xenotransplantate für präklinische Krebsforschung und Arzneimittelentwicklung.

Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts (Video) | JoVE Journal

Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts

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