Name: Murine distalen Kolostomie, ein neuartiges Modell Ablenkung Colitis bei C57BL/6 Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Erfahren Sie die distale Kolostomie bei C57BL/6-Mäusen zur Untersuchung von Ablenkungskolitis. Dieses Modell ermöglicht die Analyse immunologischer Reaktionen und Mikrobiom-Interaktionen ohne genetische Modifikationen.

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Alle hier beschriebene Methoden wurden vom zuständigen Veterinär Regierung (Forschungsdefizite Für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit Und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern (LALLF M-V)) genehmigt.
1. präoperative Pflege und Vorbereitung des Tieres
<ol><li>Bei der Ankunft in der Tierstation Teile von Tieren (C57Bl/6) in Gruppen von ähnlicher Größe, Käfig jede Gruppe zusammen und Gruppen während der Experimente konstant zu halten. Hinweis: Verwenden Sie Tiere des gleichen Geschlechts. Beschriebenen Ergebnisse wurden bei männlichen Mäusen. Hinweis: Wenn männliche Tiere verwendet werden, Käfig Gruppen zusammen ab, wenn sie 7 Wochen alt sind, so dass eine Hierarchie aufgebaut werden kann, minimiert so das Risiko von aggressivem Verhalten während der Experimente.</li>
	<li>Mindestens eine Woche vor der Operation zu wechseln, um eine hohe Energie (> 14 MJ/kg) und proteinreiche (> 20 %) feed mit allen essentiellen Spurenelementen und Vitaminen (siehe Materialliste). Hinweis: Versichern Sie alle Mäuse wiegen mindestens 25 g, wenn Chirurgie durchgeführt wird.</li>
	<li>Anästhesie und Analgesie durch intraperitoneale Injektion von Ketamin (87 mg/kg i.p) und Xylazin-Hydrochlorid (13 mg/kg i.p) induzieren. Warten Sie, bis die Maus mechanische Stimulation, z.B. Zehe Stellplatz ohne motorische Reaktion toleriert.</li>
	<li>Sichern Sie die narkotisierte Maus mit Bändern in Rückenlage auf einer Wärme-Unterlage aufgestellt am Schreibtisch Betrieb garantieren stabile Positionierung während des Betriebs und die Vermeidung von einem überwältigenden Verlust von Körperwärme. Hinweis: Die Hitze-Unterlage sollte eine Temperatur von 36 ° C bis 40 ° C haben; die Operating Raumtemperatur sollte 21 ° C.</li>
</ol>(2) distale Kolostomie Betrieb
<ol><li>Der Bauch Haare zu rasieren. Desinfizieren Sie vor Beginn der Operation das Operationsfeld dreimal mit Alkohol 70 % und eine jodophor. Drapieren Sie das Operationsfeld zu aseptischen Bedingungen garantieren.</li>
	<li>Führen Sie eine 15 mm mediane Laparotomie durch Einritzen der Bauchmuskulatur und das Bauchfell entlang der Linea Alba, Blutverlust minimiert.</li>
	<li>Verwenden Sie zwei DeBakey atraumatische Pinzetten, ziehen Sie vorsichtig den Blinddarm, terminal Ileum und aufsteigend und Colon transversum aus der Bauchhöhle. Hinweis: Seien Sie vorsichtig, mechanische Manipulation des Darms zum Schutz vor Verletzungen, mesenterialen Strukturen strikt zu begrenzen.</li>
	<li>Identifizieren Sie den cecal Mast, der aufsteigende Dickdarm und Dünndarm (Abbildungen 1a und 1 b). Hinweis: Korrekte Identifizierung des aufsteigenden Dickdarms ist von grundlegender Bedeutung für die korrekte Platzierung der Kolostomie. In Fällen, wo die Anatomie der Ileocecal Region nicht eindeutig ist, das Vorhandensein von Peyer Patches identifiziert den Dünndarm, und das Vorhandensein von geformten Stuhl kennzeichnet den Doppelpunkt.</li>
	<li>Verwenden Sie ein Lineal, um die Position der zukünftigen Kolostomie bestimmen. Es sollte 20 mm distal der Ileocecal Ventil für eine distale Kolostomie platziert werden.</li>
	<li>Machen Sie einen zweiten 3-mm-Schnitt in der Bauchdecke in der oberen rechten Quadranten. Ziehen Sie die zuvor identifizierten Doppelpunkt-Segment durch diesen Schnitt zu einer Schleife, wobei Sie darauf achten, nicht um die Schleife zu verzerren.</li>
	<li>Übergeben Sie sorgfältig eine flexible i.v. 22-Gauge-Kanüle durch das Mesocolon. Achten Sie darauf, nicht um mesenterialen vaskuläre Strukturen zu beschädigen.</li>
	<li>Den Darm in die Bauchhöhle zurück.</li>
	<li>Befestigen Sie beide Enden des Schlauches auf der Haut mit einfachen Stichen und einer resorbierbaren Naht (z.B., Polyglactin 910 oder Polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>Führen Sie vor dem Schließen der Laparotomie, Fluid Reanimation mit einer intraperitonealen Injektion von 0,5 mL 0,9 % Kochsalzlösung.</li>
	<li>Schließen Sie das Peritoneum und die Muskelschicht mit einer kontinuierlichen Naht mit einer resorbierbaren Naht (z. B. Polyglactin 910 oder Polyfil 4-0 1/2 c). Schließen Sie die Haut mit einer kontinuierlichen Naht mit einer resorbierbaren Naht (z. B. Polyglactin 910 oder Polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>Öffnen Sie die exteriorized Doppelpunkt Schleife durch Ausführen einer Zwischensumme Durchtrennung mit einer feinen Schere. Vermeiden Sie alle Verletzungen, das Mesenterium. Den Doppelpunkt nicht vollständig Transekt.</li>
	<li>Jede Kolostomie Öffnung durch drei einzelne voll Dicke Nähte, das Peritoneum zu beheben und die Haut mit einem Monofil, resorbierbaren Naht (z.B.Polydioxanon oder Monofil 6-0 3/8 s). Der afferenten Schleife, die eine funktionelle Ende-Kolostomie ist, und die ableitenden Schleife, die eine schleimige Fistel ist, sind klar getrennt, an dieser Stelle (Abbildung 1 c). Hinweis: Betriebszeit weniger als 20 Minuten sollte die Flüssigkeit und thermische Verluste zu begrenzen.</li>
	<li>Nach Beendigung der Operation, Desinfektion von Instrumenten mit einem Aldehyd-freie Desinfektionslösung in ein Ultraschallbad gemäß den Anweisungen des Herstellers.</li>
</ol>(3) Sham-Betrieb (Colotomy)
<ol><li>Führen Sie Schritte 1.1. durch 2.4.</li>
	<li>Verwenden Sie ein Lineal zur Bestimmung der zukünftigen Colotomy. Die Colotomy sollte den gleichen Abstand vom Ileocecal Ventil wie die Kolostomie in der experimentellen Gruppe positioniert werden.</li>
	<li>Öffnen Sie den Dickdarm zu mindestens zwei Dritteln seines Umfangs mit einer feinen Schere.</li>
	<li>In der Nähe der Colotomy mit einer einzigen Schicht voll-Dicke unterbrochen Naht mit einem Monofil, resorbierbaren Naht (z. B. Polydioxanon, Monofil 6-0 3/8 s). Hinweis: Betriebszeit sollte weniger als 20 Minuten für einen erfahrenen Operateur, flüssig und thermische Verluste zu begrenzen.</li>
	<li>Führen Sie Schritte 2.10. , 2.11. und 2.14.</li>
</ol>4. postoperative Pflege
<ol><li>Tiere in ihren Käfigen zurück. Sorgen für eine wohltemperierte Atmosphäre von 37 ° C (z.B.mit einer Infrarotlampe) bis Mäuse ganz wach sind. Dann halten Sie Mäuse in einer Umgebung von Temperatur und Feuchtigkeit reguliert (21 ° C; 30 % ± 10 % Relative Luftfeuchtigkeit). Freien Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser zu ermöglichen. Um flüssige Aufnahme zu erleichtern, bieten Sie zusätzliche Wasser getränkten Tierfutter.</li>
	<li>Postoperative Analgesie durch die Injektion von 0,1 mg/kg Körper Gewicht Buprenorphin beginnen s.c. wenn Tiere Reaktion auf mechanische Stimulation zeigen. Seien Sie vorsichtig, Atemdepression zu vermeiden.</li>
	<li>Ergänzen Sie Trinkwasser mit 1 mg/mL Tramadol für kontinuierliche Analgesie während der ersten postoperativen Woche.</li>
	<li>Als Ausgleich für verminderte Flüssigkeitsaufnahme aufgrund eingeschränkter Mobilität, liefern eine solide trinken Pad im Käfig während der ersten postoperativen Woche.</li>
	<li>Wiegen der Tiere und Partitur Tierverhalten täglich während der ersten Woche jeden zweiten Tag während der Rest des ersten Monats und jeden dritten Tag im zweiten Monat mit der Krankheit schwere Partitur in Kleinwort Et Al. beschrieben 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Alle Autoren erklären, dass sie keine Interessenskonflikte.

Mausmodell der DC präsentiert in diesem Protokoll zuverlässig reproduziert die histopathologische Merkmale des menschlichen DC (z. B., de Novo Entwicklung der lymphatischen Follikeln in der Submukosa der entzündeten Darm Segmente, Krypta, die Verkürzung und Senkung der Goblet Zelle Zahlen). Abgesehen von diesem Vorteil dieses Modell wird durch eine sehr ähnliche auslösende Faktor induziert und präsentiert mit einer klinischen Verlauf von mäßigen bis leichten schwere, wie der Fall in den am stärksten bet...

In den letzten Jahren eine beträchtliche Anzahl von nicht-infektiösen Kolitis Entitäten anders als klassische entzündliche Darmerkrankungen (Fahrradhändler; dh., Crohn Krankheit oder Colitis Ulcerosa) sind klinisch und histopathologisch beim Menschen charakterisiert. Die pathophysiologischen Mechanismen, die zur Entwicklung dieser ulcerosa Formen sind teilweise nicht vollständig verstanden, weil geeignete Tiermodellen knapp sind. Ablenkung Colitis ist einer dieser kürzlich beschriebenen Entitäten. Obwohl der Begriff im Jahr 1980 von Schlachter1geprägt war, wurde die Erstbeschreibung einer ähnlichen Phänotyp Morson21972 zugesprochen. Die Krankheit entwickelt sich in 50 % bis 91 % der Patienten mit Umleitung Enterostomy, und seine klinische Intensität variiert3,4. Die jährliche Inzidenz von rund 120.000 Kolostomie Patienten in den Vereinigten Staaten von Amerika gegeben, stellt dieser Krankheit Einheit ein wichtiges Gesundheitsproblem.
Das übergeordnete Ziel dieses Protokoll zu entwickeln war, ein DC-Mausmodell, das stützt sich auf eine Kolitis Trigger ähnlich gesehen im menschlichen DC und reproduziert, die die primäre histopathologischen Merkmale der menschlichen Krankheit. Im Gegensatz zu anderen Modellen murinen Kolitis ulcerosa Induktion in unserem Modell erfordert keine gentechnisch veränderte Tiere (z.B., IL-7 Transgene Mäuse, N-Cadherin dominant negativen Mäuse oder TGFβ- / - Mäusen), die Anwendung von chemisch reizende Stoffe (z.B. Dextran Sulfat Natrium (DSS) - induzierte Kolitis oder Trinitrobenzene sulfonsäure (TNBS) - induzierte Kolitis) oder die Übertragung von bestimmten Zellpopulationen immun mangelhaft Mäusen (wie in der CD45RBhohe Übertragungsraten Modell der Kolitis) (eine Übersicht finden Sie unter5). Im Gegensatz zu anderen Modellen erlaubt intakte Immunsystem unseres Modells DC Einschätzung des immunologischen Mechanismus DC Entwicklung beteiligt. Die Begrenzung der Schleimhaut Entzündung zum Segment ausgeschlossenen Darm ermöglicht die Bewertung des seine Rückwirkung auf Schleimhaut Immunität in andere Teile des Gastrointestinaltraktes, auf die immun Homöostase in anderen immun Abteilungen des Verdauungstraktes (z.B. , Peyer Patches und Mesenteriale Lymphknoten), und auf das Immunsystem Homöostase des gesamten Organismus. Schließlich bildet unser Modell ein geeignetes Instrument für die Untersuchung der Mechanismen, die lokale entzündliche Reize aus Veränderungen in der normalen Umgebung für sowohl die lokalen Microbiome sowie nährende Antigene zu kontrollieren.

<table><tbody><tr><td>Operationsmaterial</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>heat Unterlage, 6 Watt</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70% (mit Methylethylketon)</td><td>Apotheke des Universitätsklinikums Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Holzapplikatoren, kleiner Baumwollkopf einseitig, Holzstäbchen, 150 mm Länge</td><td>Centramed GmbH, Deutschland</td><td>8308370</td><td>zur Desinfektion des Operationsfeldes</td></tr><tr><td>Schere</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Atraumatic DeBakey Zange</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. Kanüle 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Deutschland</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 violett geflochten; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 Monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Spritzen mit Nadel mit sterilem Inneren)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Deutschland</td><td>18824-01</td><td>Desinfektion von chirurgischen Instrumenten im Ultraschallbad</td></tr><tr><td>Medikamente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin 10%, 100 mg/ml (Ketaminhydrochlorid)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (Xylazinhydrochlorid)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Braun Melsungen AG, Deutschland</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0,3 mg/ml (Buprenorphin)</td><td>Bayer, Deutschland</td><td>PZN: 01498870</td><td>0,1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Tropfen, 100 mg/ml (Tramadolhydrochlorid)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, Deutschland</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL Trinkwasser</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (Ceftriaxon)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Deutschland</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg Körpergewicht i.p.</td></tr><tr><td>Metronidazol 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Deutschland</td><td>PZN: 05543515</td><td>12,5 mg/kg Körpergewicht i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssiff M-Z Ereich</td><td>ssiff, Deutschland</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Festes Getränk Dehyprev Vit BIO, Beutel</td><td>TripleATrading, Niederlande</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Ausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Deutschland</td><td></td><td>Lichtmikroskopie</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Veterinärmedizinischer Hämatologie-Analysator von 50 & Mikro; l venöses EDTA-Blut</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (Ultraschallbad)</td><td>Bandelin electronics, Deutschland</td><td>RK 100 H</td><td>Desinfektion von chirurgischen Instrumenten</td></tr><tr><td>SoftwareNIS-Element</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>BR4 Software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine distalen kolostomie, ein neuartiges modell ablenkung colitis bei c57bl/6 mäusen

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Ablenkung Colitis (DC) ist eine häufige klinische Zustand auftreten bei Patienten mit Darm-Segmente aus dem fäkal Strom durch eine kurzweilige Enterostomy ausgeschlossen. Die Ätiologie dieser Erkrankung unterscheidet sich von der klassischen entzündlichen Darmerkrankungen wie Morbus Crohn und Colitis ulcerosa scheint aber bleibt unklar. Forschungsarbeiten zu entschlüsseln, die pathophysiologischen Mechanismen, die zur Entwicklung dieser Krankheit wurde stark durch das Fehlen einer entsprechenden Mausmodell behindert. Dieses Protokoll generiert ein Mausmodell der DC, der die Untersuchung der Rolle des Immunsystems und seine Wechselwirkung mit der Microbiome bei der Entwicklung von DC erleichtert. In diesem Modell mit C57BL/6 Tiere sind distalen Teile des Dickdarms aus dem fäkal Strom ausgeschlossen, durch die Schaffung einer distalen Kolostomie, die Entwicklung von leichten bis mittelschweren Entzündung in den Segmenten ausgeschlossenen Darm auslösen und Markenzeichen Läsionen der menschlichen Reproduktion DC mit einem moderaten systemische entzündliche Reaktion. Im Gegensatz zu der Rattenmodell gibt es eine große Anzahl von genetisch veränderten murinen Modelle auf dem C57BL/6-Hintergrund. Die Kombination dieser Tiere mit unserem Modell ermöglicht die möglichen Rollen der einzelnen Zytokine, Chemokine oder Rezeptoren von bioaktiven Moleküle (z. B.Interleukin (IL)-17; Il-10, Chemokin CXCL13, Chemokin-Rezeptoren CXCR5 und CCR7 und Sphingosine-1-Phosphat-Rezeptor 4) in der Pathogenese der DC beurteilt werden. Die Verfügbarkeit von Congenic Mausstämme auf dem C57BL/6 Hintergrund erleichtert weitgehend Transfer Experimente durchführen, um die Rollen der unterschiedlichen Zelltypen beteiligt in der Ätiologie von DC zu etablieren. Schließlich bietet das Modell die Möglichkeit, die Einflüsse der lokalen Interventionen (z.B. Änderung der lokalen Microbiome oder lokale antientzündliche Therapie) zu bewerten auf Schleimhaut Immunität im Darm von betroffenen und nicht betroffenen Segmente und die auf systemische immun Homöostase.

Operation ist gut verträglich, sowohl in der experimentellen (Kolostomie) und Schwindel (Colotomy) Gruppen. Perioperative Mortalität sollte 10 % nicht überschreiten, wenn Chirurgie und Perioperative Management korrekt durchgeführt wird. In der ersten postoperativen Woche sieht erheblichen Gewichtsverlust in der experimentellen und Sham Gruppen. Tiere der Sham-Gruppe erreichen ihre Gewicht Tiefpunkt in der Regel in Richtung der vierten postoperativen Tag, aber es tritt einen Tag später in ...

Murine distalen Kolostomie bietet ein Mausmodell für menschliche Abzweigung Kolitis, eine vorwiegend lymphozytären Kolitis im Dickdarm-Segment aus dem fäkal Strom ausgeschlossen.

Murine distalen Kolostomie, ein neuartiges Modell Ablenkung Colitis bei C57BL/6 Mäusen

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, die Untersuchung der Rolle des Immunsystems und seiner Interaktion mit dem Mikrobiom bei der Entwicklung von Diversion Colitis zu erleichtern. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen zur Diversionskolitis zu beantworten, die in beiden Segmenten auftritt, die aus dem Stuhlstrom ausgeschlossen sind, und bis zu 90 % der Patienten mit umleitender Enterostomie betrifft. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie keine gentechnisch veränderten Tiere, die Verwendung chemisch reizender Substanzen oder die Übertragung spezifischer Zellpopulationen auf immundefiziente Mäuse benötigt, um eine Kolitis auszulösen.Bei der Ankunft in der Tierhaltung teilen Sie die Mäuse in ähnlich große Gruppen ein. Sperren Sie jede Gruppe zusammen und halten Sie die Gruppen während der gesamten Experimente konstant. Wechseln Sie mindestens eine Woche vor der Operation zu einer energie- und proteinreichen Nahrung, die alle essentiellen Spurenelemente und Vitamine enthält.Um sich auf die Operation vorzubereiten, nachdem das Tier gemäß dem Textprotokoll betäubt wurde, verwenden Sie Klebeband, um das Tier in Rückenlage auf einem Heizkissen zu stabilisieren, um einen Verlust von Körperwärme zu vermeiden. Überprüfen Sie dann, ob die Maus mechanische Stimulation, z. B. Zehenkneifen, ohne motorische Reaktion verträgt.Desinfizieren Sie das Operationsfeld vor Beginn der Operation dreimal mit Alkohol 70% und einem Jota 4. Drapieren Sie das Operationsfeld, um aseptische Bedingungen zu gewährleisten. Führen Sie eine 15 mm große mittlere Laparotomie durch, indem Sie die Bauchmuskulatur und das Bauchfell entlang der Linea alba einschneiden, um den Blutverlust zu minimieren.Ziehen Sie dann mit zwei debakey atraumatischen Zangen vorsichtig den Blinddarm, das terminale Ileum und das absteigende und transversale Dickdarm aus der Bauchhöhle. Achten Sie darauf, die mechanische Manipulation des Darms zu begrenzen, um Verletzungen der Mesenterialstrukturen zu vermeiden und die optimale Fülle des Darms zu erhalten. Als nächstes identifizierst du den Zäkalpol, den aufsteigenden Dickdarm und den Dünndarm.Wenn die Anatomie der Ileozökalregion nicht eindeutig ist, identifiziert das Vorhandensein von Peyer-Flecken den Dünndarm und das Vorhandensein von Formen, die den Dickdarm charakterisieren. Verwenden Sie ein Lineal, um die Position der zukünftigen Kolostomie zu bestimmen. Es sollte 20 mm distal zur Ileozökalklappe für eine distale Kolostomie platziert werden.Machen Sie einen zweiten 3 mm großen Schnitt in der Bauchdecke im oberen rechten Quadranten. Ziehen Sie dann das zuvor identifizierte Dickdarmsegment durch diesen Schnitt, um eine Schlinge zu bilden, und achten Sie darauf, die Schlinge nicht zu verzerren. Führen Sie vorsichtig eine 22 Gauge, flexible IV-Kanüle durch das Mesokolon und achten Sie darauf, die mesenterialen Gefäßstrukturen nicht zu beschädigen.Bringen Sie dann den Darm wieder in die Bauchhöhle zurück. Fixieren Sie mit einfachen Nähten und einer resorbierbaren Naht beide Enden des flexiblen Schlauchs auf der Haut. Führen Sie vor dem Schließen der Laparotomie eine Flüssigkeitswiederbelebung mit einer intraperitonealen Injektion von 0,5 ml 0,9 % Kochsalzlösung durch.Verschließen Sie das Bauchfell und die Muskelschicht mit einer durchgehenden resorbierbaren Naht. Schließen Sie dann die Haut auf ähnliche Weise. Öffnen Sie mit einer feinen Schere die äußere Doppelpunktschlinge, indem Sie eine subtotale Durchtrennung durchführen.Vermeiden Sie jede Verletzung des Mesenteriums und durchtrennen Sie den Dickdarm nicht vollständig. Fixieren Sie mit einer monofiligen, resorbierbaren Naht jede Kolostomieöffnung mit drei einzelnen Stichen in voller Dicke auf dem Bauchfell und der Haut. Die afferente Schleife, bei der es sich um eine funktionelle Endkolostomie handelt, und die efferente Schleife, bei der es sich um eine Schleimfistel handelt, sind an dieser Stelle klar voneinander getrennt.Um eine Kolotomie durchzuführen, verwenden Sie nach der Identifizierung des Zäkalpols, des aufsteigenden Dickdarms und des Dünndarms, wie für die distale Kolostomie gezeigt, ein Lineal, um die zukünftige Kolostomieposition zu bestimmen, die im gleichen Abstand von der Ileozökalklappe wie die Kolostomie positioniert werden sollte. Öffne den Dickdarm mit einer feinen Schere mindestens zu zwei Dritteln seines Umfangs. Mit einer monofiligen, resorbierbaren Naht wird die Kolotomie mit einer unterbrochenen Naht in voller Dicke verschlossen, bevor die Flüssigkeitswiederbelebung und der Verschluss des Peritoneums und der Haut wie zuvor durchgeführt wird.Setzen Sie die Tiere nach dem Eingriff in ihre Käfige zurück und setzen Sie sie unter eine Infrarotlampe bei 37 Grad Celsius, bis sie vollständig wach sind, bevor Sie sie in eine temperatur- und feuchtigkeitskontrollierte Umgebung zurückbringen. Wenn Tiere auf mechanische Stimulation ansprechen, beginnen Sie mit der postoperativen Analgesie, indem Sie 0,1 mg pro kg Körpergewicht Buprenorphin SC injizieren. Überprüfen Sie sorgfältig auf Anzeichen einer Atemdepression. Ergänzen Sie das Trinkwasser mit 1 mg pro ml Tramadol für eine fortgesetzte Analgesie während der ersten postoperativen Woche.Um die verminderte Flüssigkeitsaufnahme aufgrund eingeschränkter Mobilität auszugleichen, geben Sie in der ersten postoperativen Woche ein festes Trinkkissen in den Käfig. Wiegen Sie schließlich die Tiere und bewerten Sie das Verhalten der Tiere täglich in der ersten Woche, jeden zweiten Tag während des restlichen ersten Monats und jeden dritten Tag während des zweiten Monats. Die Operation wird sowohl in der Versuchs- als auch in der Scheingruppe gut vertragen.Der Gewichtsverlust ist in der Versuchsgruppe ausgeprägter und erreicht 21,7 % des ursprünglichen Körpergewichts. Im Gegensatz dazu verlieren Scheintiere 10,8 % ihres ursprünglichen Körpergewichts. Die Gesamtmortalität in den ersten 60 Tagen nach der Operation liegt bei etwa 40 % in der Kolostomiegruppe und bei etwa 10 % in der Scheingruppe.Die meisten Todesfälle ereigneten sich in der ersten postoperativen Woche, wobei die Todesursachen in dieser Abbildung dargestellt sind. Die distale Kolostomie bei Mäusen führt zur Entwicklung einer überwiegend lymphozytären Kolitis, die die charakteristischen histologischen Merkmale der menschlichen DC reproduziert.Die Kryptenlänge ist in ausgeschlossenen Darmsegmenten signifikant verkürzt und erreicht nach 14 Tagen Stuhlumleitung eine statistische Signifikanz. Die Länge der Becherzell-tragenden Krypta ist bei ausgeschlossenen Darmsegmenten nach 30 Tagen reduziert.Auch in den Krypten im ausgeschlossenen Darmsegment ist die absolute Anzahl der Becherzellen nach 14 postoperativen Tagen signifikant reduziert. Die charakteristische Läsion der DC, die Entwicklung von lymphoiden Follikeln in der Schleimhaut, erfordert eine längere Dauer der Stuhlabweichung. Obwohl bereits nach zwei Wochen eine erhöhte Anzahl der lymphatischen Follikel beobachtet werden kann, werden die Unterschiede nach zwei Monaten signifikant.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie eine murine distale Kolostomie durchgeführt wird. Einmal gemeistert, kann diese Technik in weniger als 20 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Dieses Modell kann mit anderen genetisch veränderten Modellen oder Transferexperimenten in kongenen Mausstämmen kombiniert werden, um die Rolle von Entzündungsmediatoren spezifischer Zellpopulationen und die Pathogenese der Diversion Colitis zu untersuchen.

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Medicine

Medizin

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Murine Colitis Modeling mit Dextransulfat Sodium (DSS)

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Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

In diesem Video beschreiben wir ein chirurgisches Verfahren zur Erzeugung einer proximalen Dickdarmschleife oder eines pcLoop-Segments der Maus, gefolgt von einer intraluminalen Injektion von fluoreszierenden Markern in das Segment, um die intestinale Epithelpermeabilität zu untersuchen.

Generierung eines proximalen Dickdarmschleifenmodells der Maus: ein chirurgisches Verfahren zur Erzeugung einer proximalen Dickdarmschleife und zur Messung der intestinalen Permeabilität durch Nachweis von Fluoreszenzmarkern im Serum nach intraluminaler Injektion

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Die<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Studieren Erreger und Wirt Beiträge zur Infectious Colitis

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