Name: Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie, 4-dimensionale Bilder über die Auswirkungen der modulierende Schubspannung auf entwickelnden Zebrafisches Herzen erfassen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Erfahren Sie 4-D Licht-Blatt-Fluoreszenzmikroskopie mit computergestützter Rekonstruktion schlagender Zebrafischherzen. Diese Methode untersucht Schubspannungseffekte auf die Notch-Signalgebung während der Herzkammerentwicklung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren möchten mit William Talbot von der Stanford University für die Bereitstellung des menschliches Dankbarkeit Nrg1 cDNA und Deborah Yelon von UCSD für die Bereitstellung der WEA Mutanten. Die Autoren möchten auch Cynthia Chen Danke für die Hilfe bei der Bildaufnahme. Diese Studie wurde unterstützt durch Zuschüsse NIH HL118650 (zu t. k. Hsiai), HL083015 (zu t. k. Hsiai), HD069305 (zu N.C. Chi und t. k. Hsiai.), HL111437 (zu t. k. Hsiai und NC-Chi), HL129727 (zu t. k. Hsiai), T32HL007895 (zu R.R Sevåg Packard), HL-134613 (zu V. Messerschmidt) und Universität von Texas System STARS Finanzierung (J. Lee).

<ol><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moving+domain+computational+fluid+dynamics+to+interface+with+an+embryonic+model+of+cardiac+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Moving domain computational fluid dynamics to interface with an embryonic model of cardiac morphogenesis.</a> PLoS One. 8 (8), e72924(2013).</li>
<li>Peshkovsky, C., Totong, R., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dependence+of+cardiac+trabeculation+on+neuregulin+signaling+and+blood+flow+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Dependence of cardiac trabeculation on neuregulin signaling and blood flow in zebrafish.</a> Dev Dyn. 240 (2), 446-456 (2011).</li>
<li>High, F. A., Epstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+role+of+Notch+in+cardiac+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">The multifaceted role of Notch in cardiac development and disease.</a> Nat Rev Genet. 9 (1), 49-61 (2008).</li>
<li>Galloway, J. L., Wingert, R. A., Thisse, C., Thisse, B., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+Gata1+but+Not+Gata2+Converts+Erythropoiesis+to+Myelopoiesis+in+Zebrafish+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Loss of Gata1 but Not Gata2 Converts Erythropoiesis to Myelopoiesis in Zebrafish Embryos.</a> Developmental Cell. 8 (1), 109-116 (2005).</li>
<li>Chi, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+is+required+to+preserve+cardiac+chamber+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction is required to preserve cardiac chamber morphology.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (33), 14662(2010).</li>
<li>Paffett-Lugassy, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17579187">Functional conservation of erythropoietin signaling in zebrafish.</a> Blood. 110 (7), 2718(2007).</li>
<li>De Luca, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ZebraBeat%3A+a+flexible+platform+for+the+analysis+of+the+cardiac+rate+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">ZebraBeat: a flexible platform for the analysis of the cardiac rate in zebrafish embryos.</a> Scientific Reports. 4, 4898(2014).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dual+role+for+ErbB2+signaling+in+cardiac+trabeculation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A dual role for ErbB2 signaling in cardiac trabeculation.</a> Development. 137 (22), 3867-3875 (2010).</li>
<li>Samsa, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+contraction+activates+endocardial+Notch+signaling+to+modulate+chamber+maturation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cardiac contraction activates endocardial Notch signaling to modulate chamber maturation in zebrafish.</a> Development. 142 (23), 4080-4091 (2015).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+genetic+analysis+in+mice+unveils+central+role+for+cilia+in+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Global genetic analysis in mice unveils central role for cilia in congenital heart disease.</a> Nature. 521, 520(2015).</li>
<li>Sifrim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+genetic+architectures+for+syndromic+and+nonsyndromic+congenital+heart+defects+identified+by+exome+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Distinct genetic architectures for syndromic and nonsyndromic congenital heart defects identified by exome sequencing.</a> Nature Genetics. 48, 1060(2016).</li>
<li>Hu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+association+study+identifies+two+risk+loci+for+congenital+heart+malformations+in+Han+Chinese+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">A genome-wide association study identifies two risk loci for congenital heart malformations in Han Chinese populations.</a> Nature Genetics. 45, 818(2013).</li>
<li>Huisken, J., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+plane+illumination+microscopy+techniques+in+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Selective plane illumination microscopy techniques in developmental biology.</a> Development (Cambridge, England). 136 (12), 1963-1975 (2009).</li>
<li>Panier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+functional+imaging+of+multiple+brain+regions+in+intact+zebrafish+larvae+using+Selective+Plane+Illumination+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Fast functional imaging of multiple brain regions in intact zebrafish larvae using Selective Plane Illumination Microscopy.</a> Frontiers in Neural Circuits. 7, 65(2013).</li>
<li>Lee, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACT-PRESTO%3A+Rapid+and+consistent+tissue+clearing+and+labeling+method+for+3-dimensional+%283D%29+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">ACT-PRESTO: Rapid and consistent tissue clearing and labeling method for 3-dimensional (3D) imaging.</a> Scientific Reports. 6, 18631(2016).</li>
<li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+confocal+microscopy+and+quantitative+4D+image+analysis+of+anchor-cell+invasion+through+the+basement+membrane+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Live-cell confocal microscopy and quantitative 4D image analysis of anchor-cell invasion through the basement membrane in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Protocols. 12, 2081(2016).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4-Dimensional+light-sheet+microscopy+to+elucidate+shear+stress+modulation+of+cardiac+trabeculation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">4-Dimensional light-sheet microscopy to elucidate shear stress modulation of cardiac trabeculation.</a> The Journal of Clinical Investigation. 126 (5), 1679-1690 (2016).</li>
<li>Lavagnino, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4D+%28x-y-z-t%29+imaging+of+thick+biological+samples+by+means+of+Two-Photon+inverted+Selective+Plane+Illumination+Microscopy+%282PE-iSPIM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">4D (x-y-z-t) imaging of thick biological samples by means of Two-Photon inverted Selective Plane Illumination Microscopy (2PE-iSPIM).</a> Scientific Reports. 6, 23923(2016).</li>
<li>Huisken, J., Swoger, J., Del Bene, F., Wittbrodt, J., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Sectioning+Deep+Inside+Live+Embryos+by+Selective+Plane+Illumination+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical Sectioning Deep Inside Live Embryos by Selective Plane Illumination Microscopy.</a> Science. 305 (5686), 1007(2004).</li>
<li>Hove, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracardiac+fluid+forces+are+an+essential+epigenetic+factor+for+embryonic+cardiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Intracardiac fluid forces are an essential epigenetic factor for embryonic cardiogenesis.</a> Nature. 421 (6919), 172-177 (2003).</li>
<li>Bakkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+to+study+cardiac+development+and+human+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model to study cardiac development and human cardiac disease.</a> Cardiovascular Research. 91 (2), 279-288 (2011).</li>
<li>BioRad. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22General+Protocol+for+Western+Blotting%22">General Protocol for Western Blotting</a>. 6376, 
 <a target="_blank" href="http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6376.pdf">http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6376.pdf</a> (2018).</li>
<li>GeneTools. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Gene+Tools+Oligo+Design+Website%22">Gene Tools Oligo Design Website</a>. , 
 <a target="_blank" href="https://oligodesign.gene-tools.com/request/ ">https://oligodesign.gene-tools.com/request/ </a> (2018).</li>
<li>Mullins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMullins%2C+M+%22Zebrafish+Course%22">Zebrafish Course</a>. , ed University of Chicago (2013).</li>
<li>Grenander, U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGrenander%2C+U+%22Probability+and+Statistics%3A+The+Harald+Cram%C3%A9r+Volume%22">Probability and Statistics: The Harald Cramér Volume</a>. , Alqvist & Wiksell. (1959).</li>
<li>Fei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+Light-Sheet+Fluorescent+Microscopy+for+Multi-Scale+and+Rapid+Imaging+of+Architecture+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Cardiac Light-Sheet Fluorescent Microscopy for Multi-Scale and Rapid Imaging of Architecture and Function.</a> Scientific Reports. 6, 22489(2016).</li>
<li>Liebling, M., Forouhar , A. S., Gharib, M., Fraser, S. E., Dickinson, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four-dimensional+cardiac+imaging+in+living+embryos+via+postacquisition+synchronization+of+nongated+slice+sequences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Four-dimensional cardiac imaging in living embryos via postacquisition synchronization of nongated slice sequences.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (5), (2005).</li>
<li>Adeoye, A. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0044848616302757">Combined effects of exogenous enzymes and probiotic on Nile tilapia (Oreochromis niloticus) growth, intestinal morphology and microbiome.</a> Aquaculture. 463, 61-70 (2016).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23382350">Anesthesia and Euthanasia in Zebrafish.</a> ILAR Journal. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Dissection+in+Larval%2C+Juvenile+and+Adult+Zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (55), e3165(2011).</li>
<li>Li, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+Flow+Induces+Autophagy%2C+but+Impairs+Autophagic+Flux+to+Perturb+Mitochondrial+Homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%26+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">Disturbed Flow Induces Autophagy, but Impairs Autophagic Flux to Perturb Mitochondrial Homeostasis.</a> Antioxidants & Redox Signaling. 23 (15), 1207-1219 (2015).</li>
<li>Li, R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25147335">Shear Stress-Activated Wnt-Angiopoietin-2 Signaling Recapitulated Vascular Repair in Zebrafish Embryos.</a> Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34 (10), 2268-2275 (2014).</li>
<li>Baek, K. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-Responsive+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-Protein+Kinase+C+Isoform+Epsilon+Signaling+Mediates+Glycolytic+Metabolites+for+Vascular+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%26+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">Flow-Responsive Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-Protein Kinase C Isoform Epsilon Signaling Mediates Glycolytic Metabolites for Vascular Repair.</a> Antioxidants & Redox Signaling. 28 (1), 31-43 (2018).</li>
<li>Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ-line+transmission+of+a+myocardium-specific+GFP+transgene+reveals+critical+regulatory+elements+in+the+cardiac+myosin+light+chain+2+promoter+of+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 228 (1), 30-40 (2003).</li>
<li>Vermot, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversing+blood+flows+act+through+klf2a+to+ensure+normal+valvulogenesis+in+the+developing+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Reversing blood flows act through klf2a to ensure normal valvulogenesis in the developing heart.</a> PLoS Biol. 7 (11), (2009).</li>
<li>Grego-Bessa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+is+essential+for+ventricular+chamber+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Notch signaling is essential for ventricular chamber development.</a> Dev Cell. 12 (3), 415-429 (2007).</li>
<li>Berdougo, E., Coleman, H., Lee, D. H., Stainier, D. Y. R., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+of+weak+atrium%2Fatrial+myosin+heavy+chain+disrupts+atrial+function+and+influences+ventricular+morphogenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mutation of weak atrium/atrial myosin heavy chain disrupts atrial function and influences ventricular morphogenesis in zebrafish.</a> Development. 130 (24), 6121(2003).</li>
<li>Arnaout, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+model+for+human+long+QT+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Zebrafish model for human long QT syndrome.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (27), 11316-11321 (2007).</li>
<li>Chi, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+physiologic+dissection+of+the+vertebrate+cardiac+conduction+system%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic and physiologic dissection of the vertebrate cardiac conduction system.</a> PLoS Biol. 6 (5), e109(2008).</li>
<li>Liao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+gene+cloche+acts+upstream+of+a+flk-1+homologue+to+regulate+endothelial+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The zebrafish gene cloche acts upstream of a flk-1 homologue to regulate endothelial cell differentiation.</a> Development. 124 (2), 381-389 (1997).</li>
<li>Stainier, D. Y., Weinstein, B. M., Detrich, H. W. 3rd, Zon, L. I., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloche%2C+an+early+acting+zebrafish+gene%2C+is+required+by+both+the+endothelial+and+hematopoietic+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cloche, an early acting zebrafish gene, is required by both the endothelial and hematopoietic lineages.</a> Development. 121 (10), 3141-3150 (1995).</li>
<li>Santi, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+Sheet+Fluorescence+Microscopy%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Light Sheet Fluorescence Microscopy: A Review.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 59 (2), 129-138 (2011).</li>
<li>Engelbrecht, C. J., Stelzer, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+enhancement+in+a+light-sheet-based+microscope+%28SPIM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Resolution enhancement in a light-sheet-based microscope (SPIM).</a> Optics Letters. 31 (10), 1477-1479 (2006).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

In diesem Protokoll haben wir gezeigt, dass 4-D-Bildgebung verwendet werden kann, um die Entwicklung der trabekuläre Netzwerk als Reaktion auf Veränderungen der biomechanischen Kräfte zu verfolgen. Insbesondere initiiert die Scherspannung erfahrenen von Endothelzellen die Kerbe Signalkaskade, die wiederum Trabeculation fördert. In dieser Handschrift haben wir gezeigt, dass (1) gata1a MO-Injektion verminderte Blutbildung und daher es reduziert Wand Schubspannung, (2) tnnt2a MO-Injektion gehemmt ventrikul...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/video/57763/light-sheet-fluorescence-microscopy-to-capture-4-dimensional-images">Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart</a>.&#160;Additional author names were added, and an author affiliation was updated.
The author list was updated from:
Victoria Messerschmidt*1, Zachary Bailey*1, Kyung In Baek2, Richard Bryant1, Rongsong Li2, Tzung K. Hsiai2, Juhyun Lee1
to:
Victoria Messerschmidt*1, Zachary Bailey*1, Kyung In Baek2, Yichen Ding2, Jeffrey J. Hsu2, Richard Bryant1, Rongsong Li2, Tzung K. Hsiai2, Juhyun Lee1
The author affiliation for Rongsong Li was updated from:
Department of Medicine (Cardiology) and Bioengineering, UCLA
to:
College of Health Science and Environmental Engineering, Shenzhen Technology University

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/57763/light-sheet-fluorescence-microscopy-to-capture-4-dimensional-images">Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart</a>. Additional&#160;author names were&#160;added, and an author affiliation was updated.

Erratum: Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart

Biomechanische Kräfte, wie hämodynamische Schubspannung sind kardiale Morphogenese eng beteiligt. In Reaktion auf die hämodynamische Scherkräfte entwickeln myokardialen Rillen und Nuten in einem wellenartigen trabekuläre Netzwerk in Übereinstimmung mit der Richtung der Schubspannung in der ventrikulären (AV) Ventil1. Kardiale Trabeculation ist notwendig, KONTRAKTILE Funktion und myokardialen Masse2zu erhöhen. Mutationen im Notch Signalwege führen angeborene Herzfehler bei Menschen und anderen Wirbeltieren3. Beispielsweise wurden gata1a4 und tnnt2a5 Morpholino Oligonucleotides (MO) gezeigt, Erythropoese, reduzieren, während Erythropoetin (EPO) mRNA6 und Isoproterenol (ISO)7 roten Blutkörperchen zu erhöhen Zellen und Herzfrequenz Wand bzw. daher Scherspannung (WSS). Darüber hinaus ErbB2-Signalisierung, flussabwärts von Notch, fördert die Cardiomyocyte Proliferation und Differenzierung Kontraktionskraft, generieren die Einkerbung8,9Signalisierung wiederum aktiviert. Es wird vorgeschlagen, dass die Schubspannung Notch signaling gesteuerte Trabeculation für ventrikuläre Entwicklung regelt. Derzeit gibt es viele Studien, die versuchen, weiter zu verstehen, die genetische Programmierung Ereignisse auf angeborene Defekte (KHK)10,11,12, aber sehr wenig untersuchen, wie mechanische Kräfte beeinflussen das Umformen Herz.
Um die mechanischen Kräfte untersuchen muss auf Endokards, genaue Beobachtung während der Entwicklungszeit umgesetzt werden. Allerdings ist es schwierig, gute Bildqualität von in Vivo Proben durch die Inhärenz des traditionellen Mikroskopie13schlagen zu erhalten. Um die Entwicklung im Laufe der Zeit innerhalb einer Probe zu beobachten, müssen daher körperliche schneiden und färben,13,14,15auftreten. Obwohl der konfokalen Mikroskopie weit verbreitet ist, die 3-d-Struktur der Proben14,16Bild, ist diese bildgebenden Systemen Erwerb noch durch langsame Scan-Geschwindigkeit begrenzt.
Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie (LSFM) ist eine einzigartige bildgebendes Verfahren, die die Visualisierung von in Vivo dynamischen Events mit lange arbeiten Abstand13ermöglicht. Diese Technik verwendet eine Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie, optisch eine Probe17Abschnitt. Durch Beleuchtung nur eine dünne Folie aus Licht auf die Probe ist ein Rückgang der Foto-Bleichen und Foto Toxizität13,18. Das große Sichtfeld und langem Arbeitsabstand erlaubt für große Proben intakt bleiben, wie sie abgebildeten13,14,17sind. Die geringe Vergrößerung ermöglicht einen größeren Bereich abgebildet werden, während der langen Arbeitsabstand ermöglicht dickere Proben abgebildet werden, ohne das Signal-Rausch-Verhältnis. Viele Gruppen haben LSFM verwendet, um Bild gesamte Embryonen17,14,18, Muskeln und Herz19 unter anderen Geweben, Gehirne, zeigen die vielfältigen Arten von Proben, die abgebildet werden können.
Obwohl die bisherige Forschung reduzierte hämodynamische Querkraft nachgewiesen durch den Zufluss oder Abfluss Spuren der Zebrafisch Herzen verschließen, sind die Informationen ausschließlich qualitative. Es ergibt sich eine abnorme Dritte Kammer, verminderte kardiale looping und beeinträchtigt Ventil Bildung20. Die 4-D LSFM Bilder geben eine neue Perspektive in die Lebensweise, die der hämodynamischen beeinflussen Scherkräfte, die Entwicklung der das Herzgewebe. Diese mechanische Kräfte können Kraft-Sensitive Signalmoleküle aktivieren und induzieren die Bildung von den trabekulären Kämmen. Wegen der Nachspielzeit Aspekt der 4-D-Bildgebung kann man zum Nachverfolgen von Änderungen in der Entwicklung in Echtzeit, die zu neuen Enthüllungen führen könnten, die bisher unbemerkt hatte. Der Zebrabärbling ist ein ideales Modell für imaging, weil Wissenschaftler eine ganze vertebrate Tier im Vergleich zu nur Zell-Zell-Interaktionen beobachten können. Sauerstoff kann auch durch den gesamten Embryo diffundieren die Entwicklung ohne je nach Kreislauf-Systems, im Gegensatz zu Säugetieren Entwicklung auftreten können. Obwohl der Zebrafisch-Herz der pulmonalen Organe, die erfordern ein vier-Kammer-Herz fehlen, gibt es eine große Anzahl von kardialen Gene, die zwischen Menschen und Zebrafisch21konserviert sind.
In diesem Manuskript beschreiben wir, wie Licht-Blatt Fluoreszenzmikroskopie verwenden, um die Entwicklung Trabekel im Zebrafisch Herzen unter verschiedenen Umständen Bild. Zunächst wurden Injektion von gata1a4 oder tnnt2a5 MOs niedriger die Viskosität des Blutes und damit WSS verwendet. Die Morphologie des Herzens wurde dann aufgezeichnet. In einer separaten Gruppe von Fischen wir erhöht die WSS durch Verabreichung von EPO mRNA6 oder Isoproterenol7 und die Ergebnisse zu beobachten. Wir haben auch eine Zelle-Studie mit verschiedenen pulsierender oder oszillierende Durchflussraten. Nach jeder Gruppe imaging, fanden wir, dass WSS durch Endokards über Kerbe spürte Signalisierung Eingeweihten Trabeculation.

<table><tbody><tr><td>Clontech Hifi PCR Vormischung&nbsp;</td><td>Takara&nbsp;</td><td>639298</td><td>PCR mastermix 1.1.1.1, 1.1.1.2, 1.1.1.5, 1.1.2.1, 3.1.4</td></tr><tr><td>Humane Nrg1 cDNA</td><td>Geschenk von William Talbot, Stanford University, Stanford, California, USA</td><td>n/a</td><td>Wird für die Trabekulation rescue 1.1.1.3, 1.1.1.4, 1.1.2.1</td></tr><tr><td>CFX Connect&trade; Real-Time-PCR-Nachweissystem</td><td>Bio-Rad</td><td>1855201</td><td>PCR-Maschine 1.1.1.5, 1.1.1.6, 1.1.2.2, 1.1.3.2</td></tr><tr><td>pCS2+</td><td>GE Health</td><td></td><td>Plasmid zur Synthese von mRNA 1.1.2.1, 1.1.2.4, 1.1.2.5</td></tr><tr><td>Nukleospin-Aufreinigungskit&nbsp; &nbsp;</td><td>Clontech</td><td>740609.25</td><td>DNA-Reinigung 1.1.2.3, 1.1.2.4, 1.1.6.2</td></tr><tr><td>T4-DNA-Ligase&nbsp;</td><td>Clontech</td><td>2011A</td><td>PCR-Ligationslösung 1.1.2.5</td></tr><tr><td>Stellare kompetente Zellen</td><td>Clontech</td><td>636763</td><td>E. coli Zellen, die für die Transformation verwendet werden 1.1.2.6, 1.1.3.1, 1.1.3.2</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfektionsreagenz</td><td>Life Technologies</td><td>11668027</td><td>Transfektionsreagenz 1.1.4</td></tr><tr><td>mMessage SP6 Kit</td><td>Invitrogen</td><td>AM1340</td><td>Kit zur Synthese von mRNA 1.1.6.3</td></tr><tr><td>Aurum Total RNA Mini Kit</td><td>Bio-Rad</td><td>7326820</td><td>reinigt RNA&nbsp; 1.1.6.4, 3.1.2</td></tr><tr><td>GeneTools 4.3.8</td><td>GeneTools</td><td>N/A</td><td>Software für das Primer-Design 1.2.1, 3.1.3</td></tr><tr><td>EPO cDNA</td><td>Creative Biogene</td><td>CDFH006026</td><td>erhöht WSS 1.2.2, 1.2.3, 1.1.7</td></tr><tr><td>AG1478</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>T4182</td><td>ErbB-Inhibitor 1.3.1</td></tr><tr><td>E3-Medium</td><td></td><td></td><td>Zur Züchtung von Embryonen 1.3.1, 1.3.2, 5.1.5</td></tr><tr><td>DAPT</td><td>Sigma-Aldbsp;</td><td>D5942</td><td>&gamma;-Sekretasehemmer 1.3.2</td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>A9539</td><td>Zur Aufnahme von Embryonen 2.1.1.1</td></tr><tr><td>ORCA-Flash4.0 LT&nbsp; Digitale CMOS-Kamera</td><td>Hamamatsu Photonics</td><td>C11440-42U</td><td>Zur Aufnahme von Bildern 2.1.1.2, 2.1.1.3</td></tr><tr><td>Amira Software</td><td>FEI Software</td><td>N/A</td><td>Visualisierte und analysierte Bilder in 3D und 4D 2.1.5.1.1-2.1.5.2.8</td></tr><tr><td>Tricaonmesylat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>886-86-2</td> Zur humanen <td>Sedierung oder Tötung von Embryonen 3.1.1</td></tr><tr><td>iScript cDNA Synthesis Kit</td><td>Bio-Rad</td><td>1708890</td><td>Synthetisiert cDNA 3.1.2</td></tr><tr><td>Eppendorf 5424 Mikrozentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>05-400-005</td><td>Mikrozentrifuge 4.1.1.3</td></tr><tr><td>GI254023X</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>260264-93-5</td><td>ADAM10-Inhibitor 4.1.2, 4.1.3&nbsp;</td></tr><tr><td>Isoprenalinhydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>I5627</td><td>Isoproterenol erhöht WSS 5.1.5</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Mathworks</td><td>N/A</td><td>Analyse der Herzmechanik</td></tr></tbody></table>

licht-blatt fluoreszenz-mikroskopie, 4-dimensionale bilder über die auswirkungen der modulierende schubspannung auf entwickelnden zebrafisches herzen erfassen

Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart

Die hämodynamischen Kräfte durch die Herzen Einfluss kardiale Entwicklung, vor allem Trabeculation, bildet ein Netz von verzweigten Auswüchse von Myokard erlebt. Genetisches Programm Mängel in der Kerbe Signalisierung Kaskade ventrikuläre Defekte wie linken Ventricular Non-Compaction-Kardiomyopathie oder hypoplastischen Links-Heart-Syndrom beteiligt sind. Unter Verwendung dieses Protokolls, kann festgestellt werden, dass Schubspannung angetrieben Trabeculation und Notch signaling miteinander verbunden sind. Mit Licht-Blatt Fluoreszenzmikroskopie war Visualisierung der entwickelnden Zebrafisches Herzen möglich. In diesem Manuskript wurde geprüft, ob hämodynamischen Kräfte die Einleitung der Trabeculation über die Kerbe Signalisierung modulieren und somit KONTRAKTILE Funktion beeinflussen auftritt. Für qualitative und quantitative Scheren Spannungsanalyse, 4-D (3-D + Zeit) Bilder wurden während der Zebrafisch kardiale Morphogenese erworben und integrierten Licht-Blatt-Fluoreszenz-Mikroskopie mit 4D Synchronisation erfasst die ventrikuläre Bewegung. Viskosität des Blutes verringerte Down-Regulierung Kerbe Signal- und mildernde Trabeculation über gata1a- Morpholino Oligonucleotides (MO) Mikro-Injektion, Schubspannung, dadurch zu verringern. Co-Injektion von Nrg1 mRNA mit gata1a MO gerettet Kerbe-Genen um die Trabeculation wiederherzustellen. Bestätigen Schubspannung getrieben Notch signaling beeinflusst Trabeculation Cardiomyocyte Kontraktion verhaftet weiter über tnnt2a-MO hämodynamischen Kräfte dabei reduzieren Down-Regulierung Kerbe Zielgene, non-trabekulierte zu entwickeln Myokard. Zu guter Letzt wurde Bestätigung der Expressionsmuster von Scherbeanspruchung reagierende Kerbe Gene von Endothelzellen pulsierender Strömung unterwerfen durchgeführt. So deckte die 4-D-Licht-Blatt-Mikroskopie hämodynamischen Kräfte zugrunde liegenden Kerbe Signal- und Trabeculation mit klinischer Relevanz, nicht-Verdichtung Cardiomyopathy.

LSFM wurde in diesem Manuskript verwendet, um hochauflösende 2-D und 3-d-Bilder zu erwerben. Wie in Abbildung 1A und 1 b, leitet die Beleuchtung Linse leichte Blatt an der Probe. Wegen der Schlankheit des leichten Blatts leuchtet nur ein einziges Flugzeug. Die Erkennung Linse ist senkrecht auf die Beleuchtung Linse positioniert und konzentriert sich auf die beleuchtete Fläche (Abbildung 1 b). Das leichte Blatt vo...

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Entwicklung von Herzen im Zebrafisch in 4 Dimensionen (4D) zu visualisieren. 4-D-Bildgebung, über Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie (LSFM) dauert 3-dimensionale (3D) Bilder im Laufe der Zeit entwickelnde Herzen zu rekonstruieren. Wir zeigen qualitativ und quantitativ die Scherspannung aktiviert endokardialen Kerbe Signalisierung während der Entwicklung der Kammer, die kardiale Trabeculation fördert.

Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie, 4-dimensionale Bilder über die Auswirkungen der modulierende Schubspannung auf entwickelnden Zebrafisches Herzen erfassen

The hemodynamic forces experienced by the heart influence cardiac development, especially trabeculation, which forms a network of branching outgrowths ...

Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der kardialen Mechanobiologie zu beantworten, wie z. B. die Modulation der Scherspannung auf die Herztrabekulation durch Kerbsignalisierung mit einem 4D-Lichtblattmikroskop. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie einen dünnen Schnitt der Probe mit einer Fünf-Mikrometer-Ebene beleuchtet, was zu weniger Photobleichen und Lichtschäden führt. Darüber hinaus ermöglicht uns unser Rechenalgorithmus, ein schlagendes 4D-Zebrafischherz zu rekonstruieren.Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Diagnose angeborener Herzfehler, da sie die sequentielle In-vivo-Visualisierung der Herztrabekulation in einem frühen Entwicklungsstadium bis hin zum späteren Phänotyp ermöglicht. Im Allgemeinen werden Menschen, die neu in dieser Technik sind, feststellen, dass es schwierig ist, sich im Laufe der Zeit das Denken in drei Dimensionen vorzustellen. Darüber hinaus braucht es Zeit, das System zu erstellen und genau auszurichten.Zu Beginn trennen Sie den männlichen und den weiblichen Zebrafisch in den Aufzuchtbecken mit einer Trennwand. Heben Sie dann die Trennwand an und lassen Sie den männlichen und weiblichen Zebrafisch brüten. Entnehmen Sie die Zebrafischembryonen und injizieren Sie Morpholino-Oligo in den Embryo, um die Trabekulation zu hemmen.Bereiten Sie als Nächstes ein einprozentiges Agarose-Gel vor, indem Sie ein Gramm Agarose in 100 Milliliter destilliertes Wasser geben und erhitzen, bis sich die gesamte Agarose aufgelöst hat. Lassen Sie die Agarose abkühlen und befüllen Sie dann mit einer 20-Mikroliter-Pipette ein kleines Plastikröhrchen mit einem der vorbereiteten Embryonen und Agarose. Befestigen Sie den Tubus auf dem Mikroskoptisch und verwenden Sie das ten x Objektiv.Stellen Sie das Objektiv mit dem Drehknopf so ein, dass die Oberseite des Embryos scharf ist. Nehmen Sie Bilder des gesamten Fischembryos über mehrere Herzschlagzyklen mit einer leichten Blattdicke von fünf Mikrometern auf. Sammeln Sie 500 xy-Frames mit einer Belichtungszeit von zehn Millisekunden.Verschieben Sie dann den Tisch um einen Mikrometer im z-Zugang auf eine neue Schicht und wiederholen Sie den Bildgebungsvorgang. Fahren Sie fort mit der Vorstellung von 500 Bildern pro Z-Ebene, bis das gesamte Herz vollständig abgebildet ist. Öffnen Sie als Nächstes die Bildverarbeitungssoftware und beginnen Sie, die Bilder in 3D zu stapeln.Klicken Sie dazu zunächst auf Open Data. Wählen Sie hier alle Bilder aus, die in 3D gestapelt werden sollen, und wählen Sie dann Laden. Fügen Sie dann die Voxelgröße von 0,65 x 0,65 mal einem Mikrometer hinzu und klicken Sie auf OK.Die Eingabe der richtigen Voxelgröße ist für eine genaue Analyse der 3D-Bilder von entscheidender Bedeutung. Klicken Sie nun auf das Multiplaner-Ansichtsfeld und visualisieren Sie das 3D-Bild. Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf das blaue Slice One Dot Tiff-Feld, wählen Sie Anzeige und klicken Sie dann auf Volran.Wählen Sie im Bearbeitungsmenü Optionen und dann Farbkarte bearbeiten. Passen Sie die Farbe mithilfe der Kästchen an und klicken Sie dann auf OK. Klicken Sie noch in der Bildbearbeitungssoftware auf Datei und öffnen Sie die Zeitreihendaten.Wählen Sie die 3D-Tiffs aus, die gerade erstellt wurden, indem Sie auf Laden klicken, und geben Sie die gleiche Voxelgröße wie zuvor ein. Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf das blaue Scheiben-TIFF-Feld mit einem Punkt, und wählen Sie dann Anzeigen gefolgt von Volran aus. Klicken Sie nun auf Bearbeiten.Wählen Sie Optionen aus. Wählen Sie dann Farbkarte bearbeiten aus. Passen Sie die Farbe mithilfe der Kästchen an und klicken Sie dann auf OK.Klicken Sie anschließend mit der rechten Maustaste auf das Zeitreihensteuerelement, klicken Sie auf Movie Maker, und drücken Sie die Wiedergabetaste, um den Film anzusehen. Fügen Sie zum Schluss einen Dateinamen, eine Bildgröße, eine Bildrate und eine Qualität ein, die eins ist, und geben Sie monoskopisch ein. Klicken Sie dann auf Übernehmen.Exportieren Sie abschließend das Video. Biomechanische Kräfte, wie z. B. hämodynamische Scherspannungen, sind eng an der kardialen Morphogenese beteiligt. Hier wurde die Lichtblattfluoreszenzmikroskopie verwendet, um die in das Ventrikellumen ragenden Trabekelleisten 75 Stunden nach der Befruchtung sichtbar zu machen.100 Stunden nach der Befruchtung ist deutlich ein trabekuläres Netzwerk zu erkennen. Bei einem Embryo, der mit der gata1aMO-Mikroinjektion behandelt wurde, sind die Hämatopoese und die Viskosität um 90 Prozent reduziert. Diese verringerte Viskosität schwächte die hämodynamische Scherspannung, was zu einer verzögerten Initiierung und einem weniger dichten Trabekelnetzwerk führte.Diese Verzögerung und Dichte des trabekulären Netzwerks konnte durch Hochregulierung der kerbbedingten Genexpression wiederhergestellt werden, wodurch die Trabekelbildung 75 Stunden nach der Befruchtung und 100 Stunden nach der Befruchtung gerettet wurde. So reduzierten gata1a-Morpholino-Oligonukleotide die hämodynamischen Kräfte, was zu einer Herunterregulierung des Notch-Signalwegs führte, während Nrg1-mRNA regulierte Notch-bezogene Gene rettete und die Trabekulation wieder in Gang setzte. Einmal gemeistert, kann diese bildgebende Technik in etwa zwei Stunden abgeschlossen werden, wenn sie richtig durchgeführt wird.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Herzentwicklung, um die Faktoren im Kerb-Gen zu untersuchen, die für die korrekte Bildung der Trabekulation beim Zebrafisch verantwortlich sind. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie Bilder mit selektiver Ebenenbeleuchtungsmikroskopie aufnehmen und 4D-Bilddateien erstellen können. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Lasern äußerst gefährlich sein kann.Und Vorsichtsmaßnahmen, wie z. B. das Tragen einer geeigneten Brille, sollten während dieses Eingriffs immer getroffen werden.

light-sheet-fluorescence-microscopy-to-capture-4-dimensional-images

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Die Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie ist ein hervorragendes Werkzeug für die Abbildung der Embryonalentwicklung. Es ermöglicht die Aufnahme von langen Zeitrafferfilmen von lebenden Embryonen unter nahezu physiologischen Bedingungen. Wir demonstrieren seine Anwendung für die Bildgebung der Entwicklung von Zebrafischaugen über weite räumliche und zeitliche Skalen und stellen eine Pipeline für die Fusion und Dekonvolution von Multiview-Datensätzen vor.

Mit Lichtblatt Fluoreszenzmikroskopie Bild Zebrabärbling Augenentwicklung

Hier wird ein Protokoll für die Zeitrafferbildgebung der Augenmorphogenese mit einem handelsüblichen Lightsheet-Mikroskop und einer Bildverarbeitungs-Workstation zur Analyse der resultierenden Daten bereitgestellt. Dieses Protokoll beschreibt die Verfahren für die Anästhesie des Embryos, die Einbettung in Agarose mit niedriger Schmelztemperatur, die Suspension in der Bildgebungskammer, die Einrichtung der Bildgebungsparameter und schließlich die Analyse der Bilddaten mithilfe von...

Visualisierung der Augenmorphogenese mittels Lightsheet-Mikroskopie mittels rx3:GFP Transgener Zebrafische

Wir beschreiben optimierte Werkzeuge zur Untersuchung des Zebrafischherzens in vivo mit Lichtblattfluoreszenzmikroskopie. Insbesondere schlagen wir helle kardiale transgene Linien vor und präsentieren neue sanfte Einbettungs- und Immobilisierungstechniken, die Entwicklungs- und Herzfehler vermeiden. Eine mögliche Datenerfassungs- und Analysepipeline, die an die kardiale Bildgebung angepasst ist, ist ebenfalls vorhanden.

Lichtblattmikroskopie der schnellen Herzdynamik in Zebrafischembryonen

Dieses Protokoll verwendet Lichtblatt-Bildgebung, um die kontraktile Funktion des Herzens in Zebrafischlarven zu untersuchen und Einblicke in die Herzmechanik durch Zellverfolgung und interaktive Analyse zu gewinnen.

4D-Lichtblatt-Bildgebung der Herzkontraktion von Zebrafischen

Eine zyklische Druck Bioreaktor in der Lage zu unterwerfen Herzklappengewebe zu physiologischen und pathologischen Druckverhältnisse ausgelegt ist. Ein LabVIEW-Programm ermöglicht es Benutzern, Druck Größe, Amplitude und Frequenz-Steuerung. Dieses Gerät kann verwendet werden, um die Mechanobiologie der Herzklappe Gewebe oder isolierte Zellen zu studieren.

Entwurf eines zyklischen Druck Bioreaktor für die Ex Vivo Studium der Aorten-Herzklappen

Wir haben eine Technologie auf mesoporösen Siliciumdioxid-Dünnschicht zur selektiven Rückgewinnung von niedermolekularen Proteinen und Peptiden aus Humanserum. Die physikalisch-chemischen Eigenschaften unserer mesoporösen Chips wurden fein abgestimmt, um wesentliche Bereicherung in der Peptid-Kontrolle stellen und damit das Profil Serumproteom für diagnostische Zwecke.

Niedermolekulare Protein Enrichment auf mesoporösem Siliciumdioxid Dünnschichten für Biomarker Discovery

Ein Verfahren zur Montage von Klebstoff und löslichen Gradienten in einer Mikroskopie Kammer für lebende Zellmigration Studien beschrieben. Die gebaute Umwelt verbindet Antifouling Oberflächen und Kleber Tracks mit Lösung Steigungen und ermöglicht somit ein, um die relative Bedeutung von Leitlinien Hinweise zu bestimmen.

Erstellen Adhesive und löslichen Farbverläufe for Imaging Cell Migration mit Fluoreszenz-Mikroskopie

In diesem Videoprotokoll verfolgen wir - mit hoher Geschwindigkeit und in drei Dimensionen - fluoreszenzmarkierte Lysosomen in lebenden Zellen, mit der orbitalen Tracking-Methode in einem modifizierten Zwei-Photonen-Mikroskop.

3D-Tracking-Orbital in einer modifizierten Zwei-Photonen-Mikroskop: einen Antrag bei der Verfolgung von intrazellulären Vesikeln

Die räumliche Verteilung und zeitliche Dynamik von Plasmamembranproteinen und Lipiden ist ein heißes Thema in der Biologie. Hier wird dieses Problem durch eine räumlich-zeitliche Bildfluktuationsanalyse gelöst, die konzeptionell die gleichen physikalischen Größen der Einzelpartikelverfolgung liefert, jedoch kleine molekulare Markierungen und Standardmikroskopie-Setups verwendet.

Von Fast Fluoreszenz-Imaging, um molekulare Diffusion Gesetz über Live Cell Membrane in einem kommerziellen Mikroskop

Die Herstellung von proteinfunktionalisierten planaren glasgestützten Lipiddoppelschichten, die Bestimmung der Proteinmobilität innerhalb und die Messung von Proteindichten wird hier gezeigt. Es wird eine Roadmap zum Bau eines rauschreduzierten Totalreflexionsmikroskops skizziert, das die Visualisierung von in einzelnen Doppelschichten residenten Fluorochromen mit hoher raumzeitlicher Auflösung ermöglicht.

Einzelmolekülfluoreszenzmikroskopie auf Planar Unterstützte Bilayers

Erfahren Sie 4-D Licht-Blatt-Fluoreszenzmikroskopie mit computergestützter Rekonstruktion schlagender Zebrafischherzen. Diese Methode untersucht Schubspannungseffekte auf die Notch-Signalgebung während der Herzkammerentwicklung.

Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie, 4-dimensionale Bilder über die Auswirkungen der modulierende Schubspannung auf entwickelnden Zebrafisches Herzen erfassen (Video) | JoVE Journal

Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie, 4-dimensionale Bilder über die Auswirkungen der modulierende Schubspannung auf entwickelnden Zebrafisches Herzen erfassen

Weitere Videos entdecken