Klinisches Protokoll zur Herstellung von Fettgewebe abgeleitet Stromazellen vaskulären Bruchteil für potenzielle Knorpelregeneration

Osteoarthritis ist eine der häufigsten schwächenden Erkrankungen bei älteren Menschen. Derzeit gibt es keine definitive Heilung für die zugrunde liegenden Ursachen der Arthrose. Dieses klinische Protokoll beschreibt ein innovatives Verfahren für eine vielversprechende, minimalinvasive und alternative Behandlung der menschlichen Kniearthrose durch Regenerierung von Knorpel wie Gewebe.

Osteoarthritis ist eine der häufigsten schwächenden Erkrankungen bei älteren Menschen. Derzeit gibt es keine definitive Heilung für die unterstreichenden Ursachen von Arthrose. Dieses klinische Protokoll ist ein innovatives Verfahren für eine vielversprechende, minimalinvasive und alternative Behandlung der menschlichen Kniearthrose durch regenerierendes Knorpel-ähnliches Gewebe.

Bringen Sie den Patienten mit einer Biohazard Class A Kapuze in einen Operationssaal und bringen Sie ihn in eine Supine-Position. Reinigen Sie den Bauchbereich des Patienten mit 5%Betadin-Povidin-Jod und drapieren Sie den Patienten mit der sterilen Technik, wobei der saubere Bereich des Bauches zur Fettabsaugung freigelegt wird. Etwa fünf Zentimeter infero-seitlich vom Nabel, betäuben zwei Stellen, eine auf der linken und die andere auf der rechten Seite des Nabels des Einschnitts gemacht werden.

Mit zwei Milliliter 2%Lidocain ohne Adrenalin mit einer 25-Gauge 1,5-Zoll-Nadel in einer Fünf-Milliliter-Spritze durch Injektion jeder Stelle auf epidermaler Ebene. Anästhetisieren Sie die Einschnittstelle mit fünf Milliliter tumeszenzlösung und 10 Milliliter Spritze und der Nadel 25-Spur 1,5 Zoll gemacht werden. Machen Sie zwei Einschnitte von 0,5 Zentimetern etwa fünf Zentimeter unter dem Nabel seitlich durch Kneifen der Haut, um die Tiefe des subkutanen Niveaus zu erhöhen.

Mit einer Klinge der Nummer 11, helfen Sie der erhöhten Haut, bis zum subkutanen Niveau zu durchdringen, aber nicht durch die Bauchwand zu durchdringen. Durch die Verwendung von 20 Zentimeter60-Spur-Kanülen, betäuben Sie den subkutanen Gehalt des gesamten Unterbauchbereichs, der mit 700 bis 800 Milliliter der tumeszenten Lösung fettabsaugt werden soll. Nach Abschluss der Infiltration des gesamten Unterbauchs mit tumeszenzlösung, bereiten Sie ein Fettabsaugungsgerät vor, indem Sie eine 3,0 Millimeter Kanüle mit einer 60 Milliliter oder 30 Milliliter Spritze zur manuellen Fettabsaugung oder speziell konstruierten 3,0-Millimeter-Kanüle, die mit einem Zentrifugensatz verbunden ist, anschließen.

Eine geschlossene Systemspritze, die von uns entwickelt und von der FDA CDRH zugelassen wurde, um die Sterilität mit einer Vakuummaschine für vakuumunterstützte Fettabsaugung verbunden zu halten. Führen Sie die Fettabsaugung durch, um 100 bis 110 Gramm Fettgewebe ohne tumeszierende Lösung zu erhalten. Bei der Durchführung der Fettabsaugung wird Fettgewebe zusammen mit tumeszierender Lösung erhalten, sollte aber getrennt und entfernt werden.

Um die tumeszierende Lösung zunächst durch Schwerkraft zu trennen, kann das Fettgewebe im Zentrifugen-Kit in eine 60-Milliliter-Spritze übertragen und die Spritze nach unten gelegt werden. Zum Beispiel befindet sich der Öffnungsteil der Spritze am unteren Rand. Durch das Warten von fünf bis sechs Minuten werden das Fettgewebe und die tumeszierende Lösung getrennt.

Entfernen Sie die Flüssigkeit an der Unterseite der Spritze, indem Sie auf die Oberseite des Spritzenkolbens drücken. Führen Sie die oben genannten Schritte neun bis 11, bis insgesamt 100 Gramm bis 110 Gramm Fettgewebe Lipid Aspirat pro Knie angesammelt wurde. Nach der Trennung der Tumeszenzlösung durch Schwerkraft und akkumulieren 50 Gramm bis 55 Gramm Lipid-Aspirat pro 60 Milliliter Zentrifuge-Kit sterilgeschlossenes System, legen Sie die beiden Zentrifugen-Kits in einen Zentrifugenbehälter-Eimer und drehen Sie bei 1600 G für fünf Minuten, kondensieren das Lipid-Aspirat und trennen Flüssigkeit aus dem Fettgewebe.

Dieser Prozess kondensiert das Lipid-Aspirat weiter und kann in bestimmten Fällen Fettöl produzieren. Achten Sie darauf, nicht zu schütteln, entfernen Sie die Sicherheitskappe und den Stecker an der Unterseite des Zentrifugen-Kits. Entfernen Sie die Bodenflüssigkeit, indem Sie langsam auf den Kolben des Zentrifugen-Kits drücken.

Auf separate 60-Milliliter-Spritze, lösen Sie 10 Milligramm Kollagenase, fünf Milligramm Kollagennase spezifisch für Bindegewebe, und fünf Milligramm Kollagenase spezifisch für Fettgewebe mit 50 Milliliter normaler Saline. Mischen Sie etwa 25 bis 30 Milliliter kondensiertes Lipid-Aspirat mit gelöster Kollagennase, fünf Milligramm Kollagenase spezifisch für Bindegewebe und fünf Milligramm Kollagenase spezifisch für Fettgewebe im Verhältnis eins zu eins, Volumen zu Volumen, indem Sie die 60-Milliliter-Spritze mit einem Zentrifugen-Kit über einen speziellen Stecker verbinden. Mischen Sie gründlich, um das Prep-Aspirat und die Kollagenase zu kondensieren, indem Sie den Inhalt mit einem Stab oder einem Drücker zwischen die 60-Milliliter-Spritze und das Zentrifugen-Kit drücken.

Übertragen Sie die Mischung aus Lipid-Aspirat und Kollagenase zurück auf die 60-Milliliter-Spritze. Verbinden Sie jede 60 Milliliter Spritze, die die Mischung enthält, mit dem Gewebehomogenisator, der Klingen enthält. Schließen Sie eine leere 60-Milliliter-Spritze an das andere Ende des Homogenisators an.

Drücken Sie die Mischung vier- bis sechsmal durch den Homogenisator auf die andere 60-Milliliter-Spritze, was zum Schneiden und Zerlegen des Lipid-Aspirats führt. Übertragen Sie das homogenisierte Lipid-Aspirat und die kollagene Mischung durch einen speziellen Steckverbinder zurück in das 60 Milliliter Zentrifugen-Kit. Legen Sie die Zentrifugen-Kits in einen Behälter, der in einen Inkubator gelegt werden soll, der bei 37 Grad Celsius vorgewärmt wurde.

Die beiden Zentrifugen-Kits mit der homogenisierten Mischung bei 37 Grad Celsius 40 Minuten lang inkubieren, während sie bei 45 U/min rotieren. Nach 40 Minuten Inkubation den Behälter steril aus dem Inkubator entfernen. Entfernen Sie dann die Zentrifugensätze und legen Sie sie in eine Zentrifugenmaschine.

Zentrifugieren Sie die Mischungen bei 800 G für fünf Minuten, um die fettgewebe abgeleitete SVF zu trennen. Nach der Zentrifuge wird der Überstand, der Kollagennase und verdautes Fettgewebe enthält, aus jedem Zentrifugen-Kit entfernt, indem die Spritzenkappe auf dem Kolben entfernt und eine 30-Milliliter-Spritze über eine Spritzenverriegelung auf die Kolbenöffnung auf den Kolben gestellt wird. Drücken Sie langsam auf den Laufteil der 30-Milliliter-Spritze, damit der Überstand in die 30-Milliliter-Spritze gefüllt wird.

Drücken Sie den 30-Milliliter-Spritzenlauf bis auf die letzten drei bis vier Milliliter des Bodens des Zentrifugen-Kits, so dass nur die letzten drei bis vier Milliliter aus Fettgewebe aus DemUS übrig bleiben. Der Überstand wird verworfen. Entfernen Sie die 30-Milliliter-Spritze von der Oberseite des Kolbens und füllen Sie die Spritze mit 5%dextrose laktierte Ringerlösung, auch bekannt als D5LR.

Durch Anbringen der mit D5LR gefüllten 30-Milliliter-Spritze an der Oberseite der Kolbenöffnung füllen Sie die Zentrifugen-Kits mit drei bis vier Millilitern Ausfettgewebe mit D5LR bis zu 55 Millilitern. Dann die 30-Milliliter-Spritze entfernen, die Kolbenöffnung verkappen und die Zentrifugensätze für etwa vier Minuten wieder bei 300 G zentrieren. Wiederholen Sie die Schritte 17 bis Nummer 21 für insgesamt vier Waschungen.

Nach der vierten Zentrifuge, um den endgültigen SVF für die Injektion zu erhalten, entfernen Sie die Sicherheitskappe und den Stecker an der unteren Öffnung des Zentrifugen-Kits, ohne zu schütteln oder drehen sie den Zentrifuge-Kit. Befestigen Sie eine 20-Milliliter-Spritze an der Bodenöffnung des Zentrifugensatzes mit einem speziell entwickelten Steckverbinder. Ziehen Sie den Kolben der 20-Milliliter-Spritze mehrmals hin und her, um die Zellen aufzurütteln, die sich auf dem Boden des Zentrifugensatzes niedergelassen haben.

Entfernen Sie das gewünschte Gesamtvolumen des SVF, das sowohl ASTs als auch ECM enthält, zusammen mit anderen Zellen und Geweben. In der Regel etwa drei bis vier Milliliter von jedem Zentrifugen-Kit für Kniegelenk-Injektionen. Wir haben 30 Milliliter autologes Blut zusammen mit 2,5 Milliliter gerinnungshemmendes Citrat-Dextrose-Lösung.

Dann wurde das entnommene Blut in die 60 Milliliter Zentrifuge Fass Kits übertragen. Es wurde dann bei 730 Schwerkraft für fünf Minuten zentrifugiert. Und der Überstand wurde entfernt und in ein neues 60 Milliliter Zentrifugenfass-Kit gesteckt.

Der Überstand wurde vier Minuten lang mit 1350 Schwerkraft zentrifugiert und erhielt 4,4 Milliliter PRP. Reinigen Sie das Knie des Patienten mit 5%Betadin und drapieren Sie es steril. Palpate das Vorderdes des Knies für den Gelenkraum zwischen tibialen und femoralen Knochen.

Anästhetisieren Sie die Injektionsstelle oberflächlich mit verdünntem Lidocain, einem Milliliter 1%lidocaine mit vier Milliliter n.A. normaler Saline verdünnt, von der Haut bis direkt außerhalb der Gelenkkapsel. Dann befeuchten Sie das Innere der Gelenkkapsel mit verdünntem Ropivacain, einem Milliliter 0,75%ropivacaine mit drei Milliliter normaler Saline verdünnt. Mischen Sie zwei Milliliter HA auf die sechs bis acht Milliliter SVF, die in einer 20-Milliliter-Spritze enthalten sind, durch eine Spritze zum Spritzenverbinder.

Mit einer Spritze zum Spritzenverbinder 0,4 Milliliter Calciumchlorid zu den drei bis vier Millilitern autologem PRP hinzufügen, die bereits vorbereitet und in einer Fünf-Milliliter-Spritze fertig sind. Kombinieren Sie 3,5 bis 4,5 Milliliter PRP Calciumchlorid in einer Fünf-Milliliter-Spritze mit acht bis zehn MilliliterHA-SVF-Gemisch in einer 20-Milliliter-Spritze durch eine Spritze zum Spritzenverbinder. Injizieren Sie die Mischung, etwa 12 bis 15 Milliliter, sofort in das vordere tibial-femorale Gelenk des Knies, mit 38 Millimeter 18-Spur-Nadel mit oder ohne Ultraschallführung.

Nach der Injektion die Injektionsstelle mit Druck binden, indem Sie 4x4 Baumwolle viermal falten und Bänder über die gefaltete 4x4 Gaze legen. Weisen Sie den Patienten an, 60 Minuten still zu bleiben, um eine Zellanhaftung zu ermöglichen. Weisen Sie den Patienten an, die Aktivitäten für minimale von einer Woche nach der Entlassung aus der Klinik zu begrenzen.

Rückkehr in die Klinik für drei zusätzliche Injektionen von PRP durch Calciumchlorid über drei Wochen aktiviert. Der Patient mit der dritten Stufe OA erhielt die Behandlung, wie im Protokollabschnitt beschrieben. Nach der zweiten Woche der ASV-ECM-Mischinjektion verbesserten sich die Schmerzen und ROM des Patienten.

Bis zur 16. Woche verbesserten sich die Schmerzen des Patienten und ROM signifikant um mehr als 70%Postbehandlung MRT, die nach der 16. Woche genommen wurde, zeigten die erhöhte Dicke des knorpelähnlichen Gewebes auf der medialen Seite des Knies. Ein weiterer Patient mit Stufe drei OA erhielt die Behandlung, wie im Protokollabschnitt beschrieben. Nach der zweiten Woche der ASV-ECM-Mischinjektion verbesserten sich die Schmerzen und ROM des Patienten.

Bis zur 18. Woche verbesserten sich die Schmerzen und ROM signifikant auf 80%wiederholte MRT nach der 18. Woche nahm eine Erhöhung der Höhe des Knorpel-ähnlichen Gewebes auf der vorderen-medialen Seite des Knies. Der dritte Patient mit Stufe drei OA erhielt die Behandlung, wie im Protokollabschnitt beschrieben. Nach der zweiten Woche der ASV-ECM-Mischinjektion verbesserten sich die Schmerzen und ROM des Patienten um ca. 50% Bis zur 22. Woche verbesserten sich die Schmerzen und DAS ROM signifikant über 80%wiederholte MRTs, die nach der 22. Woche eingenommen wurden, zeigten eine Erhöhung der Höhe des knorpelähnlichen Gewebes auf der medialen Seite des Knies.

Derzeit gibt es keine heilende Therapie für die Behandlung von OA. Die perkutane Injektion der Stammzelltherapie mit ASCs und homogenisiertem ECM zusammen mit HA und analogem PRP, das mit Calciumchlorid aktiviert wird, kann jedoch eine Alternative zur aktuellen Behandlungstherapie zur Behandlung von Knie-OA darstellen.