Bau eines vielschichtigen mesenchymale Stammzellen-Blatt mit einem 3D dynamische Kultursystem

Die Stammzelltherapie wurde weithin als vielversprechende Behandlung für viele Krankheiten berichtet. Und die Zellblatttechniken wurden entwickelt, um auch die Retention der Zelle und das Überleben innerhalb der Ziele zu verbessern. Während des Zellblattbaus bleibt die unzureichende Nahrungsversorgung ein zentrales Problem für den Verlust der Funktion der Stammzellzelle und ist eine unbefriedigende Stammzelleigenschaft, die schließlich die therapeutische Wirkung in vivo bewirken würde.

Unser Ziel, verfügbare mehrschichtige Stammzellblattprodukte vorzubereiten, hat unser Team das zelluläre Pol-, Perikard- und Zellblechgerüst entwickelt. Basierend auf dem Gerüst würde der Mehrschichtzellenstarter schnell mit Nonapeptid Hydrogen konstruiert und ein dynamisches Perfusionssystem verwendet, um die Nahrungsversorgung der Stammzelle in vitro zu gewährleisten. Nehmen Sie ein getrocknetes DBP-Gerüst heraus und legen Sie es in die Mitte der schwarzen Basis.

Legen Sie einen weißen Spannring auf das DBP-Gerüst und befestigen Sie ihn im Gewebeträger. Stellen Sie sicher, dass das DBP-Gerüst vollständig im Gewebeträger fixiert ist. Fügen Sie 100 Mikroliter Kulturmedien auf dem DBP-Gerüst hinzu.

Legen Sie das Gerüst in den 37 Grad Celsius Inkubator und lassen Sie es für 15 Minuten einweichen. Nehmen Sie die Zellen aus dem Inkubator, entfernen Sie die Kulturmedien aus der Kulturschale, waschen Sie die Zellen vorsichtig mit zwei Millilitern warmer PBS. Entfernen Sie alle PBS aus dem Kulturgericht, und stellen Sie sicher, dass keine Flüssigkeit verbleibt.

Fügen Sie der Schale zwei Milliliter zu 1,25% Trypsin-Lösung hinzu und brüten Die Zellen drei Minuten lang. Beenden Sie den Trypsin-Effekt, indem Sie zwei Milliliter Kulturmedium hinzufügen. Waschen Sie die Zellen vorsichtig von der Schale.

Übertragen Sie die Zellsuspensionen in ein neues 15 Milliliter Zentrifugalrohr. Zentrifugate die Zellen bei 220-facher Schwerkraft für fünf Minuten, und erhalten Zellsedimente. Entfernen Sie den Überstand, und wischen Sie das Zellsediment ab.

Setzen Sie die Zellen mit drei Milliliter 10%Saccharose-Lösung aus. Aspirieren Sie 10 Mikroliter Zellsuspension, und die Inhaltszellzahl liest ein Hämozytometer, extrahieren Sie drei Millionen Zellen und übertragen Sie in Ihrem neuen 1,5 Milliliter Zentrifugalrohr. Zentrifugate die Zellen bei 220 mal quadratischen Wurzel für fünf Minuten, vollständig entfernen die Überräube und erhalten die Zellen Sediment.

Bereiten Sie 20 Mikroliter 10%Saccharose-Lösung. Die Zellen vorsichtig wieder aufhängen und eine gleichmäßige Suspension erhalten. Fügen Sie 20 Mikroliter Peptid-Hydrogel an der Oberseite der Suspension sanft mischen das Peptid Hydrogel, und die Zellen Suspension mit dem T, nehmen Sie das DBP Gerüst, verlassen Sie den Gewebeträger, und dann sanft die Calculi Median mit einem T.Aspirieren die Mischung die Mischung und gleichmäßig auf das DBP Gerüst hinzufügen.

Fügen Sie einen Milliliter Calciumedetat auf den Boden des Gewebeträgers. Fügen Sie dem Kulturgericht vorsichtig vier Milliliter Kulturmittel hinzu und tauchen dann das Zellblatt auf. Legen Sie die Zellen in den Inkubator für zwei Stunden lassen Sie es Kultur.

Das dynamische Perfusionssystem umfasst einen Perfusionskulturbehälter, den Gasaustausch und eine Glasflasche. Assembles sind dynamische Perfusionssysteme, wie die Abbildung zeigt. Fügen Sie zwei Hydromilliliter Kultur medians in die Glasflasche.

Legen Sie das Zellblatt in die Kammer des Kulturbehälters ein, fügen Sie drei Milliliter Kulturmittel in den Behälter ein, legen Sie die dynamischen Perfusionssysteme in die Inkubatoren und beginnen Sie zu pumpen. Öffnen Sie den Kulturcontainer im bipositiven Liegerad. Nehmen Sie das Zellblatt aus dem Kulturbehälter und legen Sie es in Kulturgericht.

Verwenden Sie eine Zange, um den Gewebeträger zu immobilisieren und verwenden Sie zwei weitere Zangen, um den weißen Spannungsring von der schwarzen Basis zu trennen. Schließlich erhalten Sie das mehrschichtige Zellblatt. DBP Gerüst ist transparent.

Die SEM-Weiterverkäufe zeigen, dass Colleges erfasst und die Komponenten vollständig reserviert sind. Die Zellblätter können für eine kurze Konservierung durch Zange erhalten und gehalten werden. Diese Zellplatte konnte in 1,5 Milliliter Zylindriformrohr übertragen werden.

Als Modell zum Beispiel beginnend mit Zelldarstellungen von BMFC'S sehr positiv für die Stammzellen Marker CD 9O und die CD 29. Nach dem Zellbau bleibt das Verlassen des Zellblattes durch die BMFC nach wie vor hohe Ausdehnungsstufen von CD 90 und CD 29. Die Erstellung der mehrschichtigen Zellstruktur ist der entscheidende Schritt des Protokolls.

Die Pfannenzeit erfordert vier Hydrogel, wenn sich der PH-Wert von SA zu neutral ändert, daher ist es wichtig, die Zelle mit Saccharoselösung zu waschen, um die Oberflächenionen zu entfernen. Auch das Volumenverhältnis von Zellsuspension und Panthihydrogel ist kein guter Freund für den Aufbau der temporären Mehrschichtstruktur. Nach der Bildung der 3D-Stammzellstruktur werden Sie sehen, dass das dynamische Perfusionssystem wichtig ist, um die mehrschichtige Struktur zu stabilisieren und die Stammzellviabilitäten aufrechtzuerhalten.

Die dynamische Infiltration des Kulturmedians könnte Stammzellen erleichtern, den Zellkontext innerhalb der mehrschichtigen Struktur zu vermehren und zu extrapolieren, auch die dynamischen Kulturthermometer sollten an verschiedene Stammzelltypen angepasst werden.