Name: Extraktion und Analyse der taiwanesischen grünen Propolis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Lernen Sie die Ethanol-Extraktion von taiwanesischem grünem Propolis zur Charakterisierung antibakterieller Eigenschaften. Diese reproduzierbare Methode ermöglicht zuverlässige Qualitätsbestimmungen für Naturstoffforschung.

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Dieses Manuskript wurde von Wallace wissenschaftliche Bearbeitung bearbeitet.

1. Vorbereitung von Ethanol extrahiert Verbindungen
<ol><li>10 g gefrorenen taiwanesischen grüne Propolis, die von Bienenstöcken in Taiwan von Mai bis Juli gesammelt wurde, wiegen und es mit dem Gewürz-Mühle mahlen. Bestätigen Sie, dass ganze Stücke von taiwanesischen grünen Propolis Boden zu einem feinen Pulver ohne jede große Partikel.</li>
	<li>Hinzugeben Sie 100 mL verschiedene Konzentrationen von Ethanol (60 %, 70 %, 80 %, 95 % und 99,5 %) und Wasser in Flaschen zu trennen und mischen jede Konzentration mit 10 g Boden Propolis.</li>
	<li>Bei 25 ° C inkubieren Sie und schütteln Sie die Flasche bei 250 u/min für 48 h.</li>
	<li>Filtern Sie die Ethanol-Extrakte durch Filterpapier mit einer 25 µm Porengröße.</li>
	<li>Bereiten Sie die Filtrate zu ihrem ursprünglichen Volumen (100 mL) mit 95 % Ethanol mit einem volumetrischen Kolben.</li>
	<li>Speichern Sie die Ethanol-Extrakte bei-20 ° C. Hinweis: Das Protokoll kann hier angehalten werden.</li>
</ol>2. Vorbereitung von Ethanol extrahiert für HPLC
<ol><li>Konzentrieren Sie 10 mL Ethanol Extrakte durch Vakuumverdampfung bei 40 ° C für 15 Minuten.</li>
	<li>Backen Sie die Trockenmasse bei 45 ° C für 24 h.</li>
	<li>Bereiten Sie die Trockenmasse mit 10 mL von 95 % Ethanol.</li>
	<li>Filter 1 mL Ethanol extrahiert eine sterile Spritze-Filter mit einer Porengröße von 0,45 µm.</li>
	<li>Refilter die Ethanol-Extrakte mit einem sterile Spritze-Filter mit einer Porengröße von 0,22 µm. Das Filtrat wird gesammelt und kann direkt mittels HPLC analysiert werden.</li>
</ol>3. Analyse der Propolin-Inhalte mittels HPLC
<ol><li>
Einrichtung von Standardkurven des propolins
	<ol>
<li>Bereiten Sie 1 L der mobilen Phase des 88.8:11.2 (V/V) Methanol: Wasser-Lösung.</li>
		<li>Bereiten Sie serielle Verdünnungen von Propolin standard (C, D, F und G) Konzentrationen (15,625 mg/mL, 31,25 mg/mL, 62,5 mg/mL und 125 mg/mL, beziehungsweise) mit der mobilen Phase-Lösung als Lösungsmittel.</li>
		<li>Propolin-standard-Konzentrationen in der Reverse-Phase-Spalte sequenziell von der niedrigen Konzentration auf die hohe Konzentration 20 µL zu injizieren.</li>
		<li>Die HPLC-Säule bei 30 ° C und die Durchflussmenge 1 mL/min eingestellt.</li>
		<li>Legen Sie die Wellenlänge des UV-Detektor auf 280 nm und der Recorder Zeit um 20 Minuten.</li>
		<li>Analysieren Sie die Standards mindestens 3 X.</li>
		<li>Plot die Messung Antwort (y-Achse) gegen die Konzentration (x-Achse) mit Berechnung Software Blatt, und erstellen Sie eine Standardkurve mit der Gleichung und R-Quadrat-Wert.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analyse der Ethanol zu extrahieren s
	<ol>
<li>Injizieren Sie 20 µL Ethanol Extrakte aus Schritt 2.5 in der Reverse-Phase-Spalte gewonnen.</li>
		<li>Die HPLC-Säule bei 30 ° C und die Durchflussmenge 1 mL/min eingestellt.</li>
		<li>Legen Sie die Wellenlänge des UV-Detektor auf 280 nm und der Recorder Zeit um 20 Minuten.</li>
		<li>Analysieren Sie die Standards mindestens 3 X.</li>
		<li>Berechnen Sie die Konzentration von Propolin in Ethanol-Extrakt, unter Verwendung der Gleichung für die Standardkurve gewonnenen Schritt 3.1.7, die die Peakfläche für jedes Propolin verwendet.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. minimale inhibitorische Konzentration und minimale bakterizide Konzentration-Analyse
Hinweis: Die Microdilution-Methode dient zur Bewertung der antibakteriellen Wirksamkeit von Ethanol extrahiert Propolins von taiwanesischen grüne Propolis.
<ol><li>
Vorbereitung der Testorganismen
	<ol>
<li>Bakterienstämme, Staphylococcus Aureus und Escherichia coli, Auftauen und dann Kultur sie in tryptic Soy Bouillon und Nährbouillon, bzw. bei 37 ° C für 24 h.</li>
		<li>Durchgang der S. Aureus mit tryptic Soy Bouillon und E. Coli mit Nährbouillon für zwei Generationen und dann berechnen Koloniebildenden Einheiten durch zählen der einzelnen Kolonien auf einer Nährbodenplatte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vorbereitung von Ethanol extrahiert für antibakterielle Aktivität testen
	<ol>
<li>Konzentrieren sich die Ethanol-Extrakte aus Schritt 1.5 durch Vakuumverdampfung bei 40 ° C für 15 Minuten gewonnen.</li>
		<li>Wiederherstellen der Trockenmasse mit Dimethyl Sulfoxid (DMSO) und passen Sie die Konzentration des Extraktes, 12,8 mg/mL.</li>
		<li>Machen Sie eine serielle Verdünnung (Konzentrationen: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 und 640 µg/mL) Ethanol extrahiert die Brühe verwenden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Minimale inhibitorische Konzentration tests
	<ol>
<li>Fügen Sie 10 µL verdünnter Ethanol Extrakte von 0.156 bis hin zu 640.0 µg/mL in einer 96-Well-Platte.</li>
		<li>Mit Brühe, stellen Sie die Lautstärke auf 100 µL und erhalten Sie 5 % DMSO in die Verdünnungen zu.</li>
		<li>Impfen Sie 100 µL der Bakterienkultur (1 x 106/mL), in der 96-Well-Platte.</li>
		<li>Kultur-Inokulum mit verschiedenen Konzentrationen von Ethanol extrahiert bei 37 ° C für 48 h.</li>
		<li>Analysieren Sie das Bakterienwachstum nach Trübung und optische Dichte (Mikrotestplatte Leser) bei 590 nm der minimale inhibitorische Konzentration (MIC) zu bestimmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Minimale bakterizide Konzentration Tests
	<ol>
<li>Impfen Sie 10 µL Flüssigkultur aus jedem Brunnen des MIC-Tests, der kein Wachstum auf einer Nährbodenplatte ausgestellt.</li>
		<li>Inkubation bei 37 ° C für 24 h.</li>
		<li>Bestimmen Sie die bakterizide Aktivität durch die Identifizierung der niedrigsten Konzentration, die keine sichtbaren Bakterienwachstum offenbart. Die Konzentration, die vollständig Zellwachstum eliminiert gilt als die minimale bakterielle Konzentration (MBC).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verzollen.

Eine Studie berichtet, dass Mazeration, mit verschiedenen Konzentrationen von Ethanol, für brasilianische Propolis Extraktion17verwendet werden könnte; Allerdings war der Prozess zeitaufwendig17. Es dauerte mindestens 10 Tage, die bioaktiven Verbindungen, wie z. B. phenolische Inhalte aus brasilianischen Propolis17zu extrahieren. Alternativ schlägt Ethanol Extraktion in Kombination mit Heizung bei 37 ° C, 50 ° C oder 70 ° C für 30 min für die Gewinnu...

Propolis ist eine natürliche harzigen Mischung von Bienenarten Apis Melliferaproduziert. Propolis hat seit der Antike in der Folk-Medizin verbreitet. Eine Studie berichtete kürzlich, dass Propolis vorteilhaft zur Vorbeugung von mikrobiellen Infektionen und Entzündungen1. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass die wichtigsten bioaktiven Substanzen im Propolis Flavonoide, phenolische Acid Ester, prenylierten p sind-Cumarsäure Säuren und Diterpenic Säuren2,3. Bisher wurden 10 prenylierten Flavanone Derivate von taiwanesischen grünen Propolis durch Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC)4,5,6,7identifiziert. Die am häufigsten vorkommende unter diesen sind Propolins C, D, F und G5,7. Die erheblichen biologischen Wirkungen der taiwanesischen grünen Propolis korrelieren mit dem hohen Gehalt an Propolins8.
Die Konzentrationen von bioaktiven Substanzen im Propolis variieren stark je nach Saison und geographische Lage aus dem Propolis gewonnen wird. Europäische Propolis enthält hauptsächlich die Flavonoid Aglykon und phenolischen Säuren9. Die wichtigsten bioaktiven Substanzen im Propolis aus Brasilien sind prenylierten p-Cumarsäure Säuren, wie z. B. Artepillin C10. Eine Studie zeigte, dass die Saison ein entscheidender Faktor ist für die Bestimmung des insgesamt Propolin Inhalts in taiwanesischen grünen Propolis11. Der Propolin-Inhalt in taiwanesischen grünen Propolis ist höchste im Sommer (Mai - Juli) und niedrigsten im Winter11. Die antibakterielle Eigenschaft von Propolis gilt weithin als Indikator der biologischen Aktivität. Im allgemeinen zeigten die Proben von Propolis gesammelt aus verschiedenen Regionen eine ähnliche antibakterielle Eigenschaft; zum Beispiel, es ist in der Regel wirksam gegen fast alle Gram-positiven Bakterien und weist eine begrenzte antibakterielle Wirkung gegen Gram-negativen Bakterien10,12,13. Synergistische Wechselwirkungen zwischen der Flavonoide in Propolis wurden, haben eine antibakterielle Wirkung14demonstriert. In ähnlicher Weise wurde taiwanesischen grünen Propolis berichtet, eine antimikrobielle Wirkung gegen gram-positive Bakterien15haben. Eine Studie identifiziert darüber hinaus auch einen antimikrobiellen Wirkung aus den Wechselwirkungen von Propolins in Taiwan grüne Propolis8.
Die Charakterisierung von bioaktiven Substanzen im Propolis ist schwierig, da seine chemische Zusammensetzung nach der Quelle des Ursprungs variieren kann. Daher ist es notwendig, machbare und wiederholbare Methode zur Qualitätsbestimmung von der taiwanesischen grünen Propolis zu etablieren. Allerdings wurde kein Standardverfahren für die taiwanesische grüne Propolis Extraktion und anschließenden Funktionsanalyse gegründet. Mehrere Methoden, die verschiedentlich organische und anorganische Lösungsmittel gelten sind für Propolis Extraktion16,17,18,19,20vorgeschlagen worden. Da Propolis eine lipophile Mischung ist, haben Studien gezeigt, dass organische Extraktion besser als anorganische Extraktion8,18,19. Die totale Propolin-Konzentration im taiwanesischen grünen Propolis und seine antibakteriellen Eigenschaften sind wichtige Indikatoren für die Qualität der taiwanesischen grünen Propolis. So ist der Zweck dieser Studie, ein Protokoll für die Verwendung von Ethanol als Lösungsmittel zu extrahieren und zu charakterisieren die antibakteriellen Eigenschaften von taiwanesischen grünen Propolis zu präsentieren.

<table><tbody><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Nr. 4 Filterpapier</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>Umkehrphase RP-18 Säule</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>tryptische Sojabrühe</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>Nährbrühe</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Gewürzmühle</td><td>Waring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Reader</td><td>Molecular Devices</td><td>EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC-System</td><td>Agilent</td><td>1200 Serie</td><td></td></tr><tr><td>Vakuumverdampfung</td><td>B&Uuml; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

extraktion und analyse der taiwanesischen grünen propolis

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Taiwanesische grüne Propolis ist reich an prenylierten Flavonoide und weist eine Vielzahl von biologischen Aktivitäten, wie z. B. antioxidative, antibakterielle, und Anti-Krebs. Die bioaktiven Substanzen der taiwanesischen grünen Propolis sind Propolins, C, D, F und G. Die Konzentration der Propolins im taiwanesischen grünen Propolis variiert je nach der Jahreszeit und der geografischen Lage. Daher ist es wichtig, ein standard und wiederholbare Verfahren zur Bestimmung der Qualität der taiwanesischen grünen Propolis zu etablieren. Hier präsentieren wir eine Protokoll, die Ethanol-basierte Extraktion, Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie und eine antibakterielle Aktivitätsanalyse verwendet, um die taiwanesische grüne Propolis Qualität charakterisieren. Diese Methode gibt an, dass 95 % und 99,5 % Ethanol Extraktionen die maximale Trockenmasse Erträge von taiwanesischen grüne Propolis erreichen, nachgiebig dabei die höchsten Konzentrationen an Propolins, die antibakterielle Eigenschaften haben. Nach diesen Erkenntnissen gilt dieses Protokolls zuverlässig und reproduzierbar zur Qualitätsbestimmung von taiwanesischen grünen Propolis.

Positive repräsentative Daten für die Gewinnung von Ethanol sind in Tabelle 1dargestellt. Der Trockenmasseertrag von taiwanesischen grünen Propolis war positiv mit der Konzentration von Ethanol in Verbindung gebracht. Die 95 % und 99,5 % Ethanol Extrakte hatte die höchsten Trockenmasse von taiwanesischen grünen Propolis Ertrag. Der niedrigste Trockenmasseertrag von taiwanesischen grünen Propolis ereignete sich, als Wasser als Lösungsmittel Extraktion verwendet wurde. Dies...

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll für die Verwendung von Ethanol als Lösungsmittel zu extrahieren und zu charakterisieren, taiwanesische grüne Propolis, das antibakteriellen Aktivität aufweist.

Extraktion und Analyse der taiwanesischen grünen Propolis

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Hier stellen wir das Protokoll zur Verwendung von Ethanol als Lösungsmittel zur Extraktion und Charakterisierung taiwanesischer grüner Propolis vor, die die antibakterielle Aktivität hemmen. Dieses Protokoll ist eine zuverlässige und wiederholbare Methode zur Bestimmung der Qualität der taiwanesischen grünen Propolis. Demonstrierend werden Chun'Ting Chen und Yi'Hsuan Chien, Doktoranden aus meinem Labor sein.Um zu beginnen, wiegen 100 Gramm taiwanesischen grünen Propolis. Mit einem Gewürzschleifer, mahlen Sie die Propolis sicherstellen, dass die Stücke zu einem feinen Pulver ohne große Partikel gemahlen werden. Legen Sie fünf Kolben fest und fügen Sie jeweils 100 Milliliter verschiedener Ethanolkonzentrationen in Wasser hinzu.Mischen Sie 10 Gramm gemahlene Propolis in die Ethanol-Lösung in jedem Kolben, und inkubieren bei 25 Grad Celsius mit Schütteln bei 250 U/min für 48 Stunden. Danach verwenden Sie Filterpapier mit einer Porengröße von 25 Mikrometern, um die Ethanolextrakte zu filtern. Mit einem Volumenkolben die Filtrate auf ihr ursprüngliches Volumen von 100 Millilitern mit 95% Ethanol rekonstituieren.Bewahren Sie die rekonstituierten Extrakte bei minus 20 Grad Celsius auf, bis sie einsatzbereit sind. Wenn Sie bereit sind, die Extrakte für HPLC vorzubereiten, verwenden Sie die Vakuumverdampfung, um 10 Milliliter jedes Extrakts bei 40 Grad Celsius für 10 Minuten zu konzentrieren. Backen Sie die Trockenmasse bei 45 Grad Celsius für 24 Stunden.Rekonstituieren Sie dann jede Probe trockener Materie mit 10 Millilitern 95%Ethanol. Mit einem Spritzenfilter mit einer Porengröße von 0,22 Mikrometern pro Extrakt refiltern und das Filtrat zur direkten Analyse mit HPLC sammeln. Um mit der Erstellung einer Standardkurve zu beginnen, bereiten Sie einen Liter der mobilen Phase Methanol zu Wasserlösung im Verhältnis von 88,8 zu 11,2 vor.Mit der mobilen Phasenlösung als Lösungsmittel können Sie serielle Verdünnungen der Propolin-Standardkonzentrationen, wie im Textprotokoll beschrieben, vorbereiten. Injizieren Sie 20 Mikroliter jeder Standardkonzentration sequenziell in die Reverse-Phase-Säulen von der niedrigsten Konzentration auf die höchste. Legen Sie dann die HPLC-Säule auf 30 Grad Celsius fest, legen Sie die Verzichtslänge des UV-Detektors auf 280 Nanometer und die Durchflussrate auf einen Milliliter pro Minute und die Rekorderzeit auf 20 Minuten fest.Analysieren Sie die Standards mindestens dreimal. Verwenden Sie anschließend die Berechnungstabellensoftware, um die Messantwort an die Konzentration zu anheften, was zu einer Standardkurve mit einer ermittelten Gleichung und einem R-Quadratwert führt. Um mit der Analyse der Extrakte zu beginnen, injizieren Sie 20 Mikroliter jedes Extrakts in die Umgekehrte Phasenspalte.Stellen Sie die HPLC-Säule auf eine Temperatur von 30 Grad Celsius und eine Durchflussrate von einem Milliliter pro Minute ein. Stellen Sie die Verzichtslänge des UV-Detektors auf 280 Nanometer und die Rekorderzeit auf 20 Minuten ein. Analysieren Sie die Extrakte mindestens dreimal.Verwenden Sie dann die Standardkurve, um die Propolinkonzentration in jedem Ethanolextrakt zu bestimmen. Nach der Vorbereitung der Testorganismen und Ethanolextrakte 10 Mikroliter verdünnter Ethanolextrakt, die zwischen 0,156 und 640 Mikrogramm pro Milliliter in die Brunnen einer 96-Well-Platte reichen. Verwenden Sie Brühe, um die Lautstärke in jedem Brunnen auf 100 Mikroliter einzustellen, um sicherzustellen, dass 5%DMSO in allen Verdünnungen erhalten bleibt.Als nächstes impfen Sie 100 Mikroliter Bakterienkultur in jeden Brunnen der 96 Brunnenplatte. Kultur bei 37 Grad Celsius für 48 Stunden. Verwenden Sie einen Mikroplattenleser mit 590 Nanometern, um das Bakterienwachstum entsprechend der Trübung zu analysieren und die minimale hemmende Konzentration zu bestimmen.Danach impfen Sie 10 Mikroliter flüssige Kultur aus jedem Brunnen, der sich auf eine Agarplatte wachsen lässt. 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius inkubieren. Identifizieren Sie die niedrigste Konzentration, die kein sichtbares bakterielles Wachstum zeigte, um die bakterielle Aktivität zu bestimmen.Die Konzentration, die das Zellwachstum vollständig eliminierte, gilt als die minimale bakterielle Konzentration. In dieser Studie wird taiwanesische grüne Propolis mit Ethanol extrahiert. Die Trockenmasseausbeute scheint am höchsten zu sein, wenn eine hohe Konzentration von Ethanol verwendet wird, und am niedrigsten, wenn Wasser verwendet wird.Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass ein organisches Lösungsmittel während dieser Extraktion am besten abschneidet und dass der Ertrag positiv mit der Ethanolkonzentration in Verbindung gebracht wird. Ebenso scheint die Konzentration von Propolinen positiv mit der Ethanolkonzentration während der Extraktion in Verbindung gebracht zu werden, wobei die höchste Ausbeute an Propolinen in den 95%- und 99,5%-Ethanolextrakten erzielt wird. Anschließend werden die antibakteriellen Auswirkungen der Ethanolextrakte gegen s aureus und E coli untersucht.Die durchschnittliche minimale hemmende Konzentration für S aureus scheint zwischen 10 und 20 Mikrogramm pro Milliliter zu liegen und die durchschnittliche bakterielle Konzentration scheint 20 Mikrogramm pro Milliliter zu liegen. Wasserextrakte hatten jedoch keine antibakterielle Wirkung gegen S aureus. Bei Verwendung der Wasser- oder Ethanolextrakte wird keine antibakterielle Wirkung für E coli beobachtet.Eines der wichtigsten experimentellen Verfahren ist die Vermeidung der Gleichförmigkeit der taiwanesischen grünen Propolis während des Schleifens.

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Forschung

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Biochemistry

Biochemie

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