Name: Ein murines Modell der Dengue-Virus-induzierten akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Krankheit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Lernen Sie ein murines Modell zur Untersuchung von Dengue-Virus-induzierter Neuropathogenese mit immunokompetenten ICR-Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Analyse viraler und Wirtsfaktoren im Zentralnervensystem.

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Diese Studie wurde durch Stipendien des Ministeriums für Wissenschaft und Technologie (MOST107-2321-B-038-001) und die intramurale Finanzierung 106TMU-CIT-01-2, Taipeh, Taiwan, unterstützt.

Experimentelle Protokolle der Tierstudie wurden vom Institutional Animal Care and User Committee des National Defense Medical Center (IACUC-Nummer: 16-261) gemäß den Richtlinien des Ministeriums für Wissenschaft und Technologie, Taiwan, genehmigt.
1. Infektionsverfahren
<ol><li>Bereiten Sie nicht angepasste DENV2 (Stamm PL046) Bestände9 (ursprünglich von den Centers for Disease Control in Taiwan erhalten, im Bereich von 2,5 x 107 bis 1 x 109 PFU/ml).</li>
	<li>Verdünnen Sie den Virusbestand auf 1 x 106 PFU mit dem Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 mittel bis zu einem Gesamtvolumen von 40 l.</li>
	<li>Füllen Sie eine 0,3 ml Spritze, die mit einer 30 G-Nadel mit 10 l (2,5 x 105 PFU) verdünntem Virus ausgestattet ist, und füllen Sie eine weitere 0,3 ml Spritze, die mit einer 30 G-Nadel mit 30 l (7,5 x 105 PFU) verdünntem Virus ausgestattet ist.</li>
	<li>
Halten Sie die 7 Tage alte ICR-Säuge maus und führen Sie die folgenden Schritte.
	<ol>
<li>Halten Sie die Maus für die intracerebrale Injektion in eine anfällige Position, indem Sie die Ohrmuschel zwischen Zeigefinger und Daumen drücken, und intracerebral 10 l verdünntes Virus in den Lambda-Bereich injizieren, den Punkt an der Kreuzung der sagittalen und lambdoiden Naht 16.</li>
		<li>Halten Sie die Maus nach der intracerebralen Injektion mit Deminzfinger und Daumen in eine Supine-Position und injizieren Sie 30 L verdünntes Virus sanft in das murine Abdomenl. HINWEIS: Um Kannibalismus zu vermeiden, wird 75% Alkohol verwendet, um einen vorübergehenden Verlust des Geruchsempfindens der Mutter zu schaffen. Zusätzlich wird empfohlen, die Würfe mit dem Stuhl und Urin ihrer Mutter zu bedecken.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Legen Sie die Säugenmäuse wieder in ihre Käfige und warten Sie 5 min, um ihre Sicherheitspoststimulation mit der Eifersucht der Mäuse zu überprüfen, einschließlich Gehen und Muttermilchsaugen. HINWEIS: Meistens zeigen Mäuse eine normale Aktivität spoststimulation und es scheint keine schädlichen Auswirkungen nach der technischen Herausforderung zu sein. Während dieses Experiments wurden die Tiere vom Institutional Animal Care and User Committee des National Defense Medical Center, Taiwan, gepflegt.</li>
	<li>Bewerten Sie den täglichen Fortschritt der Mäuse in Bezug auf das Körpergewicht (mit Hilfe eines Mikrogramm-Gleichgewichts), die akute virale Enzephalitis-ähnliche Erkrankung (durch Krankheitsbewertung wie in Abschnitt 2 beschrieben) und die Überlebensrate9,10,11 ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. Krankheitsbewertung
<ol><li>Überwachen Sie den Grad der akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Erkrankungen. Weisen Sie gesunden Mäusen eine Punktzahl von 0 zu; 1 an Mäuse mit leichten Krankheitssymptomen, einschließlich Gewichtsverlust, eingeschränkter Beweglichkeit und einer Glöckungs-Körperorientierung; 2 an Mäuse, die einen limbischen Anfall aufweisen; 3 an Mäuse zeigen die limbische Schwäche, einschließlich der Bewegung mit Schwierigkeiten und vorderen Gliedmaßen oder hintere Gliedmaßen Schwäche; 4 für Lähmung; 5 für den Tod. HINWEIS: Sobald die Punktzahl 3 erreicht, werden die Krankheitssymptome als schnell entwickelnd betrachtet.</li>
	<li>Zeichnen Sie die Bewertung der Krankheit, nach Schritt 2.1, für jeden Tag als kurvenbasierte Figur, indem Sie den Mittelwert sD der täglichen Testergebnisse in jeder Gruppe verwenden.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Die DENV-Infektion wurde im ZNS von schweren Dengue-Patienten3,17nachgewiesen, was auf die Möglichkeit der Manifestation der akuten viralen Enzephalitis während der Dengue-Pathogenese hindeutet. Hier berichten wir über ein in vivo murines Modell der DENV-Infektion zur Untersuchung der Beteiligung von ZNS-Dysfunktion an schwerem Dengue- und Insbesondere mit einem Fokus auf DENV-induzierte akute virale Enzephalitis-ähnliche Erkrankungen. Im Vergleich zu den vorgäng...

DENV, ein durch Arthropoden übertragenes Virus der Familie Flaviviridae, enthält ein positiv-sinnliches RNA-Genom, das drei virale Strukturproteine (Capsid, Premembrane und Hüllkurve) und sieben virale nichtstrukturelle Proteine (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B) kodiert. und NS5). Die vier Serotypen von DENV (DENV1-4), die jährlich etwa 390 Millionen Menschen infizieren, verursachen eine globale Belastung, obwohl die Regierungen erhebliche Anstrengungen in Richtung Mückenvektor und Krankheitsbekämpfung unternommen haben1. Derzeit befinden sich Schutzimpfstoffe und therapeutische antivirale Medikamente in der Entwicklung und erfordern eine weitere Langzeitvalidierung2. In der klinischen Praxis, obwohl ein Dengue-Patient mit ZNS-Infektion selten ist, muss es weiter erforscht werden, um die Vielfalt der Entwicklung der Dengue-Krankheit zu verstehen3. Weitere Untersuchungen und Validierungen sind erforderlich; insbesondere hat die Weltgesundheitsorganisation (WHO) die Einbeziehung von ZNS-Beeinträchtigungen wie kognitiven Beeinträchtigungen, Krämpfen, Enzephalopathie und Enzephalitis in die Klassifizierung schwerer Dengue-3,4aufgenommen. Die Erstellung von Tiermodellen der DENV-Infektion ist für die Erforschung der Neuropathogenese der DENV-Infektion unerlässlich.
Zur Generierung einer ZNS-Infektion durch DENV wurden in mehreren Studien verschiedene Wege der DENV-Infektion durchgeführt, darunter (1) intracerebrale Inokulation von C57BL/6-Mäusen, die 4 x 103 Plaque-bildende Einheiten (PFU) von nicht angepassten DENV35erhielten. 6, (2) intraperitoneale Impfung von BALB/c-Mäusen, die 7 x 104 PFU in vitro neuroangepassten DENV47, (3) intraceebrale Impfung von Schweizer Mäusen erhielten, die 1 x 105 PFU in vivo neuroangepassten DENV18erhielten, und (4) intraperitoneale Ko-Inokulation von ICR-Säugenmäusen, die 1 x 106 PFU nicht angepassten DENV29erhielten. Nach den Ergebnissen dieser Studien5,6,7,8,9, DENV-Infektion bei Mäusen führen zu einer Viralreplikation im Gehirn, was zu akuten viralen Enzephalitis-ähnliche Syndrome, Verhaltensänderungen begleitet von Gliedmaßenlähmung und Haltungsinstabilität, ZNS-Neurotoxizität und -entzündung, allgemeine und lokalisierte Plasmaleckage durch die Blut-Hirn-Schranke (BBB) und Letalität. Alle Ergebnisse dieser Studien5,6,7,8,9 haben die Fähigkeit von DENV gezeigt, das ZNS zu infizieren und die Induktion von akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Krankheit nach einer Infektion.
Basierend auf unseren aktuellen Erkenntnissen9,10,11,12,13,14,15, haben wir ein murines Modell der DENV-Infektion als in vivo erstellt Plattform, um die therapeutische Wirksamkeit gezielter Wirkstoffe/Faktoren gegen Die Virusreplikation sowie die Neurotoxizität zu untersuchen. Hier berichten wir über das Protokoll, das verwendet wurde, um eine immunkompetente outbred ICR-Maus zu erstellen, um ZNS-Infektionen zu untersuchen und die Entwicklung von Neuropathien mit unterschiedlichen Schweregraden zu überwachen, die durch DENV verursacht werden. Die Ergebnisse zeigen das signifikante Fortschreiten der Enzephalitis-ähnlichen Krankheit bei DENV-infizierten Mäusen zeitabhängig.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Verdünnende</td></tr><tr><td>Virus-0,3-ml-Insulinspritze&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>Intrazerebrale und intraperitoneale Injektion</td></tr><tr><td>Mikrowaage</td><td>METTLER TOLEDO's LabX</td><td>AL104</td><td>Gewicht Maus</td></tr><tr><td>Nicht angepasstes DENV2 (Stamm PL046)</td><td>The Centers for Disease Control of Taiwan-Infect</td><td></td> <td>mouse</td></tr><tr><td>Institute of Cancer Research (ICR) Säugmaus</td><td>BioLASCO Taiwan Co.,</td> <td>Ltd-Unser</td> <td>Mausmodell</td></tr></tbody></table>

ein murines modell der dengue-virus-induzierten akuten viralen enzephalitis-ähnlichen krankheit

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Dengue-Virus (DENV), ein durch Gliederfüßer übertragenes Virus, das von Mücken übertragen wird, kann die schwere Krankheit, die als Dengue-Hämorrhagisches Fieber bekannt ist, verursachen, die durch tödliche Komplikationen aufgrund von Plasmalecks, Aszites, Pleuraerguss, Atemnot, schwere Blutungen und Organfunktionsstörungen. Einige Fälle von DENV-Infektion enden neurologische Manifestationen; Studien haben jedoch die DENV-induzierte Neuropathogenese nicht weiter erforscht. In dieser Studie stellen wir ein Protokoll zur Verwendung einer immunkompetenten outbred ICR (Institute of Cancer Research) Maus zur Untersuchung der Induktion der Infektion des zentralen Nervensystems (ZNS) mit DENV, gefolgt von der Progression der akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen krankheit.

Schwere Dengue-assoziierte neurologische Komplikationen wurden bei Patientenfür Dengue-Pathogenese 4 berichtet. Obwohl diese Fälle in der Klinik selten sind, kann die Schaffung eines immunkompetenten murinen Modells der DENV-Infektion nicht nur zur Untersuchung der Immunpathogenese, sondern auch zur Erforschung von ZNS-Infektionen, Neuroentzündungen, Neurotoxizität und akuten viralen Enzephalitis-ähnliche Krankheit. In dieser Studie wurden nach unserem aktuellen Mo...

Hier stellen wir ein Protokoll zur Schaffung eines immunkompetenten ICR (Institute of Cancer Research) murinen Modells der Infektion des zentralen Nervensystems vor, um die Entwicklung der Neuropathie anzuzeigen. Die Überwachung akuter viraler Enzephalit-Erkrankungen durch identische Krankheitswerte könnte durchgeführt werden, um die dengue-Virus-induzierte Neuropathie in vivo zu zeigen.

Ein murines Modell der Dengue-Virus-induzierten akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Krankheit

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Dieses Protokoll eines Krankheitsmodells sehen Sie Dengue-Virus-Infektion im Gehirn zu einer In-vivo-Plattform für das Screening viraler und Wirtsvektoren im Zusammenhang mit Neuropathogenese. Im Gegensatz zu früheren Modellen verwenden unsere Modelle Werkzeuge der Infektion mit einem niedrigen viralen Titer, um das immunkompetente Institut für Krebsforschung Zusäugen von Mäusen für enzephalitische Krankheitsprokreation zu infizieren. Das Verfahren wird Ting-Jing Shen demonstrieren, ein Doktorand aus meinem Labor.Vor Beginn des Infektionsverfahrens, verdünnen Nicht-angepassten Dengue-Virus zwei Vorrat, zu einem mal 10 bis die fünfte Plaque bildende Einheiten pro 40 Mikroliter der RPMI 1640 mittlere Konzentration. Als nächstes laden Sie eine 0,3 Milliliter Spritze mit einer 30-Spur-Nadel mit 10 Mikroliter verdünntem Virus. Und eine 0,3-Milliliter-Spritze mit einer 30-Meter-Nadel, mit 30 Mikroliter Virus pro Tier.Für die Intercerebral-Lieferung des Virus, drücken Sie das Orakel zwischen Daumen und Zeigefinger, um sanft eine sieben Tage alte Säugetier-Institut für Krebsforschung Maus in einer anfälligen Position zurückhalten und injizieren die 10 Mikroliter Volumen des verdünnten Virus in den Lambda-Bereich, an der Kreuzung der sagittalen und Lambdoid Naht. Nach der Intercerebral-Injektion, verwenden Sie den Daumen und Zeigefinger, um die Maus in einer Supine-Position zu halten, und sanft intraperitoneally, injizieren Sie das 30-Mikroliter-Volumen des verdünnten Virus, in den murinen Abdomen. Für die Bewertung des Krankheitsverlaufs weisen Sie jeder geimpften Maus täglich eine Punktzahl von Null bis fünf zu, je nach Grad der akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Erkrankungen, und zeichnen Sie die Werte für jeden Tag als kurvenbasierte Figur, wobei Sie den Mittelwert plus und minus die Standardabweichung der täglichen Testergebnisse in jeder Gruppe verwenden.Verglichen mit den Körpergewichtsänderungen, die bei verspotteten, mittelgeimpften Mäusen gemessen wurden, weisen geimpfte Tiere mit Dengue-Virus zu jedem Zeitpunkt während der Studie eine Abnahme des Körpergewichts auf. Darüber hinaus zeigen Dengue-Virus-infizierte Tiere eine signifikante Zunahme von Buckelrückenhaltungen, limbischen Krampfanfällen, limbischer Schwäche, Lähmung und Tod im Vergleich zu den Symptomen, die von verspotteten geimpften Tieren gezeigt werden. Tatsächlich weisen Dengue-infizierte Mäuse eine zeitabhängige Reduktion der Überlebensraten auf, die bei verspotteten geimpften Tieren nicht beobachtet wird, was die Etablierung eines infektiösen Modells des Dengue-Virus innerhalb des zentralen Nervensystems bestätigt, das das Fortschreiten akuter viraler Enzephalitis-ähnlicher Krankheiten bei Mäusen demonstriert.Die Punktion der falschen Stelle kann zu einer Nadelblockade durch den Score und zum Überlauf der Viruslösung außerhalb des Kopfes führen, was zu einer fehlgeschlagenen Injektion und einer fehlgeschlagenen Infektion führt. Im Anschluss an das Verfahren können Hirnproben für pathologische Schäden, Immunzellinfiltration und Virusreplikationsanalyse durch Hämatoxylin und Eosin-Färbung Flusszytometrie und Plaque-Formationstest geerntet werden. Unser immunkompetentes murinisches Modell bietet eine Plattform für die Erforschung der pathogenen Mechanismen der Dengue-Virus-Infektion, für die Entwicklung von Dengue-Virus-Impfstoffen oder Anti-Dengue-Virus-Medikamente.Das Dengue-Virus ist ein Erreger der Biosicherheitsstufe zwei, und als solcher sollten alle Experimente mit diesem Virus in einem qualifizierten Labor der Biosicherheitsstufe zwei abgeschlossen werden.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt die Induktion und klinischen Scoring von einem Tiermodell der Multiplen Sklerose: chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in DA-Ratten. Die Krankheit, durch die Immunisierung von Ratten mit einer Emulsion, die ganze Ratte Rückenmark und komplettem Freund-Adjuvans induziert, weist klinische Symptome ähnlich der menschlichen Erkrankung.

Induction and Clinical Scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Mit Hilfe Luciferase und in vivo bildgebende Systeme (IVIS) als neuartiges Mittel gegen Krankheiten Endpunkte zu identifizieren, bevor klinische Entwicklungen auftreten. IVIS hat uns erlaubt, in Echtzeit visualisiert die Invasion der encephalitische Viren über mehrere Tage, eine genauere Krankheit Modell für zukünftige Studie. Es hat uns auch die Möglichkeit, die potenziellen Schutzfunktionen von Virostatika und Impfstoffen schneller als derzeit genutzt Tiermodellen zu identifizieren. Die...

In Vivo Imaging Systems (IVIS) Nachweis eines Neuro-Invasive encephalitische Virus

Das Video zeigt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell durch Injektion einer Kombination aus Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinen und inaktiviertem Mycobacterium tuberculosis. Das Modell ermöglicht es Forschenden, Krankheitsmechanismen zu untersuchen und therapeutische Interventionen zu testen.

Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

Dieses Video zeigt die Generierung eines Mausmodells mit einer ZNS-Infektion. Einem säugenden Welpen wird das Virus sowohl intrakraniell als auch intraperitoneal injiziert. Das Virus breitet sich aus, infiziert das ZNS und verursacht neuronalen Zelltod und Entzündungen. Der Welpe wird im Verlauf der Krankheit auf Symptome einer Infektion untersucht.

Generierung eines Mausmodells mit einer Infektion des Zentralnervensystems

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese...

Dieses Video zeigt die Induktion von Handling-induzierten Anfällen bei einer Maus, die mit dem Theilerschen Murinen Enzephalomyelitis-Virus (TMEV) infiziert war. Die infizierte Maus, die über übererregbare Neuronen verfügt, wird äußeren physikalischen Reizen ausgesetzt. Diese Exposition verursacht Stress, was zu einer abnormalen elektrischen Aktivität in den Neuronen führt, was zu Krampfanfällen führt.

Handhabungsinduzierte Anfälle in einem Mausmodell

Influenza A-Viren (IAVs) sind wichtige Humanpathogene Atemwege. Die Pathogenität von IAVs verstehen und neuartigen Impfstoff präklinischen Erprobung durchführen, sind Tiermodelle imitiert menschliche Physiologie erforderlich. Hier beschreiben wir Techniken zur Bewertung IAV Pathogenese, humorale Reaktionen und Wirksamkeit des Impfstoffes mit einem Maus-Modell der Infektion.

Influenza-A-Virus-Studien in einem Mausmodell der Infektion

Hier beschreiben wir eine Methode für den Aufbau eines Modells von Zika virusbedingte Mikrozephalie in Maus. Dieses Protokoll enthält Methoden zum embryonalen, Neugeborenen und Erwachsenen-Bühne intrazerebrale Inokulation von Zika-Virus.

Mausmodelle für Zika-Virus-induzierte neurologische Erkrankungen mit intrazerebrale Injektion Strategien etablieren: embryonale, Neugeborene und Erwachsene

Das hier vorgestellte Protokoll ermöglicht die Reproduktion einer weit verbreiteten Demyelinisierung der grauen Substanz beider kortikaler Hemisphären bei erwachsenen männlichen Dunklen Agouti-Ratten. Die Methode umfasst die intrazerebrale Implantation eines Katheters, die subklinische Immunisierung gegen Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein und die intrazerebrale Injektion einer entzündungsfördernden Zytokinmischung durch den implantierten Katheter.

Rattenmodell der weit verbreiteten zerebralen kortikalen Demyelinisierung, induziert durch eine intrazerebrale Injektion von entzündungsfördernden Zytokinen

Das Ziel des Protokolls ist es, die Techniken zu demonstrieren, die verwendet werden, um Viruserkrankungen zu untersuchen, indem das Zika-Virus von mehreren Organen in einer Maus nach einer Infektion isoliert und quantifiziert wird.

Isolierung und Quantifizierung des Zika-Virus aus mehreren Organen in einer Maus

Die intrazerebrale Infektion mit dem Theiler-murinen Enzephalomyelitis-Virus (TMEV) in C57BL/6-Mäusen repliziert viele der frühen und chronischen klinischen Symptome der viralen Enzephalitis und der anschließenden Epilepsie bei menschlichen Patienten. Dieser Artikel beschreibt die Virusinfektion, die Symptome und die Histopathologie des TMEV-Modells.

Ein Modell für Epilepsie infektiöser Ätiologie am Beispiel des Theiler-Maus-Enzephalomyelitis-Virus

Lernen Sie ein murines Modell zur Untersuchung von Dengue-Virus-induzierter Neuropathogenese mit immunokompetenten ICR-Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Analyse viraler und Wirtsfaktoren im Zentralnervensystem.

Ein murines Modell der Dengue-Virus-induzierten akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Krankheit

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