Name: Ein menschliches 3D extrazelluläres Matrix-Adipozyten-Kulturmodell zum Studium der Matrix-Zell Metabolischen Crosstalk (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Erfahren Sie die Entwicklung eines 3D-ECM-Adipozyten-Kulturmodells zur Untersuchung der Matrix-Zell-Interaktionen im menschlichen Fettgewebe. Diese Methode ermöglicht die Analyse metabolischer Prozesse und deren Regulation durch die extrazelluläre Matrix.

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Wir danken Danielle Berger, Marilyn Woodruff, Simone Correa und Retha Geiss für die Unterstützung bei der Studienkoordination. SEM wurde von der University of Michigan Microscopy & Image Analysis Laboratory Biomedical Research Core Facility durchgeführt. Dieses Projekt wurde unterstützt durch NIH-Stipendien R01DK097449 (RWO), R01DK115190 (RWO, CNL), R01DK090262 (CNL), Veterans Affairs Merit Grant I01CX001811 (RWO), Pilot and Feasibility Grant vom Michigan Diabetes Research Center (NIH Grant P30-DK020572) (RWO), Veterans Administration VISN 10 SPARK Pilot Grant (RWO). Rasterelektronenmikroskopie der University of Michigan Microscopy & Image Analysis Laboratory Biomedical Research Core Facility. Abbildung 4 dieses Manuskripts wurde ursprünglich in Baker et al., J Clin Endo Metab 2017 veröffentlicht; 1.10.102 (3), 1032-1043. doi: 10.1210/jc.2016-2915, und wurde mit Genehmigung der Oxford University Press [https://academic.oup.com/jcem/article/102/3/1032/2836329] reproduziert. Für die Erlaubnis, dieses Material wiederzuverwenden, besuchen Sie bitte http://global.oup.com/academic/rights.

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Die Autoren erklären keine gegensätzenden Interessen.

Das ECM-Adipozyten-Kulturmodell bietet ein wertvolles Werkzeug, um die individuellen Rollen von ECM und Zellen bei der Diktat des ultimativen Gewebephänotyps zu sezieren. Das ECM-Isolationsprotokoll ist sehr reproduzierbar, aber die Variabilität im Dezellularisierungsprozess kann beobachtet werden. Der Tag-3-Delipidierungsschritt ist ein kritischer Punkt im Protokoll. Nach Abschluss der nächtlichen Extraktion sollte die Delipidisierung der Matrix durch das Gelbdrehen der PolarSolventlösung nachgewiesen werden, während di...

Die extrazelluläre Matrix (ECM) stellt nicht nur ein mechanisches Gerüst für Gewebe bereit, sondern greift auch in komplexe Übersprachen mit Zellen ein, die sich in ihr befinden, und reguliert verschiedene Prozesse, die für die Gewebehomöostase notwendig sind, einschließlich der Zellproliferation, Differenzierung, Signalisierung und Stoffwechsel1. Während gesundes ECM eine wesentliche Rolle für die Aufrechterhaltung der normalen Gewebefunktion spielt, wurde dysfunktionales ECM in mehrere Krankheiten verwickelt2.
Adipose-Gewebe spielt eine wichtige Rolle bei der Pathogenese von Stoffwechselerkrankungen. Adipositas ist verbunden mit übermäßiger Adipozytenhypertrophie und zellulärer Hypoxie, Defekten im Adipozyten-Zellstoffwechsel und adipose Gewebe endoplasmatischere Retikulum und oxidativen Stress und Entzündungen. Obwohl schlecht verstanden, konspirieren diese komplexen Prozesse, um Fettgewebe PufferungKapazität zu beeinträchtigen, was zu Nährstoffüberlauf aus Fettgewebe, Toxizität in mehreren Geweben, und systemische Stoffwechselerkrankung3,4 ,5. Die Abfolge der Ereignisse und spezifische Mechanismen, die dem Versagen des Fettgewebes zugrunde liegen, sind schlecht verstanden, aber Veränderungen im Fettgewebe ECM wurden involviert. Die ECM-Zusammensetzung wird innerhalb des Fettgewebes bei menschlicher und muriner Fettleibigkeit verändert, mit erhöhter Ablagerung von ECM-Protein zusammen mit qualitativen biochemischen und strukturellen Unterschieden im Fettgewebe ECM im Zusammenhang mit menschlichen Stoffwechselerkrankungen, einschließlich Typ-2-Diabetes und Hyperlipidämie6,7,8,9,10,11.
Trotz dieser Beobachtungen ist die Rolle des Fettgewebes ECM bei der Vermittlung von Fettgewebedysfunktion nicht genau definiert. Dies ist zum Teil auf einen Mangel an belastbaren experimentellen Modellen zurückzuführen, die eine Zerlegung der spezifischen Rollen von ECM und Adipozyten bei der Regulierung der ultimativen Fettgewebefunktion ermöglichen. Die ECM-Adipozytenkultur simuliert die In-vivo-Umgebung des nativen Fettgewebes in mindestens zwei Punkten. Erstens bietet die ECM-Kultur eine molekulare Umgebung, die nativem Fettgewebe ähnelt, einschließlich nativer Kollagene, Elastine und anderer Matrixproteine, die in der Standard-2D-Kultur fehlen. Zweitens hat sich gezeigt, dass die Kultur auf 2D-Kunststoff den Adipozytenstoffwechsel durch mechanische Effekte durch verminderte Elastizität des Kunststoffsubstrats12verändert, was die ECM-Kultur eliminiert.
Methoden zur Konstruktion biologischer Gerüste durch Isolierung von ECM aus dezellularisiertem Fett und anderen Geweben wurden im Rahmen der regenerativen und rekonstruktiven Medizin und Gewebetechnik untersucht13,14, 15,16,17,18. Wir haben bereits eine Methodik veröffentlicht, in der wir diese Methoden angepasst haben, um ein in vitro 3D-Modell der menschlichen ECM-Adipozytenkultur zu entwickeln, mit ECM und Adipozytenstammzellen (Preadipozyten), die aus humanen viszeralen Fettgeweben abgeleitet sind11. Im vorliegenden Artikel beschreiben wir diese Methoden ausführlich. Das Dezellularisierungsverfahren für menschliches Fettgewebe ist ein viertägiger Prozess, bei dem mechanische und enzymatische Behandlungen zur Entfernung von Zellen und Lipiden durchgeführt werden, wodurch ein biologisches Gerüst zurückbleibt, das die Eigenschaften des Gewebes beibehält, aus dem es gewonnen wird. Dezellularisiertes ECM unterstützt die adipogene Differenzierung menschlicher Präadiipozyten und bei Rekonstitution mit Adipozyten, behält mikrochemische und biochemische und krankheitsspezifische Eigenschaften intakten Fettgewebes bei und beteiligt sich an metabolischen Funktionen, die für natives Fettgewebe charakteristisch sind. Diese Matrix kann allein untersucht oder mit Zellen neu gesät werden, was eine Untersuchung von Wechselwirkungen und Übersprechen zwischen den zellulären und extrazellulären Komponenten des Fettgewebes ermöglicht.

<table><tbody><tr><td>0,25 % Trypsin-EDTA</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA</td><td>Cat#25200056</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Kryoröhrchen</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#02-682-557</td><td></td></tr><tr><td>10 % neutrales gepuffertes Formalin</td><td>VWR International LLC., Radnor, PA, USA</td><td>Cat#89370-094</td><td></td></tr><tr><td>100 & Mikro; m Nylon-Netzfilter</td><td>Corning Inc., Corning, NY, USA</td><td>Kat#352360</td><td></td></tr><tr><td>2-Desoxy-D-Glukose</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, MO, USA</td><td>Kat#D8375</td><td></td></tr><tr><td>2 nM 3,3',5-Trijod-L-Thyronin-Natriumsalz (T3)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St. Louis, MO, USA</td><td>Kat#T6397</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Gewebekulturplatten</td><td>VWR International LLC., Radnor, PA, USA</td><td>Kat#10861-700</td><td></td></tr><tr><td>3-Isobutyl-1-methylxanthin (IBMX)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#I5879</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Gewebekulturplatten</td><td>VWR International LLC., Radnor, PA, USA</td><td>Cat#10861-666</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotikum-Antimykotische Lösung (ABAM)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA</td><td>Cat#15240062</td><td></td></tr><tr><td>Biotin</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#B4639</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, MO, USA</td><td>Cat#A8806</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RLT</td><td>Qiagen, Hilden, Deutschland</td><td>Cat#79216</td><td></td></tr><tr><td>Ciglitizone</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#C3974</td><td></td></tr><tr><td>Desoxy-D-Glucose, 2-[1,2-3H (N)]-</td><td>PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA</td><td>Cat#NET328A250UC</td><td></td></tr><tr><td>Desoxyribonuklease I aus der Bauchspeicheldrüse des Rinders, Typ II-S</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#D4513</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#D4902</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#BP231</td><td>Entflammbares, ätzendes</td></tr><tr><td>Dinatrium-EDTA</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#BP118</td><td></td></tr><tr><td>D-Pantothensäure Hemicalciumsalz</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#21210</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#11320033</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs, Inc., King of Prussia, PA, USA</td><td>Cat#DSP-MD.43</td><td>Entflammbare</td></tr><tr><td>EVE-Zellzählobjektträger, NanoEnTek</td><td>VWR International LLC., Radnor, PA, USA</td><td>Cat#10027-446</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA</td><td>Cat#10437028</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyd</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St Louis, MO, USA</td><td>Cat#G5882</td><td>Ätzende</td></tr><tr><td>Hexamethyldisalizan</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#440191</td><td>Entzündliche, ätzende</td></tr><tr><td>Humaninsulinlösung</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#I9278</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#A415</td><td>Entflammbares</td></tr><tr><td>Isoproterenol</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St Louis, MO, USA</td><td>Cat#I5627</td><td>Entflammbares</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#S25484</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#P5655</td><td></td></tr><tr><td>Lipase aus der Bauchspeicheldrüse des Schweins, Typ VI-S</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#L0382</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4*7H2O</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#230391</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#S5136</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#S3014</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#S233</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#A661</td><td></td></tr><tr><td>Optimaler Schnitt Temperatur (OCT) Verbindung</td><td>Agar Scientific, Ltd., Stansted, Essex, Großbritannien</td><td>Cat# AGR1180</td><td></td></tr><tr><td>Oil Red-O Solution (ORO)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St Louis, MO, USA</td><td>Cat#O1391</td><td></td></tr><tr><td>Oil Red-O Stain Kit</td><td>American Master Tech Scientific Inc., Lodi, CA, USA</td><td>Cat#KTORO-G</td><td></td></tr><tr><td>Osmium tetroxide</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#201030</td><td>Lauge</td></tr><tr><td>Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#93482</td><td></td></tr><tr><td>Ätzphosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA</td><td>USA Cat#SH3025601</td><td></td></tr><tr><td>Ribonuklease A aus der Rinderbauchspeicheldrüse, Typ III-A</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#R5125</td><td></td></tr><tr><td>RNAEasy Fasergewebe MiniKit</td><td>Qiagen, Hilden, Deutschland</td><td>Cat#74704</td><td></td></tr><tr><td>Szintillationsflüssigkeit</td><td>Fisher Scientific, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#SX18</td><td></td></tr><tr><td>Szintillations-Gegenschere</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, Pinzette, steriler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sorensen-Phosphatpuffer</td><td>Thomas Scientific, Inc., Swedesboro, NJ</td><td>CAS #: 10049-21-5</td><td></td></tr><tr><td>T-150 Kulturflasche</td><td>VWR International LLC., Radnor, PA, USA</td><td>Cat#10062-864</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Genexpression Master</td><td>Mix ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA USA</td><td>Cat#4369016</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturgesteuerter Orbitalschüttler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gewebehomogenisator, BeadBug Mikroröhrchen Homogenisator</td><td>Benchmark Scientific</td><td>Cat#D1030</td><td></td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich, Inc. St Louis, MO, USA</td><td>Cat#T3309</td><td></td></tr><tr><td>Triglycerid-Bestimmungskit</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St Louis, MO, USA</td><td>Cat#TR0100</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblau-Fleck, 0,4%</td><td>VWR International LLC., Radnor, PA, USA</td><td>Cat#10027-446</td><td></td></tr><tr><td>Typ II Kollagenase</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA</td><td>Cat#17101015</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Reeve Angel Filterpapier, Güteklasse 201, 150mm</td><td>Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, MO, USA</td><td>Kat#WHA5201150</td><td></td></tr></tbody></table>

ein menschliches 3d extrazelluläres matrix-adipozyten-kulturmodell zum studium der matrix-zell metabolischen crosstalk

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

Die extrazelluläre Matrix (ECM) spielt eine zentrale Rolle bei der Regulierung der Gewebehomöostase, die Einbeziehung in Crosstalk mit Zellen und die Regulierung mehrerer Aspekte der zellulären Funktion. Das ECM spielt eine besonders wichtige Rolle bei der Fettgewebefunktion bei Adipositas, und Veränderungen im Fettgewebe ECM Ablagerung und Zusammensetzung sind mit Stoffwechselerkrankungen bei Mäusen und Menschen verbunden. Tractable In-vitro-Modelle, die eine Zerlegung der Rolle des ECM und der Zellen bei der Beteiligung am globalen Gewebephänotyp ermöglichen, sind spärlich. Wir beschreiben ein neuartiges 3D-In-vitro-Modell der humanen ECM-Adipozytenkultur, das die Untersuchung der spezifischen Rollen des ECM und der Adipozyten bei der Regulierung des metabolischen Phänotyps des Fettgewebes ermöglicht. Das menschliche Fettgewebe wird dezellularisiert, um ECM zu isolieren, das anschließend mit Präsipozyten wieder aufgefüllt wird, die dann innerhalb des ECM zu reifen Adipozyten differenziert werden. Diese Methode erstellt ECM-Adipozytenkonstrukte, die metabolisch aktiv sind und Eigenschaften der Gewebe und Patienten, von denen sie abgeleitet werden, beibehalten. Wir haben dieses System verwendet, um krankheitsspezifische ECM-Adipozyten-Überlauf im menschlichen Fettgewebe nachzuweisen. Dieses Kulturmodell bietet ein Werkzeug zur Zersebung der Rolle des ECM und der Adipozyten bei der Teilnahme am globalen metabolischen Fettgewebe-Phänotyp und ermöglicht die Untersuchung der Rolle des ECM bei der Regulierung der Fettgewebehomöostase.

Die Herstellung von Fettgewebe ECM, Aussaat mit Präsipozyten und In-vitro-Differenzierung in reife Adipozyten führen zu klaren sequenziellen morphologischen Veränderungen im Gewebe, die eine visuelle Beurteilung des Fortschritts im gesamten Protokoll ermöglichen (Abbildung 1) . Preadipozyten, die zum Aussaat des ECM verwendet werden, werden mit Kollagennase-Verdauung aus separaten MwSt.-Proben isoliert (Abbildung 2). Die Rasterel...

Wir beschreiben ein 3D-Human-Human-Extrazellmatrix-Adipozyten-In-vitro-Kultursystem, das die Zerlegung der Rollen der Matrix und der Adipozyten bei der Kodipierung des metabolischen Phänotyps des Fettgewebes ermöglicht.

Ein menschliches 3D extrazelluläres Matrix-Adipozyten-Kulturmodell zum Studium der Matrix-Zell Metabolischen Crosstalk

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

Unser Protokoll zeigt, dass das ECM die adipogene Differenzierung in Ermangelung klassischer adipogener Mediatoren fördern kann und ist das erste, das eine krankheitsspezifische Regulierung des Zellstoffwechsels durch das ECM demonstriert. Unsere Technik bietet ein Werkzeug, um die Rolle des ECM und der Adipozyten im Fettgewebestoffwechsel zu sezieren und ermöglicht eine Untersuchung der Rolle des ECM bei der Regulierung der Darmgewebehomöostase. Im Vergleich zur Standard-2D-Zellkultur ermöglicht unser 3D-Modell eine robustere Untersuchung und Dissektion von Quergesprächen zwischen Adipozyten und Fettgewebe ECM im Zusammenhang mit Typ-2-Diabetes.Wir empfehlen, mit kleineren Proben zu beginnen, um zu messen, wie gut es zellularisiert ist. Denken Sie daran, es gibt intergeduldige Variabilität, wie gut die Zellen wachsen und wie gut das Gewebe dezellularisiert. Es ist wichtig, das Gewebe vor und nach jedem Schritt zu beobachten, um sicherzustellen, dass das Gewebe dezellularisiert wird und mögliche Unterschiede zwischen den Proben zu verstehen.Nach Erhalt viszeralen Fettgewebe oder MwSt aus der Chirurgie, bereiten Sie es für die Lagerung durch Zugabe von 5-10 Gramm des Gewebes zu 15-2

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

In Standardkulturverfahren, Zellen aus ihrer physiologischen Umgebung genommen und auf die Kunststoffoberfläche einer Schale gezüchtet. Um das Verhalten von primären humanen Knochenmarkzellen untersuchen wir eine 3-D-Kultur-System, wo Zellen unter Bedingungen rekapituliert die native Mikroumgebung des Gewebes gewachsen erstellt.

Eine dreidimensionale Zellkulturmodell zu primären humanen Knochenmark und seine Malignome Studieren

Reife Adipozyten können durch Dedifferenzierung eine reichhaltige Quelle für Stammzellen darstellen, was zu einer homogenen Population von Fibroblasten-ähnlichen Zellen führt. Der Kollagenaseverdau wird verwendet, um reife Adipozyten aus menschlichem Fett zu isolieren. Das Ziel unseres Protokolls ist es, multipotente, dedifferenzierte Fettzellen aus humanen reifen Adipozyten zu gewinnen.

Generation of Human Fettgewebestammzellen durch Dedifferenzierung der Reife Adipozyten in Decken Kulturen

Weißen Fettgewebe (WAT) hat kritische Mängel in seiner aktuellen Primärkultur Modelle, pharmakologischen Entwicklung und metabolische Studien zu behindern. Hier präsentieren wir ein Protokoll, um eine adipöse Microphysiological System durch sandwichartig WAT zwischen den Blättern der Stromazellen Zellen zu produzieren. Diese Konstruktion bietet eine stabile und flexible Plattform für WAT Primärkultur.

Eine Microphysiologic Plattform für menschliches Fett: weißen Fettgewebe eingeklemmt

Das Ziel dieser Methode ist es, fibroblast-abgeleitete 3D-Matrizen als natürliches Gerüst für nachfolgende zelluläre Assays zu erhalten. Fibroblasten werden in einer vorbehandelten Kulturplatte gesät und mit Ascorbinsäure für die Matrixgenerierung stimuliert. Matrizen werden dezellularisiert und an kulturrelevante Zellen (z. B. Endothelzellen) blockiert.

Fibroblast-Derived 3D Matrix System anwendbar auf Endothel Tube Formation Assay

Membran reife Adipozyten-Aggregatkultur (MAAC) ist eine neue Methode, um reife menschliche Adipozyten zu kultitonischen. Hier erfahren Sie, wie Adipozyten von menschlichen Fetten isoliert werden und wie MAN MAAC aufstellt.

Isolation und Kultur der menschlichen Reife Adipozyten mit Membran Reife Adipozyten Aggregatkulturen (MAAC)

Hier wird ein Protokoll vorgestellt, um Oligonukleotide wie small-interfering RNA (siRNA), micro-RNA mimics (miRs) oder anti-micro-RNA (anti-miR) in reife Adipozyten zu liefern, um die Protein- und micro-RNA-Expression zu modulieren.

Ein Adipozyten-Zellkulturmodell zur Untersuchung des Einflusses der Protein- und Mikro-RNA-Modulation auf die Adipozytenfunktion

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Isolierung, Kultivierung und Phänotypisierung von mikrovaskulären Endothelzellen aus humanem subkutanem Fettgewebe (hSATMVECs). Zusätzlich beschreiben wir ein experimentelles Modell des hSATMVEC-Adipozyten-Cross-Talks.

Untersuchung der Wechselwirkung zwischen Fettendothelzellen und Adipozyten im menschlichen subkutanen Fettgewebe

Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung von 3D-Knochenkonstrukten unter Verwendung menschlicher Osteozyten, die in Methacrylgelatine-(GelMA)-Hydrogelen eingebettet sind und mit einer decellularisierten extrazellulären Matrix ergänzt werden. Die Methode ist kostengünstig, skalierbar und kompatibel mit einfachen Laborgeräten und bietet eine translationale Plattform zur Untersuchung von Prozesse muskuloskelettaler Erkrankungen.

Eine 3D-Knochenkulturplattform mit menschlichen Osteozyten und einer dezellularisierten extrazellulären Matrix zur Modellierung muskuloskelettaler Erkrankungen

Mit einem ex-vivo-Explant-Modell werden kleine Stücke des rostralen Anteils des viszeralen weißen Fettgewebes von mageren Mäusen 7–10 Tage lang kultiviert, was die Induktion und Untersuchung der Entzündung von Fettgewebe während der fettreichen Ernährung ermöglicht.

Ein ex vivo Mausmodell für fettreiche, diätähnliche Fettgewebeentzündung

Wir beschreiben eine einfache, schnelle Methode zur Erzeugung von 3D-Gewebe-like Sphäroide und ihre mögliche Anwendung auf Unterschiede in der Zell-Zell-Interaktionen zu quantifizieren.

A Simple hängenden Tropfen Cell Culture Protokoll zur Generierung von 3D-Sphäroide

Erfahren Sie die Entwicklung eines 3D-ECM-Adipozyten-Kulturmodells zur Untersuchung der Matrix-Zell-Interaktionen im menschlichen Fettgewebe. Diese Methode ermöglicht die Analyse metabolischer Prozesse und deren Regulation durch die extrazelluläre Matrix.

Ein menschliches 3D extrazelluläres Matrix-Adipozyten-Kulturmodell zum Studium der Matrix-Zell Metabolischen Crosstalk

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