Name: Ein Femtoliter Droplet Array für massive parallele Proteinsynthese aus einzelnen DNA-Molekülen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung von Femtoliter-Droplet-Arrays für zellfreie Proteinsynthese aus einzelnen DNA-Molekülen. Diese Methode ermöglicht schnelle, quantitative Enzymaktivitätsmessungen ohne aufwendige Proteinreinigung.

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Diese Arbeit wurde von JSPS KAKENHI Grant Nummer JP18K14260 und dem Budget der Japan Agency for Marine-Earth Science and Technology unterstützt. Wir danken Shigeru Deguchi (JAMSTEC) und Tetsuro Ikuta (JAMSTEC) für die Bereitstellung der Charakterisierungsmöglichkeiten. Wir danken Ken Takai (JAMSTEC) für die kommerzielle Software-Unterstützung. Die Mikrofabrikation wurde in Takeda Sentanchi Supercleanroom, Der Universität Tokio, durchgeführt, unterstützt vom "Nanotechnology Platform Program" des Ministeriums für Bildung, Kultur, Sport, Wissenschaft und Technologie (MEXT), Japan, Grant Number JPMXP09F19UT0087.

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Die Autoren haben nichts zu verraten.

Die hochquantitative Messung auf Basis der hochgleichmäßigen, stabilen und biokompatiblen Tröpfchen in FemDA ermöglichte die diskrete Verteilung, das einzigartige Merkmal unserer Studie unterscheidet sich von anderen. In diesem Papier haben wir die Mikroherstellungs- und Tröpfchenbildungsprozesse systematisch optimiert und detailliert beschrieben. Es gibt mehrere kritische Schritte im etablierten Protokoll.
Zunächst bestimmt die gleichmäßige Beschichtung des hochviskosen CYTOP-Polymers auf dem...

Die Forscher verwenden Reaktoren, um biochemische Reaktionen durchzuführen. Es wurden erhebliche Anstrengungen unternommen, um die Größe des Reaktors zu verringern und den experimentellen Durchsatz zu erhöhen, um den Reagenzienverbrauch zu senken und gleichzeitig die Arbeitseffizienz zu verbessern. Beide Aspekte zielen darauf ab, Forscher von einer hohen Arbeitsbelastung zu befreien, die Kosten zu senken und Forschung und Entwicklung zu beschleunigen. Wir haben eine klare historische Roadmap über die Entwicklung der Reaktortechnologien aus der Sicht der Reaktionsvolumina und des Durchsatzes: Einzelbecher/Kolben/Teströhren, Milliliter-Röhren, Mikroliter-Röhren, Mikroliter 8-Röhren-Streifen, Mikroliter 96/384/1536-Well-Platte und mikrofluidische Nanoliter/Picoliter/Femtoliter-Reaktoren1,2,3,4,5,6,,7. Analog zur Verkleinerung der Funktionsgröße von Transistoren auf integrierten Schaltungschips in der Halbleiterindustrie in den letzten Jahrzehnten durchlaufen bio-chemische Mikroreaktoren Volumenreduktion und Systemintegration. Solche kleinen Werkzeuge haben einen tiefgreifenden Einfluss auf die zellbasierte oder zellfreie synthetische Biologie, Biomanufacturing und High-Throughput-Prototyping und Screening8,9,10,11,12. Dieses Papier beschreibt unsere jüngsten Bemühungen um die Entwicklung einer einzigartigen Tröpfchen-Array-Technologie und demonstriert ihre Anwendung in CFPS13, einer grundlegenden Technologie für synthetische Biologie und molekulare Screening-Gemeinschaften14. Insbesondere stellen wir bewusst ein optimiertes und kostengünstiges Protokoll bereit, um das FemDA-Gerät für jedermann zugänglich zu machen. Das kostengünstige und einfach zu handhabende Protokoll für das miniaturisierte Gerät würde zu den Bildungszwecken der Universitäten beitragen und zur Verbreitung der Technologie beitragen.
FemDA bereitet Femtolitertröpfchen mit einer ultrahohen Dichte von 106 pro 1 cm2 auf einem planaren Glassubstrat vor. Wir beschichteten ein hydrophobes Polymer, CYTOP15, auf dem Glassubstrat und selektiv geätzt (entfernt) CYTOP an vordefinierten Positionen, um ein Mikrokammer-Array auf dem Substrat zu erzeugen. So besteht die resultierende Mikrokammer aus einer hydrophoben Seitenwand (CYTOP) und einem hydrophilen Boden (Glas). Wenn wasser und öl nacheinander über die gemusterte Oberfläche fließen, kann das Wasser eingefangen und in die Mikrokammern versiegelt werden. Die hydrophil-in-hydrophobe Struktur ist entscheidend für die Abstoßung von Wasser außerhalb der Mikrokammern, die Isolierung einzelner Mikroreaktoren und die Beibehaltung einer winzigen wässrigen Lösung im Femtoliterraum. Die einzigartige Eigenschaft wurde erfolgreich für die Herstellung von Wasser-in-Öl-Tröpfchen und Lipid-Doppelschicht-Mikrokompartimenten16,17angewendet. Im Vergleich zum Prototypgerät16haben wir zunächst den Mikrofertigungsprozess optimiert, um eine vollständige Entfernung des CYTOP-Polymers sowie eine vollständige Belichtung des Glasbodens zu realisieren. CYTOP ist ein spezielles Fluorpolymer mit extrem niedriger Oberflächenspannung (19 mN/m) niedriger als herkömmliche Mikroreaktormaterialien wie Glas, Kunststoffe und Silikon. Seine gute optische, elektrische und chemische Leistung wurden bereits in der Oberflächenbehandlung von mikrofluidischen Geräten18,19,20,21,22,23,24eingesetzt. Im FemDA-System muss die Oberflächenspannung des Öls niedriger sein als die der festen Oberfläche25. Andernfalls neigt das flüssige Öl, das mit der festen Oberfläche in Berührung kommt, dazu, kugelförmig zu werden, anstatt sich über die Oberfläche auszubreiten. Außerdem fanden wir heraus, dass einige beliebte Perfluorkohlenstofföle (z. B. 3M FC-40)16 und Fluorentöle (z. B. 3M Novec-Serie) CYTOP als Folge der amorphen Morphologie von CYTOP auflösen können, was für die quantitative Messung tödlich ist und in Bezug auf die Kreuzkontamination unter Tröpfchen fragwürdig wäre. Glücklicherweise haben wir ein biokompatibles und umweltfreundliches Öl mit niedrigerer (< 19 mN/m) Oberflächenspannung13identifiziert. Wir fanden auch ein neues Tensid, das sich im ausgewählten Öl auflösen und in geringer Konzentration (0,1%, mindestens 10-mal niedriger als zuvor berichtetbeliebte 26,27)13funktionieren kann. Die resultierende Wasser-Öl-Schnittstelle kann durch das Tensid stabilisiert werden. Aufgrund der hohen Verdunstungsrate des Öls, nach dem Spülen mit dem Öl, haben wir ein weiteres biokompatibles und umweltfreundliches Öl eingesetzt, um das erste zu ersetzen, das die Mikrokammern versiegelt. Wir nennen das erste Öl (ASAHIKLIN AE-3000 mit 0,1 Gew.-SURFLON S-386) das "Flush Oil" und das zweite Öl (Fomblin Y25) das "Dichtungsöl".
Die zweistufige Ölabdichtungsstrategie kann innerhalb von Minuten und ohne ausgeklügelte Instrumentierung eine robuste Formation des Femtoliter-Tröpfchen-Arrays realisieren. Aufgrund des Verdampfungsproblems wurde es als schwierig angesehen, Mikroreaktoren zu erzeugen, die kleiner als Pikolitervolumen28sind. FemDA befasste sich mit diesem Problem, indem sie die Materialien und Verfahren zur Herstellung von Mikroreaktoren/Tröpfchen systematisch optimierte. Einige bemerkenswerte Merkmale der resultierenden Tröpfchen sind die hohe Gleichmäßigkeit (oder Monodispersität), Stabilität und Biokompatibilität auf der Femtoliter-Skala. Der Variationskoeffizient (CV) des Tröpfchenvolumens beträgt nur 3% (ohne Vignettierungskorrektur für die mikroskopischen Bilder), der kleinste CV unter den Tröpfchenplattformen der Welt, der eine hochparallele und quantitative Messung gewährleistet. Das Femtolitertröpfchen ist mindestens 24 Stunden stabil ohne Kreuzkontamination unter Tröpfchen bei Raumtemperatur, was für eine zuverlässige Zeitverlaufsmessung wertvoll ist. In Bezug auf die Biokompatibilität ist es uns gelungen, verschiedene Proteine aus einer Einzelkopie-Vorlagen-DNA im Femtoliter-Tröpfchen zu synthetisieren, die zuvor als schwierig oder ineffizient galt29,30. Es wäre wert, aufzuklären, warum einige Proteine, die in der FemDA synthetisiert werden können, nicht in anderen Tröpfchensystemen synthetisiert werden können. FemDA war nicht nur eine technische Weiterentwicklung, sondern realisierte auch eine beispiellose quantitative Messung, die den Proteinertrag (wie durch die Fluoreszenzintensität des Tröpfchens reflektiert) mit der Anzahl der Vorlagen-DNA-Moleküle in jedem Tröpfchen korrelieren kann. Infolgedessen zeigte das Histogramm der Fluoreszenzintensität von Tröpfchen aus FemDA-basiertem CFPS eine diskrete Verteilung, die durch eine Summe von Gaußschen Verteilungen gleicher Peak-to-Peak-Intervalle gut angepasst werden kann. Darüber hinaus passte die Wahrscheinlichkeit des Auftretens von Tröpfchen, die unterschiedliche Dna-Moleküle enthielten, perfekt zu einer Poisson-Verteilung31. So kann der unterschiedliche Proteinertrag in jedem Tröpfchen auf der Grundlage der diskreten Verteilung normalisiert werden. Diese kritische Funktion ermöglicht es uns, die enzymatischen Aktivitätsinformationen von der scheinbaren Intensität zu trennen, die bei anderen Mikroreaktorplattformen noch nicht verfügbar war. Bestehende mikrofluidische Zell-/Tröpfchensortiersysteme sind in der vollautomatischen Sortierung und gut in der Konzentration von Proben ausgebildet, können aber manchmal nur ein relativ breites oder langschwanzes Histogramm im analytischen Aspekt32,33ausgeben. Unser hochquantitatives und biokompatibles FemDA-System setzt neue Maßstäbe und einen hohen analytischen Standard im Bereich der Mikroreaktorentwicklung.
Die Öle und Tenside, die zur Herstellung von Tröpfchen verwendet werden könnten, sind noch sehr begrenzt34. Die Kombination von ASAHIKLIN AE-3000 und SURFLON S-386 mit Sitz in FemDA ist ein neues Mitglied des wachsenden Arsenals der physiochemischen Schnittstelle zwischen wässriger Phase und Ölphase13. Die neue Schnittstelle in FemDA ist physikalisch stabil, chemisch inert und biologisch kompatibel mit der komplexen Transkriptions-, Übersetzungs- und posttranslationalen Modifikationsmaschinerie für viele Arten von Proteinen13. Es wäre ziemlich attraktiv, ein Protein zu finden, das nicht stattdessen in den Tröpfcheneinstellungen synthetisiert werden kann. Außerdem ist die Kostenersparnis von Reagenzien im Femtoliter-Tröpfchensystem deutlicher als bei Nanoliter- und Picoliter-Reaktorsystemen35,36. Insbesondere würde es oft ein großes Totvolumen geben, das hauptsächlich durch Schläuche oder externe Vorräte in mikrofluidischen Tröpfchenerzeugungssystemen verursacht wird, aber nicht in unserer FemDA. Das Array-Format wird auch durch wiederholte und detaillierte mikroskopische Charakterisierung (ähnlich der sogenannten High-Content-Analyse) für jeden einzelnen Reaktor37begünstigt, anstatt nur durch einen einzigen Schnappschuss für ein schnell bewegliches Objekt. Die Femtoliter-Skala ermöglichte die Integration von über einer Million Reaktoren auf einer fingergroßen Fläche, während die gleiche Anzahl von Nanoliter-Reaktoren (falls vorhanden) eine Fläche von über einer Quadratmeterfläche erfordert, was zweifellos unpraktisch wäre, um ein solches System herzustellen oder zu nutzen.

<table><tbody><tr><td>(3-Aminopropyl)triethoxysilan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>440140</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Spritze</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>2-Propanol</td><td>Kanto Chemical</td><td>EL Klasse</td><td>EL: für den elektronischen Gebrauch.</td></tr><tr><td>Konfokales 3D-Laserscanning-Mikroskop</td><td>Lasertec</td><td>OPTELICS HYBRID</td><td>Andere ähnliche Mikroskope (z. B. Keyence VK-X1000, Olympus LEXT OLS5000) sind ebenfalls anwendbar.</td></tr><tr><td>50 mL Spritze</td><td>Terumo</td><td>SS-50LZ</td><td></td></tr><tr><td>6,8-Difluor-4-methylumbelliferyl</td><td>phosphat Thermo Fisher Scientific</td><td>D6567</td><td>Bereiten Sie eine 5 mM Stammlösung in Dimethylsulfoxid</td></tr><tr><td>Aceton</td> vor <td>Kanto Chemical</td><td>EL Grade</td><td>EL: für den elektronischen Gebrauch. Reinheit 99,8%.</td></tr><tr><td>Luftgebläse</td><td>Hozan</td><td>Z-263</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumblock</td><td>BIO-BIK</td><td>AB-24M-02</td><td></td></tr><tr><td>Aluminium-Mikroröhrchenständer</td><td>BIO-BIK</td><td>AB-136C</td><td></td></tr><tr><td>ASAHIKLIN AE-3000</td><td>AGC</td> <td>(Testmuster)</td><td>Kostenlose Testmuster können auf Anfrage bei AGC zur Verfügung gestellt werden.</td></tr><tr><td>BEMCOT PS-2 Wischer</td><td>Ozu</td><td>028208</td><td></td></tr><tr><td>Biopsiestempel mit Kolben</td><td>Kai</td><td>BPP-10F</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas</td><td>Matsunami Glas</td><td>Nr. 1 (24 mm & mal 32 mm, 0,13 ~ 0,17 mm Dicke)</td> <td>Größe angepasst.</td></tr><tr><td>Abdeckung Glas-Färbegestell</td><td>Nakayama</td><td>803-131-11</td><td></td></tr><tr><td>CRECIA TechnoWipe clean Wischer</td><td>Nippon Paper Crecia</td><td>C100-M</td><td></td></tr><tr><td>Schneidematte</td><td>GE Healthcare</td><td>WB100020</td><td></td></tr><tr><td>CYTOP</td><td>AGC</td><td>CTL-816AP</td><td></td></tr><tr><td>Entgasungsmischer</td><td>Thinky</td><td>AR-100</td><td></td></tr><tr><td>Desktop-Schneider</td><td>Roland</td><td>STIKA SV-8</td><td></td></tr><tr><td>Entwickler</td><td>AZ Electronic Materials</td><td>AZ 300 MIF</td><td>AZ Electronic Materials wurde jetzt von Merck übernommen. Andere alkalische Entwickler könnten ebenfalls in Frage kommen, sollten aber eine Optimierung der Entwicklungsbedingungen (Zeit, Temperatur usw.) erfordern.</td></tr><tr><td>Doppelt beschichtetes selbstklebendes Kapton-Folienband</td><td>Teraoka Seisakusho</td><td>7602 #25</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Kanto Chemical</td><td>EL Klasse</td><td>EL: für den elektronischen Gebrauch. Reinheit 99,5%.</td></tr><tr><td>Fidschi-Version</td><td></td><td></td><td>: ImageJ 1.51n</td></tr><tr><td>Flachkabelschneider</td><td>Tokyo-IDEAL</td><td>MT-0100</td><td></td></tr><tr><td>Fomblin Öl</td><td>Solvay</td><td>Y25 oder Y25/6</td><td>Kostenlose Testprobe kann auf Anfrage bei Solvay erhältlich sein. Fomblin Y25/6 ist eine Alternative, wenn Y25 nicht ohne weiteres verfügbar ist.</td></tr><tr><td>Heizplatte</td><td>als eine</td><td>TH-900</td><td></td></tr><tr><td>Injektionsnadel</td><td>Terumo</td><td>NN-2270C</td><td>22G &times 70 mm</td></tr><tr><td>Inverses Fluoreszenzmikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti-E</td><td>Epifluoreszenzspezifikation, CCD- oder sCMOS-Kamera, motorisierter Tisch, Autofokus-System und Objektiv mit hoher NA sind erforderlich.</td></tr><tr><td>KaleidaGraph</td><td>Synergy</td><td></td><td>Version: 4,5</td></tr><tr><td>Masken-Aligner</td><td>SÜSS</td><td>MA-6</td><td>Andere Masken-Aligner sind ebenfalls anwendbar, solange der Vakuumkontaktmodus verfügbar ist.</td></tr><tr><td>MICROMAN Pipette</td><td>GILSON</td><td>E M250E</td><td>Kapillarkolbenspitze: CP250</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Version: 16.16.15</td></tr><tr><td>Mini-Vakuumkammer</td><td>AS ONE</td><td>MVP-100MV</td><td></td></tr><tr><td>Nukleasefreies Wasser</td><td>NIPPON GENE</td><td>316-90101</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Amcor</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>PCR-Röhrchen</td><td>NIPPON Genetics</td><td>FG-021D/SP</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>AS ONE</td><td>GD90-15</td><td>Durchmesser 90 mm, Höhe 15 mm.</td></tr><tr><td>Photoresist</td><td>AZ Electronic Materials</td><td>AZ P4903</td><td>AZ Electronic Materials wurde jetzt von Merck übernommen. AZ P4620 ist eine Alternative.</td></tr><tr><td>Plattenleser</td><td>BioTek</td><td>POWERSCAN HT</td><td></td></tr><tr><td>Handschuhe aus Polyethen</td><td>AS ONE</td><td>6-896-02</td><td>Handelsname: Saniment.</td></tr><tr><td>PURExpress In-vitro-Proteinsynthese-Kit</td><td>New England Biolabs</td><td>E6800S oder E6800L</td><td>Für zellfreie Proteinsynthesereaktionen.</td></tr><tr><td>Reaktivionen-Ätzsystem</td><td>Samco</td><td>RIE-10NR</td><td>Andere RIE-Systeme sind ebenfalls anwendbar, sollten jedoch eine Optimierung der RIE-Bedingungen (Gasdurchflussrate, Kammerdruck, HF-Leistung, Ätzzeit usw.) erfordern.</td></tr><tr><td>RNase-Hemmer</td><td>New England Biolabs</td><td>M0314S</td><td></td></tr><tr><td>Klebeband</td><td>3M</td><td>810-1-18D</td><td></td></tr><tr><td>Natronlauge</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical</td><td>194-09575</td><td>8 M Konzentration; Gefahr.</td></tr><tr><td>Spin Coater</td><td>Oshigane</td><td>SC-308</td><td></td></tr><tr><td>SURFLON S-386 Tensid</td><td>AGC</td> <td>(Testmuster)</td><td>Eine kostenlose Testprobe kann auf Anfrage bei AGC zur Verfügung gestellt werden.</td></tr><tr><td>SYLGARD 184 Silikonelastomer</td><td>Dow</td><td>Sylgard184</td><td>Chemische Zusammensetzung: Polydimethylsiloxan. Das Standard-Mischungsverhältnis ist Base : Härter = 10 : 1 (m/m).</td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Ideal-tek</td><td>2WF. SA.1 2A</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschallreiniger</td><td>AS ONE</td><td>ASU-2M</td><td></td></tr><tr><td>Vakuumfutter</td><td>Oshigane</td> <td>(kundenspezifisch)</td> <td>Material: Delrin; rechteckiger Probentisch mit mehreren Löchern (48 Löcher mit jeweils 1 mm Durchmesser); die Größe wird an die Größe des Deckglases angepasst (24 mm & mal 32 mm).</td></tr></tbody></table>

ein femtoliter droplet array für massive parallele proteinsynthese aus einzelnen dna-molekülen

A Femtoliter Droplet Array for Massively Parallel Protein Synthesis from Single DNA Molecules

Fortschritte bei der räumlichen Auflösung und Detektionsempfindlichkeit wissenschaftlicher Instrumente ermöglichen die Anwendung kleiner Reaktoren für die biologische und chemische Forschung. Um der Nachfrage nach Hochleistungs-Mikroreaktoren gerecht zu werden, haben wir ein Femtoliter-Tröpfchen-Array (FemDA)-Gerät entwickelt und seine Anwendung in massiv parallelen zellfreien Proteinsynthesereaktionen (CFPS) veranschaulicht. Über eine Million gleichmäßige Tröpfchen wurden mit einem zweistufigen Ölabdichtungsprotokoll problemlos in einem fingergroßen Bereich erzeugt. Jedes Tröpfchen wurde in einer Femtoliter-Mikrokammer verankert, die aus einem hydrophilen Boden und einer hydrophoben Seitenwand besteht. Die hybride hydrophil-in-hydrophobe Struktur und die speziellen Dichtöle und Tenside sind entscheidend, um die femtoliter wässrige Lösung im Femtoliter-Raum ohne Verdunstungsverlust stabil zu halten. Die Femtoliter-Konfiguration und die einfache Struktur des FemDA-Geräts ermöglichten einen minimalen Reagenzverbrauch. Die einheitliche Dimension der Tröpfchenreaktoren machte großflächige quantitative und Zeitverlaufsmessungen überzeugend und zuverlässig. Die FemDA-Technologie korrelierte den Proteinertrag der CFPS-Reaktion mit der Anzahl der DNA-Moleküle in jedem Tröpfchen. Wir rationalisierten die Verfahren über die Mikrofertigung des Geräts, die Bildung der Femtolitertröpfchen und die Erfassung und Analyse der mikroskopischen Bilddaten. Das detaillierte Protokoll mit den optimiertniedrigen Betriebskosten macht die FemDA-Technologie für jeden zugänglich, der über Standard-Reinraumeinrichtungen und ein herkömmliches Fluoreszenzmikroskop an seinem eigenen Platz verfügt.

Der Mikrofertigungsprozess besteht aus Substratreinigung, Oberflächenfunktionalisierung, CYTOP-Beschichtung, Photolithographie, Trockenätzung, photoresist-Abisolieren und Endreinigung. Wichtig ist, dass das vorgestellte Protokoll die vollständige Entfernung des hydrophoben CYTOP-Polymers in den Mikrokammern ermöglichte Abbildung 3A, wodurch eine hochparallele hydrophil-in-hydrophobe Struktur auf einem Standard-Abdeckungsglassubstrat hergestellt wurde. Mit Hilfe des Ölversiegelungsprotokolls ...

Das übergeordnete Ziel des Protokolls ist es, über eine Million geordnete, einheitliche, stabile und biokompatible Femtolitertröpfchen auf einem 1 cm2 planaren Substrat herzustellen, das für die zellfreie Proteinsynthese verwendet werden kann.

Ein Femtoliter Droplet Array für massive parallele Proteinsynthese aus einzelnen DNA-Molekülen

Advances in spatial resolution and detection sensitivity of scientific instrumentation make it possible to apply small reactors for biological and ...

Mehr als eine Million Uniformen aus den Tröpfchen werden auf dem fingergroßen Substrat hergestellt. Und einzelne DNA-Moleküle werden nach dem Zufallsprinzip in jedes Tröpfchen verteilt. Die Proteinausbeute ist proportional zur Anzahl der Moleküle in einem Tröpfchen.Unsere Technik kann für eine schnelle und quantitative Messung der Enzymaktivität ohne komplizierte Proteinexpression und -reinigung eingesetzt werden. Um zu beginnen, legen Sie ein Deckglas auf ein Färbegestell und legen Sie das Rack in acht Mol Natriumhydroxid. Beschallen Sie das Deckglas und das Färberregal 15 Minuten bei Raumtemperatur.Entfernen Sie das Färbegestell aus Natriumhydroxid und spülen Sie das Deckglas zehnmal mit Wasser ab. Trocknen Sie das Deckglas mit einer Luftpistole. Dann backen und trocknen Sie das Deckglas auf einer heißen Platte bei 200 Grad Celsius für fünf Minuten.Bereiten Sie 0,05%Aminosilan-Lösung. Tauchen Sie das Deckglas in diese Lösung ein und inkubieren Sie es für eine Stunde bei Raumtemperatur. Spülen Sie das Deckglas fünfmal in reinem Wasser.Dann trocknen Sie das Deckglas mit einer Luftpistole. Backen Sie es auf der heißen Platte bei 80 Grad Celsius für fünf Minuten. Legen Sie das Deckgl

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Research

Forschung

JoVE Journal

Chemistry

Chemie

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