Name: Intratracheale Instillation von Stammzellen bei Term Neonatal Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 27 s
Description: Erfahren Sie die intratracheale Transplantation mesenchymaler Stromazellen bei neonatalen Sprague-Dawley-Ratten. Diese Methode ermöglicht die gezielte Zellabgabe in die Lunge zur Evaluierung therapeutischer Wirksamkeit bei neonatalen Erkrankungen.

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Diese Studie wurde teilweise durch ein Stipendium der Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan (A-109-008) unterstützt.

Dieses Verfahren wurde vom Animal Care and Use Committee der Taipei Medical University genehmigt.
HINWEIS: Menschliche MSCs, die stabil mit grünem fluoreszierendem Protein (GFP) und Galgengifengen (Fluc) transfiziert wurden, wurden von einem kommerziellen Unternehmen(Tabelle der Materialien)gewonnen.
1. Charakterisierung menschlicher MSCs mit Gelfeluzifase und grünem fluoreszierendem Protein
<ol><li>Bewahren Sie menschliche MSCs, die mit GFP und Fluc transfiziert sind, in vollständigen Medien (minimale wesentliche mittlere Adler-Alpha-Modifikation [MEM], ergänzt mit 10 bis 15 % fetalem Rinderserum [FBS], 2 mM L-Glutamin, 1 ng/ml Basis-FGF und PSF) bei 37 °C mit gesättigter Feuchtigkeit und 5 %CO2. Durchgangszellen bei einem Zusammenfluss von 70 bis 90 %.</li>
	<li>Beobachten Sie MSCs unter einem Fluoreszenzphasenkontrastmikroskop (Abbildung 1A) und analysieren Sie die Expressionswerte von Fluc und GFP14.</li>
	<li>Charakterisieren Sie die MSCs, indem Sie den Ausdruck von CD-Markern einschließlich CD44, CD73, CD90, CD105 mithilfe der Durchflusszytometrie analysieren (Abbildung 1B). Induzieren Trilineage Differenzierung von Stammzellen zu Adipozyten, Chondrozyten, und Osteozyten, und bestätigen Trilineage Differenzierung (Abbildung 1C) von Von Kossa, Öl rot O, und Alcian blaue Färbung nach einem kommerziellen Protokoll15,16.</li>
</ol>2. Anästhesisierung von Rattenwelpen
<ol><li>Lassen Sie zeitlich datierte schwangere Sprague-Dawley-Ratten vaginal zu liefern.</li>
	<li>Entfernen Sie die Rattenwelpen am postnatalen Tag 5 aus dem Käfig.</li>
	<li>Anästhetisieren Sie die Rattenwelpen mit Gasanästhesie (d.h. 2% Isofluran) in einer Anästhesiekammer.</li>
	<li>Bestätigen Sie eine ausreichende Anästhesie, indem Sie Atmung und Reflexe überprüfen. HINWEIS: Die Atmung sollte flach werden und die Reflexe sollten abnehmen. Rattenwelpen bleiben mit dieser Isofluran-Konzentration mindestens 10 min unbewusst.</li>
</ol>3. Intratracheale Instillation
<ol><li>Nach der Beägung die Rattenwelpen auf einem intubationsständer von 60° anwinkelt zurückhalten und Welpen mit Labor-Etikettierungsband an allen vier Gliedmaßen an Ort und Stelle halten.</li>
	<li>Tragen Sie Klebeband unter der Nase auf, um den Kopf zu fixieren und den Hals für punktionstracheotomie zu lokalisieren.</li>
	<li>Desinfizieren Sie den Schnittbereich (d.h. Hals) mit einem 75% Alkohol-Prep-Pad.</li>
	<li>Machen Sie einen 0,3 cm vertikalen Mittellinienausschnitt über der Luftröhre mit Mikroschere, um eine Beschädigung der Karotisarterien zu vermeiden.</li>
	<li>Sezieren Sie die Fett- und Muskelschichten weg, um die Luftröhre mit gekrümmter Spitze verjüngte Pinzette ohne Haken zu lokalisieren.</li>
	<li>Halten Sie die Luftröhre mit der gekrümmten Spitze verjüngte Pinzette.</li>
	<li>Halten Sie eine 100-L-Spritze aufrecht und injizieren Sie während der Inspiratorei-Phase langsam 30 l normaler Saline (d. h. Kontrolle) oder 30 l Fluc-GFP-markierte MSCs (1 x 105 Zellen) in die Luftröhre.</li>
	<li>Schließen Sie den Schnitt mit einem 6-0 Seidenstich, binden Sie den Knoten so klein wie möglich und schneiden Sie die Enden so kurz wie möglich.</li>
	<li>Stellen Sie die Ratten unter Infrarotlicht oder auf ein Heizkissen, um warm zu halten und sie von der Anästhesie erholen zu lassen.</li>
	<li>Bestätigen Sie, dass die Ratten warm, rosa und in der Lage sind, sich spontan zu bewegen, bevor sie die Ratten in den Käfig zurückbringen.</li>
</ol>4. Überwachung der Lungenverteilung von MsCs
<ol><li>Um die transplantierten menschlichen MSCs zu verfolgen, injizieren sie die Ratten intraperitoneal mit Luziferin-Kaliumsalz in Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) in einer Dosis von 125 mg/kg Körpergewicht 15 min nach MSC-Injektion.</li>
	<li>Anästhesisieren Sie die Ratten mit 2% Isofluran durch Nasenkegel.</li>
	<li>Erfassen Sie sequenzielle Bilder in 5-15 s Intervallen 10 min nach der Luciferin-Verabreichung mit mittlerem Binning, 1 f/stop und einem 26 cm Sichtfeld mit einem Kleintier-Bildgebungssystem(Tabelle der Materialien).</li>
	<li>Quantifizieren Sie die Lumineszenzaktivität aus der Lunge basierend auf den automatischen Regionen von Interesse mit Bildgebungssoftware (Tabelle der Materialien)17.</li>
</ol>

<ol><li>Ramanathan, R., Bhatia, J. J., Sekar, K., Ernst, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+in+preterm+infants+with+respiratory+distress+syndrome+treated+with+poractant+alfa%2C+calfactant+or+beractant%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Mortality in preterm infants with respiratory distress syndrome treated with poractant alfa, calfactant or beractant: a retrospective study.</a> Journal of Perinatology. 33, 119-125 (2013).</li>
<li>Gien, J., Kinsella, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of bronchopulmonary dysplasia.</a> Current Opinion in Pediatrics. 23, 305-313 (2011).</li>
<li>Pasha, A. B., Chen, X. Q., Zhou, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchopulmonary+dysplasia%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Bronchopulmonary dysplasia: Pathogenesis and treatment.</a> Experimental and Therapeutic. 16, 4315-4321 (2018).</li>
<li>Committee on Fetus and Newborn. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+corticosteroids+to+treat+or+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Postnatal corticosteroids to treat or prevent chronic lung disease in preterm infants.</a> Pediatrics. 109, 330-338 (2002).</li>
<li>Watterberg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Academy+of+Pediatrics%3B+Committee+on+Fetus+and+Newborn.+Policy+statement-postnatal+corticosteroids+to+prevent+or+treat+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">American Academy of Pediatrics; Committee on Fetus and Newborn. Policy statement-postnatal corticosteroids to prevent or treat bronchopulmonary dysplasia.</a> Pediatrics. 126, 800-808 (2010).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+stromal+cells+as+stem+cells+for+nonhematopoietic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues.</a> Science. 276, 71-74 (1997).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-+dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)- dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nature Medicine. 15 (2), 42-49 (2009).</li>
<li>Chou, H. C., Li, Y. T., Chen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+attenuate+experimental+bronchopulmonary+dysplasia+induced+by+perinatal+inflammation+and+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells attenuate experimental bronchopulmonary dysplasia induced by perinatal inflammation and hyperoxia.</a> American Journal of Translational Research. 8, 342-353 (2016).</li>
<li>Chen, C. M., Chou, H. C., Lin, W., Tseng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+effects+on+the+viability+and+function+of+human+mesenchymal+stem+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Surfactant effects on the viability and function of human mesenchymal stem cells: in vitro and in vivo assessment.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8, 180(2017).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80, 415-424 (2016).</li>
<li>Fleurence, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+intratracheal+adeno-associated+virus+administration+to+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of intratracheal adeno-associated virus administration to newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 16, 1298-1306 (2005).</li>
<li>Waszak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intratracheal+adenoviral+vector+administration+on+lung+development+in+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effect of intratracheal adenoviral vector administration on lung development in newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 13, 1873-1885 (2002).</li>
<li>O'Reilly, M., Thébaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia.+The+term+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bronchopulmonary dysplasia. The term rat models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307, 948(2014).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+labeling+and+hepatic+differentiation+potential+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">GFP labeling and hepatic differentiation potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 35, 2299-2308 (2015).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+osteogenic+capacity+for+bone+tissue+engineering+of+fetal+compared+with+perinatal+and+adult+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 27, 126-137 (2009).</li>
<li>Huang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surfactant+and+budesonide+on+pulmonary+distribution+of+fluorescent+dye+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+and+Neonatology%22%5BJournal%5D)">Effect of surfactant and budesonide on pulmonary distribution of fluorescent dye in mice.</a> Pediatric and Neonatology. 56, 19-24 (2015).</li>
<li>Keyaerts, M., Caveliers, V., Lahoutte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging%3A+looking+beyond+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging: looking beyond the light.</a> Trends in Molecular Medicine. 18, 164-172 (2012).</li>
<li>Yeh, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+budesonide%2Fsurfactant+to+prevent+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of budesonide/surfactant to prevent bronchopulmonary dysplasia.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193, 86-95 (2016).</li>
<li>Nguyen, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inoculation+of+Fischer+344+rats+with+Francisella+tularensis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inoculation of Fischer 344 rats with Francisella tularensis.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56123(2017).</li>
<li>de Almeida, P. E., van Rappard, J. R., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+for+tracking+cell+fate+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence for tracking cell fate and function.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, 663-671 (2011).</li>
<li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49, 3-10 (2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Neugeborene mit Atemnot benötigen häufig intratracheales Tensid und/oder Kortikosteroidbehandlung19. Klinische Studien der Phase I der menschlichen Phase i haben die8Sicherheit von intratrachealen MSCs bei Frühgeborenen 8 gezeigt. Diese Studien deuten darauf hin, dass die intratracheale Verabreichung von Medikamenten eine wichtige Option für Neugeborene mit Atemnot ist. Tiermodellstudien sind am hilfreichsten, wenn die Modellfunktionen direkt für den...

Zusätzliche Sauerstoff ist oft erforderlich, um Neugeborene mit Atemnot zu behandeln1. Jedoch, Hyperoxia-Therapie bei Säuglingen hat negative langzeitige Auswirkungen. Längere Exposition gegenüber hohen Sauerstoffkonzentrationen führt zu Entzündungen und akuten Lungenverletzungen, die der menschlichen Bronchopulmonaldysplasie (BPD)2ähneln. BPD ist eine hauptverkompliktige Hyperoxia-Behandlung, die trotz früher Tensidtherapie, optimaler Beatmungsverfahren und vermehrter Anwendung nichtinvasiver Positivdruckbeatmung bei Frühgeborenen auftreten kann. Während viele Behandlungsstrategien für BPD3berichtet wurden, kann keine bekannte Therapie diese Komplikation reduzieren.
Kortikosteroid-Einsatz ist eine mögliche Behandlung, um BPD zu verhindern, weil Lungenentzündung spielt eine entscheidende Rolle bei seiner Pathogenese. Jedoch, systemische Kortikosteroid-Therapie wird in der Regel nicht für Frühgeborene aufgrund von langfristigen Nebenwirkungen empfohlen4,5.
Mesenchymale Stromalzellen (MSCs) haben pluripotente Eigenschaften und können sich in verschiedene Zelltypen differenzieren, einschließlich Knochen, Knorpel, Fettgewebe, Muskel und Sehnen6. MSCs haben immunmodulatorische, entzündungshemmende und regenerative Effekte7, und Tierstudien zeigen die therapeutischen Vorteile von MSCs und ihren sezernierten Komponenten bei Hyperoxia-induzierten Lungenverletzungen bei Nagetieren8,9. Intratracheale und intravenöse MSC-Transplantation schützt nachweislich vor neonatalen hyperoxischen Lungenverletzungen. Daher könnte die intratracheale Verabreichung von Stammzellen und eine kombinierte Tensid- und Kortikosteroidtherapie eine potenzielle Behandlungsstrategie zur Behandlung von Neugeborenen mit Atemwegserkrankungen sein. Präklinische Studien haben die intratracheale Verabreichung von Stammzellen und Adeno-assoziierten Viren bei neugeborenen Ratten10,11,12verwendet. Eine schrittweise Darstellung der Technik und in vivo-Tracking der transplantierten Stammzellen ist jedoch nicht verfügbar. Die neugeborene Ratte eignet sich für die Untersuchung der Auswirkungen der intratrachealen Verabreichung auf Frühgeborene mit Atemnot, da das sakkare Stadium der Rattenlunge bei der Geburt dem der menschlichen Lunge bei 26-28 Wochen Trächtigkeitentspricht. Eine wirksame Methode zur Verabreichung in die Rattentracheistin ist entscheidend für eine erfolgreiche Lungenverteilung. Die hier vorgestellte Technik ermöglicht die Untersuchung der intratrachealen Verabreichung von Zellen und/oder Medikamenten zur Behandlung von neonatalen Lungenerkrankungen unter Verwendung von Ratten als Modell für den Menschen.

<table><tbody><tr><td>6-0 Seide</td><td>Ethicon</td><td>1916G</td><td></td></tr><tr><td>Alkohol Vorbereitung Pad</td><td>CSD</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>BD Stemflow hMSC Analysekit</td><td>BD Biosciences</td><td>562245</td><td>CD Marker</td></tr><tr><td>CMV-Luciferase-EF1&alpha;-copGFP BLIV 2.0 Lentivektor für In Vivo Imaging</td><td>SBI</td><td>BLIV511PA-1</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor10</td><td>BioLife Solutions</td><td>640222</td><td></td></tr><tr><td>Humane MSCs</td><td>Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Infrarotlicht</td><td>JING SHANG</td><td>JS300T</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Halogenkohlenstoff</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-200 Kleintier-Bildgebungssystem</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luciferin-Kaliumsalz</td><td>Promega, Madison, WI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroschere, gerade</td><td>Vannas</td><td>H4240</td><td></td></tr><tr><td>Normale Kochsalzlösung</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>113531</td><td>Isotonische Natriumchloridlösung</td></tr><tr><td>RN-Nadel mit kleiner Nabe, 30 Gauge</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>7799-06</td><td></td></tr><tr><td>Spritze (100 & Mikro; l)</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>81065</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Living Image 2.5 Software</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

intratracheale instillation von stammzellen bei term neonatal ratten

Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats

Eine längere Exposition gegenüber hohen Sauerstoffkonzentrationen führt zu Entzündungen und akuten Lungenverletzungen, die der menschlichen Bronchopulmonaldysplasie (BPD) ähneln. Bei Frühgeborenen ist BPD eine hauptverkomplikation trotz des frühen Einsatzes von Tensidtherapie, optimalen Beatmungsstrategien und nichtinvasiver Positivdruckbelüftung. Da Lungenentzündung spielt eine entscheidende Rolle bei der Pathogenese von BPD, Kortikosteroid Verwendung ist eine mögliche Behandlung, um es zu verhindern. Dennoch, systemische Kortikosteroid Behandlung wird in der Regel nicht für Frühgeborene aufgrund langfristiger Nebenwirkungen empfohlen. Präklinische Studien und klinische Studien der Phase I zeigten, dass die Anwendung von mesenchymalen stromalen Zellen (MSCs) bei hyperoxiainduzierten Lungenverletzungen und bei Frühgeborenen sicher und machbar ist. Intratracheale und intravenöse MSC-Transplantation schützt nachweislich vor neonatalen hyperoxischen Lungenverletzungen. Daher hat sich die intratracheale Verabreichung von Stammzellen und kombinierte Tensid- und Glukokortikoidbehandlung als eine neue Strategie zur Behandlung von Neugeborenen mit Atemwegserkrankungen herauskristallisiert. Das Entwicklungsstadium der Rattenlunge bei der Geburt entspricht dem in der menschlichen Lunge bei der 26-28-Wöchigen Schwangerschaft. Daher sind neugeborene Ratten geeignet, um die intratracheale Verabreichung an Frühgeborene mit Atemnot zu untersuchen, um ihre Wirksamkeit zu bewerten. Diese intratracheale Instillationstechnik ist eine klinisch praktikable Option für die Abgabe von Stammzellen und Medikamenten in die Lunge.

Die pulmonale Verteilung der intratrachealen Instillation von Stammzellen im Begriff neonatale Ratten wurde durch Gunfly-Luziferase (Fluc)-markierte Stammzellen bestimmt. MSCs wurden mit Fluc gekennzeichnet und durch lentivirale Transduktion mit grünem fluoreszierendem Protein markiert. Abbildung 1A zeigt einen hohen GFP-Ausdruck in menschlichen MSCs, und 93,7 % der Bevölkerung zeigten eine GFP-positive Expression, die durch Durchflusszytometrie erkannt wurde. MSCs waren gekennzeichnet durch...

Described ist ein Protokoll zur Durchführung einer intratrachealen Transplantation von mesenchymalen Stromalzellen (MSCs) durch intratracheale Injektion bei neonatalen Ratten. Diese Technik ist eine klinisch praktikable Option für die Abgabe von Stammzellen und Medikamenten in die Lungen der neonatalen Ratte, um ihre Wirksamkeit zu bewerten.

Intratracheale Instillation von Stammzellen bei Term Neonatal Ratten

Prolonged exposure to high concentrations of oxygen leads to inflammation and acute lung injury, which is similar to human bronchopulmonary dysplasia ...

Intratrachealinstillation ist eine klinische biotechnische zur Bereitstellung von Stammzellen und Medikamenten in eine neonatale Lunge, um die Wirksamkeit von Chilman zu bewerten. Diese Technik kann gutgläubig für die Verwendung mit einer Vielzahl von primären Anwendung bei einer neonatalen Ratte und ist eine relativ einfache und kostengünstige Maßnahme für die Behandlung von Lungenerkrankungen. Am fünften Tag der Postnatale, halten Sie die anästhetisierten Sprague-Dawley Rattenwelpen auf einem 60-Grad-Winkel-Intubationsständer zurück.Und befestigen Labor-Etikettierband auf allen vier Gliedmaßen jedes Welpen, um sie an Ort und Stelle zu sichern. Tragen Sie Klebeband unter jeder Nase auf, um die Köpfe zu fixieren. Und punktieren Sie den ersten Hals für Punktionstracheotomie.Verwenden Sie ein 75%Alkohol-Prep-Pad, um den Schnittbereich zu desinfizieren. Und machen Sie einen vertikalen 3 Zentimeter Mittellinienschnitt über der Luftröhre, um eine Beschädigung der Karotisarterien zu vermeiden. Verwenden Sie gekrümmte verjüngte Pinzette ohne Haken, um die Fett- und Muskelschichten zu trennen, um die Luftröhre zu lokalisieren.Wenn die Luftröhre beobachtet werden kann, verwenden Sie die Pin

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Bedeutende Durchbrüche in der Stammzellenforschung Identifikation werden ständig gemacht. Zu übersetzen, diese Entdeckungen, müssen jedoch neue Methoden für die zelluläre Lieferung erarbeitet werden. Hier habe ich berichten, dass die Atemwege eine sichere Route für Stammzelltransplantation in der Lunge liefern.

Tracheotomie: Eine Methode zur Transplantation von Stammzellen in die Lunge

Intratracheale Instillationen liefern Solute direkt in die Lunge. Dieses Verfahren zielt auf die Lieferung der instillate in den distalen Regionen der Lunge, und wird daher oft in Studien am Studium Alveolen gerichtet eingebaut. Wir bieten Ihnen eine detaillierte Überleben Protokoll für die Durchführung intratracheale Instillationen in Mäusen.

Direkte Instillation von gelösten Stoffen in Mauslunge

Wir entwickelten eine neuartige chirurgische Ansatz für intratracheale Verabreichung von Wirkstoffen in die Maus Fötus. Die Transportroute ist effizienter bei der Ausrichtung der fetalen Mauslungen als der üblicherweise verwendete intra-Fruchtwasser Injektion. Dieses Verfahren hat sich nicht in einem Mausmodell wurden bisher beschrieben.

A Novel Surgical Ansatz intratracheale Verabreichung von Wirkstoffen in einem Fetal Mouse Model

Dieses Video zeigt die Etablierung einer Lungeninfektion in einem immunkompetenten Nagetiermodell durch Intubation und Installation von bakteriellen Suspensionen in Lungenlappen. Dieses Modell ermöglicht antibakterielle Wirksamkeitsstudien an immunkompetenten Tieren.

Intrabronchiale Instillation von Streptococcus pneumoniae in immunkompetenten Nagetiermodellen

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Intra-arterielle Lieferung von neuronalen Stammzellen an das Ratten- und Maushirn: Anwendung auf zerebrale Ischämie

Diese Technik, Medikamente direkt in die Luftröhre von neonatalen Nagetieren einzuträufeln, ist wichtig, um die Auswirkungen von lokal verabreichten Medikamenten oder Biologika auf neonatale Lungenerkrankungen zu untersuchen. Darüber hinaus kann diese Methode auch zur Induktion von Lungenverletzungen in Tiermodellen eingesetzt werden.

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In dieser Arbeit wird ein Tiermodell der endothelial-mesenchymalen Transitions-induzierten Fibrose vorgestellt, wie sie bei angeborenen Herzfehlern wie der kritischen Aortenstenose oder dem hypoplastischen Linksherzsyndrom auftritt, das eine detaillierte histologische Gewebebewertung, die Identifizierung regulatorischer Signalwege und die Erprobung von Behandlungsoptionen ermöglicht.

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