Nutzung von Trübung und Thromboelastographie zur komplementären Clot-Charakterisierung

Thromboelastographie und Trübungsassays sind zwei einfache und unverwechselbare Methoden zur Gerinnselcharakterisierung. Diese Techniken bieten zusammen ein umfassenderes Verständnis dafür, wie sich Gerinnungsvariablen auf Gerinnselfunktionen auswirken. Beide Assays bieten nicht nur Endpunktgerinnselanalyse, sondern ziehen auch Fibrin-Gerinnselbildung im Laufe der Zeit an, im Gegensatz zu vielen anderen Gerinnselcharakterisierungswerkzeugen Diese Techniken können helfen, eine physiologisch relevante synthetische Gerinnselplattform zu entwickeln, die eine zuverlässige Diagnose des fibrinolytischen Zustands von Thrombosepatienten liefern kann, um die Trübung von Gerinnkörpern im Laufe der Zeit zu überwachen, jedes kommerziell erhältliche Spektrometer zu verwenden, das einen Absorptionsbereich von 350 bis 700 Nanometern aufweist.

Schalten Sie das Spektrometer ein und öffnen Sie die entsprechende Analysesoftware. Wählen Sie dann Platte eins und öffnen Sie die Registerkarte Platteneinstellungen. Klicken Sie auf ABS und kinetisch, um eine dynamische Absorption im Laufe der Zeit zu überwachen.

Wählen Sie 550 Nanometer in der Wellenlängen-Registerkarte, wechseln Sie dann zur Timing-Registerkarte und passen Sie die Gesamtlaufzeit auf 60 Minuten mit einem Intervall von 30 Sekunden an, wählen Sie die Sehenswürdigkeiten aus, indem Sie sie hervorheben. Pipette 140 Mikroliter PBS in einen Brunnen einer UV-transparenten 96-Wellplatte. Dann fügen Sie 10 Mikroliter Thrombin und mischen, sofort initiieren Gerinnung durch Zugabe von 50 Mikroliter Fibrinogen in den Brunnen und Pipette auf und ab fünf Mal mit nur dem ersten Stopp der Pipette unter Derobz zu vermeiden, blasen zu vermeiden.

Legen Sie die Platte in den Plattenhalter und klicken Sie in der Software lesen, um die Trübung zu starten. Wenn der Lesewert die Trübungsdaten abgerufen und eine Trübungsverfolgungskurve erhalten, indem die Absorptionsmittel im Laufe der Zeit dargestellt werden, leiten Sie die maximale Trübung ab, indem Sie den maximalen Absorptionswert der Kurve über die Zeit nehmen, und berechnen Dann 90 % maximale Trübung, indem Sie die maximale Trübung mit 0,9 multiplizieren. Leiten Sie die Zeit bis zur maximalen Trübung ab, indem Sie die Zeit von der Gerinnselinitierung bis zu 90% maximaler Trübung berechnen.

Schalten Sie die Thromboelastographie oder den TEG-Analysator ein, und warten Sie, bis sich die Temperatur bei 37 Grad Celsius stabilisiert, öffnen Sie dann die TEG-Software und erstellen Sie einen Experimentnamen unter dem Abschnitt ID. Klicken Sie auf die Registerkarte TEG, und folgen Sie den Anweisungen auf dem Bildschirm, um einen eTest-Test für alle Kanäle durchzuführen. Legen Sie dann den Hebel wieder in die Ladeposition, sobald alle Prüfungen abgeschlossen sind.

Klicken Sie auf der Informationsseite auf Fertigstellen, und geben Sie Beispielinformationen für Kanäle ein, die verwendet werden. Legen Sie einen eindeutigen unbeschichteten TEG-Becher in den entsprechenden Kanal. Schieben Sie den Träger nach oben und drücken Sie den Becherboden fünfmal, um den Stift an der Torsionsstange zu fixieren, dann senken Sie den Träger und drücken Sie den Becher nach unten in die Basis, bis er klickt.

Pipette 20 Mikroliter Thrombin-Lösung in den TEG-Becher, dann initiieren Gerinnung durch Zugabe von 340 Mikroliter Fibrinogen in die Tasse, um eine 360 Mikroliter Gerinnungslösung zu erhalten. Mischen Sie den Inhalt der Tasse, indem Sie fünfmal nach oben und unten pfeifen. Schieben Sie den becherbeladenen Träger nach oben bewegen Sie den Hebel in die Leseposition und klicken Sie in der Software auf Start, um den TEG-Lesung zu initiieren.

Sobald der Messwert abgeschlossen ist, rufen Sie die Parameter ab, und erhalten Sie eine TEG-Ablaufverfolgungskurve, indem Sie die Amplitude im Zeitverlauf zeichnen. Wählen Sie MA als maximale Amplitude, die auf Gerinnseldehnung und TMA als Zeit bis zur maximalen Amplitude von der Software hinweist. Repräsentative Trübung und eine TEG-Tracing-Kurven von menschlichen und rindern Fibrin-Gerinnseln in verschiedenen Fibrinogen-Spiegeln werden hier gezeigt.

Die Tracing-Kurven zeigen, dass nach einer Verzögerungsphase nach der Gerinnseleinweihung die Trübung oder die Gerinnselamplitude im Laufe der Zeit zunimmt und sich am Ende der Gerinnselbildung abbiegt. Maximale Trübung und maximale Trübung sind die beiden Parameter, die von Trübung abgeleitet werden, während maximale Amplitude und Zeit bis zur maximalen Amplitude von TEG abgeleitet werden. Bei einem höheren Fibrinogengehalt in der Gerinnungslösung erhöhen sich alle vier Werte.

Maximale Trübung ist ein optisches Maß für die Gerinnselstruktur, das auf fibrin faserdicke und Fibrin-Netzwerkdichte hinweist. Während die maximale Amplitude ein mechanisches Maß ist, das die absolute Gerinnselbelastung widerspiegelt, bieten die beiden Werte zusammen einen ergänzenden Einblick in die Gerinnsel-Mikrostrukturen. Dieses Verfahren zeigt ein vereinfachtes Gerinnungsmodell, um Variablen zu untersuchen, die hauptsächlich die Fibrinpolymerisation betreffen.

Dieses Modell kann durch Einbeziehung zusätzlicher Gerinnungsfaktoren angepasst werden, um andere Parameter zu untersuchen. Das Gerinnungsmodell kann leicht mit klinischen Plasmaproben modifiziert werden, um die Gerinnselbildung und Desillusionierung in Gegenwart von Antithrombotika zu überwachen. Die Ergebnisse könnten das therapeutische Management bei Patienten leiten.