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Biologie
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Situハイブリダイゼーションにおける2色単分子蛍光を用いた
大腸菌
における空間と時間におけるmRNA運動学の探査
JoVE Journal
Biologie
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JoVE Journal
Biologie
Probing mRNA Kinetics in Space and Time in
Escherichia coli
using Two-Color Single-Molecule Fluorescence In Situ Hybridization
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Situハイブリダイゼーションにおける2色単分子蛍光を用いた
大腸菌
における空間と時間におけるmRNA運動学の探査
DOI:
10.3791/61520-v
•
10:01 min
•
July 30, 2020
•
Sangjin Kim
2,3,4
,
Kavya Vaidya
2
1
Department of Physics
,
University of Illinois at Urbana-Champaign
,
2
Center for the Physics of Living Cells
,
University of Illinois at Urbana-Champaign
,
3
Carl R. Woese Institute for Genomic Biology
,
University of Illinois at Urbana-Champaign
,
4
Center for Biophysics and Quantitative Biology
,
University of Illinois at Urbana-Champaign
Kapitel
00:04
Introduction
00:42
Coverslip and Glass Slide Preparation
01:46
Time-Course Experiment and Sample Fixation
03:18
Cell Membrane Permeabilization
03:57
Probe Hybridization
04:31
Imaging
05:25
Post-Hybridization Wash and Imaging Preparation
06:20
Image Analysis
07:36
Results: Representative mRNA Kinetic Probing Analysis
09:22
Conclusion
Summary
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このプロトコルは、mRNA合成および分解のインビボ運動を測定するための一分子蛍光をその場所でのハイブリダイゼーション(smFISH)での適用について説明する。
Tags
MRNA Kinetics
Two-color Single-molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH)
Transcription
MRNA Degradation
Escherichia Coli
Time Course Experiment
IPTG Induction
ONPF Repression
Cell Fixation
Cell Permeabilization
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