Name: Systematischer Ansatz zur Identifizierung neuartiger antimikrobieller und Antibiofilmmoleküle aus Pflanzenextrakten und -fraktionen zur Vorbeugung von Zahnkaries (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Erfahren Sie ein vereinfachtes Screening-Protokoll zur Identifizierung antimikrobieller Pflanzenextrakte gegen orale Biofilme. Diese Methode nutzt hydroalkoholische Extraktion und Fraktionierung zur Bekämpfung von Streptococcus mutans.

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Wir bedanken uns bei Nécleo de Bioensaios, Biossénteese e Ecofisiologia de Produtos Naturais (NuBBE) des Chemieinstituts der UNESP, Araraquara/SP für die Bereitstellung der Laboratorien für die Aufbereitung von Pflanzenmaterial. Wir danken auch dem Applied Microbiology Laboratory der Department of Dental Materials and Prosthodontics, UNESP, Araraquara/SP. Diese Forschung wurde durch ein Forschungsstipendium der Forschungsstiftung von Sao Paulo (FAPESP #2013/07600–3 an AJC) und Stipendien plus Overhead-Fonds (FAPESP #2017/07408–6 und FAPESP #2019/23175-7 an SMR; #2011/21440–3 und #2012/21921–4 an PCPB) unterstützt. Der National Rat für wissenschaftliche und technologische Entwicklung in Verbindung mit FAPESP stellte zusätzliche Unterstützung bereit (INCT CNPq #465637/2014-0 und FAPESP #2014/50926–0 an AJC).

Es wurden keine Interessenkonflikte angemeldet.

Die wichtigsten Herausforderungen im Zusammenhang mit der Arbeit mit natürlichen Rohextrakten sind ihre komplexe Zusammensetzung und die Unzulänglichkeiten klassischer biogeführter Isolationsstudien. Obwohl dieser Prozess langsam ist, ist er wirksam und hat zu wichtigen Erkenntnissen in der NP-Forschung geführt. Um zu rationalisieren, sind prioritisierungsgetriebene Studien erforderlich, um zu rationalisieren. Daher ist die Verwendung moderner chemischer Profilierungsansätze für die Analyse von CE und Dereplikation vor d...

Die frühesten Modelle der Medizin, die in Gesellschaften verwendet wurden, basierten auf natürlichen Produkten (NPs). Seitdem sucht der Mensch nach neuen Chemikalien in der Natur, die in Medikamente umgewandelt werden können1. Diese Suche führte zu einer kontinuierlichen Verbesserung der Technologien und Methoden für ethnobotanische Screening1,2,3. NPs bieten eine reiche Quelle strukturell vielfältiger Substanzen, mit einer breiten Palette von biologischen Aktivitäten, die für die Entwicklung alternativer oder adjuvanser Therapien nützlich sind. Die inhärente komplexe Pflanzenmatrix macht die Isolierung und Identifizierung der Wirkstoffe jedoch zu einer anspruchsvollen und zeitaufwändigen Aufgabe4.
NPs-basierte Medikamente oder Formulierungen können verwendet werden, um zu verhindern und/oder behandeln mehrere Bedingungen, die oral, einschließlich Zahnkaries4. Zahnkaries, eine der weltweit am weitesten verbreiteten chronischen Krankheiten, ergibt sich aus der Wechselwirkung von zuckerreicher Ernährung und mikrobiellen Biofilmen (Zahnbelag), die auf der Zahnoberfläche gebildet werden, was zu einer Demineralisierung führt, die durch organische Säuren verursacht wird, die aus dem mikrobiellen Stoffwechsel gewonnen werden, und wenn sie nicht behandelt werden, führt zu Zahnverlust5,6. Obwohl andere Mikroorganismen assoziiert werden können7, Streptococcus mutans ist ein kritisches karogenes Bakterium, weil es sauerogen ist, saure, und ein extrazellulärer Matrix-Builder. Diese Art kodiert mehrere Exoenzyme (z.B. Glykosyltransferasen oder Gtfs), die Saccharose als Substrat8 verwenden, um die extrazelluläre Matrix zu bilden, die reich an Exopolysacchariden ist, die eine Virulenzdeterminantesind 9. Auch der Pilz Candida albicans kann die Produktion dieser extrazellulären Matrix7antreiben. Obwohl Fluorid, das in verschiedenen Modalitäten verabreicht wird, die Grundlage für die Vorbeugung von Zahnkaries10bleibt, sind neue Ansätze als Hilfsstoffe erforderlich, um seine Wirksamkeit zu erhöhen. Darüber hinaus basieren die verfügbaren Anti-Plaque-Modalitäten auf der Verwendung von Breitspektrum-Mikrobiziden (z. B. Chlorhexidin)11. Als Alternative sind NPs mögliche Therapien zur Kontrolle von Biofilmen und zur Vorbeugung von Zahnkaries12,13.
Der weitere Fortschritt bei der Entdeckung neuer bioaktiver Verbindungen aus Pflanzen umfasst notwendige Schritte oder Ansätze wie: i) die Verwendung zuverlässiger und reproduzierbarer Protokolle für die Probenahme, wenn man bedenkt, dass Pflanzen häufig intraspezifische Variabilität aufweisen; ii) die Herstellung umfassender Extrakte und ihrer jeweiligen Fraktionen in kleinem Maßstab; iii) bei der Charakterisierung und/oder Dereplikation ihrer chemischen Profile die Erfassung multidimensionaler Daten wie GC-MS, LC-DAD-MS oder NMR, z. B. angenommen; iv) die Verwendung tragfähiger und ertragsfähiger Modelle zur Bewertung der Bioaktivität; v) die Auswahl potenzieller neuer Treffer auf der Grundlage multivariater Datenanalysen oder anderer statistischer Instrumente; vi) die Isolierung und Reinigung der zielgerichteten Verbindungen oder vielversprechenden Kandidaten durchzuführen; und (vii) die Validierung der entsprechenden biologischen Tätigkeiten unter Verwendung der isolierten Verbindungen2,14.
Dereplikation ist der Prozess der schnellen Identifizierung bekannter Verbindungen in Rohextrakt und ermöglicht die Unterscheidung neuartiger Verbindungen von denen, die bereits untersucht wurden. Außerdem verhindert dieser Prozess die Isolierung, wenn bioaktivität bereits für bestimmte Verbindungen beschrieben wurde, und es ist besonders hilfreich, "häufige Hitter" zu erkennen. Es wurde in verschiedenen ungezielten Arbeitsabläufen eingesetzt, von der großen zusammengesetzten Identifizierung oder der Beschleunigung der aktivitätsgesteuerten Fraktionierung bis hin zur chemischen Profilerstellung von Extraktsammlungen. Es kann vollständig in metabolomische Studien für die ungezielte chemische Profilierung von CE oder die gezielte Identifizierung von Metaboliten integriert werden. All dies führt letztlich dazu, Extrakte vor den Isolationsverfahren1,15,16,17zu priorisieren.
Daher beschreiben wir im vorliegenden Manuskript einen systematischen Ansatz zur Identifizierung antimikrobieller und antibiofilmieller Moleküle aus Pflanzenextrakten und -fraktionen. Es umfasst vier multidisziplinäre Schritte: (1) Sammlung von Pflanzenmaterial; (2) Herstellung von Rohextrakten (CE) und Fraktionen (CEF), gefolgt von ihrer Analyse des chemischen Profils; (3) Bioassays; und (4) biologische und chemische Datenanalysen (Abbildung 1). So präsentieren wir das Protokoll entwickelt, um die antimikrobiellen und antibiofilmischen Aktivitäten von Casearia sylvestris Extrakte und Fraktionen gegen Streptococcus mutans und Candida albicans13zu analysieren, sowie die Verfahren für die phytochemische Charakterisierung und Datenanalyse. Der Einfachheit halber liegt der Fokus dabei darauf, den Ansatz zum Screening natürlicher Verbindungen mit dem Bakterium zu demonstrieren.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61773/61773fig01v2.jpg"> Abbildung 1: Flussdiagramm des Systematischen Ansatzes zur Identifizierung aktiver Moleküle aus Pflanzenextrakten und -fraktionen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61773/61773fig01v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

<table><tbody><tr><td>96-Well-Mikrotiterplatten&nbsp;</td><td>Kasvi</td><td>Flachboden</td><td></td></tr><tr><td>Aktivkohle</td><td>LABSYNTH</td><td>Reinigungs- und/oder Fraktionierungsschritt</td><td></td></tr><tr><td>Analysemühle</td><td>Ika LabortechniK</td><td>Modell A11 Basic</td><td></td></tr><tr><td>Blutagarplatten</td><td>Laborclin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chromatographische Säule C18</td><td>Phenomenex Kinetex</td><td>150 & mal 2,1 mm, 2,6 & Mikro m, 100&Acirc;</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Vehikellösung</td><td></td></tr><tr><td>ELISA-Plattenleser</td><td>Biochrom Ez</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>J. T. Baker</td><td>Für Extraktions- und Fraktionierungsschritte und Zusammensetzung</td><td></td>mobiler Phasen</tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Vehikellösung</td><td></td></tr><tr><td>Ethylacetat</td><td>J. T. Baker</td><td>Fraktionierungsschritt</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Software</td><td>La Jolla</td><td>GraphPad Prism7</td><td></td></tr><tr><td>Hexan</td><td>J. T. Baker</td><td>Fraktionierungsschritt</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>J. T. Baker</td><td>Für den Extraktionsschritt</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilisierer (ein Gefriertrockner)</td><td>Savant</td><td>Modulyo</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Millipore</td><td>LAC</td><td>0,22 &micro; m x 13 mm</td><td></td></tr><tr><td>Orbitalschüttler</td><td>Quimis</td><td>Modell G816&thinsp; M20</td><td></td></tr><tr><td>Polyamid Festphasen-Extraktionskartusche</td><td>Macherey-Nagel</td><td>Reinigungs- und/oder Fraktionierungsschritt</td><td></td></tr><tr><td>Kieselgel</td><td>Merck</td><td>40&ndash; 63&dünnsp; &mu; m, 60&thinsp; &Acirc;</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td><td>Synth</td><td>0,89% in Wasser</td><td></td></tr><tr><td>Festphasen-Extraktionskartuschen (SPE)</td><td>Macherey-Nagel</td><td>Reinigungs- und/oder Fraktionierungsschritt</td><td></td></tr><tr><td>Trypton</td><td>Difco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UHPLC-DAD</td><td>Dionex</td><td>Ultimate 3000 RS</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschallbad</td><td>UNIQUE</td><td>Modell USC 2800</td><td></td></tr><tr><td>Hefeextrakt</td><td>Difco</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

systematischer ansatz zur identifizierung neuartiger antimikrobieller und antibiofilmmoleküle aus pflanzenextrakten und -fraktionen zur vorbeugung von zahnkaries

Systematic Approach to Identify Novel Antimicrobial and Antibiofilm Molecules from Plants' Extracts and Fractions to Prevent Dental Caries

Natürliche Produkte liefern strukturell unterschiedliche Substanzen, mit einer Vielzahl von biologischen Aktivitäten. Die Identifizierung und Isolierung von Wirkstoffen aus Pflanzen ist jedoch aufgrund der komplexen Pflanzenmatrix und der zeitaufwändigen Isolations- und Identifizierungsverfahren eine Herausforderung. Daher wird ein schrittweiser Ansatz zum Screening natürlicher Verbindungen aus Pflanzen, einschließlich der Isolierung und Identifizierung potenziell aktiver Moleküle, vorgestellt. Es umfasst die Sammlung des Pflanzenmaterials; Herstellung und Fraktionierung von Rohextrakten; Chromatographie und Spektrometrie (UHPLC-DAD-HRMS und NMR) Ansätze zur Analyse und Identifizierung von Verbindungen; Bioassays (antimikrobielle und antibiobiofilmische Aktivitäten; bakterielle "Haftfestigkeit" an der Speicheldrüsenpellicle und anfängliche Glucan-Matrix, die mit ausgewählten Behandlungen behandelt werden); datenanalyse. Das Modell ist einfach, reproduzierbar und ermöglicht eine konsistente Steuerung von Hochdurchsatzuntersuchungen mehrerer Verbindungen, Konzentrationen und Behandlungsschritte. Die gewonnenen Daten bilden die Grundlage für zukünftige Studien, einschließlich Formulierungen mit den aktivsten Extrakten und/oder Fraktionen, Isolierung von Molekülen, Modellierung von Molekülen zu spezifischen Zielen in mikrobiellen Zellen und Biofilmen. Ein Ziel zur Kontrolle des karogenen Biofilms besteht beispielsweise darin, die Aktivität von Streptococcus mutans Glucosyltransferasen zu hemmen, die die Glucane der extrazellulären Matrix synthetisieren. Die Hemmung dieser Enzyme verhindert den Biofilmaufbau und verringert seine Virulenz.

Wir liefern ein Beispiel für einen systematischen Ansatz, um die biologische Aktivität von Pflanzenextrakten und -fraktionen zu untersuchen, um potenziell aktive Moleküle für mögliche neue Antikariestherapien zu identifizieren: antimikrobielle und antibiobiofilmische Aktivitäten von Casearia sylvestris Extrakten aus verschiedenen brasilianischen Biomen gegen Streptococcus mutans und Candida albicans13.
Hintergrund Komplexe ...

Natürliche Produkte sind vielversprechende Ausgangspunkte für die Entwicklung neuer Medikamente und therapeutischer Mittel. Aufgrund der hohen chemischen Vielfalt ist es jedoch eine anspruchsvolle und zeitaufwändige Aufgabe, neue therapeutische Verbindungen aus Pflanzen zu finden. Wir beschreiben einen vereinfachten Ansatz zur Identifizierung von antimikrobiellen und antibiofilmen Molekülen aus Pflanzenextrakten und -fraktionen.

Systematischer Ansatz zur Identifizierung neuartiger antimikrobieller und Antibiofilmmoleküle aus Pflanzenextrakten und -fraktionen zur Vorbeugung von Zahnkaries

Natural products provide structurally different substances, with a myriad of biological activities. However, the identification and isolation of active ...

Das vorgestellte Protokoll wird zum korrekten Screening und Analysieren von bioaktiven Kandidaten in Naturprodukten zur Kontrolle oraler Biofilme verwendet. Es kann auch für Anwendungen in anderen Biofilmforschungsbereichen angepasst werden. Diese Stärke-Screening- und Analysemethode ermöglicht es, bioaktive Komponenten gleichzeitig zu entfernen.Zahnkaries ist eine Biofilm-Diät abgeleitet, weit verbreitete, chronische Krankheit. Dieses Protokoll kann helfen, natürliche Produkte zur Kontrolle von Biofilmen und damit zahnärztlichen Karies zu identifizieren. Beginnen Sie mit der Herstellung des Extraktionslösungsmittels mit einem hydroalkoholischen Gemisch.Sie proben Konzentrationen zwischen 50 und 100 Milligramm pro Milliliter des Extraktionslösungsmittels und führen 15-minütige Ultraschall-unterstützte Extraktionen in Mikroröhren durch. Wiederholen Sie die Extraktion dreimal. Zentrifugieren Sie nach jedem Extraktionsschritt die Probe, um den festen Rückstand zu entwirren und den Überstand zu entfernen.Kombinieren Sie die Überräube aus jedem Extraktionsschritt und filtern Sie sie. Speichern Sie die Aliquots für chemische Analysen und Bioassays. Zur Fraktionierung die Rohextraktprobe verdünnen, um eine 100 Milligramm pro Milliliter Lösung zu erhalten, mit dem anfänglichen Extraktionslösungsmittel.Dann übertragen Sie einen Milliliter dieser Probe auf eine vorkonditionierte Festphasen-Extraktionspatrone mit einem Gramm Absorbent und einer Kapazität von sechs Millilitern. Führen Sie die Fraktionierung mit etwa drei toten Volumes jeder Extraktions-LUN durch, und erfassen Sie einen Bruchteil nach LUN-Zusammensetzung. Speichern Sie Aliquots für chemische Analysen und Bioassays.Entfernen Sie das Lösungsmittel unter Vakuum, Stickstofffluss oder Lyophilisierung, und registrieren Sie Gewicht und Ausbeute. Rekonstituieren Sie die Trockenmasse mit den bestmöglichen Lösungsmitteln. Berechnen Sie die Lösungsmittelkonzentration für die Stammlösung unter Verwendung der Formel im Textmanuskript.Reaktivieren Sie den mikrobiellen Stamm von S.mutans UA 159 auf Blutagar, und kulturen Sie ihn in flüssigen Kulturmedium. Führen Sie eine Ein- bis 20-Verdünnung der Anfangskultur mit demselben Kulturmedium durch und inkubieren Sie sie, bis sie die Wachstumsphase mit dem mittleren Protokoll erreicht. Bereiten Sie das Inokulum mit einer definierten Population in TYEG auf antimikrobielle Assays und TYE mit 1%Saccharose für Biofilm-Assays vor.Für antimikrobielle Aktivität, definieren Sie die Konzentration der Probe für die Analyse, und fügen Sie sie zu einer 96-Well-Platte. Fügen Sie eine Reihe von Steuerelementen in jede Platte ein, wie im Textmanuskript beschrieben. Passen Sie mit TYEG das Volumen auf 100 Mikroliter an, impfen Sie 100 Mikroliter mikrobielle Kultur und inkubieren Sie die Platte 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius in 5% Kohlendioxid.Analysieren Sie das Bakterienwachstum nach Trübung durch visuelle Inspektion der Brunnen. Induplizieren Sie ein Aliquot der gewünschten Verdünnung in bestimmten Agarplatten in Duplikaten und inkubieren Sie die Platten. Führen Sie nach der Inkubation Koloniezählungen durch.Hydroxyapatitperlen in Mikroröhrchen wiegen und sterilisieren. Dann waschen Sie die Perlen, mit Adsorptionspuffer Ab.Add 500 Mikroliter Speichel in die Mikroröhren, um eine Speichelfolie zu bilden, und inkubieren bei 37 Grad Celsius mit 24 Umdrehungen pro Minute für 40 Minuten. Entfernen Sie den Speichelüberstand und waschen Sie die Perlen dreimal mit Ab, um sie für nachgeschaltete Tests vorzubereiten.Fügen Sie 500 Mikroliter der Probe oder die Kontrolle in jedes Mikrotube mit Perlen mit Speichelblatt Pellicle, und inkubieren Sie sie bei 24 Umdrehungen pro Minute und 37 Grad Celsius für 30 Minuten. Waschen Sie die Perlen dreimal mit Ab.Add 500 Mikroliter mikrobielle Kultur zu jedem Mikrorohr, und inkubieren Sie die Rohre unter ähnlichen Bedingungen für eine Stunde. Waschen Sie dann die ungebundenen Zellen dreimal mit Ab-Puffer.Setzen Sie jede Probe mit einem Milliliter Ab-Puffer aus, und zentrieren Sie sie 30 Sekunden lang bei sieben Watt. Die Aliquots jeder Suspension verdünnen, verzehnfacht und auf bestimmte Agarplatten plattieren. Inkubieren Sie die Platten für 48 Stunden bei 37 Grad Celsius in 5% Kohlendioxid, und zählen Sie die Kolonien.Geben Sie für die Datenanalyse die Rohdaten für die Bioassays in eine Kalkulationstabelle ein und berechnen Sie das Protokoll der mikrobiellen Wachstumshemmung durch jede Behandlung und den Log-Prozentsatz der mikrobiellen Wachstumshemmung im Vergleich zur Kontrolle. Korrigieren Sie die optische Dichte der Messwerte und berechnen Sie den Prozentsatz der Biomassehemmung. Das chemische Profil des biologischen Screenings für die Menge der Clerodane-Typ Diterpene und glykosylierten Flavonoide in drei Sorten von C.sylvestris Extrakten, nämlich Sylvestris, Zwischen- und Lingua, sind hier dargestellt.Nach Auswertung der Rohdaten zeigten vier Auszüge eine positive Reaktion. Die chromatographischen Daten dieser vier Extrakte zeigen das gleichzeitige Vorhandensein von Clerodane-Typ Diterpenen und glykosylierten Flavonoiden. Darüber hinaus enthalten sie das gleiche Biom und die gleiche Vielfalt.Berechnete Prozente der behandelten planktonischen Zellen, Prozent Biomasse der behandelten Biofilme und Prozent KBE des behandelten Biofilms werden hier gezeigt. Kein Rohextrakt beeinträchtigte signifikant die Entfernung von S.mutans Zellen, die an der Speicheldrüsen-Pellicle haften. Die Haftung von S.mutans-Zellen an der Glucan-Matrix wurde durch drei der rohen Extrakte geschwächt.Da jede Pflanzenart optimierte und spezifische chemische Analysemethoden erfordert, muss die beste Lösungsmittelfraktion und Analysemethode aus früheren Berichten ausgewählt oder versuchsweise definiert werden. Es ist wichtig, Formulierungen mit den aktivsten Rohextrakten und -fraktionen vorzubereiten und an komplexen Modellen zu testen, um die Entwicklung von Biofilmen und Hohlräumen zu verhindern.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Biofilme auf der Zahnoberfläche gebildet sind sehr komplex und in denen konstante angeborenen und exogene ökologischen Herausforderungen, die ihre Architektur modulieren, Physiologie und Transkriptom. Wir entwickelten eine Toolbox, um die Zusammensetzung, die strukturelle Organisation und Genexpression von oralen Biofilmen, die auf andere Bereiche der Biofilm-Forschung angepasst werden können zu prüfen.

Ein analytisches Werkzeug-Box für umfassende biochemische, strukturelle und Transkriptom Evaluation of Oral Biofilme von Mutans Streptokokken Mediated

Wir präsentieren ein Protokoll für die strukturelle und Analyse der Zusammensetzung der natürlichen oralen Biofilm aus kieferorthopädischen Apparaturen...

Oral Biofilm Analyse Palatal Expander durch Fluoreszenz in situ Hybridisierung und konfokale Laser Scanning Mikroskopie

Das Ziel dieser Verfahren ist es, die Papier Verwendung eines mikrofluidischen Systems für die Entwicklung von Mehrarten Biofilmen, die typischerweise bei humanen supragingivale Plaque identifiziert Arten enthalten beschreiben. Methoden, um die Biofilmarchitektur Biofilm Lebensfähigkeit und ein Konzept für die Ernte Biofilm für kulturabhängig oder kulturunabhängige Analysen hervorgehoben zu beschreiben.

Verwendung eines Hochdurchsatz-<em&gt; In-vitro-</em&gt; Mikrofluidik-System auf die mündliche Multi-Spezies-Biofilme entwickeln

Die meisten bakteriellen Infektionen erzeugen einen Biofilm. Biofilm-assoziierte Bakterien sind aufgrund ihrer Umgebung oft phänotypisch resistent gegen Medikamente. Neuartige antibakterielle Moleküle, die Bakterien in Biofilmen abtöten, haben daher hohe Priorität. Wir etablieren einen Assay, um schnell nach antimikrobiellen Verbindungen zu suchen, die bei der Beseitigung von Biofilmen wirksam sind.

Targeting Biofilm Assoziierte<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Verwendung von Resazurin Based Drug-Anfälligkeit Assay

Diese Studie präsentiert die Entwicklung reproduzierbarer Methoden zur Untersuchung von Biofilm-Inhibitoren und deren Auswirkungen auf die Bacillus subtilis-Vielzelligkeit.

Methodologien für das Studium<em&gt; B. subtilis</em&gt; Biofilme als Modell für kleine Molekül-Inhibitoren Biofilm Charakterisieren

Biofilminfektionen zeigen eine hohe Toleranz gegenüber Chemotherapien. Kein einzelner Assay erfasst die Komplexität von Biofilmen. Stattdessen werden komplementäre Assays benötigt. Wir präsentieren eine Screening-Plattform (entwickelt für S. aureus), die Assays für Viabilität, Biomasse und Biofilmmatrix kombiniert. Es ermöglicht die Entdeckung von Anti-Biofilm-Medikamenten, einschließlich der Bewertung langfristiger chemotherapeutischer Wirkungen.

Eine Plattform von Assays Anti-Biofilm auf die Erforschung der natürlichen Substanzbibliotheken Geeignet

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll für die antimikrobielle Charakterisierung von Materialien. Hier wird die antimikrobielle Wirkung auf Materialoberflächen gemessen durch zwei Methoden, die einander ergänzen: eine basiert auf dem Agar Festplatte Diffusion Test, und der andere ist ein Standardverfahren, basierend auf der ISO-Norm 22196:2007.

Antimikrobielle Charakterisierung der Hochleistungswerkstoffe für Bioengineering-Anwendungen

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur mündlichen Biofilmbildung auf Titan und Zirkonoxid Materialien für Zahnersatz Aufbauten, einschließlich der Analyse von Bakterienzellen Lebensfähigkeit und morphologische Eigenschaften zu bewerten. Der oralen Biofilm-Analyse dient eine in Situ -Modell mit mächtigen mikroskopiertechniken verbunden.

Mündliche Biofilmbildung auf unterschiedlichen Materialien für Zahnimplantate

Ein 96-Well-Mikrotiterplatten-basiertes Protokoll unter Verwendung eines 2,3-Bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-carboxanilid-2H-tetrazolium (XTT)-Reduktionstests wird hierin beschrieben, um die Auswirkungen von Antikörpern auf Biofilme zu untersuchen, die von C. tropicalis gebildet werden. Dieses In-vitro-Protokoll kann verwendet werden, um die Wirkung potenzieller neuer antimykotischer Verbindungen auf die metabolische Aktivität von Candida-Spezies-Zellen in Biofilmen zu überprüfen.

Ein löslicher Tetrazolium-basierter Reduktionstest zur Bewertung der Wirkung von Antikörpern auf Candida tropicalis-Biofilme

Muskelfunktion Messungen Beitrag zur Bewertung von potentiellen Therapeutika für Muskelpathologie sowie auf die Bestimmung der physiologischen Mechanismen, die von diesem Gewebe. Wir zeigen die Herstellung des Extensor digitorum longus und Zwerchfell Muskeln für Funktionstests. Protokolle für isometrische und exzentrische Kontraktionen wird gezeigt werden, ebenso wie Unterschiede in den Ergebnissen zwischen dystrophischen Muskeln, die einen pathologischen Zustand, und Wildtyp Muskeln.

Isometrische und exzentrische Krafterzeugung Beurteilung der Skelettmuskulatur Isoliert von Mausmodellen von Muskeldystrophien

Erfahren Sie ein vereinfachtes Screening-Protokoll zur Identifizierung antimikrobieller Pflanzenextrakte gegen orale Biofilme. Diese Methode nutzt hydroalkoholische Extraktion und Fraktionierung zur Bekämpfung von Streptococcus mutans.

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