Vierfach-Schachbrett: Eine Modifikation des dreidimensionalen Schachbretts zur Untersuchung von Arzneimittelkombinationen

Das vierfache Schachbrett ist eine Technik, die alle möglichen Kombinationen untersucht, die durch die Kombination von vier Medikamenten erzielt werden können, und es ist wichtig, eine Behandlung für resistente Mikroorganismen zu finden, hauptsächlich MDRs oder auch als multiresistente Mikroorganismen bekannt. Diese Technik ist nicht arbeitsintensiv und die Ergebnisse können am nächsten Tag oder nach Ablauf der Inkubationszeit erzielt werden. Darüber hinaus können alle möglichen Kombinationen und nicht nur spezifische und sehr begrenzte Kombinationen untersucht werden, die durch die Kombination dieser vier Medikamente und aller in einem Experiment erhalten werden können.

Darüber hinaus kann diese Technik in mehreren Disziplinen und nicht nur in der Mikrobiologie und sogar in der Mikrobiologie eingesetzt werden. Es können alle möglichen Kombinationen zwischen verschiedenen antimikrobiellen Mitteln und nicht nur antibakteriellen Mitteln untersucht werden. Neben dem mikrobiologischen Teil kann es verwendet werden, um Kombinationen zwischen Krebsmedikamenten, zwischen Pflanzenextrakten und Medikamenten und sogar zwischen molekularen wirksamen molekularen Behandlungspanels zu untersuchen.

Zubereitung 4 96 Platten nebeneinander legen, um mit einem Klebeband ein Quadrat zu formen, den Boden zusammenkleben. Wiederholen Sie diesen Schritt, um vier Platten zu erhalten, die jeweils vier Platten enthalten, und nennen Sie sie eins, A zwei, a drei und vier. Fügen Sie 50 Mikroliter Müller hinzu.

Hinweis und Brühe zu den Vertiefungen zwischen Säule zwei und Säule 11 in den 1696 geben Vertiefungsplatten der vier Tafeln 200 Mikroliter Müller-Hinton-Brühe in die Vertiefung H 12, die als Negativkontrolle dient. Nun, in den 1696 Vertiefungsplatten der vier Platten fügen Sie eine 50 Mikroliter Müller Hinton Brühe zu den Vertiefungen hinzu, A eine und H eine, die als Positivkontrollvertiefungen dient, in der 1696 Vertiefung Platten der vier Platten Medikament eins Cefotaxim serielle Verdünnung zu einem konischen Röhrchen bei 15 ml. Steriles destilliertes Wasser.

Berechnen Sie das Volumen, das aus der Stammlösung des Arzneimittels entfernt werden soll, nach der Formel C eins V eins gleich C zwei V zwei. Entfernen Sie das berechnete Volumen aus dem sterilen destillierten Wasser von 15 ml und fügen Sie das gleiche Volumen der Arzneistoff-Stammlösung hinzu. In die konische Röhrchenpipette geben Sie 50 Mikroliter der zubereiteten Arzneilösung in jede Vertiefung in Spalte 11 und Spalte 12, mit Ausnahme der Vertiefung H 12, und beginnen Sie die serielle Verdünnung, indem Sie 50 Mikroliter aus Spalte 11 entnehmen und in die entsprechenden Vertiefungen in Spalte 10 geben. und dann von 10 bis zum Erreichen der zweiten Spalte, wo die 50 Mikroliter aus der zweiten Spalte verworfen werden. Wiederholen Sie die serielle Verdünnung für jede der 1696-Well-Platten der vier Panels.

Medikament zwei Amika serielle Verdünnung in ein konisches Röhrchen bei 10 ml. Steriles destilliertes Wasser. Berechnen Sie das Volumen, das aus der Stammlösung des Arzneimittels entfernt werden soll.

Entfernen Sie das berechnete Volumen aus dem 10 ml sterilen destillierten Wasser und geben Sie das gleiche Volumen der Arzneimittelstammlösung in das konische Röhrchen. Nehmen Sie eine separate 96-Well-Platte, geben Sie hundert Mikroliter sterile Mueller-Hinton-Brühe in die Vertiefungen zwischen Rose G und B.In dieser Platte, fügen Sie hundert Mikroliter des zuvor vorbereiteten Arzneimittels hinzu. Zwei, Lösung zu den Vertiefungen der Reihe G.Verdünnen Sie seriell von Reihe G zu Reihe B, indem Sie hundert Mikroliter aus jeder Vertiefung in RO G entnehmen.Und schließlich verwerfen Sie die hundert Mikroliter aus den Vertiefungen der Reihe B.Wiederholen Sie diese Schritte, um acht separate 96-Well-Platten vorzubereiten Transfer von Medikament zwei auf die vier Paneele pipettieren Sie 50 Mikroliter Medikament zwei aus den Vertiefungen zwischen den Reihen G und B in die Entsprechende Vertiefungen in jeder Platte in den vier Paneelen, wobei eine vorbereitete 96-Well-Platte hundert Mikroliter des Arzneimittels zwei enthält.

Das reicht für zwei Platten in einem Panel-Medikament. Drei lebende Lenden zusätzlich zu vier verschiedenen konischen Röhrchen mit 14 ml sterilem destilliertem Wasser. Berechnen Sie das Volumen, das aus der Stammlösung des Arzneimittels entfernt werden soll.

Entfernen Sie das berechnete Volumen aus dem sterilen destillierten Wasser von 14 ml aus jedem Röhrchen und fügen Sie das entsprechende Volumen des Arzneimittels hinzu. Nachdem Sie die erforderlichen Konzentrationen des dritten Arzneimittels hergestellt haben, nehmen Sie 50 Mikroliter und geben Sie sie in die entsprechenden Vertiefungen zwischen den Reihen B und G sowie in die Spalten zwei und 12 in der entsprechenden Platte. In jeder Platte, wobei C eins den vier P eins Platten entspricht und die vier Platten C zwei den vier P zwei Platten und die vier Platten C3 den vier P drei Platten und die vier Platten und C vier den vier P vier Platten und den vier Platten Medikament vier Trimethoprim Sulfamethoxazol Zugabe zu einem konischen Röhrchen entspricht, werden 14 ml zugegeben.

Bemühen Sie sich um destilliertes Wasser. Berechnen Sie das Volumen, das aus der Stammlösung des Arzneimittels entfernt werden soll. Entfernen Sie das berechnete Volumen aus dem 14 ml sterilen destillierten Wasser jedes Röhrchens und fügen Sie das erforderliche Volumen des Arzneimittels hinzu.

Nachdem Sie die erforderlichen Konzentrationen des vierten Arzneimittels hergestellt haben, nehmen Sie 50 Mikroliter und geben Sie sie in die entsprechenden Vertiefungen zwischen den Reihen B und G sowie den Spalten zwei und 12. In den vier Platten in der entsprechenden Tafel, wobei C eins der Tafel eins entspricht, entspricht C zwei der Tafel zwei C3, entspricht der Tafel drei und C vier der Tafel vier. Präparation und Zugabe des bakteriellen Inokulums gleich I-E-S-B-L mittels sterilem Schleifentransfer.

Eine Kolonie des Bakterienisolats entspricht der zuvor auf einer Platte kultivierten Platte in zwei ml sterile Mueller-Hinton-Brühe und Wirbel Prüfen Sie, ob die Trübung 0,5 betragen sollte. McFarland mit einer Dichte: Geben Sie eine sterile TML-Mueller-Hinton-Brühe in den sterilen Urinbecher. Geben Sie ein bakterielles Inokulum aus dem 0,5-McFarland-Inokulum in den Urinbecher nach der Formel: C eins V eins entspricht C zwei V zwei, wobei V eins 800 Mikroliter entspricht Pipettieren Sie 50 Mikroliter der Inokulumlösung und geben Sie in jede Vertiefung mit Ausnahme von H 12, das die Sterilitätskontrolle ist, die Platten über Nacht bei 37 Grad Celsius inkubieren. Diese Abbildung stellt Feld A eins dar. Die Farbverweilungen sind die Vertiefungen, die das Bakterienwachstum enthalten, und die schwarzen Pfeile stellen die Vertiefungen auf dem Wachstum dar.

Keine Wachstumsschnittstelle in Platte eins, Platte zwei und Platte drei. Wir können sehen, dass es eine Hemmung in Reihe D gibt, die eine über acht MHK von Amikacin enthält, zusätzlich zu mehreren Untergruppen von Cefotaxim und Levofloxacin zusätzlich zu einer über acht MHK von Trimethoprim sulfamethoxazol in Platte vier. Wir stellen fest, dass in dem Quadranten, der die Kombination enthält, kein Bakterienwachstum zu sehen ist.

Dies liegt daran, dass wir in dieser Platte die MHK von Levofloxacin haben, die das Wachstum vollständig hemmt. Abbildung eins B stellt Feld zwei dar. In diesem Panel können wir sehen, dass die Hemmung des Bakterienwachstums auch bei RD zu sehen ist, das Sub ics von Cefotaxim und Levofloxacin zusätzlich zu einem über acht MIC von Amikacin und einem über vier MIC von Trimethoprim Sulfamethoxazol enthält. Abbildung eins C repräsentiert Panel A drei.

In dieser Abbildung können wir sehen, dass die Hemmung des Bakterienwachstums in den Reihen C und D zu sehen ist, die mehrere Untergruppen von Cefotaxim und Levofloxacin enthalten und zusätzlich zu einer halben MHK Trimethoprim Sulfamethoxazol und einer über vier MHK von Amikacin in Reihe C und einer über zwei MHK von Amikacin in Reihe D enthalten. Abbildung 1D stellt Feld A vier dar. In diesem Panel haben wir eine MHK von Trimethoprim Sulfamethoxazol in Kombination mit mehreren Konzentrationen von Cefotaxim, Amikacin und Levofloxacin. In dieser Abbildung können wir sehen, dass das Bakterienwachstum in dem Quadranten, der die Kombination enthält, vollständig gehemmt ist, wobei diese Hemmung die Wirkung der einen MHK von Trimethoprim Sulfamethoxazol in Blatt FIC ist, alles in der Excel-Datei.

Die Tabelle zeigt die endgültige Klang-FIC mit der Interpretation des erhaltenen Wertes. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Q-Schachbretttechnik alle möglichen Kombinationen zwischen vier Medikamenten in einem einzigen Experiment untersucht. Die Ergebnisse werden am nächsten Tag erhalten und anhand einer Excel-Vorlage einfach und schnell interpretiert.