Name: Klassifizierung des Aktivierungszustands neuraler Stammzellen in vitro mittels Autofluoreszenz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie Aktivierungszustände neuronaler Stammzellen aus adulten Mäusen mittels Autofluoreszenz-Bildgebung und FACS klassifizieren. Diese markierungsfreie Methode ermöglicht die Analyse lebender Zellen mit Einzelzellauflösung.

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<ol><li>Goncalves, J. T., Schafer, S. T., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+in+the+hippocampus%3A+From+stem+cells+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis in the hippocampus: From stem cells to behavior.</a> Cell. 167 (4), 897-914 (2016).</li>
<li>Kuhn, H. G., Dickinson-Anson, H., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+dentate+gyrus+of+the+adult+rat%3A+age-related+decrease+of+neuronal+progenitor+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the dentate gyrus of the adult rat: age-related decrease of neuronal progenitor proliferation.</a> J Neurosci. 16 (6), 2027-2033 (1996).</li>
<li>Silva-Vargas, V., Maldonado-Soto, A. R., Mizrak, D., Codega, P., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+niche+signals+from+the+choroid+plexus+regulate+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Age-dependent niche signals from the choroid plexus regulate adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 19 (5), 643-652 (2016).</li>
<li>Urban, N., Blomfield, I. M., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescence+of+adult+mammalian+neural+stem+cells%3A+A+highly+regulated+rest%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Quiescence of adult mammalian neural stem cells: A highly regulated rest.</a> Neuron. 104 (5), 834-848 (2019).</li>
<li>Urban, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+to+quiescence+of+mouse+neural+stem+cells+by+degradation+of+a+proactivation+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Return to quiescence of mouse neural stem cells by degradation of a proactivation protein.</a> Science. 353 (6296), 292-295 (2016).</li>
<li>Kalamakis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescence+modulates+stem+cell+maintenance+and+regenerative+capacity+in+the+aging+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Quiescence modulates stem cell maintenance and regenerative capacity in the aging brain.</a> Cell. 176 (6), 1407-1419 (2019).</li>
<li>Walsh, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+T-cell+activation+via+autofluorescence+lifetime+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Classification of T-cell activation via autofluorescence lifetime imaging.</a> Nat Biomed Eng. 5 (1), 77-88 (2021).</li>
<li>Sagar, M. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+activation+visualization+via+fluorescence+lifetime+imaging+microscopy+of+intrinsically+fluorescent+metabolic+cofactors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Microglia activation visualization via fluorescence lifetime imaging microscopy of intrinsically fluorescent metabolic cofactors.</a> Neurophotonics. 7 (3), 035003(2020).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+control+of+adult+neural+stem+cell+activity+by+Fasn-dependent+lipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Metabolic control of adult neural stem cell activity by Fasn-dependent lipogenesis.</a> Nature. 493 (7431), 226-230 (2013).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fatty+acid+oxidation-dependent+metabolic+shift+regulates+adult+neural+stem+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A fatty acid oxidation-dependent metabolic shift regulates adult neural stem cell activity.</a> Cell Rep. 20 (9), 2144-2155 (2017).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPOT14-positive+neural+stem%2Fprogenitor+cells+in+the+hippocampus+respond+dynamically+to+neurogenic+regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">SPOT14-positive neural stem/progenitor cells in the hippocampus respond dynamically to neurogenic regulators.</a> Stem Cell Reports. 3 (5), 735-742 (2014).</li>
<li>Shin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA-Seq+with+waterfall+reveals+molecular+cascades+underlying+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA-Seq with waterfall reveals molecular cascades underlying adult neurogenesis.</a> Cell Stem Cell. 17 (3), 360-372 (2015).</li>
<li>Leeman, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+activation+clears+aggregates+and+enhances+quiescent+neural+stem+cell+activation+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosome activation clears aggregates and enhances quiescent neural stem cell activation during aging.</a> Science. 359 (6381), 1277-1283 (2018).</li>
<li>Beckervordersandforth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+metabolism-mediated+regulation+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Plast%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial metabolism-mediated regulation of adult neurogenesis.</a> Brain Plast. 3 (1), 73-87 (2017).</li>
<li>Morrow, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+is+a+biomarker+of+neural+stem+cell+activation+state%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence is a biomarker of neural stem cell activation state.</a> Cell Stem Cell. , (2024).</li>
<li>Kolenc, O. I., Quinn, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+cell+metabolism+through+autofluorescence+imaging+of+NAD%28P%29H+and+FAD%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Evaluating cell metabolism through autofluorescence imaging of NAD(P)H and FAD.</a> Antioxid Redox Signal. 30 (6), 875-889 (2019).</li>
<li>Mira, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+BMPR-IA+regulates+quiescence+and+long-term+activity+of+neural+stem+cells+in+the+adult+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Signaling through BMPR-IA regulates quiescence and long-term activity of neural stem cells in the adult hippocampus.</a> Cell Stem Cell. 7 (1), 78-89 (2010).</li>
<li>Morrow, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vimentin+coordinates+protein+turnover+at+the+aggresome+during+neural+stem+cell+quiescence+exit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Vimentin coordinates protein turnover at the aggresome during neural stem cell quiescence exit.</a> Cell Stem Cell. 26 (4), 558-568 (2020).</li>
<li>Martynoga, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenomic+enhancer+annotation+reveals+a+key+role+for+NFIX+in+neural+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Epigenomic enhancer annotation reveals a key role for NFIX in neural stem cell quiescence.</a> Genes Dev. 27 (16), 1769-1786 (2013).</li>
<li>Bin Imtiaz, M. K., Jessberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+mouse+hippocampal+neural+stem+cells+for+fluorescence+loss+in+photobleaching+assays%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult mouse hippocampal neural stem cells for fluorescence loss in photobleaching assays.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100695(2021).</li>
<li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nat Protoc. 7 (11), 2005-2012 (2012).</li>
<li>Lakowicz, J. R., Szmacinski, H., Nowaczyk, K., Johnson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+lifetime+imaging+of+free+and+protein-bound+NADH%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fluorescence lifetime imaging of free and protein-bound NADH.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89 (4), 1271-1275 (1992).</li>
<li>Blacker, T. S., Duchen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+mitochondrial+redox+state+using+NADH+and+NADPH+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence.</a> Free Radic Biol Med. 100, 53-65 (2016).</li>
<li>Datta, R., Heaster, T. M., Sharick, J. T., Gillette, A. A., Skala, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+lifetime+imaging+microscopy%3A+fundamentals+and+advances+in+instrumentation%2C+analysis%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Fluorescence lifetime imaging microscopy: fundamentals and advances in instrumentation, analysis, and applications.</a> J Biomed Opt. 25 (7), 1-43 (2020).</li>
<li>ImageJ. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> (2021).</li>
<li>Becker & Hichl Handbooks. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> (2024).</li>
<li>GitHub Materials. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://github.com/chrismorrow5/Neural-Stem-Cell-Autofluorescence-Analysis/">https://github.com/chrismorrow5/Neural-Stem-Cell-Autofluorescence-Analysis/</a> (2024).</li>
<li>Codega, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+and+purification+of+quiescent+adult+neural+stem+cells+from+their+in+vivo+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Prospective identification and purification of quiescent adult neural stem cells from their in vivo niche.</a> Neuron. 82 (3), 545-559 (2014).</li>
<li>Llorens-Bobadilla, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+reveals+a+population+of+dormant+neural+stem+cells+that+become+activated+upon+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics reveals a population of dormant neural stem cells that become activated upon brain injury.</a> Cell Stem Cell. 17 (3), 329-340 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>40x Wasserobjektiv</td><td>Nikon</td><td>MRD77410</td><td>Objektiv für ein Multiphotonenmikroskop in Teil 3</td></tr><tr><td>8-Well-Küvette</td><td>Ibidi</td><td>80826-90</td><td>Für die Bildgebung von aNSCs/qNSCs</td></tr><tr><td>Analoges Leistungsmessgerät</td><td>Thorlabs</td><td>PM100A</td><td>Wird im Multiphotonenmikroskop verwendet in Teil 3</td></tr><tr><td>Antibiotikum-Antimykotikum (100X) (PSF)</td><td>Thermo Fisher</td><td>15240062</td><td>Antibiotikum für NSC-Medien</td></tr><tr><td>B-27</td><td>Invitrogen</td><td>17504044</td><td>Nahrungsergänzungsmittel für NSC-Medien</td></tr><tr><td>BMP4</td><td>Fisher Scientific</td><td>5020BP010</td><td>Faktor zur Induktion der Ruhe</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Sigma</td><td>A4919-25G</td><td>Zur Herstellung von BMP4</td></tr><tr><td>Chamäleon-Ultrakurzpulslaser</td><td>Kohärenter</td><td>N/A-Laser</td><td>verwendet im Multiphotonenmikroskop in Teil 3</td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Nikon</td><td>C2</td><td>Mikroskop für Teil 1</td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (ohne GlutaMAX)</td><td>Invitrogen</td><td>11320033</td><td>Basismedien für NSCs</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5025-15KU</td><td>Dem Trypsin-Inhibitor</td></tr><tr><td>EdU-Assay-Kit</td><td>hinzugefügt Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Proliferationsassay für Zellkultur</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15-500UG</td><td>Wachstumsfaktor für NSC-Medien</td></tr><tr><td>FGF</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td>Wachstumsfaktor für NSC-Medien</td></tr><tr><td>Fluoreszenzaktivierter Zellsortierer</td><td>BD</td><td>FACSAria</td><td>Fluoreszenzaktivierter Zellsortierer für Teil 2</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H3149-50KU</td><td>Additiv für NSC-Medien</td></tr><tr><td>L-15</td><td>Invitrogen</td><td>21083027</td><td>Zur Herstellung der Trypsin-Inhibitor-Lösung</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma</td><td>L2020-1MG</td><td>Zum Beschichten von Glaswaren</td></tr><tr><td>Nikon TiE inverses Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>N/A</td><td>Mikroskoprahmen Verwendet für Teil 3</td></tr><tr><td>PLO</td><td>Sigma</td><td>P3655-100MG</td><td>Zum Beschichten von Glaswaren</td></tr><tr><td>SPC-150 Einzelphotonenzählelektronik</td><td>Becker und Hickl</td><td>N/A</td><td>Verwendet im Multiphotonenmikroskop in Teil 3</td></tr><tr><td>Trypsin (zum Trypsinisieren von Pellets von aNSCs, die als Kugeln oder Monoschichten wachsen)</td><td>Gibco</td><td>15090046</td><td>Zur Trypsinisierung von Neurosphären oder adhärenten aNSCs</td></tr><tr><td>Trypsin (zur Trypsinisierung von qNSCs)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td>Zur Trypsinisierung von adhärenten qNSCs</td></tr><tr><td>Trypsin-Inhibitor</td><td>Sigma</td><td>T6522-100MG</td><td>Zur Hemmung der Trypsinisierung von aNSCs</td></tr><tr><td>Harnstoffkristalle</td><td>Sigma</td><td>U5128-5G</td><td>Wird zur Sammlung eines IRF</td></tr><tr><td>verwendet Versene</td><td>Thermo Fisher</td><td>15040066</td><td>Zur Zubereitung von Trypsin</td></tr></tbody></table>

klassifizierung des aktivierungszustands neuraler stammzellen in vitro mittels autofluoreszenz

Classification of Neural Stem Cell Activation State In Vitro Using Autofluorescence

Konfokale Autofluoreszenzbildgebung zur Trennung des NSC-Zellzustands (Abbildung 1) Um die konfokale Mikroskopie zur Auflösung des NSC-Aktivierungszustands zu verwenden, wurden qNSCs und aNSCs in vitro entweder unter Verwendung eines Aktivierungsmediums oder eines Ruhemediums erzeugt, wie zuvor beschrieben 10,13,17,18. Zum Nachweis von PAF in NSCs wurden lebende qNSCs und aNSCs mit der gleichen Belichtung auf einem konfokalen Mikroskop abgebildet (Bsp.: 405 nm, Em: 580-620 nm). qNSCs wiesen im Vergleich zu aNSCs eine höhere Anzahl von PAF auf (Abbildung 1A,B). Diese Erkenntnis zeigt, wie Autofluoreszenzeigenschaften als Marker verwendet werden können, um den Zellzustand von qNSCs und aNSCs zu identifizieren.
FACS-Anreicherung des NSC-Zellzustands mittels Autofluoreszenz (Abbildung 2) Zur Anreicherung für den Zellzykluszustand mittels FACS wurden qNSCs und aNSCs in vitro 10,13,17,18,19 wie in diesem Protokoll beschrieben erzeugt und vor der Trypsinisierung und Analyse im Durchflusszytometer 1 h lang mit EdU vormarkiert, um Zellen zu markieren, die die S-Phase durchlaufen. qNSCs und aNSCs wurden dann mittels Durchflusszytometrie entweder getrennt oder gemischt in einem Verhältnis von 1 qNSC:1 aNSC analysiert (Abbildung 2 <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig03large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Table%201%20-%20Solution%20Recipes.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Table%202%20-%20Example%20Data.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%201.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%202.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%203.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%204.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%205.zip" target="_blank"></a>

Klassifizierung des Aktivierungszustands neuraler Stammzellen in vitro mittels Autofluoreszenz

Neural stem cells (NSCs) divide and produce newborn neurons in the adult brain through a process called adult neurogenesis. Adult NSCs are primarily ...

classification-neural-stem-cell-activation-state-vitro-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video zeigt Techniken für die Kennzeichnung von menschlichen embryonalen Stammzellen und mesenchymalen Stammzellen mit fluoreszierenden Farbstoffen. Diese Technik kann für eine in vivo Verfolgung der transplantierten Stammzellen mit optischen Bildgebung und zur histopathologischen Korrelation mit Fluoreszenzmikroskopie eingesetzt werden.

Labeling Stammzellen mit fluoreszierenden Farbstoffen zur nicht-invasiven Detektion mit Optical Imaging

Mit dem wachsenden Interesse an Stammzelltherapien, sind molekulare Bildgebungsverfahren ideal für die Überwachung Stammzellen Verhalten nach der Transplantation. Luciferase Reporter Gene nicht-invasive, repetitive Beurteilung der das Überleben der Zelle, den Standort und Verbreitung in vivo ermöglicht. Dieses Video wird gezeigt, wie man hESC Proliferation in einer lebenden Maus zu verfolgen.

In vitro und in vivo Biolumineszenz Reporter Gene Imaging von humanen embryonalen Stammzellen

Diese Video-Protokoll zeigt ein neues Verfahren zur Erzeugung und anschließender Reinigung von neuronalen Vorläuferzellen aus einer erneuerbaren Quelle von neuralen Stammzellen (NSC) an körperlicher (Größe und Granularität internen) und fluoreszierenden Eigenschaften unter Verwendung von Durchflusszytometrie-Technologie.

Die Neuroblast Assay: Ein Test für die Erzeugung und Anreicherung von neuronalen Vorläuferzellen aus neuralen Stammzellen differenzieren Progeny mittels Durchflusszytometrie

Dieses Video zeigt das Verfahren zum Färben neu proliferierter neuraler Stammzellen in Hirngewebeschnitten mittels EdU-Inkorporation, gefolgt von Immunfluoreszenz zur Visualisierung spezifischer Proteine, was das Verständnis der Zelldynamik und -proliferation verbessert.

Immunfluoreszenzfärbung zur Visualisierung proliferierter neuraler Stammzellen in Hirnschnitten von Mäusen

Quelle: Daynac, M., et. al. Zellsortierung von neuralen Stamm- und Vorläuferzellen aus der subventrikulären Zone adulter Mäuse und Live-Bildgebung ihrer Zellzyklusdynamik. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt die Zeitraffer-Bildgebung von neuralen Stammzellen (NSCs) aus einem transgenen Mausgehirn unter Verwendung eines konfokalen Laser-Scanning-Mikroskops. NSCs fluoreszieren während der G1-Phase rot und sind in anderen Zellzyklusphasen nicht fluoreszierend. Eine adhärente NSC-Kultur wird in...

Zeitraffer-Bildgebung der neuralen Stammzellteilung von Mäusen mittels konfokaler Mikroskopie

Quelle: Sharma, A. D., et.al. Hochdurchsatz-Charakterisierung von adulten Stammzellen, die für die Verabreichung von therapeutischen Faktoren für neuroprotektive Strategien entwickelt wurden. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt den Prozess der Charakterisierung transgener mesenchymaler Stammzellen, die so verändert wurden, dass sie therapeutische neurotrophe Faktoren exprimieren. Es werden die Schritte beschrieben, die bei der Fixierung, Permeabilisierung und Färbung der Zellen mit primären...

Charakterisierung von gentechnisch veränderten mesenchymalen Stammzellen für neurotherapeutische Anwendungen

Dieses Protokoll beschreibt die Entwicklung, Expansion und in-vivo-Bildgebung von NK-Zellen aus hES-und iPS-Zellen abgeleitet.

Entwicklung, Erweiterung und<em&gt; In vivo</em&gt; Monitoring von humanen NK Zellen aus humanen embryonalen Stammzellen (hES-Zellen) und und induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen)

Wir bieten eine detaillierte Beschreibung eines Protokolls für die durchflusszytometrische Analyse von Oberflächenantigenen und/oder intrazellulären Antigenen in neuralen Zelltypen. Kritische Aspekte der Versuchsplanung, methodische Schritte und grundlegende Prinzipien der Durchflusszytometrie werden erläutert, um Neurobiologen in die Lage zu versetzen, diese leistungsstarke Technologie zu nutzen.

Flow Cytometry Protokolle für Oberflächen- und intrazelluläre Antigen Analysen Neuronale Zelltypen

Wir berichten über eine auf Fluoreszenz aktivierte Zellsortierung (FACS) basierende Methode, um neurale Stammzellen (NSCs) und ihre Nachkommen aus der subventrikulären Zone (SVZ) des adulten Mäusegehirns zu isolieren. Angewendet auf FUCCI-transgene Mäuse (Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator) ermöglicht es die Untersuchung des Zellzyklusverlaufs durch Live-Bildgebung.

Zellsortierung von Neural Stamm- und Vorläuferzellen aus dem erwachsenen Maus Subventrikularzone und Live-Bildgebung ihrer Zellzyklus Dynamics

Neurale Stammzellen (NSCs) beziehen sich auf Zellen, die selbst zu erneuern und differenzieren sich in die drei neuronale Abstammungslinien. Hier beschreiben wir ein Protokoll NSC Frequenz in einer gegebenen Zellpopulation zu bestimmen, Neurosphärenbildung und Differenzierung unter klonalen Bedingungen.

Enumeration neuraler Stammzellen verwenden Geklonte Assays

Die Fähigkeit, Stammzellen und ihre Nachkommen mit einem Fluorophor unter Verwendung einer induzierbaren transgenen Linienverfolgungs-Mauslinie dauerhaft zu markieren, ermöglicht eine räumliche und zeitliche Analyse von Aktivierung, Proliferation, Migration und / oder Differenzierung in vivo. Die Abstammungsverfolgung kann neue Informationen über die Verpflichtung der Abstammung, die Reaktion auf Interventionen und die Multipotenz aufdecken.

Abstammungsverfolgung von induzierbaren fluoreszenzmarkierten Stammzellen im erwachsenen Mäusegehirn

Erfahren Sie, wie Sie Aktivierungszustände neuronaler Stammzellen aus adulten Mäusen mittels Autofluoreszenz-Bildgebung und FACS klassifizieren. Diese markierungsfreie Methode ermöglicht die Analyse lebender Zellen mit Einzelzellauflösung.

Klassifizierung des Aktivierungszustands neuraler Stammzellen in vitro mittels Autofluoreszenz

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