Name: Chemische Kartographie Ansätze zur Untersuchung der Trypanosomatideninfektion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-21T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Erfahren Sie chemische Kartographie zur Untersuchung von Trypanosomatideninfektionen. Diese Methode ermöglicht die 3D-Visualisierung von Metabolitenverteilung und Parasitenlast im Gewebe.

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Laura-Isobel McCall, PhD, ist Preisträgerin des Investigators in the Pathogenesis of Infectious Disease Award des Burroughs Wellcome Fund. Die Autoren möchten ferner die Unterstützung durch die NIH-Auszeichnungsnummer R21AI148886, ein Pilotstipendium des Oklahoma Center for Respiratory and Infectious Diseases (OCRID) unter der NIH-Preisnummer P20GM103648 und Startkapital der University of Oklahoma (an LIM) würdigen. Der Inhalt liegt ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und stellt nicht unbedingt die offiziellen Ansichten der Geldgeber dar. Die Autoren möchten sich auch bei den Entwicklern der in diesem Protokoll verwendeten Tools bedanken. Gegebenenfalls wurden alle relevanten Publikationen zitiert.

Keine zu meldenden Interessenkonflikte.

Das Verständnis von Trypanosomatid-Infektionen ist unerlässlich, um neuartige Arzneimittelentwicklungs- und Behandlungsansätze zu leiten. Diese chemische Kartographiemethode ist einzigartig aufgestellt, um umsetzbare Einblicke in die Beziehung zwischen Stoffwechsel und Trypanosomatid-Krankheitspathogenese zu liefern und so diesen translationalen Bedarf zu decken.
Bei der Metabolitenextraktion und ms-Analysen werden nur Lösungsmittel in LC-MS-Qualität empfohlen, um die Hintergrundkontamination zu verringern. Polymere Verunreinigungen35, die üblicherweise aus Paraffinfolien und/oder anderen Kunststoffen stammen36,37,38, sind nach Möglichkeit zu vermeiden. Insbesondere Parafilm darf niemals verwendet werden. Diese Aspekte sind von entscheidender Bedeutung, da die LC-MS-Datenqualität von den Materialien abhängt, die bei der Probenvorbereitung und Metabolitenextraktion verwendet werden. Die Datenqualität sollte vor der Erstellung von "ili-Plots" sichergestellt werden. Darüber hinaus erfordert die Erstellung dieser umfassenden räumlichen Metabolomik-Karten die Sammlung aller benachbarten Gewebeproben und die Extraktion von Metaboliten aus allen gesammelten Proben, um Lücken in diesen Karten zu vermeiden. Die Sammelverfahren, die Logistik der Metabolitenextraktion und die LC-MS-Analyse sowie die Kosten sollten daher entsprechend berücksichtigt und geplant werden.
Dieses Protokoll kann auf verschiedene Arten geändert werden, um die Benutzeranforderungen zu erfüllen. Beispielsweise beeinflussen die Polarität und Löslichkeit von Lösungsmitteln, die während der Metabolitenextraktion verwendet werden, welche Metaboliten nachgewiesen werden39. Um die Vielfalt der nachgewiesenen Metabolitenmerkmale für ungezielte chemische Kartographieanalysen zu maximieren, wird die Kombination mehrerer Extraktionsschritte und Lösungsmittel empfohlen. Zum Beispiel verwendet diese Methode Dichlormethan, Methanol und Wasser als Extraktionslösungsmittel, da sie einen genauen Nachweis von unpolaren und polaren Molekülen ermöglichen20,40. Diese Lösungsmittel sind jedoch nicht universell für jedes MS-Experiment geeignet, und forscher sollten Extraktionslösungsmittel basierend auf den Zielen ihres Projekts auswählen. Ebenso können verschiedene LC-MS/MS-Bedingungen verwendet werden, wie z.B. das Ersetzen der Umkehrphasenchromatographie durch die Normalphasenchromatographie. Alternative Säulen können auch für die Erfassung von Umkehrphasendaten anstelle der C8-Chromatographie verwendet werden, obwohl die C8-Chromatographie empirisch robuster gegenüber Gewebelipiden ist und eine geringere Verstopfungshäufigkeit aufweist. Konzeptionell können diese Protokolle auch auf andere massenspektrometrische Methoden wie Gaschromatographie-Massenspektrometrie usw. angewendet werden.
Ein alternativer Ansatz ist die massenspektrometrische Bildgebung. Im Gegensatz zu massenspektrometrischen Bildgebungsansätzen bewahrt die Flüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie die räumliche Information nicht von Natur aus10. Chemische Kartographieansätze schließen diese Lücke, indem sie den Probenstandort zum Zeitpunkt der Projektkonzeption, in die Probenmetadaten und in die Datenverarbeitungsschritte einbeziehen. Eine Stärke dieses chemischen Kartographieansatzes ist im Gegensatz zur massenspektrometrischen Bildgebung die Fähigkeit, zuverlässige Anmerkungen zu liefern (Metabolomics Standards Initiative Level 1 oder Level 2 Annotation Confidence41), im Gegensatz zur massenspektrometrischen Bildgebung, bei der der Großteil der Anwendungen nur für die Annotation auf genaue Masse angewiesen ist. Die massenspektrometrische Bildgebung ermöglicht eine feinkörnige räumliche Kartierung, manchmal bis auf die Einzelzellebene, z. B. 42,43. Im Gegensatz dazu ermöglichen chemische Kartographieansätze eine großräumige organübergreifende Kartierung der Metabolitenverteilung, ohne dass hochspezialisierte Kryosektionsfähigkeiten für ganze Tiere erforderlich sind. Die chemische Kartographie liefert ergänzende Beweise für die vielen räumlichen transkriptomischen Ansätze, die entwickelt werden, z.B. 44, mit dem Vorteil, dass sie sich auf die "Omics-Schicht" konzentriert, die dem Phänotyp am nächsten ist"45. Alternative Methoden zur Quantifizierung der Parasitenbelastung umfassen die Messung der Biolumineszenz zum Zeitpunkt der Probenentnahme6. Feine Segmente könnten auch gesammelt werden, um konfokale oder Elektronenmikroskopie zu ermöglichen, um die lokalisierte Parasitenbelastung und Gewebeschäden zu beurteilen. Das Wasserhomogenat, das in diesem Protokoll und früheren Publikationen13 für die Zytokinquantifizierung verwendet wird, könnte auch zur Quantifizierung proteinbasierter Marker für Gewebeschäden verwendet werden.
Es gibt auch mehrere Möglichkeiten, 3D-Modelle zu erhalten, die geeignet sind, die resultierenden LC-MS-Daten darzustellen. Zusätzlich zu der hier vorgeschlagenen Methode können Modelle vorgefertigt von verschiedenen Online-Anbietern erworben werden. Stellen Sie sicher, dass die Nutzungsbedingungen mit dem Verwendungszweck übereinstimmen, insbesondere in Bezug auf die Veröffentlichung. Modelle für große Organe können de novo mit 3D-Scannern nach Scanneranweisungen erstellt werden. Für die Generierung und Visualisierung von 3D-Modellen für die chemische Kartographie46 existieren Alternativen wie MATLAB, die aber vor allem vor der Entwicklung von 'ili16 implementiert wurden. MATLAB ist eine Datenanalyse- und Programmier-Tool-Suite, die eine Vielzahl von Anwendungen in vielen Bereichen bietet. MATLAB ist jedoch weder frei noch Open-Source und erfordert die Vertrautheit mit MATLAB-Schnittstellen, insbesondere wenn man bedenkt, dass MATLAB nicht für die Verarbeitung von Massenspektrometriedaten entwickelt wurde. Die Alternativen dieser vorgeschlagenen Methode, nämlich SketchUp, Meshlab und 'ili, sind frei zugänglich, benutzerfreundlich und bieten ähnliche Funktionen wie MATLAB für chemische Kartographiezwecke.
Diese Methode ist robust in Bezug auf probenpräparation und metabolitenextraktion. Die Fehlerbehebung ist meistens im LC-MS-Datenerfassungsschritt erforderlich. Dies würde den Rahmen dieses Artikels sprengen. Die Leser werden zu exzellenten Publikationen zur Fehlerbehebung bei der LC-MS-Datenerfassung weitergeleitet, darunter20,47. Ebenso geht die Komplexität der Metabolitenannotation über den Rahmen des Fokus dieser Methode auf die 3D-Modellgenerierung hinaus. Nützliche Referenzen zu diesem Thema sind24,25,48,49.
Während diese Methode die Pathogenese von Krankheiten effektiv erforscht, gibt es Einschränkungen für diesen Ansatz, von denen einige in jedem Metabolomics-Experiment üblich sind. Eine dieser Einschränkungen ist die geringe Annotationsrate der LC-MS-Features50, die von der Verfügbarkeit und Qualität der Referenzspektralbibliotheken abhängt. Eine weitere Einschränkung besteht darin, dass dieses Protokoll mRNA aufgrund der Inkompatibilität von RNA-Konservierungsreagenzien wie RNAlater mit der LC-MS/MS-Analyse nicht konserviert. Die Proteinqualität ist jedoch für nachgelagerte Analysen ausreichend und kann somit mRNA-basierte Analysen ersetzen.
Ein chemischer kartographischer Ansatz zur Infektionspathogenese spiegelt direkt wider, wie sich bakterielle, virale oder parasitäre Infektionen in Organsystemen entwickeln und lokalisierte Krankheiten verursachen. Die Analyse dieser regionalen Teilstichproben und die Generierung von 3D-Modellen vermittelt letztendlich, wie Metaboliten im dreidimensionalen Raum funktionieren, und beleuchtet diese bisher nicht erkannten räumlichen Dimensionen der Molekularbiologie. Unter Verwendung dieses Protokolls wurde beispielsweise die Metabolitenlokalisation mit der Parasitenbelastung von Trypanosoma cruzi verglichen. Die Ergebnisse klärten die Beziehung zwischen dem Erreger und dem Wirtsgewebe und zeigten auch die metabolische Dynamik der Symptomprogression der Chagas-Krankheit6. Chemische Kartographiemethoden wurden auch auf verschiedene Themen angewendet, wie z.B. die Interaktion zwischen Mensch und gebauter Umwelt51,52,53, die chemische Zusammensetzung von Organsystemen wie menschliche Haut46 und Lunge54 sowie pflanzenstoffwechsel und Umweltinteraktionen55. Zukünftige Anwendungen können die Bewertung der lokalen Krankheitstoleranz und -resilienz oder der Beziehung zwischen lokalen Metabolitenspiegeln, Pathogentropismus und Krankheitstropismus in Modellen über die Trypanosomatideninfektion hinaus umfassen. Dieser Ansatz sollte auch eine breite Anwendbarkeit haben, um die aktuellen pharmakokinetischen Protokolle zu erweitern, um die Beziehung zwischen lokalen Gewebearzneimittelspiegeln und Arzneimittelstoffwechsel vs. gesamtmetabolischem Kontext, Gewebeschäden und Pathogenclearance zu bewerten. Insgesamt ermöglicht die chemische Kartographie einzigartige Erkundungen der Metabolitenverteilung in verschiedenen Probentypen, mit Anwendungen wie Krankheitspathogenese, menschliche Gesundheit, Mensch-Umwelt-Interaktionen und mikrobielle Dynamik.

Trypanosomatidenparasiten bestehen aus Leishmania-Arten, afrikanischen Trypanosomen (Trypanosoma brucei) und amerikanischen Trypanosomen (Trypanosoma cruzi). Leishmania protozoa verursachen Leishmaniose, die selbstheilende und selbstbegrenzte lokalisierte kutane Leishmaniose, mukokutane Leishmaniose, bei der das Schleimhautgewebe von Mund, Nase und Rachen geschädigt wird, und viszerale Leishmaniose mit Parasitentropismus zu den viszeralen Organen, die Fieber und Hepatosplenomegalie verursachen1,2 umfasst. T. brucei verursacht humane afrikanische Trypanosomiasis (HAT), auch bekannt als Schlafkrankheit, die hauptsächlich in afrikanischen Ländern berichtet wird3. Zu den klinischen Anzeichen und Symptomen gehören Hepatosplenomegalie, Fieber, Kopfschmerzen, Muskel-Skelett-Schmerzen, Lymphadenopathien und Anämie im hämo-lymphatischen Stadium, wenn Parasiten im Blutkreislauf und in der Lymphgefäße lokalisiert sind. Es folgt das meningo-enzephalitische Stadium, in dem Parasiten im zentralen Nervensystem lokalisiert sind und Schlafstörungen, Verhaltensänderungen und schließlich tödliches Komas verursachen4. T. cruzi verursacht die Chagas-Krankheit, die in Amerika endemisch ist. Infizierte Personen erleben ein anfängliches akutes Stadium, in der Regel asymptomatisch, mit breitem Parasitentropismus. Etwa 10%-30% der infizierten Personen erleben nach jahrzehntelanger Infektion chronische Symptome im Stadium, die durch Megaösophagus, Megakolon und kardiovaskuläre Komplikationen gekennzeichnet sind5,6.
Metabolomics untersucht kleine molekulare Spezies (50-1.500 Da), einschließlich biologischer Verbindungen aus dem primären oder sekundären Stoffwechsel und extern abgeleiteter Verbindungen wie Medikamente oder aus Lebensmitteln gewonnene Moleküle. Im Kontext von Wirt-Pathogen-Interaktionen kann die Metabolomik die Auswirkungen einer Infektion auf die Umgebungen der Wirtsmetaboliten untersuchen, was entscheidend für den Zugang zur Wirkung des Erregers auf den Wirt ist. Es kann auch die Anpassung von Krankheitserregern an die Ernährungs- und immunologische Umgebung des Wirts beurteilen7,8,9. Massenspektrometrie (MS) und Kernspinresonanzspektroskopie (NMR) sind gängige Metabolomik-Werkzeuge, die zur Identifizierung, Quantifizierung und Charakterisierung von Metaboliten verwendet werden. Dieser "Omics"-Ansatz kann auch auf die Entdeckung von Biomarkern und die Arzneimittelentwicklung angewendet werden10,11.
Angesichts des spezifischen Gewebetropismus von Trypanosomatiden-Parasiten können räumliche Metabolomik-Analysen einen signifikanten Einblick in die Pathogenese der von ihnen verursachten Krankheiten ermöglichen. Die Kartierung der räumlichen Verteilung der Metaboliten ergab Metaboliten, die lokal von einer chronischen Trypanosoma cruzi-Infektion im Herzgewebe der Maus und einer akuten und langfristigen Trypanosoma cruzi-Infektion im Magen-Darm-Trakt der Maus betroffen sind6,12,13. Insbesondere zeigte die chemische 3D-Kartographie eine Diskrepanz zwischen Parasitenpersistenz und metabolischen Veränderungen im Herzgewebe von chronisch Trypanosoma cruzi-infizierten Mäusen. Der Stoffwechsel war in den unteren und apikalen Segmenten des Herzens am stärksten gestört und stimmte mit den Stellen der Symptome der Chagas-Krankheit (herzapikale Aneurysmen) überein. Zu den Metabolitenfamilien, die durch eine Infektion an bestimmten kardialen Stellen gestört werden und mit dem Schweregrad der Erkrankung korrelieren, gehören Acylcarnitine und Glycerophosphocholine12,13,14. Im Magen-Darm-Trakt stimmten anhaltende Stoffwechselveränderungen mit den Symptomen der Chagas-Krankheit überein: Speiseröhre und Dickdarm. Im Gegensatz dazu ist der Stoffwechsel an Stellen, die nicht mit den Symptomen der Chagas-Krankheit assoziiert sind, wie dem Dünndarm, wieder normalisiert. Zu den Metaboliten, die lokal durch eine Infektion im Magen-Darm-Trakt gestört werden, gehören Acylcarnitine, Glycerophosphocholine, Kynurenin, Tryptophan und Cholsäure. Darüber hinaus ermöglichten diese Analysen die Identifizierung eines neuen metabolischen Mechanismus der Toleranz gegenüber der Chagas-Krankheit6. Die Anwendung dieser Methoden auf die Untersuchung der kutanen Leishmaniose zeigte signifikante metabolische Störungen an der Stelle der Läsion, aber auch spezifische metabolische Veränderungen im läsionsbenachbarten, makroskopisch gesunden Gewebe. Zum Beispiel wurde Glutamin an der Läsionsstelle erschöpft, während Glycerophosphocholine im m / z (Masse-Ladungs-Verhältnis) 200-299, 400-499, 500-599 und 600-699 an der Läsionsstelle signifikant erhöht waren. PC (O-34:1) war nur an läsionsbenachgebliebenen Stellen erhöht15.
Ziel dieses Manuskripts ist es, die Schritte zu demonstrieren, die notwendig sind, um 3D-Modelle der Metabolitenverteilung ("chemische Kartographie") zu generieren, wie sie auf Trypanosomatiden-Parasiteninfektionsmodelle angewendet werden (Abbildung 1). Dieser Ansatz baut auf mehreren kritischen Fortschritten im Zusammenhang mit der Metabolomik und der Metabolomik-Datenverarbeitung auf, insbesondere auf der Entwicklung einer Software zur Darstellung von Metabolomik-Daten auf 3D-Modellen16.

<table><tbody><tr><td>1,5 mL Eppendorf Röhrchen</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>1 L Flasche, Pyrex</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>1 L Messzylinder, Pyrex</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>2 mL SafeLock Eppendorf Röhrchen</td><td>VWR</td><td>20901-540</td><td>verwenden Sie das passende Röhrchenmodell für den verfügbaren Gewebehomogenisator</td></tr><tr><td>3D-Modell (de-novo gemäß den Protokollschritten generiert oder gekauft)</td><td>NA</td><td>NA</td><td>je nach Modell für das zu untersuchende System</td></tr><tr><td>5 mm Edelstahlperle</td><td>Qiagen</td><td>69989</td><td></td></tr><tr><td>96 Well-Platte</td><td>Fisher</td><td>3252449</td><td></td></tr><tr><td>AATTCCTCCAAGCAGCGGATA Primer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, sofern verfügbar; veröffentlicht in Piron, M. et al. Entwicklung eines real-time PCR Assays für den Trypanosoma cruzi Nachweis in Blutproben. Acta tropica. 103 (3), 195&ndash; 200 (2007).</td></tr><tr><td>Analysenwaage</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>ASTCGGCTGATCGTTTTCGA Primer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar; veröffentlicht in Piron, M. et al. Entwicklung eines real-time PCR Assays für den Nachweis von Trypanosoma cruzi in Blutproben. Acta tropica. 103 (3), 195&ndash; 200 (2007).</td></tr><tr><td>Tischzentrifuge mit Mikrozentrifuge, Falcon-Röhrchen und 96-Well-Plattenkapazität</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, soweit verfügbar</td></tr><tr><td>Biosicherheitswerkbank</td><td>NA</td><td></td><td>NA Klasse II, Typ A2; jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>CAGCAAGCATCTATGCACTTAG ACCCC-Primer</td><td>NA</td><td></td><td>jede Marke, wie verfügbar; veröffentlicht in Cummings, K.L., Tarleton, R.L. Schnelle Quantifizierung von Trypanosoma cruzi im Wirtsgewebe durch Echtzeit-PCR. Molekulare und biochemische Parasitologie. 129 (1), 53&ndash; 59 (2003).</td></tr><tr><td>Kamera</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar. Eine Handykamera ist für dieses Protokoll ausreichend</td></tr><tr><td>chemilumineszierendes Bildgebungssystem</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jedes System, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Wattebällchen</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Kryohandschuhe</td><td>VWR</td><td>97008-208</td><td>ersetzen durch jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Präparierschere</td><td>NA</td><td></td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Trockeneis</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, soweit verfügbar</td></tr><tr><td>Extra-Länge Pinzette</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>entflammbarer Kühlschrank</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Gefrierschrank-Aufbewahrungsboxen für Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Abzug</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>hochauflösende Masse Spektrometer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie z.B. ThermoFisher Q-Exactive Plus (Katalognummer 0726030)</td></tr><tr><td>Eiskübel</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>ili Software</td><td>ili.embl.de</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Covetrus</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>große Tupperware</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar; groß genug, um sie bequem aufzunehmen Maus, Wattebausch</td></tr>, <tr><td>Acetonitril in LC-MS-Qualität</td><td>Fisher Optima</td><td>A955-4</td><td></td></tr><tr><td>Dicholoromethan in LC-MS-Qualität</td><td>Fisher Optima</td><td>D151-4</td><td></td></tr><tr><td>Ameisensäure in LC-MS-Qualität</td><td>Fisher Optima</td><td>A11750</td><td></td></tr><tr><td>Methanol in LC-MS-Qualität</td><td>Fisher Optima</td><td>A456-4</td><td></td></tr><tr><td>Wasser in LC-MS-Qualität</td><td>Fisher Optima</td><td>W64</td><td></td></tr><tr><td>Flüssigchromatographie-Säule</td><td>Phenomenex</td><td>00B-4499-AN</td><td>kann je nach den interessierenden Metaboliten auf andere Marken und Modelle umgestellt werden</td></tr><tr><td>Flüssigchromatographie-Säulenschutzpatrone</td><td>Phenomenex</td><td>AJ0-8784</td><td>kann je nach den interessierenden Metaboliten auf andere Marken und Modelle umgestellt werden</td></tr><tr><td>Flüssigchromatographie-Säulenschutzpatronenhalter</td><td>Phenomenex</td><td>AJ0-9000</td><td>Kann je nach den interessierenden Metaboliten auf andere Marken und Modelle umgestellt werden</td></tr><tr><td>Flüssigstickstoff</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, sofern verfügbar</td></tr><tr><td>Luciferin</td><td>Goldbio</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>MeshLab Software</td><td>https://www.meshlab.net/</td> <td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Meshmixer Software</td><td>https://www.meshmixer.com/</td> <td>NA</td><td></td></tr><tr><td>MS Kalibrant</td><td>NA</td><td>NA</td><td>geeignet für das verfügbare Instrument</td></tr><tr><td>MS-Datenverarbeitungssoftware</td><td>NA</td><td>NA</td><td>mehrere Optionen verfügbar; Autoren empfehlen MZmine</td></tr><tr><td>MSConvert Software</td><td>http://proteowizard.sourceforge.net/</td> <td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop ThermoFisher</td><td></td><td>ND-ONE-W</td><td>andere Nanotropfenmodelle sind auch geeignet</td></tr><tr><td>p1000 Pipettenspitzen</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Verwenden Sie die entsprechende Marke für verfügbare Pipetten</td></tr><tr><td>p1000 Pipettierer</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, sofern verfügbar</td></tr><tr><td>p20 Pipettenspitzen</td><td>NA</td><td>NA</td><td>verwenden Sie die entsprechende Marke für verfügbare Pipetten</td></tr><tr><td>p20 Pipettierer</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, da verfügbar</td></tr><tr><td>p200 Pipettenspitzen</td><td>NA</td><td></td><td>verwenden Sie die entsprechende Marke für verfügbare Pipetten</td></tr><tr><td>p200 Pipettierer</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, sofern verfügbar</td></tr><tr><td>Persönliche Schutzausrüstung (Handschuhe, Laborkittel, Schutzbrille/Gesichtsschutz)</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Q-Plex Maus Zytokin - Bildschirm (16-Plex)</td><td>Quansys biosciences</td><td>110949MS</td><td>kann durch andere proteinbasierte Zytokin-Assays ersetzt werden, wie z. B. andere kommerzielle Zytokin-ELISA-Kits</td></tr><tr><td>Quick-DNA Miniprep Plus Kit (200 Präparate)</td><td>Zymo</td><td>D4069</td> Ersetzen Sie das Echtzeit-Thermocycler NA NA jeder Marke durch ein <td>Säugetier-DNA-Extraktionskit, je</td></tr> nach <tr><td></td><td></td><td></td><td>Verfügbarkeit,</td></tr> einen <tr><td>Salzstreuer oder ein Tee-Ei</td><td>NA</td><td></td> NA <td>jeder Marke, um mit Isofluran getränkte Wattebälle einzudämmen und den Kontakt mit der Maushaut zu verhindern</td></tr><tr><td>SketchUp-Software</td><td>https://www.sketchup.com/ NA-Proben</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pinzette</td><td>NA</td><td></td><td>NA jede Marke, je nach Verfügbarkeit</td></tr><tr><td>Speedvac mit Mikrozentrifugenröhrchen und 96-Well-Plattenkapazität</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Tabellenkalkulationssoftware</td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td><td>NA</td><td>kann durch andere Tabellenkalkulationsverwaltungssoftware ersetzt werden, je nach Bedarf</td></tr><tr><td>Sulfachloropyridazin</td><td>Sigma S9882-100G</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sulfadimethoxin</td><td>Sigma</td><td>S7007-10G</td><td></td></tr><tr><td>Sybr grün qPCR Reaktionsmischung</td><td>Fisher</td><td>A25780</td><td>kann mit anderen Sybr grünen qPCR Reaktionsmischungen, wie gewünscht</td></tr>, <tr><td>TCCCTCTCATCAGTTCTAT GGCCCA Primer</td><td>NA</td><td>NA</td> jeder <td>Marke, wie verfügbar, ersetzen; veröffentlicht in Cummings, K.L., Tarleton, R.L. Schnelle Quantifizierung von Trypanosoma cruzi im Wirtsgewebe durch real-time PCR. Molekulare und biochemische Parasitologie. 129 (1), 53&ndash; 59 (2003).</td></tr><tr><td>Gewebehomogenisator</td><td>NA</td><td></td><td>NA jeder Marke, sofern verfügbar, z.B. Qiagen TissueLyser II, Katalognummer 85300, mit TissueLyser Adapter Set (2 x 24), Katalognummer 69982</td></tr><tr><td>Gewebeproben</td><td>NA</td><td>NA</td><td>aus entsprechendem Infektionsmodell</td></tr><tr><td>TissueLyser Einzelperlenspender</td><td>Qiagen</td><td>69965</td><td></td></tr><tr><td>UHPLC</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, soweit verfügbar, wie z.B. ThermoFisher Vanquish (Katalognummer IQLAAAGABHFAPUMBHV)</td></tr><tr><td>Ultratiefkühlschrank (-80)</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Ultraschallbad</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jedes System, wie verfügbar</td></tr><tr><td>Nasseis</td><td>NA</td><td>NA</td><td>jede Marke, wie verfügbar</td></tr><tr><td>zonenfreie Siegelfolie</td><td>VWR</td><td>&nbsp; Tel.: 490007-390</td><td></td></tr></tbody></table>

chemische kartographie ansätze zur untersuchung der trypanosomatideninfektion

Chemical Cartography Approaches to Study Trypanosomatid Infection

Pathogentropismus und Krankheitstropismus beziehen sich auf die Gewebestellen, die selektiv von Krankheitserregern besiedelt oder beschädigt werden, was zu lokalisierten Krankheitssymptomen führt. Zu den humaninfektiösen Trypanosomatidenparasiten gehören Trypanosoma cruzi, der Erreger der Chagas-Krankheit; Trypanosoma brucei, der Erreger der Schlafkrankheit; und Leishmania-Arten , Erreger der Leishmaniose. Zusammen betreffen sie 20 Millionen Menschen auf der ganzen Welt. Diese Parasiten zeigen einen spezifischen Tropismus: Herz, Speiseröhre, Dickdarm für T. cruzi, Fettgewebe, Bauchspeicheldrüse, Haut, Kreislaufsystem und Zentralnervensystem für T. brucei, Haut für dermotrope Leishmania-Stämme und Leber, Milz und Knochenmark für viscerotrope Leishmania-Stämme . Eine räumliche Perspektive ist daher unerlässlich, um die Pathogenese der Trypanosomatid-Krankheit zu verstehen. Die chemische Kartographie erzeugt 3D-Visualisierungen der Häufigkeit kleiner Moleküle, die durch Flüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie erzeugt werden, im Vergleich zu mikrobiologischen und immunologischen Parametern. Dieses Protokoll zeigt, wie die chemische Kartographie angewendet werden kann, um pathogene Prozesse während der Trypanosomatideninfektion zu untersuchen, beginnend mit der systematischen Gewebeentnahme und Metabolitenextraktion, gefolgt von der Erfassung von Daten zur Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie und abschließend mit der Erstellung von 3D-Karten der Metabolitenverteilung. Diese Methode kann für mehrere Forschungsfragen verwendet werden, wie z.B. Nährstoffbedarf für die Gewebebesiedlung durch T. cruzi, T. brucei oder Leishmania, Immunmetabolismus an Infektionsorten und die Beziehung zwischen lokaler Gewebemetabolische Störung und klinischen Krankheitssymptomen, was zu einem umfassenden Einblick in die Pathogenese der Trypanosomatid-Krankheit führt.

Die Anzahl der erhaltenen Metabolitenmerkmale hängt vom analysierten Gewebetyp und den Datenverarbeitungsparametern ab. Zum Beispiel wurde dieses Protokoll verwendet, um die räumlichen Auswirkungen der T. cruzi-Infektion auf das Metabolom des Magen-Darm-Trakts in einem Mausmodell der T. cruzi-Infektion zu analysieren. In früheren Arbeiten wurden männlichen C3H/HeJ intraperitoneal 1.000 CL + luc T. cruzi Parasiten injiziert32,6. Die Tiere wurden 12 oder 89 Tage nach der Infektion eingeschläfert, und eine chemische Kartographieanalyse von 13 zusammenhängenden Segmenten des Magen-Darm-Traktes wurde wie in diesem Protokoll beschrieben durchgeführt. Diese Analyse führte zu einer Feature-Tabelle mit 5.502 Features, die dann mit den in diesem Protokoll beschriebenen Schritten in 3D visualisiert wurden. Dieser Ansatz ermöglicht die Visualisierung von Metabolitenmerkmalen bei einzelnen Tieren, die an der Stelle hoher Parasitenlast hoch sind (Kynurenin, Abbildung 2B vs. Parasitenlast, Abbildung 2A), von Metaboliten mit differentieller Verteilung über Geweberegionen (Glutamin, Abbildung 2C) und Metabolitenmerkmalen, die in vergleichbaren Konzentrationen über Dünn- und Dickdarm gefunden werden (LPE 16:0 Abbildung 2D). ). Kynurenin wurde aufgrund seiner bekannten Beziehung zur Entzündung und früherer Veröffentlichungen über die Fähigkeit von Kynurenin-abgeleiteten Metaboliten, die T. cruzi-Last zu regulieren, für die Visualisierung ausgewählt33. Random-Forest-basierte Machine-Learning-Modelle hatten zuvor einen Zusammenhang zwischen Kynureninspiegeln und Infektionsstatus6 aufgedeckt. Glutamin wurde für eine Visualisierung ausgewählt, die auf früheren Publikationen basiert, die einen Zusammenhang zwischen der Verfügbarkeit von In-vitro-Glutamin und der Sensitivität des T. cruzi-Medikaments zeigen34. Die Differentialverteilung wurde mit Hilfe der logistischen Regression, p &lt; 0,05, bestätigt. LPE 16:0 wurde nach visueller Inspektion der Daten ausgewählt, um Metabolitenmerkmale zu entdecken, die in vergleichbaren Konzentrationen an Gewebestellen gefunden wurden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63255/63255fig01.jpg"> Abbildung 1: Protokollübersicht. Die Illustration wurde mit BioRender.com erstellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63255/63255fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63255/63255fig02.jpg"> Abbildung 2: Chemische Kartographieanalyse. Männlichen C3H/HeJ-Mäusen wurden intraperitoneal 1.000 CL+luc T. cruzi Parasiten injiziert32. Die Tiere wurden 12 oder 89 Tage nach der Infektion eingeschläfert, und der Magen-Darm-Trakt wurde systematisch entnommen und abschnittiert (Schritt 1)6. Die Metaboliten wurden wie in Schritt 2 extrahiert und von LC-MS/MS analysiert.3D Modellgenerierung wurde mit der SketchUp-Software durchgeführt (Schritt 5), und die Daten wurden in 3D wie in Schritt 6 dargestellt. (A) Parasitenverteilung in einer bestimmten Maus, 12 Tage nach der Infektion. (B) Verteilung des Kynurenin-Metaboliten in derselben Maus, 12 Tage nach der Infektion. (C) Mittlere Glutaminverteilung über infizierte Mäuse, 89 Tage nach der Infektion. (D) Vergleichbare Mengen an m/z 454,292 Retentionszeit 2,929 min, annotiert als 2-Hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin (LPE 16:0), in derselben Maus wie in A und B im Dünndarm und Dickdarm. Stichproben und Daten wurden in6 generiert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63255/63255fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zur Erstellung eines 3D-Modells der Metabolitenverteilung während der Trypanosomatideninfektion, einschließlich Probenentnahme, Metabolitenextraktion, überblick über die Datenerfassung von Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie, 3D-Modellgenerierung und schließlich Datenvisualisierung.

Chemische Kartographie Ansätze zur Untersuchung der Trypanosomatideninfektion

Pathogen tropism and disease tropism refer to the tissue locations selectively colonized or damaged by pathogens, leading to localized disease symptoms. ...

Dieses Protokoll kann verwendet werden, um 3D-Modelle der Metaboliten- und Parasitenverteilung zu erstellen. Dies kann helfen, die Beziehung zwischen lokaler Stoffwechselstörung des Gewebes, Parasitenverteilung und klinischen Krankheitssymptomen zu verstehen. Der Hauptvorteil dieser Methode besteht darin, dass sie eine Live-Skalen-Cross-Organ-Kartierung der Metabolitenverteilung im Vergleich zur Pathogenverteilung und ihre statistische Analyse ermöglicht.Theoretisch kann die chemische Kartographie die Entwicklung und die Auswirkungen der Krankheit auf den Wirt untersuchen, indem sie die für die Pathogenese verantwortlichen Metaboliten und die Auswirkungen der Behandlung direkt untersucht. Beginnen Sie mit dem Wiegen und Beschriften der Rohre. Schneiden Sie die Gewebe systematisch mit einem Abschnitt pro Röhrchen.Wiegen Sie die Röhrchen mit Gewebeproben, um das Probengewicht zu bestimmen und das Gewicht aufzuzeichnen. Um eine wasserbasierte Homogenisierung der Gewebeproben durchzuführen, fügen Sie den zwei Milliliter Mikrozentrifugenröhrchen, die Gewebeproben enthalten, eine fünf Millimeter große Edelstahlperle hinzu. Stellen Sie ein leeres Rohr her, das Wasser in LCMS-Qualität enthält.Erhöhen Sie das Volumen auf 500 Mikroliter pro 50 Milligramm der Probe, indem Sie gekühltes LCMS-Wasser hinzufügen, und homogenisieren Sie die Proben dann drei Minuten lang bei 25 Hertz. Die Proben sollten gründlich homogenisiert werden. Sammeln Sie 1/10 des Homogenisierungsvolumens für DNA-Extraktion und andere Analysen.Fügen Sie dem Homogenat eiskaltes Methanol in LCMS-Qualität hinzu, das mit vier Mikromolar Sulfachlorpyridazin versetzt ist. Homogenisieren Sie die Proben in einem Gewebehomogenisator bei 25 Hertz für drei Minuten, gefolgt von einer Zentrifugation für 10 Minuten. Sammeln Sie ein gleiches Volumen Überstand in eine 96-Well-Platte und halten Sie feste Rückstände auf Eis, während Sie die Überstände sammeln.Trocknen Sie den wässrigen Extraktionsüberstand vollständig mit maximaler Geschwindigkeit und ohne Erhitzen. Führen Sie eine organische Extraktion durch, indem Sie 1.000 Mikroliter vorgekühltes Dichlormethanmethanol hinzufügen, das mit zwei mikromolaren Sulfachlorpyridazin pro 50 Milligramm fester Rückstandsprobe versetzt ist. Homogenisieren Sie die Proben fünf Minuten lang bei 25 Hertz, gefolgt von einer Zentrifugation für 10 Minuten.Sammeln Sie ein gleiches Volumen an Überstand in eine 96-Well-Platte. Machen Sie ein Foto von der Orgel von Interesse. Klicken Sie auf Datei und dann in der SketchUp-Software auf Importieren, um ein Bild der interessierenden Organe zu importieren.Klicken Sie auf das Linienwerkzeug und wählen Sie die Freihandoption. Verwenden Sie das Bleistiftwerkzeug, um die Umrisse der interessierenden Organe zu zeichnen und zu zeichnen. Wählen Sie das Push/Pull-Werkzeug aus und ziehen Sie den schattierten Bereich nach oben, um die Zeichnung von 2D in 3D zu konvertieren.Exportieren Sie die Datei im dae-Format, indem Sie auf Dateiexport und dann auf 3D-Modell klicken. Um den Realismus des Modells zu verbessern, importieren Sie das Modell in die MeshLab-Software, indem Sie Datei auswählen und dann auf Mesh importieren klicken. Wählen Sie im oberen Menü die Option Drahtmodell (Wireframe) und dann Filter (Filters), klicken Sie auf Remeshing Simplification and Reconstruction (Vernetzung und Rekonstruktion) und dann auf Subdivision Surfaces Midpoint.Lassen Sie alle Werte als Standardwert, und wählen Sie Zweimal Anwenden aus. Exportieren Sie das Modell im SDL Format, indem Sie auf Datei und dann auf Mesh exportieren als klicken und dann im Dropdown-Menü Dateityp die Option SDL Dateiformat auswählen. Speichern Sie dies und wählen Sie OK im nächsten Popup-Menü.Öffnen Sie die Meshmixer-Software und importieren Sie die im vorherigen Schritt generierte SDL-Datei. Verwenden Sie die Skulptur, Pinsel, Drachenskulptur, Pinsel, Aufblaswerkzeuge, um die Modelloberflächen herauszuziehen, die abgerundet werden müssen. Speichern Sie es im SDL Format, sobald das Modell das gewünschte Aussehen hat, indem Sie auf Datei und Exportieren klicken.Benennen Sie die Datei wie gewünscht, wählen Sie das SDL Binärformat aus und speichern Sie sie. Öffnen Sie das 3D-Modell in der MeshLab-Software. Klicken Sie im Popup-Fenster nach dem Öffnen auf OK.Rufen Sie X-, Y- und Z-Koordinaten für jeden Abtastpunkt ab, indem Sie das Werkzeug "Pickpunkte" auswählen und dann in regelmäßigen Abständen mit der rechten Maustaste über die 3D-Modelloberfläche klicken. Sobald alle gewünschten Koordinaten ausgewählt wurden, klicken Sie auf die oberste Schaltfläche Speichern im Formular-Popup-Fenster. Öffnen Sie in der Tabellenkalkulationssoftware die im vorherigen Schritt generierte pp-Datei.Passen Sie die Datenanzeige an, indem Sie auf Datentext in Spalten und dann auf Abgegrenzt klicken. Klicken Sie auf Weiter und wählen Sie dann Platz und klicken Sie auf Fertig stellen. Formatieren Sie das Format neu, sodass nur numerische Werte in den Tabellenkalkulationszellen verbleiben, indem Sie Home-Suchen und Ersetzen auswählen.Geben Sie im Feld Suchen nach die Zeichenfolge Y equal coat ein und lassen Sie das Feld zum Ersetzen leer. Klicken Sie auf Alle ersetzen und dann auf OK. Wiederholen Sie den Vorgang für X gleiche Schicht und für Z gleiche Schicht und für Strich größer als. In der Tabellenkalkulationssoftwaretabelle entsprechen Zeilen jeder Position und Spalten Daten.Fügen Sie die entsprechenden Metadaten und die Häufigkeit der Metabolitenfunktionen in die nachfolgenden Tabellenkalkulationsspalten ein. Geben Sie in der Spalte Radius die gewünschte Größe der Probenahmepunkte ein, die auf dem Modell visualisiert werden sollen. Ermitteln Sie die Werte für den Radius empirisch und speichern Sie die Datei im CSV-Format.Wählen Sie nacheinander jede Datenspalte aus, um die Verteilung dieses Metabolitenmerkmals im 3D-Modell zu bewerten. Diese Analyse führte zu einer Tabelle mit 5.502 Features und deren Visualisierung in 3D. Dieser Ansatz ermöglicht die Visualisierung von Metabolitenmerkmalen bei einzelnen Tieren, die an der Stelle hoher Parasitenbelastung hoch sind, von Metaboliten mit differentieller Verteilung über Geweberegionen und von Metabolitenmerkmalen, die in vergleichbaren Mengen im Dünn- und Dickdarm gefunden werden.Es ist wichtig, daran zu denken, nur LCMS-Lösungsmittel zu verwenden und das gesamte angrenzende Gewebe zu sammeln und die Metaboliten für alle gesammelten Proben zu extrahieren, um Lücken in räumlichen Karten zu vermeiden. Diese Technik kann verwendet werden, um den Nährstoffbedarf für die Gewebebesiedlung durch Trypanosomatidenparasiten zu untersuchen, um die Krankheitspathogenese durch den Vergleich von 3D-Metabolitenverteilungskarten nach der Infektion zu verstehen.

chemical-cartography-approaches-to-study-trypanosomatid-infection

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Manuskript beschreibt die Verwendung eines biolumineszierenden Stammes afrikanischer Trypanosomen, um die Verfolgung von Infektionen im Spätstadium zu ermöglichen, und zeigt, wie in vivo Live-Bildgebung verwendet werden kann, um Infektionen im zentralen Nervensystem in Echtzeit zu visualisieren.

Biolumineszenz-Bildgebung zur Erkennung von Late Stage-Infektion der afrikanischen Trypanosomiasis

Afrikanische Trypanosomen, die in vitro gezüchtet werden, durchlaufen eine geringe antigene Variation, so dass die Populationen aus Parasiten bestehen, die eine dominante Variante des Oberflächenglykoproteins (VSG)-Typs exprimieren, und einer kleinen Population von "geschalteten" Varianten.  Dieses Protokoll beschreibt eine schnelle Methode zum Nachweis und zur Quantifizierung dieser Populationen.

Nachweis von<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt; Variante Oberflächen-Glykoprotein Switching von Magnetic Activated Cell Sorting und Durchflusszytometrie

In diesem Protokoll Eindringmittel beschrifteten T. Trypanosoma wurden in durchsichtigen Zebrafischlarven injiziert und Parasiten Motilität wurde in Vivo mit Lichtblattmikroskopie Fluoreszenz beobachtet.

Gründung der Larven Zebrafisch als Tier-Modell zu untersuchen Trypanosomen Trypanosoma Motilität In Vivo

Die Trypanosomen Trypanosoma Agent der Chagas-Krankheit produziert langlebige asymptomatische Infektionen, die abrupt in klinisch anerkannten Pathologie zu entwickeln. Die folgenden Forschungs-Protokoll beschreibt eine kurzfristige familienbasierte epidemiologische Studie um die T. Trypanosoma Infektion, sexuell übertragbare von übergeordneten an Nachkommen zu entwirren.

Sexuelle Übertragung von amerikanischen Trypanosomen von Männchen und Weibchen zu Naive Mates

Diese Methode der Trypanosomen Trennung vom Blut hängt ihre Oberflächenladung wird weniger negativ als Blut Säugerzellen. Infiziertem Blut ist platziert und auf ein Anion-Exchanger Spalte behandelt. Diese Methode, die passende Diagnose für afrikanische Trypanosomiasis, bietet gereinigte Parasiten für immunologische, biologische, biochemische, pharmazeutische und molekularbiologischen Untersuchungen.

Reinigung der extrazellulären Trypanosomen, einschließlich Afrika, aus Blut von Anionen-Austauscher (Diethylaminoethyl-Zellulose Spalten)

Das vorliegende Protokoll beschreibt Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie und automatisierte softwaregestützte Methoden zur Visualisierung und genauen Quantifizierung proliferierender und ruhender Trypanosoma-cruzi-Parasiten und T-Zellen in intakten, gereinigten Organen und Geweben. Diese Techniken bieten eine zuverlässige Möglichkeit, Behandlungsergebnisse zu bewerten und neue Einblicke in Parasiten-Wirt-Interaktionen zu bieten.

Quantitative 3D-Bildgebung von Trypanosoma-cruzi-infizierten Zellen, ruhenden Amastigoten und T-Zellen in intakten geklärten Organen

Diese Studie zeigt ein detailliertes Protokoll zur Durchführung der Ultrastrukturexpansionsmikroskopie in drei in vitro Lebenszyklusstadien von Trypanosoma cruzi, dem Erreger, der für die Chagas-Krankheit verantwortlich ist. Wir schließen die optimierte Technik für Zytoskelettproteine und die Pan-Proteom-Markierung ein.

Ultrastrukturelle Expansionsmikroskopie in drei in vitro Lebenszyklusstadien von Trypanosoma cruzi

Weltweit wurden medizinische Blutparasiten in einfachen Schritten auf einer Low-Code-KI-Plattform automatisch gescreent. Die prospektive Diagnose von Blutausstrichen wurde durch den Einsatz einer Objekterkennungs- und Klassifikationsmethode in einem hybriden Deep-Learning-Modell verbessert. Das Zusammenwirken von aktivem Monitoring und gut trainierten Modellen hilft, Hotspots der Trypanosomenübertragung zu identifizieren.

Überlegene automatische Identifizierung von Trypanosomenparasiten durch Verwendung eines hybriden Deep-Learning-Modells

Wir beschreiben eine Methode, um zu untersuchen, wie der pH-Wert auf Umweltreize in den Glykosomen der Blutkreislaufform afrikanischer Trypanosomen reagiert. Dieser Ansatz beinhaltet einen pH-sensitiven Sensor für vererbbare Proteine in Kombination mit Durchflusszytometrie zur Messung der pH-Dynamik, sowohl als Zeitverlaufsassay als auch in einem Hochdurchsatz-Screen-Format.

Messung dynamischer glykosomaler pH-Änderungen bei lebenden Trypanosoma brucei

Das hier bereitgestellte Protokoll beschreibt die detaillierten Schritte zur Durchführung von Arzneimittelwirksamkeitsstudien in einem biolumineszierenden Modell der Trypanosoma cruzi-Infektion , wobei der Schwerpunkt auf der Datenerfassung, -analyse und -interpretation liegt. Fehlerbehebungs- und Qualitätskontrollverfahren zur Minimierung technischer Probleme werden ebenfalls bereitgestellt.

Entmystifizierung der In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung eines Mausmodells für die Chagas-Krankheit für Wirksamkeitsstudien von Arzneimitteln

Erfahren Sie chemische Kartographie zur Untersuchung von Trypanosomatideninfektionen. Diese Methode ermöglicht die 3D-Visualisierung von Metabolitenverteilung und Parasitenlast im Gewebe.

Chemische Kartographie Ansätze zur Untersuchung der Trypanosomatideninfektion

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