Name: Murine Hauttransplantation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Lernen Sie die Hauttransplantation bei Mäusen zur Untersuchung allogener Immunantworten und Toleranzinduktionsstrategien. Diese Methode nutzt die BALB/c-zu-C57BL/6-Kombination für Transplantationsbiologie.

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NIH Immunologie Training Grant T32 AI 60573 (KRG) und NIH GM 41514 (MDC)

Vor Beginn des Experiments: <ul><li> Erhalten IACUC Genehmigung </li><li> Sterilisieren Instrumente und Q-Tipps </li></ul> I. Ernte Spendergewebe <ol><li> Euthanize Spender Maus (in Übereinstimmung mit Institution SOP) </li><li> Nasses Haar zurück von der Basis des Ohres mit Alkohol </li><li> Ernte Spenderhaut indem Ohr ab an der Basis </li><li> Legen Gewebe in der Platte auf Eis </li><li> Split Ohr: pinch ventralen und dorsalen Seiten des Gewebes an der Basis der Ohren mit Ratten-Zahn-Zange; vorsichtig auseinander ziehen Gewebe; float dorsal Gewebe, innere Oberfläche nach unten, in PBS auf Eis; verwerfen kollagenen ventralen Klappe </li></ol> II. Bereiten Empfänger für Transplant <ol><li> Anesthetize Maus mit zugelassenen Verfahren </li><li> Verwalten für post-op Schmerzlinderung (dh 0.05-0.1 mg / g Bupernex ip) analgetische </li><li> Bewegen Sie die Maus in Seitenlage </li><li> Führen Zeh kneifen, um zu gewährleisten, Tier ausreichend sediert </li><li> Nasses Haar mit Alkohol und rasieren Thorax </li><li> Wischen Sie den Bereich zu säubern mit Alkoholtupfer </li></ol> III. Hauttransplantat <ol><li> Machen Sie ~ 1 cm Schnitt: Zelthaut mit Ratten-Zahn-Pinzette und schneiden ~ 0,25-0,5 cm unterhalb Zange </li><li> Entfernen Spenderhaut von PBS, Platz oben auf graft Bett (mit inneren Oberfläche der Ohren Haut nach graft Bett), und entfernen Sie überschüssiges PBS mit einem sterilen Wattestäbchen </li><li> Sorgfältig entfernt trim überschüssiger Haut, so dass Spender Transplantation liegt flach im Transplantat Bett (um sicherzustellen, dass Transplantat Kanten nicht unter eingerollt und das Transplantat nicht Kater auf Empfängers Stamm Haut) </li><li> Wrap Empfänger in sterilen Verband (mit der nicht klebenden Gaze-Segment über die Hauttransplantation platziert) </li><li> Stellen Sie sicher, dass Bandage ist nicht zu eng (zu beurteilen Tieres Atmung) und dass die Arme frei beweglich sind </li><li> Sichere Bandage mit einem 2-0 Seidenfaden </li><li> Tier in den Käfig sauber (unter Wärmelampe bis Tier hat genügend aus der Narkose erholt) </li><li> Monitor-Empfänger 1-2/day für Anzeichen von Leiden und verwalten analgetische als zur Schmerzlinderung erforderlich </li></ol> IV. Bandage Removal (6-7 Tage nach Transplantation) <ol><li> Anesthetize Maus mit zugelassenen Verfahren </li><li> Cut und entfernen Seidennaht </li><li> Mit stumpfen Ende einer Schere, vorsichtig durch Verband (achten Sie darauf nicht zu stören graft) geschnitten und schonend entfernen </li><li> Zurück Maus zu reinigen Käfig </li><li> Überprüfen Sie Transplantat ~ 8 Stunden nach dem Verband Entfernung auf Anzeichen von Schorfbildung oder Kontraktion. Falls vorhanden, kann Transplantat nicht vaskularisieren haben und sollte als ein technischer Defekt sein. </li><li> Monitor täglich auf Anzeichen von Ablehnung (in der Regel als ~ 80% Nekrose des Spendergewebe definiert) </li><li> Allogene Hauttransplantationen wird in der Regel zwischen d8-12 post-op ablehnen </li></ol> V. Hilfreiche Tipps <ol><li> Harvesting Spendergewebe der Nähe der Basis des Ohres werden: 1) zu maximieren Transplantat Größe und 2) eine ungleichmäßige ventralen Überhang, dass die Aufspaltung erleichtern </li><li> Verwenden Sie immer eine neue Rasierklinge zum Rasieren Empfänger </li><li> Wenn Schmerzmittel gegeben ip werden, bevor verwalten, um den Vorgang Transplantation post-op Handhabung zu minimieren (Minimierung Chance Störung des Transplantats) </li><li> Wenn möglich, entfernen Handschuhe vor dem Auftragen der Verband. Handschuhe neigen dazu, den Verband kleben und erschweren Anwendung </li><li> Platzieren einer einzigen Naht an den Verband Ende minimiert vorzeitige Entfernung </li><li> Wrap Bandage so fest wie erlaubt und bewerten Atmung Bevor Naht. Wenn Verband zu eng ist, wird Tier den Atem anhalten. Wenn Verband ist zu locker, wird Tieres zu entfernen. </li></ol>

Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

Wie in diesem Video-Beitrag gezeigt hat, ist die Hauttransplantationsmodell eine schnelle und einfache Methode zur Überwachung von allogenen T-Zell-Antworten. Allogene Hauttransplantation hat eine breite Palette von Anwendungen und hat Assay wurde die Effizienz einer Vielzahl von Immunsuppressiva und Toleranzinduktion Protokollen, sowie zur Untersuchung der biologischen Wirkungen der verschiedenen blockierende Antikörper eingesetzt.

<table><tbody><tr><td>Feine Pinzette (gekrümmt)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Rattenzahn-Pinzette (1x2 Zähne, gerade)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>Strabismus-Schere (stumpfe Spitze)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Augenbrauen-Pinzette (gekrümmt)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Federschere (abgewinkelt)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Halsey-Mikronadelhalter</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>10-cm-Platten</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (Buprenorphinhydrochlorid)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>Insulinspritzen (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>Einklingen-Rasierklingen (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>Seiden-Nahtmaterial (2-0; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

murine hauttransplantation

Murine Skin Transplantation

Als einer der härtesten und am wenigsten technisch anspruchsvollen Modellen ist Hauttransplantation eine standardisierte Methode, um Test-Host T-Zell-Antworten auf MHC-disparate Spender-Antigene. Das Ziel dieses Video-Artikels ist es, den Betrachter mit einer Schritt-für-Schritt-visuelle Demonstration der Hauttransplantation am Mausmodell liefern. ; 2) vorzubereiten Empfänger für die Transplantation, 3) Hauttransplantat; 4) Bandage entfernt und Überwachung Abstoßung des Transplantats; 5) hilfreiche Hinweise 1) Ernte Spenderhaut: Das Protokoll ist in 5 Hauptkomponenten unterteilt. Sobald beherrschen, sollte das Verfahren selbst zu nehmen &lt;10 min zu erfüllen.

Allogene Hauttransplantation ist ein Standard-Modell zum Testen Host T-Zell-Antworten auf MHC-disparate Spender-Antigene. Dieses Video-Artikel bietet eine visuelle Anleitung für jeden Schritt bei der Durchführung einer BALB/c--&gt; C57BL / 6 Hauttransplantat beteiligt.

Murine Hauttransplantation

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Willkommen im Labor von Dr. Michael Kalen. Ich bin Kim Gard. Heute werden wir ein Hauttransplantationsmodell anhand der allogenen BC-zu-Schwarzes-Sechs-Stammkombination demonstrieren, das als eines der strengsten und technisch am wenigsten anspruchsvollen Modelle für die Abstoßung von Gewebetransplantaten gilt.Die Hauttransplantation ist eine Standardtechnik, die zur Untersuchung allogener Antworten eingesetzt wird, und wird häufig verwendet, um die Effizienz verschiedener Strategien zur Induktion von Toleranz zu bewerten. Beginnen wir also. Dieses Verfahren beginnt mit der Entnahme der Haut von unserer BAB-Stammzellspendermaus.Töten Sie den Spender zunächst gemäß der Iacuc-Standardarbeitsanweisung euthanasiegemäß. Befeuchten Sie nun das Haar an der Basis mit Alkohol, entnehmen Sie die Haut, indem Sie das Ohr so nah wie möglich an der Basis entfernen, und legen Sie es auf Eis. Danach teilen Sie jedes Ohr und entsorgen die kollagenreiche ventrale Klappe, während Sie das Gewebe auf Eis schwimmen lassen.Die Spenderhaut ist nun bereit zur Transplantation. Das Transplantationsverfahren beginnt mit der Anästhesie des Empfängertiers gemäß genehmigter Verfahren. Sobald das Empfängertier au

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Die Schwanzhauttransplantation ist ein leistungsfähiges Modell zur Untersuchung der T-Zell-abhängigen Abstoßung und Toleranzinduktion während allogener Immunantworten bei Mäusen. Die Vorteile dieses Protokolls sind kleinere invasive Eingriffe und eine einfache Überwachung, ohne dass die Empfängermaus geopfert werden muss.

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Generation von 3D Haut organoide aus Cord Blood-abgeleitete induzierte pluripotente Stammzellen

Ziel dieser Studie war es, ein murines Modell der Verbrennungswundung zu entwickeln. Eine thermische Verbrennung wurde auf der rückenden Haut von Mäusen mit einer vorgeheizten Messingschablone induziert. Verbranntes Gewebe wurde entbraut und mit einem Hauttransplantat überzogen, das vom Schwanz einer genetisch ähnlichen Spendermaus geerntet wurde.

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Das vorliegende Protokoll beschreibt, wie menschliche Haut auf nicht-adipöse diabetische (NOD)-scid-Interleukin-2-Gamma-Kettenrezeptor-Mäuse (NSG) transplantiert werden kann. Eine detaillierte Beschreibung der Vorbereitung der menschlichen Haut für die Transplantation, der Vorbereitung von Mäusen für die Transplantation, der Transplantation der Split-Thickness der menschlichen Haut und des Wiederherstellungsverfahrens nach der Transplantation sind in dem Bericht enthalten.

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Heterotopische Hintergliedmaßen-zu-Hals-Transplantation bei der Maus: Ein supermikrochirurgisches Modell der vaskularisierten zusammengesetzten Allotransplantation

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