Name: Eine modifizierte Operationstechnik zur Nierentransplantation bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-22T13:15:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Lernen Sie eine modifizierte Operationstechnik zur Nierentransplantation bei Mäusen mit verbesserter arterieller Anastomose und erhaltener Harnleiterarterie. Diese Methode verkürzt die Operationszeit und erhöht die Erfolgsrate signifikant.

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Wir danken Dr. Tiantian Bai Team für die Hilfe bei der Sprachausgabe, Miss Mian Pao für ihre Hilfe bei der medizinischen Illustration. Diese Arbeit wurde unter anderem von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG) zur Förderung internationaler Kooperationen (HO2581/4-1 to AH) und der National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 bis FJ) unterstützt.

Alle Tierversuche wurden nach den Richtlinien der Richtlinie 2010/63/EU des Europäischen Parlaments zum Schutz von Tieren durchgeführt, die für wissenschaftliche Zwecke verwendet werden (Tierethikkarte: Niedersächsisches Ministerium für Lebensmittel- und Arzneimittelsicherheit, #33.9-42502-04-11/0492). Führen Sie Verfahren mit sterilen chirurgischen Instrumenten und Verbrauchsmaterialien (autoklaviert) durch und versuchen Sie, den Operationsbereich so steril wie möglich zu halten.
HINWEIS: C57BL/6J männliche Mäuse dienten als Spender und Empfänger (syngenes Transplantationsmodell), während Balb / c-Mäuse als Nierenallotransplantatempfänger dienten (Modell zur Untersuchung der akuten Allotransplantatabstoßung Modell9). Die Mäuse waren zwischen 8-12 Wochen alt, wogen bei der Transplantation ~ 25-30 g und wurden unter Standardbedingungen untergebracht. Die in diesem Manuskript berichteten Daten wurden von vier Chirurgen generiert, die Erfahrung in der Mäusechirurgie haben.
1. Vorbereitende Schritte
<ol><li>Verwenden Sie für die Operation eine Reihe von mikroskopischen Instrumenten, einschließlich einer Mikroschere, einer Mikropinzette, eines Nadelhalters, mikrohämostatischer Klemmen und eines elektrochirurgischen Stifts. Führen Sie Nähte mit 7/0er, 10/0er oder 4/0er Nylonmonofilament durch.</li>
	<li>Für die Anästhesie, legen Sie die Maus in die Box zum Einatmen von Isofluran (2%) für etwa 40-60 s, um Bewusstlosigkeit zu induzieren.</li>
	<li>Sobald die Maus betäubt ist, wiegen Sie die Maus.</li>
	<li>Je nach Gewicht der Maus eine intraperitoneale Injektion von Ketamin (100 mg/kg) + Xylazin (10 mg/kg) + Acepromazin (2 mg/kg) zur Betäubung der Maus13 auftragen. Bestätigen Sie, dass die Maus betäubt ist, indem Sie eine mangelnde Reaktion auf eine Zehenzwicke beobachten.</li>
	<li>Wenn die Anästhesie wirksam geworden ist, schneiden Sie das Bauchfell ab. Fixieren Sie dann die Maus auf dem Operationstisch, indem Sie die Gliedmaßen mit einem sterilen Abdeckband locker immobilisieren.</li>
	<li>Desinfizieren Sie den Bauch der Maus, nachdem Sie die Maus auf den Operationstisch gelegt haben. Führen Sie eine Desinfektion mit abwechselndem Peeling von Povidoniodid (Iodophor) und Alkohol dreimal durch (verwenden Sie ein konzentrisches Muster, beginnen Sie mit dem Peeling in der Mitte des Abdomens und bewegen Sie sich nach außen) und drapieren Sie die Maus dann ordnungsgemäß mit einem fenestrierten chirurgischen Handtuch.</li>
	<li>Tragen Sie Augensalbe auf und bewahren Sie die Sterilität während des gesamten Eingriffs. HINWEIS: Antibiotika werden während des gesamten Verfahrens nicht empfohlen, da diese Substanzen die immunologischen Reaktionen beeinflussen können.</li>
</ol>2. Verfahren für die Operation des Spenders
<ol><li>Verwenden Sie eine Schere, um die Haut zu schneiden und führen Sie einen Kreuzbauchschnitt von ca. 3-4 cm durch. Schneiden Sie die Muskeln der Bauchdecke ab. Bedecken und entfernen Sie vorsichtig die Eingeweide mit einer salzhaltigen Gaze.</li>
	<li>Verwenden Sie ein Wattestäbchen, um den Darm, den Magen und die Milz vorsichtig in Richtung der rechten Seite (aus der Sicht der Maus) zu entfernen, bedecken und bewegen Sie die Eingeweide vorsichtig mit einer salzhaltigen Gaze weg.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Mikrozange, um die linke Niere, die Aorta und die untere Hohlvene (IVC) freizulegen.</li>
	<li>Verwenden Sie einen elektrochirurgischen Bleistift, um die linken Lendenvenen, einschließlich ihrer darunter liegenden Äste und anderer kleiner Gefäße zusammen mit dem linken Nebennierengefäß, vorsichtig zu kauterisieren.</li>
	<li>Verwenden Sie Mikroscheren und Pinzetten, um den linken Harnleiter zu sezieren und vorsichtig aus dem umgebenden Gewebe zu mobilisieren. Schneiden Sie es sauber in der Nähe der Harnblase ab. Mobilisieren Sie die Aortenregion zwischen den linken und rechten Nierenarterien von etwa 2 mm Länge.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Mikropinzette, um die infrarenale untere Vena cava (IVC) und die Aorta zu trennen, und verwenden Sie dann eine gekrümmte Pinzette, um unter die Aorta zu gehen, um eine lose Krawatte aus 7-0-Seidennaht um dieses Gefäß zu legen.</li>
	<li>Kreuzklemmen Sie den Bereich der Aorta unterhalb der rechten Nierenarterie und der Vena cava inferior (IVC) mit zwei 5 mm Mikrovaskulärklemmen.</li>
	<li>Transsektieren Sie die linke Nierenvene aus der Vena cava.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Spritze, um die Aorta mit 1 ml Heparin-Kochsalzlösung (60 E/ml) zu spülen.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Mikrozange, um die in Schritt 2.5 angewendete Ligatur festzuziehen. Schneiden Sie dann die Aorta sowohl unterhalb der Ligatur als auch unterhalb der proximalen Klemme ab. Dabei werden die proximalen Verzweigungen der Nierenarterie (bitte beachten Sie, dass die arterielle Öffnung ordentlich geschnitten werden muss, da sonst die Anastomose beeinträchtigt wird) und die Harnleiterarterie eingeschlossen und en bloc transektiert. Bereiten Sie sich sorgfältig vor, damit die empfindliche Harnleiterarterie vollständig erhalten bleibt.</li>
	<li>Verwenden Sie den elektrochirurgischen Bleistift und die Pinzette, um die linke Niere und die zugehörigen Gefäße vollständig zu befreien, indem Sie vorsichtig alle Gefäße kauterisieren, die das Gewebe umgeben. Entfernen Sie die Niere und lagern Sie sie in Kochsalzlösung bei 4 °C.</li>
	<li>Euthanasieren Sie die betäubte Spendermaus durch Enthauptung.</li>
</ol>3. Verfahren für die Bedienung des Empfängers
<ol><li>Führen Sie die ersten chirurgischen Schritte (einschließlich Anästhesie und Sterilisation, siehe Schritte 1.1 bis 1.7) wie für die Spendermaus beschrieben durch.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Schere, um den Bauch über einen mittleren Schnitt (etwa 2,5 cm lang) zu öffnen, und bedecken Sie dann die Bauchorgane mit einer feuchten Gaze mit Kochsalzlösung.</li>
	<li>Bewahren Sie die infrarenale Aorta und die untere Hohlvene (IVC) sorgfältig auf und stellen Sie sicher, dass jeder große Gefäßzweig kauterisiert ist. Verwenden Sie auch die elektrische Kauterisation, um den linken Harnleiter vorsichtig an einer Position proximal zum Nierenbecken zu sezieren. Entfernen Sie dann die linke Niere.</li>
	<li>Verwenden Sie Mikropinzetten und Wattestäbchen, um die Bauchaorta und die untere Hohlvene freizulegen und sie vom umgebenden Fettgewebe (ca. über 4 mm lang) zu lösen.</li>
	<li>Verwenden Sie zwei mikrovaskuläre Klemmen und positionieren Sie sie proximal und distal sowohl auf der unteren Hohlvene als auch auf der Bauchaorta.</li>
	<li>Verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um eine 10/0 monofile (aus synthetischer Faser mit glatter Oberfläche) Nahtnadel zu führen, die proximal zu distal durch die Aortenwand platziert wird.</li>
	<li>Erreichen Sie eine elliptische Arteriotomie von ca. 1 mm mit einer sanften Aufwärtsbewegung der Naht, während Sie mit einer feinen, gebogenen Schere direkt unter der unteren Nadelfläche schneiden.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Mikroschere, um die untere Hohlvene (IVC) in Längsrichtung mit einer ausreichenden Länge von ca. 1,5 mm zu schneiden. Positionieren Sie diesen Schnitt leicht unter seinem Aortengegenstück.</li>
	<li>Führen Sie die Aorta-Anastomose des Spenders und des Empfängers in einer End-to-Side-Weise durch. Legen Sie die Spenderniere auf die rechte Seite der unteren Hohlvene des Empfängers und richten Sie die Manschette der Bauchaorta des Spenders mit der Anastomose der Bauchaorta des Empfängers aus.</li>
	<li>Verwenden Sie einen Mikronadelhalter und zwei separate 10-0-Nähte, um die proximalen und distalen Enden der Anastomose zu nähen.</li>
	<li>Lassen Sie nach dem Binden die beiden langen Nähte, einschließlich der Nadel, an Ort und Stelle. Nähen Sie die linke Seite der Aortenwand der Anastomose kontinuierlich mit zwei gleichmäßig verteilten Stichen in distal-proximaler Richtung.</li>
	<li>Nach dem letzten Stich führen Sie die Naht durch eine teilweise Dicke der Gefäßwand über der oberen Bleibnähte.</li>
	<li>Verwenden Sie Mikrozangen, um gleichzeitig sanfte Traktion bis zum kurzen Ende der unteren Nahtbindung auszuüben. HINWEIS: Bei dieser neuen knotenlosen Technik ist der letzte Stich nicht an das kurze Ende der oberen Bindung gebunden.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Mikrozange, um die transplantierte Niere in ihre normale Position zu bringen. Nähen Sie nun kontinuierlich die rechte Wand der Aortenanastomose mit drei Stichen proximal bis distal. HINWEIS: Im Vergleich zur herkömmlichen Operationstechnik 7,8 wird die letzte Naht mit der distalen Krawatte in der Nähe verschmolzen. Binden Sie es nicht an das Ende der unteren Naht, sondern schneiden Sie es ab, um stattdessen eine freie Länge von 2-3 mm zu erhalten.</li>
	<li>Führen Sie die venöse Anastomose mit dem gleichen Nahtverfahren wie zuvor beschrieben durch, mit dem Unterschied, dass für jede Seite der Anastomose vier bis fünf Stiche erforderlich sind. Der letzte Stich wird als freies Ende von ähnlicher Länge ähnlich der oben beschriebenen Aortenanastomose belassen.</li>
	<li>Nachdem Sie beide Anastomosen abgeschlossen haben, verwenden Sie einen trockenen Tupfer, um für etwa 10-20 s einen sanften Druck auf den vernähten Bereich auszuüben.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Clip-Applikator-Pinzette, um beide Klemmen zu entfernen, zuerst die untere, dann die obere. Die Bauchhöhle mit 0,9% Natriumchlorid bei einer Temperatur von 38,0 °C abspülen.</li>
	<li>Beobachten Sie die Reperfusion der transplantierten Niere.</li>
</ol>4. Harnleiterimplantation
<ol><li>Verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um mit einer 10/0-Naht (gerade Nadel) durch die Urinblase des Empfängers einzudringen, und führen Sie sie zur Orientierung in ein 21-G-Nadellumen ein (siehe Ergänzende Abbildung 1a).</li>
	<li>Führen Sie nun die 21 G Nadel, um ein Loch an der Stelle der vorherigen Nadelapplikation zu nähen (Ergänzende Abbildung 1b).</li>
	<li>Ziehen Sie die 21 G Nadel heraus (Ergänzende Abbildung 1c).</li>
	<li>Verwenden Sie einen Mikronadelhalter und eine 10/0-Naht, um das beschnittene Harnleiterende zu nähen (ohne Krawatte) und perforieren Sie die Blase mit dieser 10/0-Naht erneut an der Eintrittsstelle (Ergänzende Abbildung 1d).</li>
	<li>Verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um das 10/0-Filament und den Harnleiter durch das konstruierte Loch in die Urinblase zu schleppen (Ergänzende Abbildung 1e).</li>
	<li>Verwenden Sie einen Mikronadelhalter und eine weitere 10/0-Naht, um den Harnleiter des Spenders an die Urinblase des Empfängers zu anastomosieren. Verbinden Sie hier die äußere Membran des Harnleiters mit der äußeren Membran der Blasenwand und führen Sie intermittierende Nähte mit 3 bis 4 Stichen durch. Ziehen Sie schließlich die Zugnaht heraus (Ergänzende Abbildung 1f).</li>
	<li>Verwenden Sie eine Pinzette, um den Darm wieder in die Bauchhöhle zu legen. Führen Sie zweischichtige Nähte durch (zuerst die Bauchmuskeln, gefolgt von der Haut), um die Bauchwunde mit einem 4/0-Filament zu schließen.</li>
	<li>Legen Sie die transplantierten Mäuse in eine sauerstoff- und temperaturkontrollierte Kammer, um sich nach der Operation zu erholen.</li>
	<li>Bei postoperativer Analgesie geben Sie Metamizol direkt 200 mg / kg pro OS nach der Operation. Vier und 16 Stunden nach der Operation ergeben Metamizol 200 mg/kg pro OS plus Carprofen (5mg/kg) s.c. In der weiteren Nachuntersuchung wenden Sie Carprofen (5 mg / kg) s.c. alle 24 Stunden an drei aufeinanderfolgenden Tagen nach Operation13 an den transplantierten Mäusen an. Wenn Anzeichen einer unzureichenden Analgesie vorliegen, wird Buprenorphin zusätzlich alle 8 h s.c. 0,05 mg/kg verabreicht.</li>
</ol>5. Kontralaterale Nephrektomie und Opfer der Empfängermaus
HINWEIS: Führen Sie 5 Tage nach der Transplantation eine kontralaterale Nephrektomie der Empfängermaus durch.
<ol><li>Führen Sie die kontralaterale Nephrektomie der transplantierten Maus 5 Tage nach der Transplantation unter Narkose durch. Ligatieren und schneiden Sie die autologen rechten Nierenarterien und Venen des Empfängers ab, entfernen Sie die rechte Niere und schließen Sie die Bauchhöhle. Die postoperative Versorgung und Analgesie sind die gleichen wie zuvor beschrieben (siehe Schritt 4.7).</li>
	<li>Heben Sie den Zustand der Maus an und zeichnen Sie ihn auf. Stellen Sie der transplantierten Maus postoperative Analgesie, Nahrung und Wasserversorgung zur Verfügung.</li>
	<li>Opfern Sie vier Wochen nach der Transplantation die Hälfte der transplantierten Mäuse und führen Sie eine H & E-Färbung für ihre Nierentransplantationen durch.</li>
	<li>Opfern Sie 12 Wochen nach der Transplantation die verbleibenden Mäuse und führen Sie eine Masson Gold-Färbung dieser Nierentransplantationen durch.</li>
</ol>

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</ol>

Während das Hauttransplantationsmodell bei Mäusen einfach und leicht durchzuführen ist, um alloimmune Abstoßungsereignisse zu untersuchen, haben sich die chirurgischen Techniken zur Untersuchung der alloimmunbedingten entzündlichen Veränderungen nach Herz16 und Nierentransplantation10 als komplex und sehr anspruchsvoll erwiesen. Aus Sicht des Transplantationnephrologen hat die Etablierung eines effektiven und langzeitstabilen Mausnierentransplantationsmodells für viele funk...

Seit Sakowitz et al. 1973 zum ersten Mal Mausmodelle der Nierentransplantation entwickelten 1, hat es sich als wichtiges experimentelles Werkzeug erwiesen, um die Mechanismen der ischämischen Transplantationsverletzung und der alloimmunen Abstoßung zu untersuchen sowie neue Behandlungen zu entwickeln, die darauf abzielen, das Überleben des Allotransplantats zu verlängern und möglicherweise eine immunologische Toleranz zu erreichen. Die Operationstechnik hat sich jedoch als komplex und sehr anspruchsvoll erwiesen und weist manchmal Komplikationen wie vaskuläre anastomotische Strikturen auf, die zu prärenalem nicht-immunologischem Nierentransplantatversagen2 führen, postrenales Versagen durch Ischämie und anschließende Nekrose des transplantierten Harnleiters, Einschränkungen der Anastomose des transplantierten Harnleiters und / oder der Urinblase des Empfängers, die zu einer Störung des Harnabflusses führen. All dies sind Gründe, warum die Nierentransplantation bei Mäusen nicht weiterentwickelt wurde und daher nicht weit verbreitet ist. Die Etablierung eines effektiven und langzeitstabilen Mausnierentransplantationsmodells ohne Gefäß- und Harnwegskomplikationen hat für viele Studien im Transplantationsbereich mit Fokus auf die renalen immunvermittelten aber auch Infektionskrankheiten noch unersetzliche Bedeutung3. Darüber hinaus bietet das Nierentransplantationsmodell der Maus im Vergleich zu anderen Organtransplantationen in murinen Modellen wie Lungen-, Herz- und Darmtransplantation 4,5 eine Chance, das Langzeitüberleben auch unter dem Setzen einer großen Histokompatibilitätsantigendisparitätzu untersuchen 3,6. Es wurde auch gezeigt, dass in der gleichen Umgebung von Spender-Empfänger-Stammkombinationen verschiedene Organtransplantationen wie Herz oder Niere durch unterschiedliche Dynamiken und Auslöser der Allotransplantatabstoßunggekennzeichnet sind 3. Darüber hinaus ist es aus nephrologischer Sicht ein geeigneteres Modell für die Untersuchung parenchymalvermittelter Immunregulationsmechanismen im Kontext akuter und chronischer Abstoßungsereignisse als einfache Hauttransplantationsexperimente.
Auf der Grundlage früherer Berichte über die Operationstechnik der Nierentransplantation bei Mäusen 3,7,8,9 zeigen wir hier die folgenden zuverlässigen Verbesserungen, die in den letzten 10 Jahren in unserer Gruppe 10,11,12 erfolgreich angewendet wurden: Erstens wird die Harnleiterarterie sicher konserviert, da die Nierenarterie en bloc reseziert wird zusammen mit dem jeweiligen Teil der Bauchaorta. Zweitens eine neue, einfache und schnelle Technik einer knotenlosen vaskulären Anastomose, bei der der letzte Stich der Anastomose nicht wie der traditionelle Ansatz mit dem Ende der oberen Bindung verbunden ist, sondern frei bleibt. Diese Technik ermöglicht es, die Größe der Anastomose nach der renalen Reperfusion zu erhöhen oder zu verringern, um Gefäßverengungen und intraabdominale Blutungen zu vermeiden. Drittens wurden 21 G und 30 G Spritzennadeln als zusätzliches Einstichführungswerkzeug verwendet, um den Spenderharnleiter in die Blasenwand des Empfängers zu implantieren, wodurch die Schädigung der Blase des Empfängers verringert und die Bildung einer strikturfreien Anastomose erleichtert wurde.
In diesem Bericht verglichen wir auch die traditionelle, weit verbreitete Technik mit der modifizierten, die in unserem Labor etabliert ist, und fanden keinen signifikanten Unterschied im Grad der renalen tubulären Atrophie und der interstitiellen Gewebefibrose der Nierentransplantation. In früheren Studien haben wir die Ergebnisse dieser neuen Technik zusätzlich mit der herkömmlichen Methode in Bezug auf lokale Blutungen, Thrombosen, Zeit für die Durchführung der Gefäßanastomose und Überlebensrate verglichen. Wir fanden Verbesserungen wie eine signifikante Reduktion lokaler Thromboseereignisse (1,1% gegenüber 6,6%), eine verkürzte Zeit für das Anastomoseverfahren und ein hochgradig reproduzierbares Langzeitüberleben des syngenen Nierentransplantats (95% gegenüber 84% mit dem klassischen Ansatz)10.

<table><tbody><tr><td>30G-Nadeln</td><td>Braun</td><td>456300-Acepromazin</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CP Pharma</td><td>Tranquisol</td> <td>P-Bepanthen</td></tr> <tr><td>Augensalbe</td><td>Haus-Apotheke</td><td>PZN</td> <td>01578675-Bonn</td></tr> <tr><td>Mikropinzette</td><td>FST</td><td>11083-07-Box</td><td></td></tr> <tr><td>für Isolierung und Sauerstoffversorgung</td><td>Gerät RUSKINN</td><td>INVIV-C57BL</td><td></td></tr><tr><td>/6J&nbsp; Mäuse</td><td>Charles River. Deutschland</td><td>keine Katalognummer-Carprofen</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Zoetis</td><td>Rimadyl 50 mg/</td><td></td></tr><tr><td>ml-KATHETER-FEP 26G</td><td>TERUMO</td><td>Surflo-W-Clip</td><td></td></tr> <tr><td>Applikator Pinzette Typ</td><td>FST</td><td>18057-14-Gebogene</td><td></td></tr> <tr><td>Pinzette</td><td>WPI</td><td>14114-G-Cutasept</td><td></td></tr> <tr><td>Hautdesinfektion</td><td>VWR</td><td>BODL980365</td><td>-</td></tr><tr><td>Dörrgerät</td><td>DIAPATH</td> <td>Donatello-Elektrochirurgie-Pen</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Bovie</td><td>CHANGE-A-TIP-Einbettungsgerät</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-P5-Ethanol</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD</td><td></td> <td>100092683-Frozen</td></tr> <tr><td>Plattform</td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-L5-Mullpads</td><td></td></tr><tr><td>, Wattestäbchen</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td>13353-Objektträger</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Servicebio</td><td>G6004-HE</td><td></td></tr> <tr><td>Färbelösungsset</td><td>Servicebio</td><td>G1003-Heizmatte</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>THERMO MAT PRO 30W</td><td>HTP-30-hämostatischer</td><td></td></tr> <tr><td>Schwamm</td><td>CuraSpon</td><td>J1276A-Heparin-Lösung</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Haus-Apotheke</td><td>PZN 03029820</td><td>- </td></tr><tr><td>Eisbox</td><td>PETZ</td><td>Nr. Katalognummer</td> <td>vorhanden-Bildgebungssystem</td></tr> <tr><td></td><td>Nikon</td><td>Nikon DS-U3-Inhalationsanästhesiegerät</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>GROPPLER</td><td>BKGM 0616-Isofluran</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CP Pharma</td><td>Isofluran CP 1 ml/ml-Ketamin</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Zoetis</td><td>keine Katalognummer-Masson</td><td></td></tr> <tr><td>Farbstofflösungsset</td><td>Servicebio</td><td>G1006-Metamizol</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>WDT</td><td>kein Katalog</td><td></td></tr> <tr><td>Nummer-Mikroschere</td><td>FST</td><td>15000-00,15000-10-Micro</td><td></td></tr> <tr><td>Serrefine ( Klemme ) Abgewinkelt / 16 mm</td><td>FST</td><td>18055-06-Mikroskop</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Leica</td> <td>LEICAMZ6-Mikroskop</td><td></td></tr> <tr><td>light</td><td>SCHOTT</td><td></td> <td>KL2500LED-Neutral</td></tr> <tr><td>Zahnfleisch</td><td>SCRC</td><td></td> <td>10004160-Ofen</td></tr> <tr><td></td><td>Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd</td><td>GFL-230-Pathologie-Schneidemaschine</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td><td>RM2016-Kochsalzlösung</td><td></td></tr> <tr><td>(NaCl 0,9 %)</td><td>Haus-Apotheke</td><td>PZN</td><td></td></tr> <tr><td>06178437-Schere</td><td>Peha Instruments</td><td>991083/</td><td>4-Präparate</td></tr> <tr><td></td><td>Servicebio</td><td></td><td>-</td></tr><tr><td>kleine Petrischale</td><td>Sarstedt</td><td>8,33,900-gerade</td><td></td></tr> <tr><td>Pinzette</td><td>WPI</td><td>14113-G-chirurgisches</td><td></td></tr> <tr><td>Band</td><td>BSN</td><td>4120-Nahtbindezange</td><td></td></tr> <tr><td>- 10 cm</td><td>FST</td><td>18025-10-Nähte</td><td></td></tr><tr><td>(10-0)</td><td>Medtronic</td><td>N2540-Nähte</td><td></td></tr><tr><td>(4-0)</td><td>ETHILON</td><td>V4940H</td><td>-</td></tr><tr><td>Nähte(7-0)</td><td>ETHILON</td><td>1647H-Spritze</td><td></td></tr> <tr><td>(0,3 mL)</td><td>BD</td><td></td> <td>324826-Spritze</td></tr> <tr><td>(1 mL)</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>320801-Gewebespreizer</td><td>Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd</td><td>KD-P-Aufrechtes</td><td></td></tr> <tr><td>optisches Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Nikon Eclipse E100-Xylazin</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Bayer</td><td>Rompun</td><td>-</td></tr><tr><td>Xylole</td><td>Sinopharm Group Chemisches Reagenz Co. LtD</td><td>10023418</td><td>-</td></tr></tbody></table>

eine modifizierte operationstechnik zur nierentransplantation bei mäusen

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Die Nierentransplantation bei Mäusen ist ein kompliziertes und herausforderndes chirurgisches Verfahren. Es gibt nur sehr wenige Publikationen, die die wichtigsten Schritte dieser Operation aufzeigen. Daher stellt dieser Artikel die Technik vor und weist auf die chirurgischen Vorbehalte hin, die mit dieser Operation verbunden sind. Darüber hinaus werden wichtige Modifikationen im Vergleich zum herkömmlichen Verfahren aufgezeigt. Zunächst wird ein Fleck der Bauchaorta geschnitten und so präpariert, dass die proximalen Bifurkationen der Nierenarterie, einschließlich der Harnleiterarterie, zusammen mit der Spenderniere en bloc transktiert werden. Dies reduziert das Risiko einer Harnleiternekrose und vermeidet die Entwicklung eines Harnwegsverschlusses. Zweitens wird eine neue Methode der vaskulären Anastomose demonstriert, die es dem Bediener ermöglicht, die Größe der Anastomose flexibel zu erhöhen oder zu verringern, nachdem die Nierentransplantationsreperfusion bereits eingeleitet wurde. Dies vermeidet die Entwicklung von Gefäßverengungen und intraabdominalen Blutungen. Drittens wird eine Technik gezeigt, die die Anastomose des empfindlichen Spenderharnleiters und der Empfängerblase ermöglicht, die kein Trauma verursacht. Die Einführung dieses Protokolls kann die Operationszeit verkürzen und die Schädigung der Blase des Empfängers reduzieren, wodurch die Operationserfolgsrate für die Empfängermäuse erheblich erhöht wird.

Vier Wochen nach der Transplantation zeigten sowohl die modifizierte Technik als auch die konventionelle Technik moderate Anzeichen einer renalen tubulären Atrophie14,15 im Vergleich zu den kontralateralen Nieren des nativen Empfängers (Abbildung 1). Der Grad der Nierentubuli-Atrophie zeigte keinen signifikanten Unterschied zwischen den beiden verschiedenen Techniken. Masson Goldners trichrome Färbung, die 12 Wochen nach der Transpla...

Dieses Protokoll stellt eine neue chirurgische Technik der Nierentransplantation von Mäusen vor, die sich auf eine modifizierte Strategie der arteriellen Anastomose konzentriert. Eine vaskuläre Nahttechnik, einschließlich einer einfachen und sichereren Harnleiter-Blasen-Anastomose-Methode, wird ebenfalls vorgestellt. Diese Modifikationen verkürzen die Operationszeit und verbessern die Erfolgsquote der Nierentransplantation der Maus.

Eine modifizierte Operationstechnik zur Nierentransplantation bei Mäusen

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Die Nierentransplantation bei Mäusen ist für die Untersuchung der Mechanismen der akuten und einer chronischen Allotransplantatabstoßung unerlässlich. Hier stellen wir eine neue Operationstechnik zur Gefäßanastomose und der ureteralen Implantation im abdominalen Nierentransplantationsmodell bei Mäusen vor. In traditionellen Nierentransplantationsmodellen der Maus ist der obere Teil der Aorta ungefähr zu den Nierenarterien ligiert.Die linke Nierenvene des Spenders wird an der Hohlvene durchblutet und die Spenderaorta wird unterhalb der Nierenarterie gleichmäßig geteilt, um später an die Bauchaorta des Empfängers anastomosiert zu werden. Bei dieser modifizierten Technik der Mausnierentransplantation wird die linke Nierenvene des Spenders auch an der Hohlvene transzediert, aber die Spenderaorta wird oberhalb des Nachwuchses der Nierenarterie und ihrer Anastomose zur abdominalen Aorta des Empfängers geschnitten. Während das Spenderende der Aorta ligiert ist, bleibt die Harnleiterarterie bewusst erhalten.Nun beginnen wir mit der Demonstration des chirurgischen Eingriffs. Für die Anästhesie, legen Sie die Maus in die Box zum Einatmen von Isofluran etwa 40 bis 60 Sekunden, um Bewusstlosigkeit zu induzieren. Sobald die Maus betäubt ist, wiegen Sie die Maus.Entsprechend dem Gewicht der Maus wird der betäubten Maus intraperitoneale Injektion von Ketamin, Xylat und Acepromazin verabreicht. Wenn die Anästhesie wirksam geworden ist, schneiden Sie das Bauchfell ab. Beheben und desinfizieren Sie dann die Maus auf dem Operationstisch.Schneiden Sie die Haut mit dem Kreuzbauchschnitt ab. Schneiden Sie die Muskeln der Bauchdecke ab. Als nächstes bedecken Sie vorsichtig die Eingeweide mit einer salzhaltigen Gaze weg.Legen Sie die linke Niere, die Aorta und die Hohlvene inferior frei. Kauterisieren Sie die linken Lendenwirbelvenen, einschließlich ihrer darunter liegenden Äste und andere kleine Gefäße einschließlich des linken Nebennierengefäßes, sorgfältig. Mobilisieren Sie die Aortenregion zwischen den linken und rechten Nierenarterien von etwa zwei Millimetern Länge.Trennen Sie die infrarenale Vena cava inferior und die Aorta. Und passieren Sie gekrümmte Pinzetten unter der Aorta, um eine lose Bindung von 7,06 Naht um dieses Gefäß zu legen. Kreuzklemmen Sie den Bereich der Aorta unterhalb der rechten Nierenarterie und der unteren Hohlvene mit zwei fünf Millimeter Mikrovaskulärklemmen ein.Transsektieren Sie die linke Nierenvene aus der Vena cava. Spülen Sie die Aorta mit einem Milliliter Heparinlösung. Ziehen Sie die Ligatur fest und schneiden Sie die Aorta sowohl unterhalb der Ligatur als auch unterhalb der proximalen Klemme ab.Bereiten Sie sich sorgfältig vor, damit die empfindliche Harnleiterarterie vollständig erhalten bleibt. Befreien Sie die linke Niere und die damit verbundenen Gefäße vollständig, indem Sie vorsichtig alle Gefäße, die das Gewebe umgeben, kauterisieren. Entfernen Sie die Niere und lagern Sie sie in Zelllinienlösung bei vier Grad.Die ersten Operationsschritte ähneln denen, die zuvor für die Spendermaus gezeigt wurden, einschließlich Anästhesie und Desinfektion. Öffnen Sie den Bauch über einen medianen Schnitt und bedecken Sie dann die Bauchorgane mit einer feuchten Gaze mit Kochsalzlösung. Bewahren Sie die infrarenale Aorta sorgfältig auf und stellen Sie sicher, dass jeder große Gefäßzweig kauterisiert ist.Verwenden Sie die elektrische Kauterisation, um den linken Harnleiter vorsichtig an einer Position proximal zum Nierenbecken zu sezieren. Entfernen Sie dann die linke Niere. Legen Sie die untere Hohlvene und die Bauchaorta frei und lösen Sie sie vom umgebenden Fettgewebe mit einer Länge von etwa vier Millimetern.Dann Kreuzklemme jeweils mit zwei mikrovaskulären Klemmen ungefähr und distal von ihnen. Verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um eine 10/0 monofile Nahtnadel zu führen, die von proximaler zu distaler Weise durch die Aortenwand gelegt wird. Eine elliptische Arteriotomie von etwa einem Millimeter wird durch sanftes Aufwärtsziehen der Naht erreicht, während mit einer feinen, gebogenen Schere direkt unterhalb der unteren Nadelfläche geschnitten wird.Führen Sie die Spender-Empfänger-Aorta-Anastomose in einer End-to-Side-Weise durch. Stitchen Sie die proximalen und distalen Enden der Anastomose. Letzter Stich mit zwei separaten 10.0-Nähten.Lassen Sie nach dem Binden die beiden langen Nähte, einschließlich der Nadel, an Ort und Stelle. Nähen Sie die linke Seite der Aortenwand der Anastomose kontinuierlich mit zwei gleichmäßig verteilten Stichen in distal-proximaler Richtung. Nach dem letzten Stich führen Sie die Naht durch eine Teildicke der Gefäßwand oberhalb der oberen Schrägnahtbindung und üben gleichzeitig sanfte Traktion bis zum kurzen Ende der unteren Nahtbindung aus.Beachten Sie, dass bei dieser neuen knotenlosen Technik der letzte Stich nicht an das kurze Ende der oberen Bindung gebunden ist. Drehen Sie die transplantierte Niere in ihre normale Position. Nähen Sie nun kontinuierlich die rechte Wand der Aortenanastomose proximal zu distal mit drei Stichen proximal zu distal.Beachten Sie, dass im Vergleich zur herkömmlichen Operationstechnik die letzte Naht mit der distalen Krawatte in der Nähe verschmolzen wird. Binden Sie es nicht an das Ende der unteren Naht, sondern schneiden Sie es ab, um stattdessen eine freie Länge von etwa zwei bis drei Millimetern zu erhalten. Schneiden Sie die untere Hohlvene längs mit einer ausreichenden Länge von ca. 1,5 Millimetern ab.Positionieren Sie diesen Schnitt leicht unter seinem Aortengegenstück. Führen Sie die venöse Anastomose mit dem gleichen Nahtverfahren wie zuvor beschrieben durch, mit dem Unterschied, dass für jede Seite der Anastomose vier bis fünf Stiche erforderlich sind. Der letzte Stich wird als freies Ende von ähnlicher Länge ähnlich der oben beschriebenen Aortenanastomose belassen.Und die neue knotenlose Anastomose-Technik, der letzte Stich wird nicht gebunden, sondern frei gelassen. Dies verkürzt die Operationszeit und ermöglicht es dem Chirurgen, die Größe der Anastomose zu erhöhen oder zu verringern. Diese Verbesserung reduziert die Schwierigkeit und die Komplikationen nach der Operation der vaskulären Anastomose.Nachdem Sie beide Anastomosen abgeschlossen haben, verwenden Sie ein trockenes Tupfer, um etwa 10 bis 20 Sekunden lang sanften Druck auf den vernähten Bereich auszuüben. Danach können beide Klemmen entfernt werden. Dringen Sie mit einer geraden Nadel mit 10.0-Naht durch die Urinblase des Empfängers ein und führen Sie sie zur Orientierung in ein 21-G-Nadellumen ein.Führen Sie nun die 21 G Nadel, um ein Loch an der Stelle der vorherigen Nadelapplikation zu nähen und die Nadel herauszuziehen. Nähen Sie das getrimmte Harnleiterende und perforieren Sie die Blase mit dieser 10.0-Naht erneut an der Stelle ihres Eintritts. Schleppen Sie das 10.0-Filament und den Harnleiter durch das konstruierte Loch in die Urinblase.Anastomose des Harnleiters des Spenders an die Urinblase des Empfängers. Verbinden Sie hier die äußere Membran des Harnleiters mit der äußeren Membran der Blasenwand und führen Sie intermittierende Nähte mit drei bis vier Stichen durch. Ziehen Sie die Traktionsnaht heraus.Legen Sie den Darm zurück in die Bauchhöhle. Führen Sie zweischichtige Nähte durch, zuerst die Bauchmuskeln, gefolgt von der Haut, um die Bauchwunde zu schließen. Legen Sie die transplantierten Mäuse in eine sauerstoff- und temperaturkontrollierte Kammer, um sich nach der Operation zu erholen.Geben Sie eine angemessene postoperative Analgesie vier aufeinanderfolgende Tage nach der Operation. Führen Sie fünf Tage nach der Transplantationsanästhesie eine kontralaterale Nephrektomie der Empfängermaus durch. Heben Sie den Zustand der Maus an und zeichnen Sie ihn auf.Wir verglichen die konventionellen und modifizierten Transplantationstechniken, indem wir histologische Veränderungen der transplantierten Isotransplantatnieren im Vergleich zu den kontralateralen Nieren des nativen Empfängers bewerteten. Sowohl der Grad der Trophäe der Nierentubuli als auch die renale interstitielle Fibrose unterschieden sich vier bzw. 12 Wochen nach der Transplantation nicht signifikant. Zuvor haben wir das Ergebnis dieser neuen knotenlosen Technik untersucht und mit dem klassischen Ansatz in Bezug auf die technischen Aspekte des Verfahrens interoperative und postoperative Komplikationen verglichen.Die modifizierte Technik, die hier gezeigt wird, war mit einem geringeren Auftreten von intratransplantierten arteriellen venösen thrombotischen Ereignissen verbunden. Die Zeit, um die Stenose durchzuführen, war signifikant kürzer und ein ausgezeichnetes Nierenisotransplantat, ein langfristiges Überleben wurde erreicht. Die Nierentransplantation bei Mäusen ist ein kompliziertes und innovatives Verfahren.Dies ist eine neue chirurgische Technik für eine Gefäßanastomose und Nierenimplantation, die die Gesamterfolgsrate verbessern soll, was sie zu einem zuverlässigen Werkzeug für die Untersuchung der Autoimmunreaktion nach einer Nierentransplantation macht.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

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Lernen Sie eine modifizierte Operationstechnik zur Nierentransplantation bei Mäusen mit verbesserter arterieller Anastomose und erhaltener Harnleiterarterie. Diese Methode verkürzt die Operationszeit und erhöht die Erfolgsrate signifikant.

Eine modifizierte Operationstechnik zur Nierentransplantation bei Mäusen

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