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Detection of Post-Replicative Gaps Accumulation and Repair in Human Cells Using the DNA Fiber Assay
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使用DNA纤维测定检测人细胞中复制后间隙的积累和修复

DOI:
10.3791/63448-v

•

10:32 min

•

February 03, 2022

•

, , ,
1Department of Microbiology, Institute of Biomedical Sciences,University of São Paulo, 2Division of Oncology, Department of Internal Medicine,Washington University in St. Louis

Kapitel

  • 00:04Introduction
  • 01:27S1 Fiber Experimental Setup
  • 03:51DNA Fiber Preparation by Spreading
  • 04:58Immunostaining of DNA Fibers
  • 06:45Image Acquisition and Analysis
  • 08:39Results: Post-Replicative ssDNA Gaps on Ongoing Forks by S1 Fiber Assay and Post-Replicative Repair by Gap Filling
  • 09:42Conclusion

Summary

Automatische Übersetzung

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在这里，我们描述了DNA纤维测定的两种修饰，以研究病变诱导后复制DNA的单链DNA间隙。S1纤维测定能够使用ssDNA特异性S1内切酶检测复制后间隙，而间隙填充测定允许间隙修复的可视化和定量。

Tags

DNA Fiber AssayPost-replicative GapsS1 NucleaseDNA RepairReplication StressGenome IntegrityUV-C IrradiationCldU IncorporationCSK PermeabilizationDNA Lesion Detection

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