Verwendung einer Zell-Tracer-Injektion zur Untersuchung des Ursprungs von Neointima-bildenden Zellen in einem Rattensack-Seitenwandmodell

Durch die Verwendung einer direkten intraaortalen Zell-Tracer-Anwendung können wir die Rolle von Endothelzellen, die aus der Elternarterie stammen, bei der Neointima-Bildung zu zwei verschiedenen Zeitpunkten analysieren. Ein großer Vorteil dieser Technik ist eine direkte, einpunktige, interpretative In-vivo-Injektion, die dieses Modell zu einer robusten und reproduzierbaren Technik macht. Inkubieren Sie vor der Operation die arteriellen Beutel von Spenderratten in 0,1% Natriumdodecylsulfat für 10 Stunden bei 37 Grad Celsius, um dezellularisierte Aneurysmen zu erhalten.

Holen Sie diese Beutel einige Tage vor der Operation von Spendertieren ab. Analysieren Sie zunächst das Verhalten des Tieres und untersuchen Sie die Schleimhäute und den Turgor im Rahmen der präoperativen klinischen Untersuchung. Notieren Sie das Gewicht jedes Tieres.

Für die Anästhesieinduktion legen Sie alle Ratten in eine saubere Box, die mit Sauerstoff versorgt ist, bis sie nach fünf bis 10 Minuten das Bewusstsein verlieren. Überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie durch das Fehlen des Pedalentzugsreflexes. Legen Sie die Ratten in Rückenlage und rasieren Sie den Thoracoabdominalbereich mit einem elektrischen Rasierer.

Befestigen Sie mit Klebeband die Pfoten der Ratte auf einem Brett, das von einem Heizkissen bedeckt ist, das mit einer selbstregulierenden Rektumsonde verbunden ist. Führen Sie die rektale Sonde in den Anus der Ratte ein, um die gewünschte Temperatur von 37 Grad Celsius mit Hilfe eines Heizkissens aufrechtzuerhalten. Installieren Sie dann einen Sensor am rechten Hinterbein, der mit einem computergestützten System verbunden ist, um die Vitalparameter intraoperativ zu überprüfen.

Für die perianästhetische Pflege tragen Sie ein steriles ophthalmologisches Gleitmittel auf die Augen auf und bedecken Sie sie mit einer undurchsichtigen Folienmaske, um Austrocknung und Beschädigung durch die OP-Lampe zu verhindern. Desinfizieren Sie das Operationsfeld mit Povidonjod und drapieren Sie das Operationsfeld steril. Legen Sie einen Mikrotupfer mit violetter Polsterung unter die proximalen und distalen Teile der Aorta, um die Arterie besser sichtbar zu machen, sobald sie von der Cavalvene getrennt ist.

Schützen Sie dann den Bauch mit weißer Gaze. Am Betriebstag zwei Mikroliter des Zell-Tracers durch Pipettieren in einem Milliliter PBS auflösen. Übertragen Sie die Mischung in eine Ein-Milliliter-Spritze, die mit einer Kanüle ausgestattet ist.

Schalten Sie das Licht im Operationssaal aus. Führen Sie mit einem Mikroskop die Einpunktinjektion in den mittleren ventralen Teil der Aorta mit einer Mikropinzette durch und injizieren Sie vorsichtig einen Milliliter heparinisierte 0,9% Salzlösung. Injizieren Sie den Zell-Tracer vorsichtig und schalten Sie sofort auch das Operationsmikroskop aus.

Schützen Sie den Bauch wieder mit nasser Gaze. Lassen Sie den Farbstoff mindestens 15 Minuten inkubieren. Schalten Sie dann das Mikroskop und die Operationssaalbeleuchtung ein.

Verwenden Sie eine Mikropinzette und eine Mikroschere, um die Längsarteriotomie durchzuführen, so dass ihre Länge den Durchmesser des geernteten Aneurysmas mittelt. Legen Sie das Aneurysma vor der Arteriotomie neben die Aorta, um die richtige Länge zu gewährleisten. Nähen Sie das Aneurysma mit acht bis 10 Einzelstichen mit einer nicht resorbierbaren 10-0-Naht.

Vor dem letzten Stich die Spule mit einer Packungsdichte von einem Zentimeter liefern. Bei diesem Modell kann entweder eine Spulen- oder Stentbehandlung durchgeführt werden. Entfernen Sie dann vorsichtig die temporären Klemmen, beginnend distal, unter kontinuierlicher Bewässerung mit heparinisierter Kochsalzlösung.

Schließen Sie die Wunde in einer geschichteten Art und Weise. Am Ende der Operation kehren Sie die Anästhesie mit einer subkutanen Injektion um. Lassen Sie jedes betriebene Tier sich in einem sauberen Käfig erholen, bis es vollständig wach und bei Bedarf mit einer Heizlampe warm ist.

Die gezogenen Ausgangsaneurysmavolumina für Tag sieben und Tag 21 unterschieden sich nicht signifikant für dezellularisierte oder vitale Aneurysmen zwischen den Spulen- oder Stentbehandlungsgruppen. Gezogene FU-Volumina für dezellularisierte Aneurysmen zeigten ein nicht signifikantes Aneurysmawachstum in Coiled im Vergleich zu den stented Aneurysmen. Das gezogene FU-Volumen war in der Vitalwickelgruppe signifikant größer als in der Stentgruppe.

Die Mengen an Zell-Tracer-positiven Zellen in der Neointima dezellularisierter Aneurysmen unterschieden sich nicht signifikant zwischen den Stent- oder Coil-behandelten Gruppen am siebten Tag FU, waren aber bei Stent-Ratten an Tag 21 signifikant höher, FU.No signifikante Unterschiede bei vital-aneurysmnahten Ratten entweder sieben Tage oder 21 Tage FU.In dezellularisierte Aneurysmen bei sieben Tagen FU festgestellt wurden. Signifikant mehr Zell-Tracer-positive Zellen verblieben im Thrombus des Stent-Behandelten im Vergleich zur spulenbehandelten Gruppe. Dieser Unterschied wurde bei lebenswichtigen Aneurysmen nach sieben Tagen FU nicht beobachtet. Denken Sie daran, immer das Licht im Operationssaal auszuschalten, bevor Sie den Zell-Tracer injizieren, um ein Ausbleichen zu verhindern. Lassen Sie den Farbstoff auch mindestens 15 Minuten inkubieren.