Name: Intravitale subzelluläre Mikroskopie der Brustdrüse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: Erfahren Sie die intravitale subzelluläre Mikroskopie der laktierenden Maus-Milchdrüse mit Laser-Scanning-Konfokal- und Multiphotonenmikroskopie. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung von Lipidtropfen-Dynamik und Drüsenmorphologie.

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<ol><li>Scheele, C. L. G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identity+and+dynamics+of+mammary+stem+cells+during+branching+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identity and dynamics of mammary stem cells during branching morphogenesis.</a> Nature. 542 (7641), 313-317 (2017).</li>
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<li>Kedrin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastatic+behavior+through+a+mammary+imaging+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window.</a> Nature Methods. 5 (12), 1019-1021 (2008).</li>
<li>Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic%2C+long-term+in+vivo+imaging+of+tumor-stroma+interactions+in+mouse+models+of+breast+cancer+using+spinning-disk+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Dynamic, long-term in vivo imaging of tumor-stroma interactions in mouse models of breast cancer using spinning-disk confocal microscopy.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (2), (2011).</li>
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<li>Dawson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+ductal+macrophages+survey+the+mammary+epithelium+and+facilitate+tissue+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident ductal macrophages survey the mammary epithelium and facilitate tissue remodelling.</a> Nature Cell Biology. 22 (5), 546-558 (2020).</li>
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<li>Green, K. A., Lund, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ECM+degrading+proteases+and+tissue+remodelling+in+the+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">ECM degrading proteases and tissue remodelling in the mammary gland.</a> Bioessays. 27 (9), 894-903 (2005).</li>
<li>Lund, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+phases+of+apoptosis+in+mammary+gland+involution%3A+proteinase-independent+and+-dependent+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Two distinct phases of apoptosis in mammary gland involution: proteinase-independent and -dependent pathways.</a> Development. 122 (1), 181-193 (1996).</li>
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<li>Hadjantonakis, A. K., Gertsenstein, M., Ikawa, M., Okabe, M., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+green+fluorescent+mice+by+germline+transmission+of+green+fluorescent+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Generating green fluorescent mice by germline transmission of green fluorescent ES cells.</a> Mechanisms of Development. 76 (1-2), 79-90 (1998).</li>
<li>Mazumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45 (9), 593-605 (2007).</li>
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<li>Hunziker, W., Kraehenbuhl, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+transcytosis+of+immunoglobulins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Epithelial transcytosis of immunoglobulins.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 3 (3), 287-302 (1998).</li>
<li>Messal, H. A., van Rheenen, J., Scheele, C. L. G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intravital+microscopy+toolbox+to+study+mammary+gland+dynamics+from+cellular+level+to+organ+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">An intravital microscopy toolbox to study mammary gland dynamics from cellular level to organ scale.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 26 (1), 9-27 (2021).</li>
<li>Teter, B. B., Sampugna, J., Keeney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+fat+depression+in+C57Bl%2F6J+mice+consuming+partially+hydrogenated+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Milk fat depression in C57Bl/6J mice consuming partially hydrogenated fat.</a> Journal of Nutrition. 120 (8), 818-824 (1990).</li>
<li>Russell, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+of+the+mammary+epithelium+with+adenovirus+vectors+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Transduction of the mammary epithelium with adenovirus vectors in vivo.</a> Journal of Virology. 77 (10), 5801-5809 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>488 Laser</td><td>Melles-Griot-CW</td><td></td><td>&nbsp; Laser 50 mW</td></tr><tr><td>60x PLAPON Öl-Immersionsobjektiv (NA 1.42)</td><td>Olympus</td><td>1-U2B933</td><td>Objektiv Konfokales Mikroskop</td></tr><tr><td>633 Laser</td><td>Melles-Griot-CW</td><td></td> <td>He-Ne Laser 12 mW</td></tr><tr><td>63x Objektiv (NA 1.40, HC PL APO CS2)</td><td>Leica</td><td>11506350</td><td>Objektiv Zwei-Photonen-Mikroskop</td></tr><tr><td>BA 410-460 nm</td><td>Chroma</td><td>-</td><td>Bandpassfilter</td></tr><tr><td>BA 495-540 nm</td><td>Chroma-Bandpassfilter</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>BA 505-605 nm</td><td>Chroma-Bandpassfilter</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>BA 655-755 nm</td><td>Chroma-Bandpassfilter</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Bordipyrromethan (BODIPY) 665/676</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B3932</td><td>Lipidperoxiationssensor</td></tr><tr><td>Carbomer-940</td><td>Snowdrift Farm</td><td>739601480651</td><td></td></tr><tr><td>Gelkatheter</td><td>Terumo</td><td>SV27EL</td><td>Geflügelte Infusionssets&nbsp;</td></tr><tr><td>Kauterisierer&nbsp;</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>GEM 5917</td><td>Kautersystem</td></tr><tr><td>CMV-Cre Maus&nbsp;</td><td>Jackson Labor</td><td>006054</td><td>Maus Linie</td></tr><tr><td>Deckglas</td><td>Bioptechs-30mm</td><td></td> <td>Durchmesser Decklippe für inverses Mikroskop</td></tr><tr><td>Curity 4x4 Zoll Allzweck Schwamm</td><td>Gaze Covidien</td><td>9024</td><td>Schwamm</td></tr><tr><td>EGFPcyto Maus</td><td>Jackson Labor</td><td>003291</td><td>Mauslinie</td></tr><tr><td>Fiji/ImageJ Software</td><td>Open</td> <td>Source-Freies</td> <td>Software-Tool</td></tr><tr><td>Feine Pinzette</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>FC003 8</td><td>Gewebezange</td></tr><tr><td>Fluoview 1000 Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>FV1000</td><td>Konfokales</td></tr><tr><td>Mikroskop FluoView Software</td><td></td> Olympus-Konfokales <td></td><td>Mikroskop und Zwei-Photonen-Mikroskop</td></tr><tr><td>Handheld Elektrorasierer</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>CLP-8786-451A</td><td>Akku-Clipper</td></tr><tr><td>Wärmekissen</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>DPIP</td><td>Heizkissen für Tiere</td></tr><tr><td>HyD-Detektoren</td><td>Leica-Leica</td><td></td> <td>4Tune Spektraldetektor</td></tr><tr><td>Imaris Software</td><td>Bitplane / Oxford Instrumente-Kommerzielles</td><td></td> <td>Software-Tool</td></tr><tr><td>Ingisht X3 abstimmbarer Laser</td><td>Spectra Physics</td><td>Insight X3</td><td>abstimmbarer Puls-Laser</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>VetOne</td><td>13985-046-40</td><td>Anästhetikum</td></tr><tr><td>Ketamin&nbsp;</td><td>VetOne</td><td>13985-702-10</td><td>Anästhetikum</td></tr><tr><td>LAS X Software</td><td></td> Leica-Zwei-Photonen-Mikroskop <td></td><td>Software-Tool</td></tr><tr><td>Mai-Tai abstimmbarer Laser</td><td>Spectra Physics</td><td>Mai-Tai</td><td>Laser</td></tr><tr><td>MetaMorph</td><td>Molecular</td> <td>Devices-Kommerzielles</td> <td>Software-Tool</td></tr><tr><td>Monodansylpentan AUTODOT</td><td>Abcepta</td><td>Sm1000a</td><td>Lipid-Tröpfchen-Farbstoff</td></tr><tr><td>MPE-RS Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>IX70</td><td>Zwei-Photonen-Mikroskop</td></tr><tr><td>mT/mG Maus</td><td>Jackson Labor</td><td>007676</td><td>Mauslinie</td></tr><tr><td>Objektivheizung</td><td>Bioptechs</td><td>150819</td><td>Objektivheizung für konfokale und Zwei-Photonen-Mikroskope</td></tr><tr><td>Sauerstoffgesättigte Atemkammer</td><td>Patterson Scientific</td><td>78933385, SAS3 und EVAC4</td><td>Gasanästhesie- und Evakuierungssystem&nbsp;</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Heathrow Scientific</td><td>HS234526B</td><td>Halbtransparenter, flexibler, thermoplastischer</td></tr><tr><td>Folien-PMT-Detektor</td><td></td> Olympus-Descanned<td></td><td>&nbsp; &nbsp; Detektoren</td></tr><tr><td>PMT-Detektor</td><td>LSM-Technologie</td><td>Sonderanfertigungen</td><td>Non-Descan-Detektoren</td></tr><tr><td>Pumpe</td><td>Harvard Apparat</td><td>703602, 704402</td><td>Nanomit-Injektor und -Controller</td></tr><tr><td>Kochsalzqualität</td><td>Biologisch</td><td>114-055-721EA</td><td>Normale Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Scharfe Schere mit stumpfem Ende</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>SCT-S 508</td><td>Chirurgische Schere</td></tr><tr><td>Spritze</td><td>Covidien</td><td>22-257-150</td><td>1mL Tuberkulinspritze</td></tr><tr><td>TCS SP8 Tauchspektralmikroskop</td><td>Leica</td><td>SP8</td><td>Zwei-Photonenmikroskop</td></tr><tr><td>Pinzette&nbsp;</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>FC032</td><td>Gewebezange</td></tr><tr><td>Xylazin &nbsp;</td><td>VetOne</td><td>13985-704-10</td><td>Anästhetikum</td></tr></tbody></table>

intravitale subzelluläre mikroskopie der brustdrüse

Intravital Subcellular Microscopy of the Mammary Gland

Milch wird aus polarisierten Alveolarepithelzellen sezerniert, die sich während der Schwangerschaft von den Knospen eines ausgedehnten duktulären Baumes differenzieren26 (Abbildung 2A). Vorläufer für die Milchsynthese werden über basale/laterale Membranen assimiliert und fertige Produkte werden über die apikale Oberfläche in einen zentralen "Milchraum" sezerniert. Die basale Seite jeder Alveole ist von einer sternförmigen Anordnung von Myoepithelzellen bedeckt (<stron...

Intravitale subzelluläre Mikroskopie der Brustdrüse

The mammary gland constitutes a model par excellence for investigating epithelial functions, including tissue remodeling, cell polarity, and secretory ...

intravital-subcellular-microscopy-of-the-mammary-gland

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Zeitraffer-Bildgebung verwendet wird, um das Verhalten von primären präneoplastischen Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen Brustkrebsrisiko abgeleitet, um zu bestimmen, ob es Korrelationen zwischen spezifischen Verhaltensparametern und unterschiedlichen genetischen Läsionen sind beurteilen.

Zeitraffer-Imaging of Primary Präkanzeröse Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen der Breast Cancer Abgeleitet

Intravitalmikroskopie ist ein leistungsfähiges Werkzeug, das die Abbildung verschiedener biologischer Prozesse in lebenden Tieren ermöglicht. In diesem Artikel stellen wir eine detaillierte Methode zur Abbildung der Dynamik der subzellulären Strukturen, wie den sekretorischen Granula, in den Speicheldrüsen von lebenden Mäusen.

Intravitalmikroskopie zur Imaging subzellulärer Strukturen in lebenden Mäusen Ausdruck Fluoreszierende Proteine

Ein Protokoll für die nicht-invasive intraductal Lieferung von wässrigen Reagenzien zu der Brustdrüse der Maus beschrieben. Die Methode nutzt lokalisierte Injektion in den Brustwarzen der Brustdrüsen Targeting Milchgänge speziell. Diese Technik ist für eine Vielzahl von Verbindungen, einschließlich siRNA, chemotherapeutischen Mitteln und kleinen Molekülen anpaßbar.

Intraduktale Injection für Lokalisierte Drug Delivery auf die Maus Milchdrüse

Die in diesem Artikel beschriebene indirekte Immunofluoreszenz-Protokoll ermöglicht den Nachweis und die Lokalisierung von Proteinen in der Milchdrüse der Maus. Eine vollständige Verfahren wird gegeben, um Brustdrüsenproben herzustellen, um die Immunhistochemie die Gewebeschnitte durch Fluoreszenzmikroskopie durchführen, um Bild und um Bilder zu rekonstruieren.

Die indirekte Immunfluoreszenz auf Gefrierschnitte von Mäusemilchdrüse

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung von Multiphotonen - Mikroskopie ausgedehnte Zeitraffer-Bildgebung von mehrzelligen Interaktionen in Echtzeit durchzuführen, in vivo auf Einzelzellauflösung.

Erweiterte Zeitraffer-Intravital Imaging von Echtzeit-Vielzellige Dynamics im Tumormikromilieu

Hier beschreiben wir eine Technik zur lokalisierten Verabreichung von Reagenzien an die Brustdrüse von Kaninchen über eine intraduktale Injektion. Darüber hinaus beschreiben wir ein Protokoll zur Visualisierung und Bestätigung der Abgabe durch hochauflösende Ultraschallbildgebung von Kontrastmitteln.

Intraduktale Lieferung an die Kaninchen Brustdrüse

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Isolierung des gesamten, intakte Maus Milchdrüsen um Ausdruck der extrazellulären Matrix (ECM) und duktale Morphologie zu untersuchen. Maus #4 Bauch-Drüsen wurden von ca. 8-10 Wochen alten weiblichen nulliparous Mäusen, in neutral gepuffertem Formalin fixiert, geschnitten und gefärbt mit Immunohistochemistry für ECM Proteine extrahiert.

Isolierung von intakt, ganze Maus Milchdrüsen zur Analyse der extrazellulären Matrix Ausdruck und Drüse Morphologie

Hier wird ein Ansatz für die intravitale Langzeitbildgebung mit optisch klaren Silikonfenstern vorgestellt, die direkt auf das interessierende Gewebe/Organ und die Haut geklebt werden können. Diese Fenster sind billiger und vielseitiger als andere, die derzeit im Feld verwendet werden, und das chirurgische Einführen verursacht begrenzte Entzündungen und Leiden bei den Tieren.

Längsschnittliche intravitale Bildgebung durch klare Silikonfenster

Dieses Protokoll beschreibt ein neuartiges Brustbildfenster mit einem austauschbaren Deckel (R.MIW). Die intravitale Mikroskopie nach Implantation des R.MIW ermöglicht eine Längs- und Mehrtagesbildgebung der gesunden und erkrankten Brustdrüse mit zellulärer Auflösung während der verschiedenen Entwicklungsstadien.

Längsschnittliche intravitale Mikroskopie unter Verwendung eines Brustbildgebungsfensters mit austauschbarem Deckel

Das hier beschriebene intravitale Bildgebungsverfahren nutzt die zweite harmonische Kollagenerzeugung und die endogene Fluoreszenz aus dem metabolischen Co-Faktor NAD(P)H, um eine nicht markierte Tumormikroumgebung nicht-invasiv in Tumor-, Stroma- und Gefäßkompartimente für eine eingehende Analyse von intravitalen 4D-Bildern zu segmentieren.

Ein markierungsfreier Segmentierungsansatz für die intravitale Bildgebung von Brusttumor-Mikroumgebungen

Das vorliegende Protokoll beschreibt die intraduktale Injektion von viralen Vektoren über die Zitze, um Gene von Interesse in die Brustepithelzellen einzuschleusen.

Im lebenden Organismus Gentransfer in Brustepithelzellen der Maus durch intraduktale Injektion in der Brust

Erfahren Sie die intravitale subzelluläre Mikroskopie der laktierenden Maus-Milchdrüse mit Laser-Scanning-Konfokal- und Multiphotonenmikroskopie. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung von Lipidtropfen-Dynamik und Drüsenmorphologie.

Intravitale subzelluläre Mikroskopie der Brustdrüse

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