Name: Kontrolle der Partikelfraktion in mikroporös geglühten Partikelgerüsten für die 3D-Zellkultur (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-28T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie die Partikelfraktion in MAP-Gerüsten für die 3D-Zellkultur präzise steuern. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Gewebematerialien für die regenerative Medizin.

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Die Autoren danken den National Institutes of Health, den National Institutes of Neurological Disorders and Stroke (1R01NS112940, 1R01NS079691, R01NS094599) und dem National Institute of Allergy and Infectious Disease (1R01AI152568). Diese Arbeit wurde zum Teil an der Duke University Shared Materials Instrumentation Facility (SMIF) durchgeführt, einem Mitglied des North Carolina Research Triangle Nanotechnology Network (RTNN), das von der National Science Foundation (Preisnummer ECCS-2025064) als Teil der National Nanotechnology Coordinated Infrastructure (NNCI) unterstützt wird. Die Autoren danken dem ehemaligen Postdoc des Labors, Dr. Lucas Schirmer, sowie Ethan Nicklow für ihre Unterstützung bei der Erstellung des 3D-gedruckten Geräts für Zellkulturexperimente.

<ol><li>Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P. O., Di Carlo, D., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+wound+healing+by+injectable+microporous+gel+scaffolds+assembled+from+annealed+building+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Materials%22%5BJournal%5D)">Accelerated wound healing by injectable microporous gel scaffolds assembled from annealed building blocks.</a> Nature Materials. 14 (7), 737-744 (2015).</li>
<li>Daly, A. C., Riley, L., Segura, T., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+microparticles+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Materials%22%5BJournal%5D)">Hydrogel microparticles for biomedical applications.</a> Nature Reviews Materials. 5 (1), 20-43 (2020).</li>
<li>Darling, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click+by+click+Microporous+Annealed+Particle+%28MAP%29+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Click by click Microporous Annealed Particle (MAP) scaffolds.</a> Advanced Healthcare Materials. 9 (10), 1901391(2020).</li>
<li>Truong, N. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+annealed+particle+hydrogel+stiffness%2C+void+space+size%2C+and+adhesion+properties+impact+cell+proliferation%2C+cell+spreading%2C+and+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Microporous annealed particle hydrogel stiffness, void space size, and adhesion properties impact cell proliferation, cell spreading, and gene transfer.</a> Acta Biomaterialia. 94, 160-172 (2020).</li>
<li>Pfaff, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+improved+photoannealing+of+Microporous+Annealed+Particle+%28MAP%29+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Selective and improved photoannealing of Microporous Annealed Particle (MAP) scaffolds.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 7 (2), 422-427 (2021).</li>
<li>Sideris, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+hydrogels+based+on+hyaluronic+acid+building+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Particle hydrogels based on hyaluronic acid building blocks.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 2 (11), 2034-2041 (2016).</li>
<li>Caldwell, A. S., Campbell, G. T., Shekiro, K. M. T., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clickable+microgel+scaffolds+as+platforms+for+3D+cell+encapsulation%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Clickable microgel scaffolds as platforms for 3D cell encapsulation.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (15), 1700254(2017).</li>
<li>Qazi, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+rod-shaped+particles+influence+injectable+granular+hydrogel+properties+and+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Anisotropic rod-shaped particles influence injectable granular hydrogel properties and cell invasion.</a> Advanced Materials. 34 (12), 2109194(2022).</li>
<li>Wilson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stoichiometric+post+modification+of+hydrogel+microparticles+dictates+neural+stem+cell+fate+in+microporous+annealed+particle+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Stoichiometric post modification of hydrogel microparticles dictates neural stem cell fate in microporous annealed particle scaffolds.</a> Advanced Materials. 34 (33), 2201921(2022).</li>
<li>Muir, V. G., Qazi, T. H., Shan, J., Groll, J., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+microgel+fabrication+technique+on+granular+hydrogel+properties%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Influence of microgel fabrication technique on granular hydrogel properties.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 7 (9), 4269-4281 (2021).</li>
<li>Highley, C. B., Song, K. H., Daly, A. C., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jammed+microgel+inks+for+3D+printing+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Science%22%5BJournal%5D)">Jammed microgel inks for 3D printing applications.</a> Advanced Science. 6 (1), 1801076(2018).</li>
<li>Anderson, A. R., Nicklow, E., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+fraction+as+a+bioactive+cue+in+granular+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Particle fraction as a bioactive cue in granular scaffolds.</a> Acta Biomaterialia. 150, 111-127 (2022).</li>
<li>Pruett, L., Ellis, R., McDermott, M., Roosa, C., Griffin, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+heterogeneous+epidermal+growth+factor+release+from+microporous+annealed+particle+%28MAP%29+hydrogel+for+improved+wound+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Spatially heterogeneous epidermal growth factor release from microporous annealed particle (MAP) hydrogel for improved wound closure.</a> Journal of Materials Chemistry B. 9 (35), 7132-7139 (2021).</li>
<li>Sheikhi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microengineered+emulsion-to-powder+technology+for+the+high-fidelity+preservation+of+molecular%2C+colloidal%2C+and+bulk+properties+of+hydrogel+suspensions%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Polymer+Materials%22%5BJournal%5D)">Microengineered emulsion-to-powder technology for the high-fidelity preservation of molecular, colloidal, and bulk properties of hydrogel suspensions.</a> ACS Applied Polymer Materials. 1 (8), 1935-1941 (2019).</li>
<li>Brower, K., White, A. K., Fordyce, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-step+variable+height+photolithography+for+valved+multilayer+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multi-step variable height photolithography for valved multilayer microfluidic devices.</a> Journal of Visualized Experiments. (119), e55276(2017).</li>
<li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+Magnetic+Resonance+%28NMR%29+Spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+Science+Education+Database.+Organic+Chemistry.+JoVE%22%5BJournal%5D)">Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Spectroscopy.</a> JoVE Science Education Database. Organic Chemistry. JoVE. , Cambridge, MA. (2022).</li>
<li>Roosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+synthesis+of+microgel+building+blocks+for+microporous+annealed+particle+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microfluidic synthesis of microgel building blocks for microporous annealed particle scaffold.</a> Journal of Visualized Experiments. (184), e64119(2022).</li>
<li>Zhang, H., Dicker, K. T., Xu, X., Jia, X., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interfacial+bioorthogonal+crosslinking%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Letters%22%5BJournal%5D)">Interfacial bioorthogonal crosslinking.</a> ACS Macro Letters. 3 (8), 727-731 (2014).</li>
<li>Welzel, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryogel+micromechanics+unraveled+by+atomic+force+microscopy-based+nanoindentation%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Cryogel micromechanics unraveled by atomic force microscopy-based nanoindentation.</a> Advanced Healthcare Materials. 3 (11), 1849-1853 (2014).</li>
<li>Plieva, F., Huiting, X., Galaev, I. Y., Bergenståhl, B., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroporous+elastic+polyacrylamide+gels+prepared+at+subzero+temperatures%3A+control+of+porous+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Macroporous elastic polyacrylamide gels prepared at subzero temperatures: control of porous structure.</a> Journal of Materials Chemistry. 16 (41), 4065-4073 (2006).</li>
<li>Rommel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+microgel+rods+interlinked+into+soft+macroporous+structures+for+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Science%22%5BJournal%5D)">Functionalized microgel rods interlinked into soft macroporous structures for 3D cell culture.</a> Advanced Science. 9 (10), 2103554(2022).</li>
<li>Kurt, E., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acid+delivery+from+granular+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Nucleic acid delivery from granular hydrogels.</a> Advanced Healthcare Materials. 11 (3), 2101867(2021).</li>
<li>Isaac, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+bio-orthogonally+annealed+particle+hydrogels+for+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Microporous bio-orthogonally annealed particle hydrogels for tissue engineering and regenerative medicine.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 5 (12), 6395-6404 (2019).</li>
<li>Truong, N. F., Lesher-Pérez, S. C., Kurt, E., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathways+governing+polyethylenimine+polyplex+transfection+in+Microporous+Annealed+Particle+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pathways governing polyethylenimine polyplex transfection in Microporous Annealed Particle scaffolds.</a> Bioconjugate Chemistry. 30 (2), 476-486 (2019).</li>
<li>Koh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+in+vivo+delivery+of+stem+cells+using+microporous+annealed+particle+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Enhanced in vivo delivery of stem cells using microporous annealed particle scaffolds.</a> Small. 15 (39), 1903147(2019).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+tissue+formation+through+assembly+of+microgels+containing+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Cartilage tissue formation through assembly of microgels containing mesenchymal stem cells.</a> Acta Biomaterialia. 77, 48-62 (2018).</li>
</ol>

ARA und TS haben ein vorläufiges Patent auf diese Technologie angemeldet.

Die mikrofluidische Herstellung von HA-NB-Mikrogelen erzeugt nachweislich Mikrogele mit einem engeren Größenverteilungsbereich als dieEmulsionschargenproduktion 3,9. Die in diesem Protokoll beschriebenen Mikrogele wurden unter Verwendung eines MMP-spaltbaren Vernetzers (Ac-GCRDGPQGIWGQDRCG-NH2) formuliert, um den Materialabbau zu unterstützen. HA-NB-Mikrogele können jedoch auch mit einem alternativen Dithiol-Linker wie Dithiothreitol (DTT) vernetzt wer...

Mikroporöse geglühte Partikel (MAP)-Gerüste sind eine Unterklasse von körnigen Materialien, in denen die Mikrogel-Bausteine (μgel) miteinander verbunden sind, um ein poröses Gerüst zu bilden. Mit der einzigartigen Mikroarchitektur dieser körnigen Gerüste unterstützt die angeborene Porosität, die durch den Hohlraum zwischen vernetztem sphärischem Mikrogel erzeugt wird, eine beschleunigte Zellinfiltration und -migration1. Die Mikrogel-Bausteine von MAP-Gerüsten können sowohl aus synthetischen als auch aus natürlichen Polymeren mit chemischen Modifikationen hergestelltwerden 2. Die hier beschriebenen Methoden heben insbesondere die Verwendung von Mikrogelen hervor, die aus einem Hyaluronsäure (HA)-Rückgrat bestehen, das mit funktionellen Norbornen (NB)-Griffen modifiziert ist. Der funktionelle NB-Griff am HA-Polymer unterstützt Klickchemiereaktionen zur Bildung von Mikrogelen und deren Verknüpfung zu MAP-Gerüsten 3,4. Zahlreiche Verfahren wurden verwendet, um die Mikrogele miteinander zu verbinden (d.h. Glühen), wie enzymatische1, lichtbasierte5,6 und additivfreie Klickchemie 3,7 Reaktionen. In dieser Arbeit wird die additivfreie Klickchemie beschrieben, wobei die inverse Tetrazin-Norbornen-Elektronenbedarfs-Diels-Alder-Konjugation zur Verknüpfung der HA-NB-Mikrogele verwendet wird.
Zur Herstellung von MAP-Gerüsten erzeugen Anwender die Mikrogelbausteine zunächst unter Verwendung von Umkehremulsionen entweder in Batch-Systemen oder in mikrofluidischen Geräten sowie durch elektrohydrodynamisches Spritzen, Lithographie oder mechanische Fragmentierung2. Die Herstellung von sphärischen HA-NB-Mikrogelen wurde gut beschrieben und zuvor unter Verwendung von Batchemulsion2 und mikrofluidischen Tröpfchenerzeugungstechniken 8,9,10,11 berichtet. In dieser Arbeit wurden sphärische HA-NB-Mikrogele auf einer strömungsfokussierenden mikrofluidischen Plattform für kontrollierte Größe und Form erzeugt, wie zuvor beschrieben 8,9,10. Nach der Reinigung liegen die Mikrogele in einer wässrigen Suspension vor und müssen konzentriert werden, um einen verklemmten Zustand zu induzieren. Wenn sie verklemmt sind, weisen Mikrogele scherverdünnende Eigenschaften auf, die es ihnen ermöglichen, als injizierbare, raumfüllende Materialien zu fungieren1. Eine Methode zur Induktion eines gestauten Zustands besteht darin, die Mikrogele durch Lyophilisation oder Gefriertrocknung zu trocknen und anschließend das getrocknete Produkt in einem kontrollierten Volumen zu rehydrieren12. Alternativ kann überschüssiger Puffer aus der Mikrogelaufschlämmung durch Zentrifugieren über einem Sieb oder durch manuelles Entfernen des Puffers aus dem Mikrogelpellet entweder durch Absaugen oder unter Verwendung eines absorbierenden Materials entfernt werden. Die Verwendung von Zentrifugation zum Trocknen der Mikrogele kann jedoch bei der Herstellung von körnigen Gerüsten12 einen sehr variablen Bereich von Partikelfraktionen und Hohlraumfraktionen erzeugen. Techniken zur Lyophilisierung von Mikrogelen wurden unter Verwendung von 70% IPA für Polyethylenglykol (PEG)-Mikrogele13, fluorierten Ölen für Gelatinemethacryloyl (GelMa)-Mikrogele 14 und 70% Ethanol für HA-Mikrogele12 beschrieben. Dieses Protokoll hebt Methoden zur Gefriertrocknung kugelförmiger HA-Mikrogele unter Verwendung von 70% Ethanol, einem Standardlaborreagenz, hervor, um die ursprünglichen Mikrogeleigenschaften während des Trocknungsprozesses beizubehalten. Die gefriergetrockneten HA-Mikrogele können mit benutzerdefinierten Gewichtsprozentsätzen gewogen und rehydriert werden, um die endgültigen Partikelfraktionen in MAP-Gerüsten12 zu kontrollieren.
Der letzte Schritt bei der MAP-Gerüstbildung beruht auf dem Glühen der Mikrogele, um ein poröses Gerüst zu erzeugen1. Durch die Verwendung nativer extrazellulärer Matrixkomponenten und den Einsatz bioorthogonaler Glühschemata dienen MAP-Gerüste als biokompatible Plattform sowohl für die In-vitro-Zellkultur als auch für die In-vivo-Gewebereparatur 3. Durch diese Ansätze können MAP-Gerüste aus HA-NB-Bausteinen mit benutzerdefinierten Partikelfraktionen für ihren Einsatz in Tissue-Engineering-Anwendungen hergestellt werden12. Das folgende Protokoll beschreibt die mikrofluidische Produktion von HA-NB-Mikrogelen gefolgt von Lyophilisation und Rehydratation zur Kontrolle der Partikelfraktion in MAP-Gerüsten. Schließlich werden Schritte zum Glühen der Mikrogele unter Verwendung bioorthogonaler Chemie für in vitro 3D-Zellkulturexperimente beschrieben.

<table><tbody><tr><td>1 mL Luer-Lok Spritze steril, Einmal, Polycarbonat</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Luer-Lok Spritze steril, Einmal,</td><td>Polycarbonat BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 C5 Maleimid</td><td>Invitrogen</td><td>A10254</td><td>Für die Synthese von fluoreszenzmarkiertem Tetrazin</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A22287</td><td>Zum Färben von Zellkulturproben</td></tr><tr><td>Aluminiumfolie</td><td>VWR</td><td>89107-726</td><td></td></tr><tr><td>Biopsie-Stanze mit Kolben, 1,0 mm</td><td>Integra Miltex</td><td>69031-01</td><td></td></tr><tr><td>Biopsie-Stanze, 4 mm</td><td>Integra Miltex</td><td>33-34</td><td></td></tr><tr><td>Stumpfe Nadel, 23 G 0,5", unsteril, mit Verschluss</td><td>SAI Infusion Technologies</td><td>B23-50</td><td></td></tr><tr><td>Flaschen-Vakuumfilter, 0,22 &mu; m</td><td>Corning</td><td>CLS430521</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>VWR</td><td>1B1110</td><td>Für Mikrogel-Waschpuffer</td></tr><tr><td>Kapillarkolben-Baugruppen für Verdrängerpipetten, 1000 &mu; L max. Volumen</td><td>Rainin</td><td>17008609</td><td></td></tr><tr><td>Kapillarkolben-Baugruppen für Verdrängerpipetten, 25 μm; L max. Volumen</td><td>Rainin</td><td>17008605</td><td></td></tr><tr><td>Kapillarkolben-Baugruppen für Verdrängerpipetten, 250 &mu; L max. Volumen</td><td>Rainin</td><td>17008608</td><td></td></tr><tr><td>Countess Zellzählkammer Objektträger</td><td>Invitrogen</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL Automatisierter Zellzähler</td><td>Invitrogen</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen, 15 mL</td><td>CELLTREAT</td><td>667015B</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen, 50 mL</td><td>CELLTREAT</td><td>229421</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform, ACS-Qualität, Glasflasche</td><td>Stellar Scientific</td><td>CP-C7304</td><td>Für die Synthese von fluoreszenzmarkierten Tetrazin-Corona-Plasmakanone</td></tr><tr><td>, BD-10A Hochfrequenzgenerator</td><td>ETP</td><td>11011</td><td></td></tr><tr><td>KryoTube-Fläschchen, Polypropylen, Innengewinde mit Schraubverschluss</td><td>Nunc</td><td>368632</td><td></td></tr><tr><td>D1 mesenchymale Mauszellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-12424</td><td>Beispielzelllinie für die Kultur in MAP-Gelen</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>Zum Färben von Zellkulturproben</td></tr><tr><td>Deuteriumoxid, 99,9 Atom% D</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>151882</td><td>Für die NMR-Spektroskopie</td></tr><tr><td>Dialyseschläuche, regenerierte Zellulosemembran, Molekulargewichtsgrenzwert von 12-14 kDa</td><td>Spectra/Por</td><td>132703</td><td>Zur Aufreinigung von HA-NB und HA-Tet</td></tr><tr><td>Diethylether</td><td>VWR</td><td>BDH1121-4LPC</td><td>Für die Synthese von fluoreszenzmarkiertem Tetrazin</td></tr><tr><td>Dimethylformamid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>277056</td><td>Zur Synthese von fluoreszenzmarkiertem Tetrazin-4</td></tr><tr><td>-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholiniumchlorid (DMTMM)&nbsp;</td><td>TCI-Chemicals</td><td>D2919</td><td>Zur Modifizierung von</td>HA-Dithiothreitol</tr><tr><td>(DTT)</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0861</td><td>Nicht abbaubarer Dithiol-Linker (Ersatz für MMP-spaltbares Peptid)</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), hohe Glukose, mit 4500 mg/L Glukose, L-Glutamin, Natriumpyruvat und Natriumbicarbonat, flüssig, sterilgefiltert, geeignet für Zellkultur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429-500ML</td><td>für D1 </td></tr><tr><td>Zellkultur EMS Paraformaldehyd, Granulat</td><td>VWR</td><td>100504-162</td><td>Zur Herstellung von 4% PFA</td></tr><tr><td>Ethanol absolut (200 proof)</td><td>KOPTEC</td><td>89234-850</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>ATCC</td><td>30-2020</td><td>Für D1-Zellkultur</td></tr><tr><td>Heizplatte</td><td>Kopf Instruments</td><td>HP-4M</td><td></td></tr><tr><td>Hämazytometer mit Deckglas</td><td>Daigger Scientific</td><td></td><td></td>EF16034F</tr><tr><td>2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethansulfonsäure (HEPES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhyaluronat, durchschnittliches Molekulargewicht 79 kDa, hergestellt in Bakterien Streptococcus zooepidemicus, pharmazeutische Qualität, mikrobielle Kontamination < 100 KBE/g, bakterielle Endotoxine < 0,050 IE/mg</td><td>Contipro</td><td>N/A</td><td>79 kDa durchschnittliches Molekulargewicht wurde für die HA-Tet-Synthese verwendet, aber diese Methoden könnten für andere Molekulargewichte angepasst werden.</td></tr><tr><td>IMARIS Essentials Softwarepaket</td><td>Oxford Instruments</td><td>N/A</td><td>Bildanalysesoftware für die Mikroskopie</td></tr><tr><td>Infusionspumpe, Doppelspritze</td><td>Chemyx</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Laborstativ mit Halterung Laborklemme</td><td>Geyer</td><td>212100</td><td></td></tr><tr><td>Flüssigstickstoff</td><td>Airgas</td><td>NI 180LT22</td><td></td></tr><tr><td>Lithiumphenyl(2,4,6-trimethylbenzoyl)phosphinat</td><td>TCI-Chemicals</td><td>L0290</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilizer</td><td>Labconco</td><td>N/A</td><td>Labconco FreeZone 6 plus wurde eingestellt, aber andere Konsolen-Gefriertrockner in Laborqualität könnten für dieses Protokoll verwendet werden.</td></tr><tr><td>Methyltetrazin-PEG4-maleimid</td><td>Kerafast</td><td>FCC210</td><td>Für die Synthese von fluoreszenzmarkiertem Tetrazin-2</td></tr><tr><td>-(4-Morpholino)ethansulfonsäure (MES)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP300-100</td><td>Zur Modifizierung von HA</td></tr><tr><td>Mikro-Deckglas, 24 x 60 mm Nr. 1</td><td>VWR</td><td>48393-106</td><td></td></tr><tr><td>Mikrofluidisches Gerät SU8 Master-Wafer</td><td>FlowJem</td><td></td><td>Sonderanfertigung entweder im eigenen Haus Reinraum- oder ausgelagertes</td></tr><tr><td>Mineralöl, schweres</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330760</td><td></td></tr><tr><td>MMP-spaltbares Dithiol-Crosslinkerpeptid (Ac-GCRDGPQGIWGQDRCG-NH2)</td><td>GenScript</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>5-Norbornen-2-methylamin</td><td>TCI-Chemicals</td><td>95-10-3</td><td>Für die HA-NB-Synthese</td></tr><tr><td>Packband</td><td>Scotch</td><td>3M 1426</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>PEG(thiol)2</td><td>JenKem Technology USA</td><td>A4001-1</td><td>Für die Synthese von fluoreszenzmarkiertem Tetrazin</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin, 10.000 Einheiten/ml</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Für D1-Zellkulturen</td></tr><tr><td>Petrischale, Polystyrol, Einweg, Durchmesser x H=150 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443</td><td>Zum Waschen von HMPs</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) 1x</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>RainX wasserabweisende Glasbehandlung</td><td>Grainger</td><td>465D20</td><td>Synthetische hydrophobe Behandlungslösung für die mikrofluidische Gerätebehandlung</td></tr><tr><td>RGD-Peptid (Ac-RGDSPGERCG-NH2)</td><td>GenScript</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Gummibänder</td><td>Klammern</td><td>112417</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Chem-Impex</td><td>30070</td><td>Für die Dialyse</td></tr><tr><td>Spanne 80 für die Synthese</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1338-43-8</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikonelastomer</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>4019862</td><td>Polydimethylsiloxan (PDMS) Elastomer zur Herstellung von mikrofluidischen Geräten und Gewebekulturgeräten</td></tr><tr><td>Spritzenfilter, Whatman Uniflo, 0,2 &mu; m PES, 13 mm Durchmesser</td><td>Cytvia</td><td>09-928-066</td><td></td></tr><tr><td>Tetraview LCD Digitalmikroskop</td><td>Celestron</td><td>44347</td><td></td></tr><tr><td>Tetrazin-Amin HCl Salz</td><td>Chem-Impex</td><td>35098</td><td>Für die HA-Tet-Synthese</td></tr><tr><td>Triethylamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>471283</td><td>Für die Synthese von fluoreszenzmarkiertem Tetrazin</td></tr><tr><td>Tris(2-carboxyethyl)phosphin (TCEP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>51805-45-9</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97063-864</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblau-Lösung, 0,4</td>%<td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin EDTA (0,25%), Phenolrot</td><td>Fisher Scientific</td><td>25-200-056</td><td>Zum Anheben von adhärenten Zellen auf den Samen in MAP-Gelen</td></tr><tr><td>Tygon ND-100-80 Non-DEHP Medizinischer Schlauch, Nadelstärke = 23, Wandstärke = 0,020 Zoll, Innendurchmesser = 0,020 Zoll, Außen Durchmesser = 0,060 Zoll</td><td>Thomas Scientific</td><td>1204G82</td><td></td></tr><tr><td>Controller für das UV-Härtungssystem, LX500 LED&nbsp;</td><td>OmniCure</td><td>010-00369R</td><td></td></tr><tr><td>UV-Härtungskopf, LED-Spot UV</td><td>OmniCure</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>UV-Belichtungsmesser, rückführbar</td><td>VWR</td><td>61161-386</td><td></td></tr><tr><td>Vakuum-Exsikkator</td><td>Bel-Art</td><td>08-594-15C</td><td></td></tr><tr><td>X-Acto Z-Serie Präzisions-Allzweckmesser</td><td>Elmer's</td><td>XZ3601W</td><td></td></tr></tbody></table>

kontrolle der partikelfraktion in mikroporös geglühten partikelgerüsten für die 3d-zellkultur

Controlling Particle Fraction in Microporous Annealed Particle Scaffolds for 3D Cell Culture

Mikrogele sind die Bausteine von mikroporösen geglühten Partikeln (MAP)-Gerüsten, die als Plattform für die In-vitro-Zellkultur und die In-vivo-Gewebereparatur dienen. In diesen körnigen Gerüsten ermöglicht die angeborene Porosität, die durch den Hohlraum zwischen Mikrogelen erzeugt wird, die Zellinfiltration und -migration. Die Kontrolle der Hohlraumfraktion und der Partikelfraktion ist entscheidend für das MAP-Gerüstdesign, da die Porosität ein bioaktiver Hinweis für Zellen ist. Sphärische Mikrogele können auf einer mikrofluidischen Vorrichtung für kontrollierte Größe und Form erzeugt und anschließend gefriergetrocknet werden, wobei Methoden verwendet werden, die das Brechen des Polymernetzwerks verhindern. Bei der Rehydratation führen die lyophilisierten Mikrogele zu kontrollierten Partikelfraktionen in MAP-Gerüsten. Die Implementierung dieser Methoden zur Mikrogel-Lyophilisation hat zu reproduzierbaren Studien geführt, die den Einfluss der Partikelfraktion auf die Makromoleküldiffusion und Zellausbreitung zeigen. Das folgende Protokoll umfasst die Herstellung, Lyophilisierung und Rehydratation von Mikrogelen zur Kontrolle der Partikelfraktion in MAP-Gerüsten sowie das Glühen der Mikrogele durch bioorthogonale Vernetzung für die 3D-Zellkultur in vitro.

Ziel dieses Protokolls ist es, die Herstellung von mikroporösen geglühten Partikeln (MAP)-Gerüsten mit einem bioorthogonalen Vernetzungsschema sowie kontrollierten Partikelfraktionen für die 3D-Zellkultur zu demonstrieren. Zunächst wurde HA mit Norbornen-Anhängergruppen modifiziert, um sowohl bei der Mikrogelbildung als auch bei der Verkettung zu MAP-Gerüsten verwendet zu werden. Mit diesen Methoden wurden etwa 31% der HA-Wiederholungseinheiten erfolgreich mit einem Norbornen-Funktionsgriff modifiziert (<strong class="xf...

Die Minimierung der Variabilität der Partikelfraktion innerhalb von Granulatgerüsten erleichtert reproduzierbare Experimente. Diese Arbeit beschreibt Methoden zur Erzeugung granularer Gerüste mit kontrollierten Partikelfraktionen für in vitro Tissue Engineering Anwendungen.

Kontrolle der Partikelfraktion in mikroporös geglühten Partikelgerüsten für die 3D-Zellkultur

Microgels are the building blocks of microporous annealed particle (MAP) scaffolds, which serve as a platform for both in vitro cell culture and in vivo ...

Granulare Materialien wie MAP-Gerüste sind poröse injizierbare Materialien aus miteinander verbundenen Hydrogelpartikeln in Mikrogröße. Die Kontrolle der Partikelfraktion ist entscheidend für Materialeigenschaften und zelluläre Reaktionen. Variable Partikelfraktionen in MAP-Gerüsten führen zu einer Reihe von Gerüsteigenschaften und Zellantworten, aber diese Technik ermöglicht es Benutzern, die endgültige Partikelfraktion in den von ihnen erstellten MAP-Gerüsten zu definieren.MAP-Gerüste können verwendet werden, um die Reparatur und Regeneration komplexer Wunden zu fördern sowie Medikamente zu verabreichen. Die Partikelfraktion beeinflusst beispielsweise die Geschwindigkeit und den Grad der zellulären Infiltration und Regeneration. Diese Methode kann in allen Klassen von körnigen Hydrogelen angewendet werden.Jetzt, da wir MAP-Gerüste mit benutzergesteuerten Partikelfraktionen herstellen können, können wir die Bioaktivität dieser Materialien reproduzierbar untersuchen und einzigartige Zellreaktionen wie Einschluss untersuchen. Das Einrichten der mikrofluidischen Mikrogelerzeugung erfordert Zeit und Geduld, während Sie die Techniken erlernen. Es ist am besten, mehrere Geräte vorbereitet und bereit zu haben, falls Sie Probleme mit der Einrichtung haben.Beginnen Sie mit der mikrofluidischen Produktion von Hyaluronsäure oder HA und Norbornen- oder NB-Mikrogelen. Wiegen Sie vor dem Trocknen der Mikrogele ein kryosicheres Schraubverschlussrohr. Anschließend in einer sterilen Haube die gewaschenen und gereinigten Mikrogele mit einer Verdrängerpipette in ein kryosicheres Schraubverschlussrohr geben.Fügen Sie 70% Ethanol zu den gereinigten Mikrogelen hinzu und mischen Sie gut. Zentrifugieren Sie das Röhrchen fünf Minuten lang bei 5.000 g. Saugen Sie den Überstand ab und fügen Sie 70% Ethanol hinzu.Gut mischen und über Nacht bei vier Grad Celsius inkubieren. Am nächsten Tag kurz zentrifugieren, um sicherzustellen, dass sich die Mikrogele am Boden des Röhrchens befinden. Fügen Sie flüssigen Stickstoff in einen kryogenen Behälter und legen Sie die Tube mit Mikrogelen zum Einfrieren auf.Nach fünf bis 10 Minuten die Tube mit Mikrogelen mit einer Pinzette entfernen. Entfernen Sie schnell die Kappe und bedecken Sie die Röhre mit Laborgewebe. Sichern Sie das Gewebe mit einem Gummiband und übertragen Sie es in einen Gefriertrocknungsbehälter oder eine Kammer.Laden Sie die Probe gemäß den Anweisungen des Herstellers auf den Gefriertrockner und lyophilisieren Sie bei 0,066 Torr und minus 63 Grad Celsius. Wiegen Sie die lyophilisierten Mikrogele aus dem Röhrchen, bevor Sie sie bei Raumtemperatur lagern. Mischen Sie Polydimethylsiloxan oder PDMS-Elastomerbasis mit dem Härter im Massenverhältnis 10 zu eins.Gießen Sie die PDMS-Mischung in eine große Kunststoff-Petrischale und entgasen Sie 30 Minuten lang im Exsikkator oder bis alle Blasen verschwunden sind. Sobald alle Blasen verschwunden sind, platzieren Sie die 3D-gedruckte Form vorsichtig in das PDMS, um die Bildung neuer Blasen zu minimieren. Für zwei Stunden bei 60 Grad Celsius in den Ofen stellen, um das PDMS auszuhärten.Verwenden Sie nach dem Aushärten ein Messer oder eine Rasierklinge, um den Umfang des Kulturgeräts vorsichtig zu umkreisen, und entfernen Sie die Form vorsichtig. Verwenden Sie einen Vier-Millimeter-Biopsiestempel, um PDMS vom Boden der Vertiefungen zu entfernen. Schneiden Sie die Geräte so ab, dass sie auf einen Glasdeckel passen.Verwenden Sie Klebeband, um Staub von der Unterseite des Kulturgeräts zu entfernen. Stellen Sie den sauberen Glasdeckel und das Kulturgerät für 15 Minuten auf eine Heizplatte bei 135 Grad Celsius, um Feuchtigkeit zu entfernen. Verwenden Sie in einem Abzug eine Corona-Plasmapistole hoch auf dem Glasdeckel und der Unterseite des Geräts für 30 Sekunden.Dann verkleben Sie die behandelten Oberflächen schnell miteinander. Üben Sie vorsichtig Druck aus, um eine gute Abdichtung zwischen dem Kulturgerät und dem Glasdeckel zu gewährleisten. Stellen Sie das Gerät über Nacht in einen 60-Grad-Ofen, um die Verbindung zu sichern.Am nächsten Tag autoklavieren Sie das Gerät, um es vor der Verwendung in vitro zu sterilisieren. Als nächstes bereiten Sie die mikroporösen geglühten Partikel oder MAP-Gerüstkomponenten basierend auf der gewünschten Partikelfraktion für die Zellkultur in MAP-Gerüsten vor. Wiegen Sie lyophilisierte Mikrogele, um die Masse der Mikrogele zu bestimmen.Dann rekonstituieren Sie die Mikrogele in 84% des endgültigen MAP-Volumens der Zellmedien basierend auf dem gewählten Gewichtsprozent MAP. Lassen Sie die Mikrogele 20 Minuten aufquellen. Die Hyaluronsäure oder HA-Tetrazin und die Zellmedien werden in 16% des endgültigen MAP-Volumens gelöst.Sobald die Zellen den gewünschten Zusammenfluss erreicht haben, heben und zählen Sie die Zellen. Übertragen Sie 10.000 Zellen pro Mikroliter MAP in eine neue Röhre. Zentrifugieren Sie die Zellen und saugen Sie den Überstand aus dem Pellet ab, ohne die Zellen anzusaugen.Mikrogele und Vernetzer mit einer Verdrängerpipette zum Pellet geben. Gut mischen und 10 Mikroliter pro Vertiefung säen. Pipette in kreisenden Bewegungen, um die Mischung gleichmäßig im Vertiefung zu verteilen.Lassen Sie die Mikrogele 25 Minuten bei 37 Grad Celsius glühen, bevor Sie Zellmedien hinzufügen, um die Vertiefungen zu füllen. Halten Sie die 3D-Kulturen bei 37 Grad Celsius und wechseln Sie die Medien nach Bedarf. Um ein Ansaugen des Gerüsts zu vermeiden, stabilisieren Sie die Pipettenspitze entlang des Kamms der oberen Vertiefung.Zu den gewünschten Zeitpunkten fixieren Sie Proben, indem Sie die Medien 30 Minuten lang bei Raumtemperatur durch 50 Mikroliter 4% Paraformaldehyd pro Vertiefung ersetzen. Waschen Sie die Proben dreimal mit 50 Mikrolitern PBS oder bevorzugtem Puffer und fahren Sie mit der Immunfluoreszenz oder Fluoreszenzfärbung unter Verwendung von 50 Mikrolitern pro Vertiefung sowie dem Arbeitsvolumen fort. Es wurde gezeigt, dass mikrofluidische Geräte mit einem strömungsfokussierenden Bereich HA-NB-Mikrogele mit einem Durchmesser von entweder 50 oder 100 Mikrometern erzeugen.Das Medium zur Lyophilisierung der Mikrogele wurde optimiert, um die Kryogelbildung durch die Verwendung von 70% Ethanol zu minimieren. Andere Medien wie Isopropylalkohol, Wasser und Acetonitril können jedoch austauschbar verwendet werden, um die Bildung von Kryogel zu erleichtern. Um die bioorthogonale Vernetzung von HA-NB-Mikrogelen zu erleichtern, wurde ein linearer HA-Tetrazin-Vernetzer synthetisiert.Die Protonen-NMR-Spektroskopie zeigt eine erfolgreiche Modifikation von 11% der HA-Wiederholungseinheiten mit einer Tetrazin-Pendant-Gruppe. Das getrocknete lyophilisierte Mikrogelprodukt wurde mit speziellen Volumina rehydriert und geglüht, um unterschiedliche Gewichtsprozentformulierungen von Mikrogelen in MAP-Gerüsten zu erhalten. Diese Gewichtsprozentsätze von Mikrogelen in MAP-Gerüsten entsprachen eindeutigen Partikelfraktionen.Zellkultur in MAP-Gerüsten wird hier gezeigt. Zellen in 3D-Kultur in MAP-Gerüsten wurden am fünften Tag fixiert, gefärbt und mit einem konfokalen Mikroskop abgebildet. Einzelne Z-Schnitte zeigen Unterschiede im Zellwachstum und Gerüste mit unterschiedlichen Gewichtsprozenten MAP.Wählen Sie Ihre Lyophilisationsmedien entsprechend aus, je nachdem, ob Sie Kryogele wünschen oder nicht. Überspringen Sie keine Inkubationsschritte, damit Ihre Mikrogele genügend Zeit haben, in den Medien aufzuquellen. Standardtechniken wie Mikroskopie, Durchflusszytometrie, RNA-Sequenzierung und mehr können verwendet werden, um Zellantworten in diesen körnigen Materialien mit definierten Porositäten zu bewerten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Wir präsentieren zwei Prozesse für die Mikrofabrikation von porösen Polymer-Chips für dreidimensionale Zellkultivierung. Die erste ist Heißprägen mit einem Lösemitteldampf Schweißverfahren kombiniert. Die zweite nutzt ein neu entwickeltes microthermoforming Prozess mit Ionen-Track-Technologie führt zu einer wesentlichen Vereinfachung der Herstellung kombiniert.

Microfabrication der Chip-Größe Gerüste für die dreidimensionale Kultivierung der Zellen

Biokompatiblen pH anspricht Sol-Gel-Nanosensoren können in Poly (milchsäure-co-Glykolsäure) (PLGA) elektro Gerüste eingebracht werden. Die hergestellten Selbstberichts Gerüste können für die in situ Überwachung von Mikroumgebungsbedingungen, während die Kultivierung von Zellen auf dem Gerüst verwendet werden. Dies ist vorteilhaft, da die 3D-Zellkonstrukt kann in Echtzeit, ohne den Versuch zu stören überwacht werden.

Selbstberichts Gerüste für 3-Dimensional Cell Culture

Dieser Artikel beschreibt eine Reihe von Setups für die Aussaat menschlicher mesenchymaler Stammzellen auf Materialien, in diesem Fall elektrogesponnene Garne, die die Basis von Standard-Kultur-Well-Platten nicht bedecken, um die Anzahl der Zellen, die sich anfänglich anheften, im Vergleich zur bekannten Seeding-Dichte zu maximieren und zu quantifizieren.

Optimierung der Befestigung der humanen mesenchymalen Stammzellen auf Poly (ε-caprolacton) Elektrogesponnene Garne

Fortschritte in der Biomaterialtechnologie ermöglichen die Entwicklung dreidimensionaler Konstrukte vom Typ Mehrzelle. Wir haben Elektrospinning-Protokolle entwickelt, um drei einzelne Gerüste herzustellen, um die Hauptstrukturzellen der Atemwege zu kultivieren und ein 3D-In-vitro-Modell der Bronchiolenwand der Atemwege zu erstellen.

Anpassung der Elektrospinnverfahren für einen Dreischicht stellen drei einzigartige Umgebungen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell der Atemwegswand

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur 3D-Kultur-Systeme selbst Montage Peptid Gerüste zur Förderung der Differenzierung der entdifferenzierten menschlichen Gelenkknorpel Chondrozyten Knorpel-ähnliches Gewebe zu erhalten.

Kultivierung von Säugerzellen in dreidimensionale Peptid Gerüste

Wir präsentieren Ihnen ein Verfahren zur Steuerung der erste Zellform der Cluster in einer 3D extrazelluläre Matrix, eine wiederholbare Musterbildung zu erhalten. Eine kubische Gerät mit zwei verschiedenen Hydrogele wird eingesetzt, um Multi-direktionalen Imaging für Gewebebildung Muster zu erreichen.

Erste 3D Cluster Zellkontrolle in einem Hybrid Gel Cube Gerät für wiederholbare Muster Formationen

Mikrogelstäbchen mit komplementären reaktiven Gruppen werden durch Mikrofluidik mit der Fähigkeit hergestellt, sich in wässriger Lösung zu vernetzen. Die anisometrischen Mikrogele klemmen und verbinden sich zu stabilen Konstrukten mit größeren Poren im Vergleich zu sphärischen Systemen. Mit GRGDS-PC modifizierte Mikrogele bilden makroporöse 3D-Konstrukte, die für die Zellkultur verwendet werden können.

Vernetzte makroporöse 3D-Gerüste aus Mikrogelstäben

Dieses Protokoll beschreibt eine Reihe von Methoden zur Synthese der Mikrogelbausteine für mikroporös geglühte Partikelgerüste, die für eine Vielzahl von Anwendungen der regenerativen Medizin verwendet werden können.

Mikrofluidische Synthese von Mikrogelbausteinen für mikroporös geglühte Partikelgerüste

Diese Arbeit wird die Herstellung von 3D-Fibrin-Gerüste für die Kultivierung und Differenzierung von Stammzellen plutipotent. Solche Gerüste verwendet werden, um die Auswirkungen von verschiedenen biologischen Verbindungen zur Stammzellforschung Verhalten Bildschirm als auch modifiziert werden, um Drug Delivery-Systemen enthalten sein.

Erstellung von 3D-Fibrin-Gerüste für Stem Cell Culture Anwendungen

Micro-Particle Image Velocimetry (μPIV) wird verwendet, um gepaart Bilder von Mikro-Partikel im Blut fließt die kreuzkorrelierten um eine genaue Geschwindigkeitsprofil geben sind ausgesät visualisieren. Schergeschwindigkeit, maximale Geschwindigkeit, Geschwindigkeit Profilform und Strömungsgeschwindigkeit, von denen jede klinische Anwendungen hat, können aus diesen Messungen abgeleitet werden.

Micro-Particle Image Velocimetry für Velocity Micro Profil Messungen der Blut fließt

Erfahren Sie, wie Sie die Partikelfraktion in MAP-Gerüsten für die 3D-Zellkultur präzise steuern. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Gewebematerialien für die regenerative Medizin.

Kontrolle der Partikelfraktion in mikroporös geglühten Partikelgerüsten für die 3D-Zellkultur

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