Name: Messung des retinalen Gefäßdurchmessers aus Fluoreszenzangiographie-Bildern der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Lernen Sie die automatische Messung des retinalen Gefäßdurchmessers bei Mäusen mit Fluoreszenzangiographie und MATLAB-Analyse. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen von Netzhauterkrankungen und deren Behandlungseffekten.

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Diese Arbeit wurde durch ein Postdoctoral Fellowship des Icelandic Research Fund (217796-052) (A.G.L.) und des Helga Jónsdóttir and Sigurlidi Kristjánsson Memorial Fund (A.G.L und T.E.) unterstützt. Die Autoren danken Prof. Eiríkur Steingrímsson für die Bereitstellung der Mäuse.

Alle Versuche wurden von der isländischen Lebensmittel- und Veterinärbehörde genehmigt (MAST-Lizenz Nr. 2108002). Alle Tierversuche wurden gemäß der Erklärung der Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) für die Verwendung von Tieren in der Ophthalmologie- und Sehforschung durchgeführt. In dieser Studie wurden männliche und weibliche C57BL/6J- und Mitf mi-vga9/+ Mäuse verwendet. Als Kontrolle wurden C57BL/6J-Mäuse (n = 7) verwendet. Die Wildtypen wurden kommerziell gewonnen (siehe Materialtabelle), aber alle mutierten Mäuse (n = 7) wurden in Tiereinrichtungen im Biomedizinischen Zentrum der Universität Island gezüchtet und aufgezogen. In der vorliegenden Studie wurden 3 Monate alte Tiere verwendet; Das Protokoll gilt jedoch auch für Tiere ab 1 Monat.
1. Experimentelle Vorbereitung
<ol><li>Bereiten Sie die Anästhesiemischung vor. Nehmen Sie eine Ampulle mit einer 2 mL Ketamin-Stammlösung (25 mg/ml) und 250 μl Xylazin-Stammlösung (2%) zur Herstellung einer Arbeitslösung aus Ketamin/Xylazin-Gemisch (25 mg/ml Ketamin und 20 mg/ml Xylazin) (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Betäuben Sie die Maus mit einer intraperitonealen Injektion des Ketamin/Xylazin-Gemisches mit einem Flüssigkeitsvolumen, das das Vierfache des Körpergewichts der Maus beträgt. Zum Beispiel benötigt eine Maus mit einem Gewicht von 20 g 35 μl Xylazin/Ketamin-Arbeitslösung, um eine Arbeitsdosis aus Xylazin (4 mg/kg Körpergewicht) und Ketamin-Gemisch (40 mg/kg Körpergewicht) zu erhalten.</li>
	<li>Erweitern Sie die Pupillen mit einem Augentropfen aus 10 % Phenylephrinhydrochlorid und 1 % Tropicamid unmittelbar nach der Anästhesie.</li>
	<li>Warten Sie, bis das Tier vollständig betäubt ist und seine Pupillen weit geweitet sind.</li>
	<li>Bereiten Sie die Fluoreszeinsalzlösung vor. 9 mL phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS; 1x) zu 1 mL Fluoresceinlösung (100 mg/mL Stammkonzentration) geben (siehe Materialtabelle). Die Arbeitslösung für die Endkonzentration beträgt 10 mg/ml.</li>
</ol>2. In-vivo-Bildgebung des retinalen Gefäßsystems mit einem Nagetier-Bildgebungssystem
<ol><li>Verabreichen Sie dem anästhesierten Tier intraperitoneal eine Fluoreszein-Arbeitslösung (5 μl/g Körpergewicht).</li>
	<li>Tragen Sie einen Tropfen 2%iges Methylcellulosegel auf die Hornhautoberfläche auf und legen Sie das Tier dann auf den Positionierungstisch des Bildgebungssystems (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Positionieren Sie das Kameraobjektiv für die Netzhautbildgebung so, dass es die Hornhaut der Maus direkt und sanft berührt. Um den Sehnervenkopf in der Mitte des Gesichtsfeldes zu platzieren, passen Sie die Ausrichtung leicht an.</li>
	<li>Wechseln Sie zum grünen Leuchtstoffkanal an der Funduskamera.</li>
	<li>Fokussieren Sie sich auf die Netzhautgefäße, um Bilder aufzunehmen.</li>
	<li>Um den idealen Zeitpunkt zu finden, machen Sie eine Reihe von Fotos nach 1, 3, 5 und 10 Minuten (aber nicht länger als 10 Minuten) nach der Fluoreszeininjektion. HINWEIS: Die FA-Behandlung muss innerhalb von 10 Minuten abgeschlossen sein, da nach dieser Zeit das Fluorescein zu stark diffundiert werden kann und die Gefäße nicht mehr nachweisbar sind.</li>
	<li>Nach Abschluss der Bildgebung, während die Maus noch anästhesiert ist, euthanasieren Sie sie durch Gebärmutterhalsdislokation.</li>
</ol>3. Analyse des Gefäßdurchmessers der Netzhaut
<ol></ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass keine konkurrierenden Interessen bestehen.

Der vorliegende Artikel ist der erste, der eine Methode zur Analyse des retinalen Gefäßdurchmessers und des retinalen Gefäßsystems aus FA-Bildern von Mäusen vorstellt. Da bei den in dieser Studie untersuchten Mäusen nur Fundusbildgebung zur Aufnahme von Bildern des retinalen Gefäßsystems verwendet wurde, hat das Verfahren mehrere Nachteile, von denen einer darin besteht, dass man bei den in dieser Studie untersuchten Mäusen nur auf Veränderungen in den oberflächlichen Schichten des retinalen Gefäßsystems schließen kann; ...

Das möglicherweise am besten erforschte Gefäßbett des Körpers ist das retinale Gefäßsystem. Mit immer besserer technischer Verfeinerung lässt sich das retinale Gefäßsystem bei lebenden Patienten leicht fotografieren und in vielen Forschungsbereichen einsetzen1. Darüber hinaus hat sich das retinale Gefäßsystem der Maus während der Entwicklung als sehr effektives Modellsystem für die Erforschung der grundlegenden Biologie des Gefäßwachstums erwiesen. Der primäre Zweck des retinalen Gefäßsystems besteht darin, den inneren Teil der Netzhaut durch ein laminares Kapillargeflecht, das das Nervengewebe durchdringt, mit metabolischer Unterstützung zu versorgen2. Nichtsdestotrotz kann der Zustand der Netzhaut und folglich jede Funktionsstörung oder Atrophie erhebliche Auswirkungen sowohl auf die Bifurkationen der retinalen Gefäße als auch auf den Durchmesser der Arterien haben, was ein Zusammenspiel zwischen den Netzhautzellen und dem Gefäßsystem zeigt 3,4. Es ist bekannt, dass zahlreiche Augenerkrankungen, darunter Frühgeborenenretinopathie (ROP), diabetische Retinopathie (DR), altersbedingte Makuladegeneration (AMD), Glaukom und Hornhautneovaskularisation, zu einer abnormalen okulären Angiogenese führen können5. Im Falle des retinalen Gefäßsystems weisen Mausmodelle der Netzhautdegeneration häufig Veränderungen auf, die mit denen vergleichbar sind, die bei menschlichen Gefäßerkrankungen beobachtet werden 6,7. Die Myc-Supergenfamilie der fundamentalen Helix-Loop-Helix-Zipper-Transkriptionsfaktoren umfasst das Mikrophthalmie-assoziierte Transkriptionsfaktor-Gen (Mitf), das im retinalen Pigmentepithel (RPE) exprimiert wird8,9,10.
Zahlreiche Organe, darunter das Auge, das Ohr, das Immunsystem, das zentrale Nervensystem, die Niere, die Knochen und die Haut, wurden nachweislich durch Mitf 9,11,12,13 reguliert.Wir haben entdeckt, dass die Struktur und Funktion des RPE bei Mäusen mit verschiedenen Mutationen im Mitf-Gen beeinträchtigt sind, was in einigen Fällen zu Netzhautdegeneration und schließlich zum Verlust des Sehvermögens führt10. Kürzlich konnte gezeigt werden, dass sich die Anzahl der Gefäße und der Gefäßdurchmesser zwischen Mitf-Mutanten und Wildtyp-Mäusen signifikant unterscheiden14. Forscher und Mediziner können das retinale Gefäßsystem heute dank der Entwicklungen in der Netzhautbildgebung in vivo präzise quantifizieren. Seit den 1800er Jahren haben sich Forscher und Ärzte die Vorteile der Visualisierung der retinalen Gefäße zunutze gemacht, und die Fluoreszenzangiographie (FA) hat sowohl den retinalen Blutfluss als auch den Abbau der Blut-Netzhaut-Schranke gezeigt15.
In diesem Artikel wird gezeigt, wie der retinale Gefäßdurchmesser aus FA-Bildern von Mäusen mit einem benutzerdefinierten Code in der MATLAB-Software analysiert wird.

<table><tbody><tr><td>1% Tropicamid (Mydriacyl)</td><td>Alcon Inc Laboratories</td><td></td><td>Mydriatische Substanz</td></tr><tr><td>2% Methocel</td><td>OmniVision Eye Care</td><td></td><td>Hydroxypropryl Methylcellulose Gel</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>Wildtyp-Mäuse</td></tr><tr><td>Excel für Microsoft 365</td><td>Microsoft Inc</td><td></td><td>Softwarepaket</td></tr><tr><td>Fluorescein Natriumsalz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>28803-100G</td><td>Fluoreszenzangiographie</td></tr><tr><td>Matlab 8.0</td><td>The MathWorks, Inc.</td><td></td><td>Softwarepaket</td></tr><tr><td>Micron IV Nagetier-Funduskamera</td><td>Phoenix-Micron</td><td>40-2200</td><td>Fundusfotografie</td></tr><tr><td>Phenylephrin 10% w/v</td><td>Bausch & Lomb</td><td></td><td>Mydriatisches Mittel</td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung - 100 Tabletten</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>Verdünnung</td></tr><tr><td>Sigmaplot 13</td><td>Jandel Scientific Software</td><td></td><td>Softwarepaket</td></tr><tr><td>S-Ketamin, 25 mg/ml</td><td>Pfizer Inc.</td><td>PAA104470</td><td>Anästhesie IP</td></tr></tbody></table>

messung des retinalen gefäßdurchmessers aus fluoreszenzangiographie-bildern der maus

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

Es ist wichtig, die Entwicklung des retinalen Gefäßsystems bei Retinopathien zu untersuchen, bei denen ein abnormales Gefäßwachstum letztendlich zum Verlust des Sehvermögens führen kann. Mutationen im Mikrophthalmie-assoziierten Transkriptionsfaktor (Mitf)-Gen zeigen Hypopigmentierung, Mikrophthalmie, Netzhautdegeneration und in einigen Fällen Blindheit. Die nicht-invasive In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus ist für die Augenforschung von entscheidender Bedeutung. Aufgrund ihrer geringen Größe ist die Bildgebung des Mausfundus jedoch schwierig und erfordert möglicherweise spezielle Werkzeuge, Wartung und Schulung. In dieser Studie haben wir eine einzigartige Software entwickelt, die die Analyse des retinalen Gefäßdurchmessers bei Mäusen mit einem automatisierten Programm ermöglicht, das in MATLAB geschrieben wurde. Fundusfotos wurden mit einem kommerziellen Funduskamerasystem nach einer intraperitonealen Injektion einer Fluoreszeinsalzlösung aufgenommen. Die Bilder wurden verändert, um den Kontrast zu verbessern, und das MATLAB-Programm ermöglichte die automatische Extraktion des mittleren Gefäßdurchmessers in einem vordefinierten Abstand von der Sehscheibe. Die vaskulären Veränderungen wurden bei Wildtyp-Mäusen und Mäusen mit verschiedenen Mutationen im Mitf-Gen durch Analyse des retinalen Gefäßdurchmessers untersucht. Das hier entwickelte eigens entwickelte MATLAB-Programm ist praxisnah, einfach zu bedienen und ermöglicht es den Forschern, den mittleren Durchmesser und den mittleren Gesamtdurchmesser sowie die Anzahl der Gefäße aus dem retinalen Gefäßsystem der Maus bequem und zuverlässig zu analysieren.

Abbildung 1 zeigt den Prozess zur Analyse des retinalen Gefäßsystems, der auf Maus-FFA-Bilder aller getesteten Mäuse angewendet wird. Ein Radius, der doppelt so groß ist wie der der Papille, wird verwendet, um die Intensität von Pixeln in kreisförmiger Uhrzeigersinn vom Mittelpunkt der Papille aus zu messen. Es markiert Pixel mit einem Start- oder Endpunkt, wenn es auf Punkte über bzw. unter einem benutzerdefinierten Schwellenwert stößt. Dies wird 30 Mal wiederholt, wobei jedes Mal ein Stück...

Das retinale Gefäßsystem der Maus ist besonders interessant, um die Mechanismen der Gefäßmusterbildung zu verstehen. Dieses Protokoll misst automatisch den Durchmesser von Netzhautgefäßen der Maus aus fluoreszierenden Angiographie-Fundusbildern in einem festen Abstand zur Sehscheibe.

Messung des retinalen Gefäßdurchmessers aus Fluoreszenzangiographie-Bildern der Maus

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

Dieses Protokoll bietet eine einfache und zuverlässige Methode zur automatischen Messung des Durchmessers von Netzhautgefäßen bei anästhesierten Mäusen aufgrund von Genmutationen oder Netzhauterkrankungen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das benutzerdefinierte MATLAB-Programm hier praktisch, einfach zu bedienen, bequem und zuverlässig ist. Veränderungen des retinalen Gefäßdurchmessers treten häufig bei degenerativen Erkrankungen wie RP und anderen retinalen Gefäßerkrankungen auf.Mausmodelle bieten Einblicke in die Wirksamkeit der Behandlung und ihre Auswirkungen auf die Netzhautgefäße. Die Methode kann als quantifizierbarer klinischer Marker nach dem Fortschreiten von Gefäßerkrankungen im Auge und zur Überwachung potenzieller Behandlungen potenziell nützlich sein. Bereiten Sie zunächst eine Spritze mit Fluorescein-Arbeitslösung vor und verabreichen Sie sie intraperitoneal an das anästhesierte Tier und tragen Sie einen Tropfen 2%iges Methylcellulosegel auf die Hornhautoberfläche auf.Platzieren Sie das Tier dann auf dem Positionierungstisch des Bildgebungssystems. Positionieren Sie das Kameraobjektiv für die Netzhautbildgebung so, dass es die Hornhaut der Maus direkt und sanft berührt, und passen Sie die Ausrichtung leicht an, um den Sehnervenkopf in der Mitte des Gesichtsfelds zu platzieren. Wechseln Sie dann auf den grünen Fluoreszenzkanal an der Funduskamera und fokussieren Sie auf die Netzhautgefäße, um die Bilder aufzunehmen.Nehmen Sie Bilder zu den gewünschten Zeitpunkten nach der Fluoreszeininjektion auf, um den idealen Zeitpunkt zu bestimmen und das Fluoreszeinfundusbild zu visualisieren. Öffnen Sie zunächst das MATLAB-Programm. Laden Sie dann den Fundusdurchmesser herunter und speichern Sie ihn.Es erscheint ein Popup-Menü zur Auswahl des Bildes. Wählen Sie das Bild aus, und auf dem Bildschirm erscheint ein Popup-Menü für die Analyseparameter. Stellen Sie die Analyseparameter im Popup-Menü ein und drücken Sie OK. Wählen Sie die Mitte der Papille und dann den Rand der Papille aus.Die Analyse wird im Hintergrund durchgeführt und die Analyseergebnisse werden auf dem Bildschirm angezeigt. Die Tabelle enthält die Werte für Mittelwert, Standardabweichung und Standardfehler für jedes Schiff. Speichern Sie die Tabelle.Speichern Sie dann die Figur mit der eingestellten mittleren Dicke. Öffnen Sie den Analyseordner mit den gespeicherten Dateien und öffnen Sie dann die gespeicherte Abbildung. Öffnen Sie die gespeicherte Tabelle, kopieren Sie die Werte, und fügen Sie sie in eine Excel-Datei ein.Nach der Fluorescein-Injektion wurden Bilder von einer Kontrollmaus und einer MITFMI-VGA9/Mutantenmaus erhalten, wobei der kürzeste Abstand von der Mitte der Papille zu den Endpunkten auf den Gefäßen im Uhrzeigersinn gemessen wurde. Der mittlere Gefäßdurchmesser wurde in Abhängigkeit von der Gefäßnummer für die Wildtyp- und mutierten Mäuse ermittelt. Die wichtigsten Dinge, die Sie sich merken sollten, sind die Positionierung der Funduskamera und die Zentrierung der Papille im Fundusbild.Zusätzlich zu dieser Technik können molekulare Techniken durchgeführt werden, um neue Medikamente zu erforschen, verschiedene Gefäßerkrankungen im Auge zu diagnostizieren und die Funktionsweise der retinalen Gefäße besser zu verstehen.

measuring-retinal-vessel-diameter-from-mouse-fluorescent-angiography

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Intravitalmikroskopie kann bei Tieren verwendet werden, um retinale Gefäßdurchmesser, Blutbahngeschwindigkeiten und den gesamten retinalen Blutfluss sichtbar zu machen und zu messen.

Intravitale Videomikroskopie-Messungen des retinalen Blutflusses bei Mäusen

Das Protokoll beschreibt die Hornhaut-Mikrotaschen-Assay in Mäusen entwickelt.

Die Hornhaut-Mikrotest: Ein Modell der Angiogenese bei der Maus Augen

Um die Permeabilität der Blut-Netzhaut-Schranke und die innere Grenzmembranintegrität in Tiermodellen für Netzhauterkrankungen zu untersuchen, haben wir mehrere Adeno-assoziierte Virus (AAV) Varianten als Werkzeuge zur Markierung von retinalen Neuronen und Gliazellen verwendet. Die virusvermittelte Reportergenexpression wird dann als Indikator für die Permeabilität der Netzhautbarriere verwendet.

Verwendung Adeno-assoziierte Virus als Werkzeug Retinal Barrieren in Disease Study

Die Netzhaut teilt prominente Ähnlichkeiten mit dem Gehirn und stellt damit ein einzigartiges Fenster zum Gefäßsystem und neuronale Struktur im Gehirn nicht-invasiv zu untersuchen. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, um Demenz mit bildgebenden Verfahren in der Netzhaut zu studieren. Diese Methode kann potenziell in Diagnostik und Risikoabschätzung von Demenz helfen.

Retinale Bildgebung bei der Demenz zu studieren

Viele Vision-bedrohlichen okuläre Erkrankungen gehen einher mit dysfunktionalen retinalen mikrogefäßen. Daher ist die Messung der retinalen arteriola Antworten wichtig, die zugrunde liegenden pathophysiologischen Mechanismen zu untersuchen. Dieser Artikel beschreibt ein detailliertes Protokoll für Maus retinalen arteriola Isolation und Vorbereitung zur Bewertung der Auswirkungen von vasoaktive Substanzen auf vaskuläre Durchmesser.

Vorbereitende Schritte für die Messung der Reaktivität in Maus retinalen Arteriolen Ex Vivo

Hier diskutieren wir eine Methode-Protokoll ermöglicht eine einfache Analyse der Erwachsenen tg(fli:EGFP) Zebrafisch retinalen Gefäßsystem als eine schnelle Auslesung in Einstellungen des langfristigen vaskuläre Krankheiten Neoangiogenese und strukturelle Veränderungen verbunden.

Diabetes durch die Augen eines Fisches zu studieren: Mikrodissektion, Visualisierung und Analyse von den Erwachsenen tg(fli:EGFP) Zebrafisch Retinal Gefäßsystem

In-vivo-Bildgebung ist ein leistungsfähiges Werkzeug für das Studium der Biologie in Gesundheit und Krankheit. Dieses Protokoll beschreibt die transpupille Bildgebung der Netzhaut der Maus mit einem Standard-Zwei-Photonen-Mikroskop. Es zeigt auch verschiedene In-vivoimaging-Methoden, um mehrere zelluläre Kohorten der Netzhaut fluoreszierend zu markieren.

Transpupille Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

Dieses Protokoll beschreibt eine detaillierte Methode zur Herstellung und Immunfluoreszenzfärbung von Netzhaut-Flachhalterungen und Analysen von Mäusen. Auch die Verwendung der Fluoresceinfundusangiographie (FFA) bei Mäusewelpen und die Bildverarbeitung werden ausführlich beschrieben.

Überwachung des dynamischen Wachstums von Netzhautgefäßen im sauerstoffinduzierten Retinopathie-Mausmodell

Dieser Artikel beschreibt einen gut etablierten und reproduzierbaren Lektin-Färbungsassay für die gesamten Netzhautpräparate und die Protokolle, die für die quantitative Messung von Gefäßparametern erforderlich sind, die bei proliferativen und nicht-proliferativen Retinopathien häufig verändert sind.

Quantifizierung vaskulärer Parameter in der gesamten Netzhaut von Mäusen mit nicht-proliferativen und proliferativen Retinopathien

Hier stellen wir drei Datenanalyseprotokolle für Fluorescein-Angiographie (FA) und optische Kohärenztomographie (OCT) Bilder in der Studie der Netzhautvenenokklusion (RVO) vor.

Im lebenden Organismus Gefäßverletzungsanzeigen in der Netzhaut der Maus zur Förderung der Reproduzierbarkeit

Die Perizyten in retinalen Gefäßen wurden durch Immunfluoreszenzfärbung mit Thrombozyten-abgeleiteten Wachstumsfaktor-Rezeptoren β nach retroorbitaler Injektion von fluoreszierendem Tomatenlektin untersucht. Die markierte Netzhaut wurde weiter mit der Gewebereinigungsmethode behandelt und als Ganzes montiert, um die dreidimensionalen Ansichten der Perizyten, die das retinale Gefäßsystem umgeben, unter einem konfokalen Mikroskop zu visualisieren.

3D-Visualisierung von retinalen vaskulären Perizyten bei Mäusen durch Immunfärbung 

Lernen Sie die automatische Messung des retinalen Gefäßdurchmessers bei Mäusen mit Fluoreszenzangiographie und MATLAB-Analyse. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen von Netzhauterkrankungen und deren Behandlungseffekten.

Messung des retinalen Gefäßdurchmessers aus Fluoreszenzangiographie-Bildern der Maus

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