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Methoden zur Elektroporation und Transformationsbestätigung in Limosilactobacillus reuteri
Methoden zur Elektroporation und Transformationsbestätigung in Limosilactobacillus reuteri
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JoVE Journal Bioengineering
Methods for Electroporation and Transformation Confirmation in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Methoden zur Elektroporation und Transformationsbestätigung in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Full Text
4,941 Views
11:04 min
June 23, 2023

DOI: 10.3791/65463-v

Alexander Duggan1, David McMillen1

1University of Toronto Mississauga

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Hier stellen wir Protokolle für die Arbeit mit Limosilactobacillus reuteri DSM20016 vor, die das Wachstum, die Plasmidtransformation, die Kolonie-PCR, die fluoreszierende Reporterproteinmessung und die begrenzte Plasmid-Minivorbereitung detailliert beschreiben, sowie häufige Probleme und Fehlerbehebung. Diese Protokolle ermöglichen die Messung von Reporterproteinen in DSM20016 oder die Bestätigung durch Kolonie-PCR, wenn kein Reporter beteiligt ist.

L. Reuteri und insbesondere der Stamm DSM20016 ist ein robuster, natürlicher menschlicher Darmkommensal, der vielversprechend für die therapeutische Verabreichung und die Erkennung von Krankheiten im gesamten Magen-Darm-Trakt ist. Diese Arbeit wird dazu beitragen, DSM20016 als Chassis für die synthetische Biologie für diese Art von Anwendungen zu positionieren. Laktobazillen haben keinen spezifischen Modellorganismus.

Es gibt zwar bevorzugte Arten, aber sie werden in der Regel mit einer Vorliebe für bestimmte Forschungsziele ausgewählt. Die Variation innerhalb der Bakterienfamilie hat zu fragmentierten Protokollen geführt, von denen einige Iterationen von Modifikationen auf Veröffentlichungen zurückgehen. Für Anfänger ist es sehr schwierig, genau zu filtern, was nützlich ist und was nicht.

Es gibt zwar ein Papier für die Transformation der DSM20016, aber es ist nicht modern. Es gibt moderne Protokolle für andere Mitglieder der Lactobacillales-Familie, aber sie sind nicht DSM20016. Hier bemühen wir uns, einen einfach zu bedienenden, zentralisierten, modernisierten, vollständigen Satz von Protokollen für die DSM20016 Elektroporation bereitzustellen.

Dieser Protokollsatz bietet eine wesentliche Modernisierung gegenüber früheren DSM20016 Explorationsprotokollen und erläutert einige hängende Fäden sowie die Betonung von Teilen, die zuvor weniger klar waren. Der Protokollsatz ist ebenfalls vollständig und speziell für DSM20016, eine Sorte, für die andere nicht DSM20016 Protokolle nicht vollständig kompatibel sind. Eines unserer Hauptziele ist es, Mikroben als kostengünstige Sensoren und Verabreichungssysteme zu verwenden.

Wir arbeiten mit Experten für Darmerkrankungen zusammen, um DSM20016 zu nutzen, um die Bedingungen im Magen-Darm-Trakt zu erfassen und bei Bedarf Therapeutika bereitzustellen.

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Bioengineering Heft 196

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