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DOI: 10.3791/65592-v
Wayne A. Johnston1,2,3,4, Juan Alfaro Palma1,2,3,4, Kirill Alexandrov1,2,3,4,5
1CSIRO-QUT Synthetic Biology Alliance,Queensland University of Technology, 2ARC Centre of Excellence in Synthetic Biology,Queensland University of Technology, 3Centre for Agriculture and the Bioeconomy,Queensland University of Technology, 4School of Biology and Environmental Science,Queensland University of Technology, 5Centre for Genomics and Personalised Health,Queensland University of Technology
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Leishmania Translational Extract (LTE) ist ein eukaryotisches zellfreies Proteinexpressionssystem, das aus dem einzelligen Parasiten Leishmania tarentolae gewonnen wird. Dieses optimierte Protokoll macht LTE einfach und kostengünstig in der Herstellung. Es eignet sich für verschiedene Anwendungen, die sich auf die multiparallele Expression und Untersuchung komplexer eukaryotischer Proteine und ihrer Wechselwirkungen konzentrieren.
Unser zellfreies Proteinexpressionssystem, das in der Regel eine Kühlkette für den Transport benötigt, hat jetzt eine bahnbrechende gefriergetrocknete Version. Diese Version bleibt bei Umgebungstemperaturen stabil und ist damit das erste eukaryotische System, das in diesem Format erhältlich ist. Dies vereinfacht den Transport zu Laboren und Feldanwendungen.
Zu den aktuellen experimentellen Herausforderungen der zellfreien Proteinproduktion gehört die Optimierung der Reaktionsbedingungen, um sicherzustellen, dass rekombinante Proteine richtig gefaltet und aktiv sind. Obwohl die Kosteneffizienz zellfreier Techniken im Vergleich zur herkömmlichen In-vivo-Proteinexpression nach wie vor eine große Herausforderung darstellt, hilft die Einfachheit unseres eukaryotischen LTE-zellfreien Systems, dies zu verringern. Das zellfreie LTE-System ermöglicht die schnelle Rekonstitution und Analyse von Proteinnetzwerken und Biosynthesewegen.
Die Integration mit Technologien wie AlphaLISA und In-vivo-Assays ermöglicht die funktionelle Analyse komplexer Systeme, einschließlich des Proteininteraktionsnetzwerks von SARS-CoV-2 und des Hakenwurm-Sekretoms. Das zellfreie LTE-System ermöglicht die schnelle und kostengünstige Herstellung von schwer zu exprimierenden Proteinen im Multiplex-Format. Es bietet eine einfache Optimierung für die Proteinsynthese und eignet sich hervorragend zur Herstellung komplexer oder toxischer Proteine.
Das System ist skalierbar und bietet eine gleichbleibende Chargenqualität.
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