Name: Erleichterung wiederholter Intrakarotis-Injektionen in Mausmodellen durch eine neuartige Reparaturtechnik an der Injektionsstelle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Erfahren Sie eine neuartige Reparaturmethode für wiederholte intrakarotide Injektionen in Mäusen. Diese Technik ermöglicht die effektive Zufuhr von Hirntumor-Therapeutika und verhindert zerebrale Ischämien.

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<meta charset="utf8"></head><body>Reparatur der Arteria carotis communis nach Injektion in einem Mausmodell

<ol><li>Loya, J., Zhang, C., Cox, E., Achrol, A. S., Kesari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+intratumoral+therapy+for+the+high-grade+glioma+part+i%3A+Intratumoral+delivery+and+immunotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Oncol%22%5BJournal%5D)">Biological intratumoral therapy for the high-grade glioma part i: Intratumoral delivery and immunotoxins.</a> CNS Oncol. 8 (3), (2019).</li>
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<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+orthotopic+mouse+models+of+patient-derived+breast+cancer+brain+metastases+by+a+modified+intracarotid+injection+method%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method.</a> Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).</li>
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<li>Qiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+and+photoacoustic+imaging+of+brain+tumor+mediated+by+mesenchymal+stem+cell+labeled+with+multifunctional+nanoparticle+introduced+via+carotid+artery+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance and photoacoustic imaging of brain tumor mediated by mesenchymal stem cell labeled with multifunctional nanoparticle introduced via carotid artery injection.</a> Nanotechnology. 29 (16), 165101(2018).</li>
<li>Yong, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+for+intravascular+delivery+of+oncolytic+adenovirus+delta24-rgd+to+human+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells for intravascular delivery of oncolytic adenovirus delta24-rgd to human gliomas.</a> Cancer Res. 69 (23), 8932-8940 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL Spritzen (geringer Totraum)</td><td>Air-tite Products Co.</td> KG<td>A1</td><td></td></tr><tr><td>26 G; 1/2" Nadel</td><td>Air-tite Products Co.</td><td>N2612</td><td></td></tr><tr><td>33 G; 1/2" Nadel</td><td>JBP, Air-tite Products Co.</td><td></td><td></td>JBP3313B</tr><tr><td>3 cm Petrischale</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>08-772A</td><td></td></tr><tr><td>3M Durapore chirurgisches</td><td>Klebeband Fisher Scientific</td><td>19-071-152</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Nahtfaden</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-122</td><td></td></tr><tr><td>9-0 mikrochirurgische Naht mit Nadel&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12052-09</td><td></td></tr><tr><td>Analgetikum für größere chirurgische</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eingriffe Künstliche Tränen/Augensalbe</td><td>Covetrus</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>Bead Sterilizer</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-341</td><td></td></tr><tr><td>Betadine/Chlorhexidin</td><td>McKesson, Fisher Scientific</td><td>NC1696484</td><td></td></tr><tr><td>Stumpfer Haken-Retraktor</td><td>Fine Science Tools</td><td>17022-13</td><td></td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>Zeiss Microscopy, LLC</td><td>491903-0010-000</td><td></td></tr><tr><td>Elektrisches Heizkissen</td><td>Insource, Fisher Scientific</td><td>NC0667724</td><td></td></tr><tr><td>Extra schmale Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Feine Pinzette - Dumont #5 Pinzette mit mikrostumpfen Spitzen</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Feine Pinzette - Dumont #5/45 Zange mit abgewinkelter Spitze mit mikrostumpfen Spitzen</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran-Verdampfer (oder Ketamin/Xylazin-Cocktail)</td><td>Kent Scientific</td><td>VetFlo-1231</td><td></td></tr><tr><td>Lichtquelle</td><td>Laxco, Fisher Scientific</td><td>AMPSILED21</td><td></td></tr><tr><td>Mausanästhesie Nasenkonus</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>XENO-M</td><td></td></tr><tr><td>Nadeltreiber & nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Wattestäbchen</td><td>Texwipe, Fisher Scientific</td><td>18-366-472</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Mulleinlagen</td><td>Covidien, Fisher Scientific</td><td>22-037-907</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Kochsalzlösung (0,9%)</td><td>KD Medical, Fisher Scientific</td><td>50-103-1363</td><td></td></tr><tr><td>Sterile OP-Abdecktücher</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-129-6666</td><td></td></tr> Sterile OP-/<tr><td>Absaugliege</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile Nahtpackung (beliebiger geeigneter Durchmesser für Verschluss der Mauswunde)&nbsp;</td><td>Ethicon, Fisher Scientific</td><td>50-209-2811</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Instrumente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vinyl-Laborklebeband</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901</td><td></td></tr></tbody></table>

erleichterung wiederholter intrakarotis-injektionen in mausmodellen durch eine neuartige reparaturtechnik an der injektionsstelle

Facilitating Repeat Intracarotid Injections in Mouse Models by a Novel Injection Site Repair Technique

Frühere Berichte haben gezeigt, dass aus dem Knochenmark gewonnene humane mesenchymale Stammzellen (BM-hMSCs), die durch Intrakarotis-Injektion verabreicht wurden, erfolgreich in intrakraniellen Gliomen bei Mäusen untergebracht wurden19. Wir verwendeten dieses Modell, um die Effekte der CCA-Ligation mit der CCA-Reparatur mit wiederhergestellter Durchblutung nach intrakarotiser Injektion von BM-hMSCs bei gliomtragenden Mäusen zu vergleichen. Athymen Nacktmäusen wurden U87-Gliomzellen implantiert, gefolgt von der Injektion von GFP-markierten BM-hMSCs mit anschließender CCA-Ligation oder CCA-Reparatur mit wiederhergestellter Durchblutung. Nach 3 Tagen wurden Mäuse getötet und Gehirne entnommen, fixiert und eine Immunhistochemie zum Nachweis von GFP durchgeführt, und GFP-positive Zellen wurden gezählt (Abbildung 8A-D).
Das Gesamthoming von GFP-BM-hMSCs zu intrakraniellen Gliomen wurde anhand der Gesamtzahl der GFP-positiven Zellen innerhalb der Tumorgrenze auf zwei verschiedenen Objektträgern (Schnitte &gt;75 μm Abstand) aus derselben Probe untersucht. Der Vergleich der Mittelwerte mittels ungepaartem t-Test deutete darauf hin, dass es keinen signifikanten Unterschied zwischen dem zwischen den beiden Verfahren beobachteten mittleren Homing gab (P = 0,6858) (Abbildung 8E). Die Verteilung von GFP-BM-hMSCs im Tumor wurde durch Zählung von GFP-positiven Zellen über 10 Hochleistungsfelder innerhalb des Tumors untersucht. Erhöhte Zellzahlen in Hochleistungsfeldern können auf Veränderungen in der Dispersion der Zellen im gesamten Tumor hinweisen, die sich aus der Variation des Verfahrens ergeben. Der Vergleich der Medianwerte mit Hilfe des Wilcoxon-Vorzeichen-Rang-Tests zeigte, dass es keinen signifikanten Unterschied zwischen der medianen Anzahl von GFP-positiven Zellen in Hochleistungsfeldern zwischen CCA-Ligation und CCA-Reparaturgruppen gab (Abbildung 8F).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig01.jpg"> Abbildung 1: Vorbereitung des Operationstisches und der Maus für die Operation. (A,B) Operationsbett (Etiketten A. Vinylband, das das Bett bildet, B. Chirurgisches Klebeband für die Vordergliedmaßen, C. Kissen, D. Gewicht, E. Anästhesie-Nasenkonus, F. Stumpfer Hakenretraktor, G. 1 cm lange Nähte aus 70%igem Ethanol, H. Feine Pinzette, I. Zange mit abgewinkelter Spitze, J. Schmale Schere, K. Sterile Wattebällchen). (C,D) Positionieren der Maus. (E,F) Operationsstelle und Desinfektion der Operationsstelle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig02.jpg"> Abbildung 2: Inzision und Freilegung von Strukturen an der Injektionsstelle. (A) Inzision in der Mittellinie. (B,C) Retraktion der rechten Speicheldrüse. (D) Das muskuläre Dreieck, das aus dem Luftröhren-/Sternohyoideus-Muskel, dem Musculus sternocleidomastoideus und dem Musculus digastricus gebildet wird, ist ebenfalls sichtbar. (E) Arteria carotis communis, gekennzeichnet durch den Pfeil. (F) Nervus vagusis und Arteria carotis communis, gekennzeichnet durch die Pfeile. Abkürzungen: sh = Luftröhre/M. sternohyoideus; sm = M. sternocleidomastoideus; dg = Musculus digastricus; OH = Musculus omohyoidus; CCA = Arteria carotis communis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig03v2.jpg"> Abbildung 3: Vorbereitung der CCA für die Injektion. (A) Zange mit abgewinkelter Spitze, die unter der CCA geführt wird. (B) Die Naht wurde mit einer Zange mit abgewinkelter Spitze halb unter die CCA gezogen. (C) Die zweite Naht wurde zur Hälfte unter die CCA gezogen. (D) Vernäht, gebunden in losen Kenntnissen rund um das CCA. Abkürzung: CCA = Arteria carotis communis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig03largev2.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig04.jpg"> Abbildung 4: Isolierung und Vorbereitung der Arteria carotis externa. (A) CCA, Arteria carotis externa und Arteria carotis interna. (B) Die Naht wird nach der Hälfte unter dem ECA gezogen. Abkürzungen: CCA Arteria carotis communis; ECA = Arteria carotis externa; ICA = Arteria carotis interna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig05.jpg"> Abbildung 5: Vorbereitung von Nadel und Spritze. (A) Injektion mit einer geraden Nadel, wobei eine Spritze am Körper der Maus anliegt. (B) Injektion mit einer gebogenen Nadel, wobei eine Hand auf dem Operationstisch ruht. (C,D) Vorbereiten einer gebogenen Nadel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig06v2.jpg"> Abbildung 6: Intrakarotis-Injektion. (A) Die obere Naht ist locker, die untere Naht wird auf dem CCA festgezogen, die Nadel wird über der unteren Naht platziert. (B) Die Nadel wird direkt hinter der Fase eingeführt, die Arterie wird um die Nadel herum verschlossen. (C) Die obere Naht wird angehoben, um die Arterie nach oben zu knicken und einen Rückfluss zu verhindern. (D) Die obere Naht an der CCA wird festgezogen. Abkürzung: CCA = Arteria carotis communis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig06largev2.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig07.jpg"> Abbildung 7: Reparatur der Injektionsstelle und Wiederherstellung der Durchblutung. (A) Die Injektionsstelle ist mit einem Pfeil gekennzeichnet. (B) Die Injektionsstelle wird mit einem chirurgischen Knoten verschlossen, mindestens vier Würfe. (C,D) Lockerung der oberen und unteren Nähte an der CCA nach der Reparatur der Injektionsstelle; Keine Blutung nach Lockerung der Naht. (E) Die Nähte werden entfernt, nachdem festgestellt wurde, dass die Injektionsstelle ausreichend repariert ist. Abkürzung: CCA = Arteria carotis communis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig07large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig08.jpg"> Abbildung 8: Intrakarotis-Injektion von GFP-BM-hMSCs und Vergleich des Homings mit intrakraniellen Gliomtumoren nach entweder CCA-Ligatur oder CCA-Reparatur mit wiederhergestellter Durchblutung. Hirngewebeschnitte von tumortragenden Mäusen wurden mit Anti-GFP-Primär- und Alexa Fluor 488-Sekundärantikörpern gefärbt, um GFP-BM-hMSCs zu markieren (grün). Die Zellkerne wurden mit Hoechst 33342 (blau) angefärbt. Repräsentative Low-Power-Felder von markierten Schnitten, die das Gesamt-Homing zum Tumor zeigen, und High-Power-Felder, die eine GFP-positive Zellverteilung nach (A,C) CCA-Reparatur oder (B,D) CCA-Ligation zeigen. (E) Das Gesamthoming von GFP-BM-hMSCs zu Tumoren wurde anhand der Gesamtzahl der GFP-positiven Zellen innerhalb der Tumorgrenze auf zwei verschiedenen Objektträgern bewertet und die Mittelwerte wurden mittels t-Test verglichen. Es wurde kein signifikanter Unterschied im gesamten Homing zwischen den alternativen Verfahren beobachtet (P = 0,6858). (F) Die Verteilung von GFP-BM-hMSCs im Tumor wurde durch Zählung von GFP-positiven Zellen über 10 Hochleistungsfelder innerhalb des Tumors untersucht. Der Vergleich der Medianwerte durch den Wilcoxon-Vorzeichen-Rang-Test zeigt keinen signifikanten Unterschied zwischen den Individuen, unabhängig vom Verfahren (P = 0,1914, 0,5000, 0,1641, 0,9512, 0,8828, 0,2207). Abkürzungen: GFP = grün fluoreszierendes Protein; GFP-BM-hMSCs = GFP-markierte humane mesenchymale Stammzellen aus dem Knochenmark; CCA = Arteria carotis communis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig08large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Erleichterung wiederholter Intrakarotis-Injektionen in Mausmodellen durch eine neuartige Reparaturtechnik an der Injektionsstelle

Given recent advances in the delivery of novel antitumor therapeutics using endovascular selective intraarterial delivery methods in neuro-oncology, there ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Zahlreiche genetische Manipulationen und / oder intramyokardialen Injektionen von Genen, Proteinen, Zellen und / oder Biomaterialien basieren auf die Dimension der Zeit in Studien zur akuten Ischämie / Reperfusion und chronischer Umbau in Mäusen überlagert. Dieses Video zeigt die mikrochirurgische Verfahren für die Ischämie / Reperfusion, permanent koronare Ligation und intramyokardialen Injektion Studien.

Koronare Ligation und intramyokardialen Injection in einem Mausmodell der Infarkt

Echokardiographie geführten perkutanen intramyokardiale Injektion stellt einen effizienten, zuverlässigen und anzielbare Modalität für die Lieferung von Gentransfermittel oder Zellen in die Maus-Herz. Nach der Schritte in diesem Protokoll dargelegt, kann der Bediener schnell kompetente werden in diesem vielseitigen, minimal-invasive Technik.

Ultraschall-geführte Transthorakale intramyokardiale Injection in Mäuse

Hirnmetastasen hat ein dringender medizinischer Bedarf werden wie ihre Häufigkeit zugenommen hat, während therapeutische Optionen palliative geblieben sind. Erstellen von experimentellen Tiermodellen von Hirnmetastasen über intracarotid arterielle Injektion von Krebszellen erleichtert mechanistische Untersuchungen der Krankheitsbiologie und Evaluierung neuartiger Interventions Regimen.

Intracarotid Cancer Cell Injection zu produzieren Mausmodelle von Hirnmetastase

Hier präsentieren wir ein Protokoll für Herz-Kreislauf-spezifische Genmanipulation bei Mäusen. Unter Narkose waren die Mäuseherzen durch den vierten intercostalneuralgie Raum ausgelagert. Anschließend, blot Adenoviren, die Codierung bestimmter Gene mit einer Spritze das Myokard injiziert wurden, gefolgt von Protein Ausdruck Messung via in-Vivo Bildgebung und Western Analyse.

Eine einfache und effiziente Methode zur In Vivo Cardiac-spezifische Genmanipulation durch Injektion von Intramyocardial bei Mäusen

Hirnmetastasen sind eine Ursache für schwere Morbidität und Mortalität bei Krebspatienten. Die meisten Hirnmetastasen-Mausmodelle werden durch systemische Metastasen kompliziert, die die Analyse der Mortalität und der therapeutischen Interventionsergebnisse verwirren. Hier wird ein Protokoll für die interne Karotisinjektion von Krebszellen vorgestellt, das konsistente intrakranielle Tumoren mit minimalen systemischen Tumoren erzeugt.

Modellierung der Hirnmetastasierung durch Injektion von Krebszellen in die innere Halsschlagader

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein interventionelles radiologisches Verfahren, das für die intrathymische Injektion bei Mäusen eingerichtet wurde, um das Risiko einer offenen Operation zu vermeiden und die Genauigkeit blinder perkutaner Injektionen zu verbessern.

Eine minimal-invasive, genaue und effiziente Technik zur intrathymischen Injektion bei Mäusen

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Intrakranielle Kanülenimplantation für serielle lokoregionäre chimäre Antigenrezeptor (CAR) T-Zell-Infusionen in Mäusen

Hier wird ein einfacher und schneller Ansatz zur Durchführung von intrazerebroventrikulären Injektionen bei Mäusen unter Verwendung eines Freihandansatzes (d.h. ohne stereotaktische Vorrichtung) beschrieben.

Intrazerebroventrikuläre Freihandinjektionen bei Mäusen

Dieser Artikel beschreibt ein optimiertes Protokoll für echokardiographiegesteuerte intramyokardiale Injektionen in Rattenmodellen für Myokardinfarkt mit einer 29 G x 88 mm Nadel. Diese Technik gewährleistet eine robuste, präzise und reproduzierbare Verabreichung von Therapeutika direkt in die Periinfarktzone.

Echokardiographie-gesteuerte Injektion zur gezielten und zuverlässigen intramyokardialen Stammzellabgabe in einem Rattenmodell für Myokardinfarkt

Hier haben wir ein Protokoll beschreiben bei der Untersuchung der Auswirkungen von anomalen Spleißen auf Medikamentenresistenz bei soliden Tumoren und hämatologischen Malignitäten ausgerichtet. Zu diesem Ziel haben wir analysiert , die transkriptomischen Profile der elterlichen und beständig in - vitro - Modellen durch RNA-seq und gründete eine qRT-PCR - basierte Methode Kandidatengene zu validieren.

Mit RNA-Sequenzierung Neuartige Splice-Varianten zu Arzneimittelresistenz mit Bezug zu erkennen in<em&gt; In Vitro</em&gt; Cancer Models

Erfahren Sie eine neuartige Reparaturmethode für wiederholte intrakarotide Injektionen in Mäusen. Diese Technik ermöglicht die effektive Zufuhr von Hirntumor-Therapeutika und verhindert zerebrale Ischämien.

Erleichterung wiederholter Intrakarotis-Injektionen in Mausmodellen durch eine neuartige Reparaturtechnik an der Injektionsstelle (Video) | JoVE Journal

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