Name: Postoperatives Ileus-Mausmodell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 26 s
Description: Erfahren Sie die Etablierung eines postoperativen Ileus-Mausmodells durch Darmmanipulation zur Untersuchung intestinaler Immunität und Pathophysiologie. Diese Methode ermöglicht die Entwicklung neuer Therapien.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Mausmodell zur Untersuchung des postoperativen Ileus durch Darmmanipulation

<ol><li>Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+following+major+colorectal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus following major colorectal surgery.</a> Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).</li>
<li>Farro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR2-dependent+monocyte-derived+macrophages+resolve+inflammation+and+restore+gut+motility+in+postoperative+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motility in postoperative ileus.</a> Gut. 66 (12), 2098-2109 (2017).</li>
<li>Wouters, M. M., Vicario, M., Santos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+functional+GI+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in functional GI disorders.</a> Gut. 65 (1), 155-168 (2016).</li>
<li>Engel, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat Med. 16 (12), 1407-1413 (2010).</li>
<li>Schwartz, C., Voehringer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+murine+basophils+by+flow+cytometry+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of murine basophils by flow cytometry and histology.</a> Methods Mol Biol. 2163, 367-375 (2020).</li>
<li>Funk, E. K., Weissbrod, P., Horgan, S., Orosco, R. K., Califano, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+experience+with+a+novel+single-port+platform+for+transoral+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Endosc%22%5BJournal%5D)">Preclinical experience with a novel single-port platform for transoral surgery.</a> Surg Endosc. 35 (8), 4857-4864 (2021).</li>
<li>Nemoto, S., Mailloux, A. W., Kroeger, J., Mulé, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-031%3A+Immunologic+checkpoint+expression+on+murine+effector+and+memory+T-cell+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-031: Immunologic checkpoint expression on murine effector and memory T-cell subsets.</a> Cytometry A. 89 (5), 427-429 (2016).</li>
<li>Brandi, J., Wiethe, C., Riehn, M., Jacobs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-93%3A+A+41-color+high+parameter+panel+to+characterize+various+co-inhibitory+molecules+and+their+ligands+in+the+lymphoid+and+myeloid+compartment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-93: A 41-color high parameter panel to characterize various co-inhibitory molecules and their ligands in the lymphoid and myeloid compartment in mice.</a> Cytometry A. 103 (8), 624-630 (2023).</li>
<li>Swidsinski, A., Weber, J., Loening-Baucke, V., Hale, L. P., Lochs, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+and+composition+of+the+mucosal+flora+in+patients+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Spatial organization and composition of the mucosal flora in patients with inflammatory bowel disease.</a> J Clin Microbiol. 43 (7), 3380-3389 (2005).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> J Vis Exp. (113), e54161(2016).</li>
<li>van Bree, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+studying+postoperative+ileus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Physiol+Pathophysiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Novel method for studying postoperative ileus in mice.</a> Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 4 (4), 219-227 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES</td><td>Thermo</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>APC Anti-Maus I-A/I-E (MHC-II)</td><td>Biolegend</td><td>107614</td><td></td></tr><tr><td>APC Anti-Maus TCRb</td><td>Biolegend</td><td>109212</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 Anti-Maus CD4</td><td>Biolegend</td><td>100414</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 Anti-Maus Ly6G</td><td>Biolegend</td><td>127624</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 Anti-Maus CD69</td><td>Biolegend</td><td>104545</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 Anti-Maus F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123132</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 785 Anti-Maus/Mensch CD44</td><td>Biolegend</td><td>103041</td><td></td></tr><tr><td>BUV395 Anti-Maus CD8a</td><td>BD</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>BUV737 Anti-Maus CD3e</td><td>BD</td><td>612771</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Kulturmikroskop</td><td>CKX53</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>Desoxyribonuklease I aus der bovinen Bauchspeicheldrüse (DNase I)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-5G</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>EDS-100G</td><td></td></tr><tr><td>FITC Anti-Maus CD45</td><td>Biolegend</td><td></td><td></td>147709</tr><tr><td>FITC-Dextran (70 kWM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD70-100MG</td><td>Gastrointestinal-Transit-Assay</td></tr><tr><td>HE-Färbekit</td><td>solarbio</td><td>G1120</td><td></td></tr><tr><td>PE Anti-Maus CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101208</td><td></td></tr><tr><td>PE Anti-Maus PD-1</td><td>Biolegend</td><td>114118</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 Anti-Maus CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117318</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE (Pharmacia)</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Symphony A5 Durchflusszytometer</td><td></td> <td>BD-Immunzellnachweis und -sortierung</td><td></td></tr> <tr><td>Tribromethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>Anästhesie</td></tr><tr><td>Varioskan LUX</td><td>Thermo</td><td>N16699</td><td>Multimode-Mikroplatten-Reader</td></tr><tr><td>Zombie Aqua Fixierbares Viabilitätskit</td><td>Biolegend</td><td>423102</td><td>Fluoreszierend Viabilität Farbstoff&nbsp;</td></tr></tbody></table>

postoperatives ileus-mausmodell

Postoperative Ileus Murine Model

In diesem Protokoll wurde der POI chirurgisch durch Darmmanipulation (IM) induziert, was dem Effekt einer klinischen Operation ähnelt. In der Scheingruppe wurde ein Schnitt ohne IM gesetzt. POI-Mäuse wurden 24 Stunden nach der POI-Operation zusammen mit Scheinkontrollmäusen getötet. Die kritische Funktion des Verdauungstraktes, die Funktion des Inhaltstransits, wurde durch eine Sonde von FITC-Dextran nachgewiesen. Das POI-Modell wurde als erfolgreich angesehen, da die FITC-Intensität im proximalen Teil des Dünndarms zunahm (Abbildung 2B). Die mittleren GC wurden berechnet, um die Transitstörung des IM zu quantifizieren und die Konsistenz des Vorgangs anzuzeigen (Abbildung 2C).
Die HE-Färbung zeigte die Morphologie verschiedener Segmente des Verdauungstrakts an (Abbildung 3). Die Submukosa und die glatte Muskelschicht des Duodenums und des Ileums schwollen 24 h nach der POI-Induktion an (Abbildung 3A,B). Im Vergleich zu denen in Scheinmäusen zeigte die HE-Färbung des Zwölffingerdarms eine erhöhte Infiltration von Immunzellen bei POI-Mäusen (Abbildung 3A).
Die mehrfarbige durchflusszytometrische Analyse ist die zentrale Methode zur Analyse von Anteil, Status und Funktion von Immunzellen. Das Darmgewebe wurde mit Kollagenase und Desoxyribonuklease verdaut und für die Durchflusszytometrie in eine Einzelzellsuspension getrennt. Die Gating-Strategie wurde verwendet, um die Anteile von CD3-T-Zellen und verwandten Subpopulationen unter den LPLs zu bestimmen (Abbildung 4A). Der Aktivierungs- und Adhäsionsmarker CD69 und die Expression von CD4-T-Zellen, CD8-T-Zellen und gd-T-Zellen sind in POI-Mäusen hochreguliert (Abbildung 4B)7. In ähnlicher Weise zeigte der Anteil der CD44+ PD-1+ (Aktivierung, terminale Differenzierung und Erschöpfungsmarker) eine zunehmende Tendenz (Abbildung 4C)7. Neben den Lymphozyten sind auch die Anteile der myeloischen Zelluntergruppen (Neutrophile, dendritische Zellen und Makrophagen) nach der IM-Operation erhöht (Abbildung 4D)8.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2.jpg"> 
Abbildung 1: Mausmodell des postoperativen Ileus. (A) Schematische Darstellung des Mausmodells des postoperativen Ileus. (B) Fixierung der Maus nach Anästhesie und Rasur. (C) Der Schnitt wurde freigelegt und mit einer medizinisch sterilen Gaze bedeckt. (D) Die Darmschläuche wurden durch den Bauchschnitt aus der Bauchhöhle herausgedrückt und freigelegt, indem sie auf sterile Gaze gelegt wurden. (E) Der gesamte Dünndarm wurde einem angefeuchteten sterilen Wattestäbchen ausgesetzt. (F) Die Muskelschicht wurde durch eine chirurgische Naht verschlossen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig02v2.jpg"> 
Abbildung 2: Gastrointestinaler Transitassay zur Beurteilung der Funktion des Verdauungstrakts. 22,5 h nach der Operation wurden die Schein- oder POI-Mäuse mit FITC-Dextran-Lösung versorgt und 90 min später getötet. (A) Der Verdauungstrakt wurde in 15 Segmente unterteilt und nach physiologischer Position nummeriert. (B) FITC-Intensität jedes Segments aus dem Verdauungstrakt von Schein- und POI-Mäusen. (C) Die geometrischen Zentren des verabreichten FITC-Dextrans wurden berechnet und sind als Violinplots dargestellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Repräsentative HE-Färbung des Dünndarms von POI-Mäusen. HE-Färbung von Querschnitten des (A) Zwölffingerdarms und des (B) Ileums von Schein- und POI-Mäusen. Maßstabsleisten: 100 μm oder 25 μm (vergrößertes Bild des Einschubs). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Repräsentative durchflusszytometrische Analyse von Immunzellen des Dünndarms von POI-Mäusen. (A) Durchflusszytometrische Gating-Strategie für T-Zellpopulationen aus Dünndarmgewebe von POI-Mäusen 24 h nach der Operation. (B) Die Anteile des aktiven T-Zell-Markers CD69+ in CD4-T-Zellen, CD8-T-Zellen und gd-T-Zellen aus dem Dünndarm von Schein- und POI-Mäusen. (C) Die Anteile von CD44+ PD-1+ aktiven Markern unter CD4 T-Zellen, CD8 T-Zellen und gd T-Zellen im Dünndarm von Schein- und POI-Mäusen. (D) Die Anteile von Neutrophilen (Ly6G+ CD11b+), dendritischen Zellen (CD11c+ MHC-II+) und Makrophagen (CD11b+ F4/80+) unter den CD45+ Aqua-lebenden Immunzellen aus dem Dünndarm von Schein- und POI-Mäusen. Die Zahl in jedem Feld stellt den Prozentsatz der jeweiligen Zellentypen dar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Postoperativen Ileus (POI) ist eine Komplikation der Bauchchirurgie führt zu einer erhöhten Morbidität und einen längeren Krankenhausaufenthalt. Da prophylaktische oder therapeutische Strategien fehlen verstärkte Forschung notwendig ist. Deshalb haben wir eine standardisierte und machbar Mausmodell, um die Pathophysiologie von POI zu untersuchen und mögliche therapeutische Optionen zu studieren.

Functional Assessment of Darmmotilität und Darmwand Entzündung in Nagetiere: Analysen in einem standardisierten Modell der intestinalen Manipulation

Dieses Video beschreibt das detaillierte Protokoll für die Darmresektion in einem Mausmodell. Diese Technik bietet Einblicke in die durch Ileektomie induzierte Gallenmalabsorption, Überakkumulation und Toxizität im Darm der Maus.

Maus-Ileumresektionsmodell: Untersuchung des Ileektomie-induzierten Gallenstoffwechsels im Mausmodell

Ileokolische Resektion wird häufig bei verschiedenen menschlichen Krankheiten durchgeführt; es ist jedoch wenig über den Einfluss der Darmresektion auf chirurgische Erkrankungen bekannt. Dieser Artikel enthält Anweisungen zur Durchführung des Verfahrens bei Mäusen mit hohem Erfolg und bietet ein Mittel, um die Auswirkungen der ileokolischen Resektion in Krankheitsmodellen zu untersuchen.

Murine Ileocolische Darmresektion mit primärer Anastomose

Das murine Modell der irreversiblen einseitigen Harnleiterobstruktion (UUO) wird zusammen mit dem Modell der reversiblen UUO vorgestellt, bei dem die Harnleiterobstruktion durch Anastomose des durchtrennten Harnleiters in die Blase aufgehoben wird. Diese Modelle ermöglichen die Untersuchung von Nierenentzündungen und Narbenbildung sowie des Gewebeumbaus.

Ein Mausmodell der irreversiblen und reversiblen Einseitige Ureterobstruktion

Hier beschreiben wir die Einzelheiten des Verfahrens der intestinalen Ischämie-Reperfusion bei Mäusen, die ohne Mortalität in reproduzierbarer Verletzungen führt die Standardisierung dieser Technik auf dem Gebiet zu fördern. Dieses Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusions-Verletzung kann die zellulären und molekularen Mechanismen der Schädigung und Regeneration zu studieren verwendet werden.

Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

Dünndarm-abhängige Gallensäure Resorption und Feedback-Hemmung der hepatischen Gallensäure Synthese ist wichtig für systemische Homöostase und Gesundheit. In dieser Studie beschreiben wir ein Mausmodell für ileale Resektion, Ileectomy-induzierten Galle Malabsorption, Overaccumulation und Toxizität im Darm der Maus zu bewerten.

Overaccumulation Ileectomy-induzierten Galle im Darm der Maus

Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung des Darms, die starke Bauchschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, und verhindert den Durchgang von Stuhl verursachen können. Dieses Verfahren zum Erstellen von Darm teilweise Obsructions bei Mäusen ist zuverlässig bei der Untersuchung der Mechanismen, die krankhaften Zellwachstum und Tod im Darm.

Ein Maus-Modell der teilweisen Darmverschluss

Murine distalen Kolostomie bietet ein Mausmodell für menschliche Abzweigung Kolitis, eine vorwiegend lymphozytären Kolitis im Dickdarm-Segment aus dem fäkal Strom ausgeschlossen.

Murine distalen Kolostomie, ein neuartiges Modell Ablenkung Colitis bei C57BL/6 Mäusen

Wir beschreiben detailliert ein klinisch relevantes Tumormodell der Darmkrebslebermetastasen (CRLM) und den Einfluss der Leberischämie-Reperfusion (I/R) auf Tumorwachstum und Metastasierung. Dieses Modell kann helfen, die Mechanismen, die der chirurgieinduzierten Förderung des metastasierenden Wachstums der Leber zugrunde liegen, besser zu verstehen.

Murine Modell der metastasierenden Lebertumoren in der Einstellung der Ischämie Reperfusionsverletzung

Der Duodeno-ileale Bypass mit einfacher Anastomose (SADI-S) ist ein aufstrebendes bariatrisches Verfahren mit wichtigen metabolischen Auswirkungen. In diesem Artikel stellen wir ein zuverlässiges und reproduzierbares Modell von SADI-S in Mäusen vor.

Duodeno-ilealer Bypass mit Sleeve-Gastrektomie-Modell bei Mäusen

Erfahren Sie die Etablierung eines postoperativen Ileus-Mausmodells durch Darmmanipulation zur Untersuchung intestinaler Immunität und Pathophysiologie. Diese Methode ermöglicht die Entwicklung neuer Therapien.

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Weitere Videos entdecken