Name: Schnelle Trennung und Darstellung von aktiven fibrinogenolytischen Wirkstoffen in Sipunculus nudus durch Fibrinogen-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Lernen Sie eine optimierte Fibrinogen-PAGE-Methode zur schnellen Trennung fibrinogenolytischer Wirkstoffe in Sipunculus nudus. Diese effiziente Technik beschleunigt die Entwicklung neuer thrombolytischer Arzneimittel.

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<meta charset="utf8"></head><body>Enthüllung von fibrinogenolytischen Wirkstoffen bei Erdnusswürmern mit Fibrinogen-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
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<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
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<table><tbody><tr><td>1&nbsp; M Tris-HCl (pH 6,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1,5 M Tris-HCl (pH 8,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% Acrylamid/Bis-Acrylamid</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniumpersulfat</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>Becherglas</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator mit konstanter Temperatur</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Brillant Blue Färbelösung</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische Analysenwaage</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogen</td><td>Solarbio</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitzen zum Laden von Gelen, Bulk</td><td>Biosharp</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>Homogenisator</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>Oszillator mit horizontaler Rotation</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Referenz</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitze (1 mL)</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitze (10 & Mikro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitze (200 & Mikro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettierer (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipettierer (10 Mikro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>Pipettierer (200 & Mikro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Pipette (50 & Mikro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>gekühlte Zentrifuge</td><td>cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Natriumdodecylsulfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

schnelle trennung und darstellung von aktiven fibrinogenolytischen wirkstoffen in sipunculus nudus durch fibrinogen-polyacrylamid-gelelektrophorese

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Nach der Elektrophorese waren alle Banden des Markers deutlich dargestellt. Die 1x SDS-PAGE-Ladebahnen wiesen nur 10 kDa-Banden (Bromphenolblau) auf. Die sFE- und Erdnusswurmproben zeigten keine beobachtbaren Banden (Abbildung 1). Obwohl die Banden der Proben nicht sichtbar sind, deutete die Leistung des Markers und des Bromphenolblaus darauf hin, dass die Elektrophorese erfolgreich war, und die Proben wurden nach ihrem Molekulargewicht getrennt.
Obwohl das gesamte Gel durch die Färbung blau wurde, machte die Entfärbung den Bereich, in dem Fibrinogen durch Fibrinogenolytika abgebaut wurde, transparent. Im Vergleich zum Marker zeigte der sFE eine aktive fibrinogenolytische Bande nahe 25 kDa. Das Erdnusswurm-Homogenat wies 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa und eine Reihe von Banden auf, die größer als 70 kDa waren (Abbildung 2). Die Ergebnisse zeigten, dass sFE nur eine 25 kDa fibrinogenolytische Komponente enthielt, das Erdnusswurm-Homogenat jedoch sFE-Komponenten und andere fibrinogenolytische Wirkstoffe enthielt. Ergänzende Abbildung 1 ist ein Beispiel für ein Gelbild, das den Marker in tiefem Blau und die Zielproben als helle Banden zeigt.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> Abbildung 1: Gel nach der Elektrophorese. M: Markierung; Bahn 1: 1x SDS-PAGE-Ladepuffer; Bahn 2: sFE; Bahn 3: 1x SDS-PAGE Ladepuffer; Spur 4: Erdnusswurm-Homogenat; Bahn 5: 1x SDS-PAGE Ladepuffer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> Abbildung 2: Gel nach der Entfärbung. M: Markierung; Bahn 1: 1x SDS-PAGE-Ladepuffer; Bahn 2: sFE; Bahn 3: 1x SDS-PAGE Ladepuffer; Spur 4: Erdnusswurm-Homogenat; Bahn 5: 1x SDS-PAGE Ladepuffer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Abbildung 1: Gelbild, das den Marker in tiefem Blau und die Zielproben als helle Banden zeigt. M: Markierung; Bahn 1: 1x SDS-PAGE-Ladepuffer; Bahn 2: sFE; Bahn 3: 1x SDS-PAGE Ladepuffer; Spur 4: Erdnusswurm-Homogenat; Bahn 5: 1x SDS-PAGE Ladepuffer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Schnelle Trennung und Darstellung von aktiven fibrinogenolytischen Wirkstoffen in Sipunculus nudus durch Fibrinogen-Polyacrylamid-Gelelektrophorese

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Dieses Video zeigt das Protokoll eines in-vitro-Angiogenese-Assay, rekapituliert mehrere Stufen der Angiogenese. Zeitraffer-Bilder von Keimen, Lumenbildung, Verzweigung und Anastomose - die wichtigsten Merkmale der Angiogenese - gezeigt werden.

Optimierte Fibringel Bead Assay für das Studium der Angiogenese

In diesem Video demonstrieren wir eine zweidimensionale Gelelektrophorese-Methode, die einzelne Proteine aus einer komplexen Proteinmischung trennt, die aus Tumorgeweben des humanen nichtfunktionellen Hypophysenadenoms (NFPA) gewonnen wurde. Die Proteine werden in der ersten Dimension anhand ihrer elektrischen Ladung und in der zweiten Dimension anhand von Molekulargewichten weiter getrennt.

Zweidimensionale Polyacrylamid-Gelelektrophorese: eine Trenntechnik zur Analyse von Proteinen in komplexen Proteingemischen basierend auf Ladung und Molekulargewicht

Dieses Video zeigt die Verwendung eines UV-sichtbaren Spektralphotometers zur Überwachung der Bildung von unlöslichen Fibringerinnseln in Abhängigkeit von der Änderung der Lösungstrübung. Das UV-sichtbare Spektralphotometer misst die Absorption der Lösung über die Zeit, die die Trübungsänderung aufgrund der Bildung unlöslicher Fibringerinnsel darstellt.

UV-sichtbare Spektroskopie zur Überwachung der Bildung von Fibringerinnseln

Ziel ist es, bioaktive kleine Moleküle, Peptide aus einem komplexen Pflanzenextrakt und Proteine aus pathogenen Mikroben durch die Anwendung der Flüssigphasen-Isotonisierungsmethode (IEF) zu fraktionieren und zu isolieren. Darüber hinaus wurden die getrennten Moleküle identifiziert und ihre Bioaktivität bestätigt.

Trennung von bioaktiven kleinen Molekülen, Peptiden aus natürlichen Quellen und Proteinen aus Mikroben durch Präparative Isoelektrische Fokussierung (IEF) Methode

Dieser Bericht beschreibt Techniken zur Isolierung und Reinigung von sulfatierten Glykosaminoglykanen (GAGs) aus biologischen Proben und einen Polyacrylamid-Gelelektrophorese-Ansatz, um ihre Größe anzunähern. GAGs tragen zur Gewebestruktur bei und beeinflussen Signalprozesse durch elektrostatische Interaktion mit Proteinen. Die GAG-Polymerlänge trägt zu ihrer Bindungsaffinität für verwandte Liganden bei.

Nachweis von Glykosaminoglykanen durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese und Silberfärbung

Hier stellen wir eine Affinitätsreinigungsmethode eines fibrinolytischen Enzyms aus Sipunculus nudus vor, die einfach, kostengünstig und effizient ist.

Affinitätsreinigung eines fibrinolytischen Enzyms aus Sipunculus nudus

Das hier verwendete Experiment zeigt eine Methode des molekularen Andockens in Kombination mit einem zellulären thermischen Shift-Assay, um die Interaktion zwischen kleinen Molekülen und Proteinzielen vorherzusagen und zu validieren.

Vorhersage und Validierung von Proteinzielen für niedermolekulare Verbindungen

Proteinasen sind für die bakterielle Pathogenese von entscheidender Bedeutung und ermöglichen die Invasion und Immunumgehung. Die einstufige Extraktion von zytoplasmatischen und Membranproteinen von Bakterien in ihrer aktiven Form ist erschütternd. Dieser Videoartikel zeigt die Extraktion ganzzellulärer Proteine von Leptospira für die Zymographie-Analyse zum Nachweis und zur Charakterisierung von Gelatinasen.

Einstufige Extraktion und zymographische Analyse von bakteriellen Gelatinasen

Diese Arbeit beschreibt einen mikrofluidischen Assay, der Scherspannung nutzt, um die Thrombusbildung im Blut auszulösen, und charakterisiert den Thrombus anhand mehrerer Auswertungsdimensionen. Der Test kann die prothrombotische Tendenz von Blutproben messen und ist daher nützlich für die Krankheitsdiagnose, Arzneimittelentwicklung sowie grundlegende mechanistische Studien im Zusammenhang mit Thrombose.

Thrombusprofiling-Assay: Eine auf Mikrofluidik basierende Plattform zur umfassenden Charakterisierung biomechanischer Thrombogenese

Dieses Protokoll beschreibt den Nijmeger Hämostasis-Assay, der eine gleichzeitige, zeitaufgelöste Messung von Thrombin- und Plasminbildung ermöglicht, um eine integrierte Bewertung der Gerinnung und Fibrinolyse zu ermöglichen. Der Test zielt darauf ab, die Charakterisierung des hämostatischen Gleichgewichts in Forschung und klinischen Einrichtungen über den Rahmen konventioneller hämostatischer Tests hinaus zu verbessern.

Der Nijmeger Hämostase-Assay: Gleichzeitige fluorogene Messung der Thrombin- und Plasminbildung in einem einzigen Bohrloch

Lernen Sie eine optimierte Fibrinogen-PAGE-Methode zur schnellen Trennung fibrinogenolytischer Wirkstoffe in Sipunculus nudus. Diese effiziente Technik beschleunigt die Entwicklung neuer thrombolytischer Arzneimittel.

Schnelle Trennung und Darstellung von aktiven fibrinogenolytischen Wirkstoffen in Sipunculus nudus durch Fibrinogen-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Video) | JoVE Journal

Schnelle Trennung und Darstellung von aktiven fibrinogenolytischen Wirkstoffen in Sipunculus nudus durch Fibrinogen-Polyacrylamid-Gelelektrophorese

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