Name: Zellfreies Proteinsynthesesystem für den Aufbau synthetischer Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Erfahren Sie das zellfreie Proteinsynthesesystem für den Aufbau synthetischer Zellen mit CFPS in verschiedenen Mikrokompartimenten. Diese Methode ermöglicht modulare Zellmimikry-Systeme für die synthetische Biologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>CFPS-Protokolle für mikrokompartimentierte synthetische Zellen

<table><tbody><tr><td>1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholin(DOPC)</td><td>Avanti</td><td>850375P</td><td></td></tr><tr><td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serin (Natriumsalz)(DOPS)</td><td>Avanti</td><td>840035P</td><td></td></tr><tr><td>1,4-dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.11474</td><td></td></tr><tr><td>1-Palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholin (POPC)</td><td>Avanti</td><td>850457P</td><td></td></tr><tr><td>3,5-zyklisches AMP (cAMP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9501</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Röhrchen</td><td>Eppendorf</td><td>Röhrchen BioBased</td><td></td></tr><tr><td>50% Wasserstoffperoxid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>516813</td><td></td></tr><tr><td>Acetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Pulver Sigma-Aldrich</td><td>05040</td><td></td></tr><tr><td>Alanin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4349</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Rührzellen</td><td>MerckMillipore</td><td>UFSC05001</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniumacetat (NH4OAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7262</td><td></td></tr><tr><td>Arginin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4474</td><td></td></tr><tr><td>Asparagin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0884</td><td></td></tr><tr><td>Aspartat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5474</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Roche</td><td>11140965001</td><td></td></tr><tr><td>Atto 488 DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>67335</td><td></td></tr><tr><td>Atto 647N DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>42247</td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyerkolben</td><td>Shuniu</td><td>250 mL, 1000 mL</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>Roche</td><td>10711454001</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugeröhrchen</td><td>Eppendorf Eppendorf</td><td>Röhrchen 3810X</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugeröhrchengestell</td><td>Eppendorf</td><td>0030119819</td><td></td></tr><tr><td>Chemilumineszenz- und Epifluoreszenz-Bildgebungssystem</td><td>Uvitec</td><td>Alliance Q9 Advanced</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie (LSM)</td><td>ZEISS</td><td>LSM 780</td><td></td></tr><tr><td>Countess Zellzählkammer Objektträger</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas</td><td>Thermo Scientific</td><td>Menzel BB02400500A113MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>Kreatinkinase (CK)</td><td>Roche</td><td>10127566001</td><td></td></tr><tr><td>Kreatinphosphat (CP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10621714001</td><td></td></tr><tr><td>Kulturschale</td><td>Huanqiu</td><td>90 mm</td><td></td></tr><tr><td>Cystein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5360</td><td></td></tr><tr><td>Cytidin 5'-Triphosphat-Dinatriumsalz (CTP)</td><td>Aladdin</td><td>C101487</td><td></td></tr><tr><td>Dialysemembran</td><td>Spectrum</td><td>Standard RC Schläuche MWCO: 12-14 kD</td><td></td></tr><tr><td>E.Z.N.A. Cycle Pure Kit</td><td>Omega Bio-Tek</td><td>D6492-01</td><td></td></tr><tr><td>Elektroheizung Grubber mit stehendem Temperaturbereich</td><td>Yiheng Instrument</td><td>DHP-9602</td><td></td></tr><tr><td>Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)</td><td>Biosharp</td><td></td><td></td>1100027</tr><tr><td>Fluoreszenzplatten-Lesegerät</td><td>BioTek</td><td>Synergy 2</td><td></td></tr><tr><td>Fluoriertes Öl</td><td>Suzhou CChip wissenschaftliches Instrument</td><td>2%HFE7500</td><td></td></tr><tr><td>Folinsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47612</td><td></td></tr><tr><td>French Press</td><td>G.Heinemann</td><td>HTU-DIGI-Press</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Glutamat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5667</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5792</td><td></td></tr><tr><td>Glycerin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Glycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7126</td><td></td></tr><tr><td>Guanosin 5'-triphosphat Natriumsalzhydrat (GTP)</td><td>Roche</td><td>10106399001</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HiPrep Q FF 16/10</td><td>Cytiva</td><td>28936543</td><td></td></tr><tr><td>Histidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>Isoleucin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5281</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl-β-D-Thiogalactopyranosid (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5502</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8281</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Leucin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6914</td><td></td></tr><tr><td>Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumacetat-Tetrahydrat (Mg(OAc)2</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>M5661</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid(MgCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Methionin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8439</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5424 R</td><td></td></tr><tr><td>Mineralöl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell Systems</td><td>Bio-Rad</td><td>1645050</td><td></td></tr><tr><td>Mehrzweckzentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Nukleinsäure &amp; Protein UV-Assay Messungen</td><td>IMPLEN</td><td>NanoPhotometer N60</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBond Xtra Maxi Kit für Transfektionsplasmid DNA</td><td>MACHEREY-NAGEL</td><td>740414.5</td><td></td></tr><tr><td>Nunc-Immuno MicroWell 96 Well Polystyrolplatten</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8616</td><td></td></tr><tr><td>PCR Thermal Cycler</td><td>Eppendorf</td><td>Mastercycler nexus</td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>83059</td><td></td></tr><tr><td>Phenylalanin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8740</td><td></td></tr><tr><td>Phosphoenolpyruvat (PEP)</td><td>GLPBIO</td><td>GC44635</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PMSF-RO</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenglykol 8000 (PEG 8000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89510</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumacetat (KOAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5708</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid ( KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumglutamat (K-Glutamat)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumhydroxid (KOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td></td></tr><tr><td>Prolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8865</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvatkinase (PK)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9136</td><td></td></tr><tr><td>Serin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4311</td><td></td></tr><tr><td>Schüttler</td><td>Zhichushakers</td><td>ZQZY-AF8</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxid (NaOH)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Aladdin</td><td>S112226</td><td></td></tr><tr><td>Schwefelsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>339741</td><td></td></tr><tr><td>Spritzenvorsatzfilter</td><td>Jinteng</td><td>0,45 μ m</td><td></td></tr><tr><td>Reagenzglas</td><td>Shuniu</td><td>20 mL</td><td></td></tr><tr><td>TGX FastCast Acrylamid Kit, 12%</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610175</td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer</td><td>Eppendorf</td><td>ThermoMixer C</td><td></td></tr><tr><td>Threonin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8441</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900483</td><td></td></tr><tr><td>tRNA</td><td>Roche</td><td>10109550001</td><td></td></tr><tr><td>Trypton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7293</td><td></td></tr><tr><td>Tryptophan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8941</td><td></td></tr><tr><td>Tyrosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8566</td><td></td></tr><tr><td>UTP Trinatriumsalz (UTP)</td><td>Aladdin</td><td>U100365</td><td></td></tr><tr><td>Vakuumpumpe mit Umwälzwassersystem</td><td>Zhengzhou Greatwall Scientific Industrial and Trade Co.Ltd</td><td>SHB-<img alt="Gleichung 1" src="/Dateien/ftp_upload/66626/66626eq01.jpg" style="Rand: auto; "></td><td></td></tr><tr><td>Valin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4638</td><td></td></tr><tr><td>Vortex-Mischer</td><td>Kylin-Bell</td><td>Vortex QL-861</td><td></td></tr><tr><td>Wasseraufbereitungssystem</td><td>MerckMillipore</td><td>Direct Reinstwasser (Typ 1)</td><td></td></tr><tr><td>Hefeextrakt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70161</td><td></td></tr><tr><td>β-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

zellfreies proteinsynthesesystem für den aufbau synthetischer zellen

Cell-Free Protein Synthesis System for Building Synthetic Cells

Für jede neue Charge von Zellextrakt und T7-RNA-Polymerase wird empfohlen, ein grundlegendes Screening sowohl der Mg2+- als auch der K+-Konzentrationen durchzuführen, um die optimale Leistung des CFPS-Systems sicherzustellen. Die Fluoreszenz von Superfolder GFP kann als Indikator für die Gesamtausbeute des CFPS-Systems unter verschiedenen Bedingungen dienen, wie in Abbildung 1A,B dargestellt. Darüber hinaus ist in Abbildung 1C ein paralleler Ausbeutevergleich des CFPS-Systems über verschiedene Kompartimente hinweg dargestellt, der eine konsistente Leistung in verkapselten CFPS-Systemen zeigt, wenn auch mit einer leichten Abnahme der GUVs, möglicherweise aufgrund des Einflusses von Saccharose46. Darüber hinaus wurden CFPS-Reaktionen erfolgreich in Tröpfchen (Abbildung 2), GUVs (Abbildung 3) und auf SLBs (Abbildung 4) eingekapselt.
Abbildung 2A zeigt die Bildung von Emulsionströpfchen, die sichtbar wurden, wenn die Öllösung turbulent wurde. Die Expression von grün/rot fluoreszierenden Proteinen (GFP und mCherry) wurde mit Hilfe einer konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopie erfasst. Abbildung 3 zeigt den Erfolg der Verkapselung der CFPS-Reaktion in GUVs durch den einfachen Emulsionstransferprozess. Der rote Kanal zeigte die markierten Lipide an; der grüne Kanal zeigte den Ausdruck des Superordners GFP; und der gelbe Kanal stellte einen inerten Fluoreszenzfarbstoff dar. Abbildung 4A zeigt die SLB-Kammer, in der die CFPS-Reaktion abgelagert werden konnte. In dieser Kammer wurde ein SLB auf dem Glasdeckglas gebildet, wobei das CFPS-Reaktionsgemisch auf dem vorgeformten SLB platziert wurde, was eine Bildgebung über eine konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie ermöglichte. Wie in Abbildung 4B dargestellt, wurde SLB durch markierte Lipide visualisiert, die in grün dargestellt sind, während die exprimierte kleine GTPase Cdc42, die mit mCherry fusioniert ist, in Magenta dargestellt wurde. Die in-situ-Expression von mCherry-Cdc42 war zusammen mit dem reversiblen Membran-Targeting-Prozess unter dem Mikroskop beobachtbar. Das verwendete CFPS-System wurde jedoch durch Prenylierungsmaschinen ergänzt, wie in einer kürzlich veröffentlichten Veröffentlichung47 ausführlich dargelegt wird.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig01.jpg"> Abbildung 1: Optimierung und Vergleich des CFPS-Systems. Screening der (A) Mg2+ -Konzentration und (B) der K+ -Konzentrationen für das CFPS-System in loser Schüttung. (C) Ein Balkendiagramm, das die Proteinexpressionserträge in verschiedenen Kompartimenten zeigt. Die Fluoreszenz des Superfolder GFP wurde verwendet, um die Ausbeute des CFPS-Systems zu bestimmen, gemessen mit einem Plattenleser oder einem konfokalen Laser-Scanning-Mikroskop. Abkürzungen: CFPS = zellfreie Proteinsynthese; GFP = grün fluoreszierendes Protein; sfGFP = Oberordner GFP; GUV = riesiges unilamelläres Vesikel; SLB = unterstützte Lipiddoppelschicht. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig02.jpg"> Abbildung 2: Zellfreie Proteinsynthese in Tröpfchen. (A) Ein Foto von verkapselten CFPS-Reaktionen in tensidstabilisierten Wasser-in-Öl-Tröpfchen. (B) Hellfeld- und (C,D) Fluoreszenzbilder von CFPS von (C) mCherry und (D) Superfolder GFP, eingekapselt in Tröpfchen, visualisiert durch konfokale Laserscanning-Mikroskopie. Superfolder GFP wird grün angezeigt; mCherry ist in Magenta angegeben. Maßstabsleisten = 20 μm. Abkürzungen: CFPS = zellfreie Proteinsynthese; GFP = grün fluoreszierendes Protein. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig03.jpg"> Abbildung 3: Zellfreie Proteinsynthese in GUVs. (A) Ein Foto von verkapselten CFPS-Reaktionen in GUVs. (B-D) Fluoreszenzbild von verkapseltem CFPS in POPC-GUVs, das Superfolder GFP exprimiert. (B) Die Lipiddoppelschicht wurde mit 0,05 % markierten Atto647N-DOPE-Lipiden markiert, die in Rot dargestellt sind, (C) einem inerten Farbstoff in Gelb und (D) Superfolder GFP in Grün. Maßstabsleisten = 20 μm. Abkürzungen: CFPS = zellfreie Proteinsynthese; GFP = grün fluoreszierendes Protein; GUV = riesiges unilamelläres Vesikel; POPC = 1-Palmitoyl-2-oleoyl-glycerol-3-phosphocholin; DOPE = 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig04.jpg"> Abbildung 4: Zellfreie Proteinsynthese des kleinen GTPase-Proteins-Cdc42 auf SLBs. (A) Schematische Darstellung der Rekonstitution des Membran-Targetings von Cdc42 und der RhoGDI-abhängigen Membranextraktion auf SLBs, wie sie durch konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie sichtbar gemacht wurde. Die Prenylierungsmaschinerie wurde über einen mit Prenlytransferase angereicherten Extrakt implementiert, der an anderer Stelle ausführlich beschrieben wird. 47. (B) Eine orthogonale Ansicht der Prä- und Postprenylierung des Reaktionsgemisches auf SLB. (C,D) Zeitreihe der mCherry-Cdc42-Intensität auf der Membran (rosa) und in Lösung (schwarz) während des (C)-Membran-Targetings und der (D)-Membranextraktion. Die Maßstabsbalken = 10 μm. (A-D) wurden von Kai et al.47 übernommen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Tabelle 1: Liste der Puffer. HINWEIS: Fügen Sie kurz vor Gebrauch β-Mercaptoethanol und DTT hinzu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%201_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Tabelle 2: Pipettierschema für das Mg2+ -Konzentrationsscreening. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%202_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Tabelle 3: Pipettierschema für das K+ -Konzentrationsscreening. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%203_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Tabelle 4: Zusammensetzung der inneren Lösung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%204_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Tabelle 5: Zusammensetzung der äußeren Lösung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%205_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Tabelle 6: Zusammensetzung der Preinner Lösung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%206_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>

Zellfreies Proteinsynthesesystem für den Aufbau synthetischer Zellen

The Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) system has been widely employed to facilitate the bottom-up assembly of synthetic cells. It serves as the host for ...

cell-free-protein-synthesis-system-for-building-synthetic-cells

Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Das Fünf-Tage-Protokoll beschreibt alle Schritte, Geräte und Zusatzsoftware notwendig für die Schaffung und den Betrieb einer effizienten endogenen Escherichia coli basierten TX-TL zellfreien Expressionssystem von Grund auf neu. Mit Reagenzien, nimmt das Protokoll 8 Stunden oder weniger, um das Setup eine Reaktion, sammeln und Prozessdaten.

Protokolle für die Implementierung einer Escherichia coli Basierend TX-TL Zellfreie Expression System für Synthetische Biologie

Hier beschreiben wir einfache Methoden für die Herstellung von Vesikeln, die Verkapselung der Transkription und Translation Maschinen, und die Überwachung der Herstellung von Proteinen. Die resultierende zellfreie Systeme können als Ausgangspunkt, von dem zunehmend komplexen zellulären Mimik genutzt werden müssen.

Die Verkapselung von Zellfreie Transkription und Übersetzung Machinery in Vesikel über die Errichtung von Cellular Mimics

Wir beschreiben ein einfaches lithographischen Verfahren für die Immobilisierung von gen-Länge DNA-Molekülen auf einer Fläche, die zur zellfreien gen Ausdruck Experimente auf Biochips durchführen können.

Funktionale Oberfläche-Immobilisierung von Genen mit mehrstufigen Strang Verschiebung Lithographie

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte, die Kosten und die notwendige Ausrüstung für E. Colizu generieren-basierte Zellextrakte und in-vitro- Protein Synthesereaktionen innerhalb von 4 Tagen oder weniger zu implementieren. Um die flexiblen Charakter dieser Plattform für breite Anwendungen nutzen zu können, diskutieren wir Reaktionsbedingungen, die angepasst und optimiert werden können.

Escherichia coli-basierte zellfreie Proteinsynthese: Protokolle für eine robuste, flexible und zugängliche Plattform-Technologie

Dieses Protokoll beschreibt die Methode, Materialien, Ausrüstung und Schritte zur Bottom-up-Vorbereitung von RNA und Protein produzierenden synthetischen Zellen. Das innere wässrige Fach der synthetischen Zellen enthielt das in einer Lipid-Bilayer (d. h. stabile Liposomen) eingekapselte S30-Bakterienlysat, das mit einem Wasser-in-Öl-Emulsionstransferverfahren verkapselt war.

Herstellung von Proteinproduktion synthetischer Zellen mit zellfreien bakteriellen Extrakten, Liposomen und Emulsionstransfer

Wir präsentieren eine schnelle und kostengünstige Methode zur Herstellung des rekombinanten PURE zellfreien TX-TL-Systems mit Standard-Laborgeräten.

OnePot PURE Zellfreies System

Die Studie beschreibt ein Protokoll zur Erzeugung großer (μg-mg) Mengen an DNA für Protein-Screening-Kampagnen aus synthetischen Genfragmenten ohne Klonen oder Verwendung lebender Zellen. Die minimale Schablone wird enzymatisch verdaut und zirkuliert und dann mit isothermer Rollkreisamplifikation amplifiziert. Zellfreie Expressionsreaktionen könnten mit dem ungemeinigten Produkt durchgeführt werden.

Schnelle, enzymatische Methoden zur Amplifikation minimaler, linearer Templates für das Protein-Prototyping mit zellfreien Systemen

Gut charakterisierte genetische Teile sind für das Design neuartiger genetischer Schaltkreise notwendig. Hier beschreiben wir eine kostengünstige Hochdurchsatzmethode zur schnellen Charakterisierung genetischer Teile. Unsere Methode reduziert Kosten und Zeit durch die Kombination von zellfreien Lysaten, linearer DNA zur Vermeidung von Klonen und akustischem Flüssigkeitshandling, um den Durchsatz zu erhöhen und das Reaktionsvolumen zu reduzieren.

Schnelle Charakterisierung genetischer Teile mit zellfreien Systemen

Diese Arbeit beschreibt die Herstellung von Zellextrakt aus Escherichia coli (E. coli ) gefolgt von zellfreien Proteinsynthesereaktionen (CFPS) in weniger als 24 Stunden. Die Erläuterung des CFAI-Protokolls (Cell-Free Autoinduction) beschreibt Verbesserungen, die vorgenommen wurden, um die Aufsicht der Forscher zu reduzieren und die Mengen des erhaltenen Zellextrakts zu erhöhen.

Von der Zelle zur zellfreien Proteinsynthese innerhalb von 24 Stunden mit zellfreiem Autoinduktions-Workflow

Hier wird ein Protokoll zur Herstellung und Pufferkalibrierung von Zellextrakten aus Exonuklease-V-Knockout-Stämmen von Escherichia coli BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD und ΔrecB) vorgestellt. Dies ist ein schneller, einfacher und direkter Ansatz für die Expression in zellfreien Proteinsynthesesystemen mit linearen DNA-Vorlagen.

Zellfreie Proteinsynthese aus Exonuklease-defizienten Zellextrakten unter Verwendung linearer DNA-Vorlagen

Wir präsentieren ein aktualisiertes Protokoll für die Herstellung des OnePot-Systems "Protein synthesis Using Recombinant Elements" (PURE) und roher Ribosomen für die zellfreie Proteinsynthese, wobei der Schwerpunkt auf der Kontrolle des Zellwachstums liegt, um Variationen von Charge zu Charge zu minimieren.

Verfeinerung von OnePot PURE und Roh-Ribosomen-Produktion für reproduzierbare zellfreie Proteinsynthese

Erfahren Sie das zellfreie Proteinsynthesesystem für den Aufbau synthetischer Zellen mit CFPS in verschiedenen Mikrokompartimenten. Diese Methode ermöglicht modulare Zellmimikry-Systeme für die synthetische Biologie.

Zellfreies Proteinsynthesesystem für den Aufbau synthetischer Zellen

Weitere Videos entdecken