Name: Erfahrungsabhängiger Umbau der synaptischen Konnektivität von olfaktorischen sensorischen Neuronen im juvenilen Gehirn in einer kritischen Phase im frühen Leben (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Entdecken Sie die Rolle von Gliazellen bei der erfahrungsabhängigen synaptischen Ummodellierung in Drosophila. Diese Methode nutzt kontrollierte olfaktorische Reize und konfokale Bildgebung zur Analyse neuronaler Plastizität während kritischer Entwicklungsphasen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Durch olfaktorische Erfahrung induzierter synaptischer Umbau im juvenilen Gehirn von Drosophila

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</ol>

<table><tbody><tr><td>For Odor Exposure</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drosophila fläschchen</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-110</td><td></td></tr><tr><td>Ethylbutyrat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E15701</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Fisher Wissenschaftlich&nbsp;</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Mineralöl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3516</td><td></td></tr><tr><td>Geruchskammern</td><td>Glasslock</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinsel</td><td>Winsor & Newton</td><td>Series 233</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Thermofisher</td><td>S37440</td><td></td></tr><tr><td>Drahtgeflecht</td><td>Scienceware</td><td>378460000<</td><td></td></tr><tr><td>strong>Brain Dissection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, 190 proof</td><td>Decon Labs</td><td>2801</td><td>Verdünnt auf 70%</td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-30</td><td>Dumont #5</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd&nbsp;</td><td>Elektronenmikroskop Wissenschaften</td><td>157-8</td><td>Verdünnt auf 4%</td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-757-100B</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>70011-044</td><td>Verdünnt auf 1x</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP220-1</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard</td><td>Elektronenmikroskop Sciences</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>BP151-100</td><td></td></tr><tr><td>Brain Immunocytochemistry</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>488</td><td>Anti-Hühner-Invitrogen</td><td>A11039</td><td></td></tr><tr><td>546 Anti-Ratte</td><td>Invitrogen</td><td>A11081</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Huhn Anti-GFP</td><td>Abcam</td><td>13970</td><td></td></tr><tr><td>Deckgläser</td><td>Avantor</td><td>48366-067</td><td>25 x 25 mm</td></tr><tr><td>Doppelseitiges Klebeband</td><td>Scotch</td><td>34-8724-5228-8</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G&nbsp;</td><td>Elektronenmikroskop Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td>75 x 25 mm</td></tr><tr><td>Nagellack</td><td>Sally Hansen</td><td>109</td><td>Xtreme Wear, Invisible</td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Anti-CadN</td><td>Entwicklungsstudien Hybridom Bank</td><td>AB_528121</td><td></td></tr><tr><td> Konfokal/Analyse</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jeder Computer/Laptop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Zeiss 510 META&nbsp;</td></tr><tr><td>Fidschi Software</td><td>Fidschi</td><td></td><td>Version 2.14.0/1.54f</td></tr></tbody></table>

erfahrungsabhängiger umbau der synaptischen konnektivität von olfaktorischen sensorischen neuronen im juvenilen gehirn in einer kritischen phase im frühen leben

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period

Abbildung 1 zeigt den Arbeitsablauf für die von der Geruchserfahrung abhängige Geruchsstoffexposition in der kritischen Periode und bildgebende Verfahren des Gehirns. Das Protokoll beginnt mit der Altersanpassung von dunklen Puppen pharate unmittelbar vor der Eklosion (Abbildung 1A). Die Puppen werden für 4 Stunden in Odoriermittelkammern gelegt, und dann werden neu eingeschlossene Erwachsene in frische Fläschchen entweder in der Fahrzeugkontrolle oder in dosierten EB-Odormittelkammern umgedreht (Abbildung 1B). Wir setzen das Odormittel in der Regel 24 Stunden lang aus, obwohl jede Dauer möglich ist. Nach der Exposition mit Geruchsstoffen beginnt die Dissektion des Gehirns mit der Entfernung des Kopfes aus dem Thorax und dann mit der Entfernung des Exoskeletts der Nagelhaut mit einer feinen Pinzette (Abbildung 1C). Das isolierte Gehirn wird von allen assoziierten Geweben gereinigt, die die Bildgebung beeinträchtigen könnten, und dann sofort in 4 % Paraformaldehyd und 4 % Saccharose in PBS fixiert. Eine kurze Fixzeit von 30 Minuten ist ausreichend für eine gute Integrität des Hirngewebes. Das immunzytochemische Protokoll beginnt mit einem 1-stündigen Block (z. B. BSA, NGS), einer Inkubation über Nacht in primären Antikörpern (z. B. anti-GFP, -CadN) und einer anschließenden kurzen 2-stündigen Inkubation in sekundären Antikörpern (Abbildung 1D). Die markierten Gehirne werden auf Objektträgern unter versiegelten Deckgläsern mit der Rückenfläche des Gehirns nach oben montiert, um eine optimale Abbildung der Antennenlappen zu ermöglichen (Abbildung 1E). Beachten Sie, dass alle Proben sowohl für den Genotyp als auch für die Erfahrungsbedingungen verblindet werden, indem der Objektträger mit einer codierten Bezeichnung für die spätere Dekodierung markiert wird. Ein konfokales Laser-Scanning-Mikroskop mit einem 63-fachen Ölimmersionsobjektiv wird verwendet, um die Antennenlappen des Zentralhirns abzubilden (Abbildung 1F). Es werden Laserlinien ausgewählt, die für die verwendeten Fluorophore optimal sind (z. B. Argon 488 und HeNe 543), um die olfaktorische sensorische Neuroneninnervation von VM7 in Or42a im Kontext der umgebenden Glomeruli abzubilden.
Es ist wichtig, die optimale Verstärkung, den optimalen Offset, die optimale Bildauflösung und die optische Schichtdicke auszuwählen, um die gesamte Z-Stapel-Projektion der Or42a-Neuroneninnervation in den VM7-Glomeruli zu erfassen. Alle zu vergleichenden Genotypen und Erfahrungsbedingungen werden mit identischen Mikroskopeinstellungen abgebildet. Die Z-Stacks werden mit der ImageJ-Software verarbeitet, wobei die erfahrungsabhängigen Veränderungen hauptsächlich anhand des Innervationsvolumens 7,14 bewertet werden. Es gibt zwei Möglichkeiten, volumetrische Messungen zu berechnen. Man berechnet die Innervationsfläche Schicht für Schicht mit der Lasso-Funktion ImageJ und multipliziert dann jeden Wert mit der Dicke jeder Scheibe (μm)8,9. Die andere verwendet Z-Projektionen für Summenschichten und multipliziert die Anzahl der Z-Stapel-Schichten mit der Schichtdicke, um das durchschnittliche Volumen zu bestimmen. Beide Methoden liefern konsistente Ergebnisse. Zusätzlich zu den Volumenmessungen kann auch die Fluoreszenzintensität mit der maximalen Intensitätsprojektion von VM7 glomeruli16 bestimmt werden. Die gewichtete Summe aller Pixel wird über die maximale Projektion der ImageJ-Summenschicht bewertet, wobei die Pixelanzahl auf jeder Intensitätsstufe summiert wird, um die Gesamtintensität 8,9 zu berechnen. Der Hintergrund kann subtrahiert werden, indem eine extraglomeruläre Region identischer Größe quantifiziert wird. Diese Subtraktionsmethode ist zeitaufwändiger, aber genauer, da sie unterschiedliche Niveaus der Hintergrundantikörpermarkierung in jeder Gehirnprobe berücksichtigt, um eine repräsentativere Quantifizierung der Innervationsfluoreszenzintensitätswerte zu erzielen. Intensitätsmessungen werden in einem typischen Bereich von 18-30 optischen Schichten (0,37 μm/Schicht) innerhalb eines Z-Stapels durchgeführt, gemittelt für jedes Gehirn16. In fast allen Fällen liefern die Messungen der Innervationsfluoreszenzintensität und des Volumens konsistente Ergebnisse.
Über alle Messmodalitäten hinweg bleiben die repräsentativen Ergebnisse unerschütterlich; Die frühe Erfahrung mit EB-Odorierstoffen führt zu einem signifikanten Verlust der Innervation von Or42a-Neuronen. Der VM7-Glomerulus kann zuverlässig anhand von Größe, Form und Lage unter anderen präzise kartierten olfaktorischen Glomeruli des Antennenlappens identifiziert werden (Abbildung 2A) und durch gezielte Expression der Or42a-mCD8::GFP-Membranmarkierung, die an die glomeruläre Markierung mit antineuralem Cadherin (CadN; Abbildung 2B). Die zeitgesteuerte Exposition gegenüber dem Odorierungsmittel (Mineralöl) führt zu einer Innervation von Or42a-Neuronen, die von einem unbehandelten, normalen Tier nicht zu unterscheiden ist. Dennoch führt die Erfahrung von EB-Odoriermitteln in den ersten Tagen nach der Eklosion (dpe) zu einer synaptischen Glomeruli-Beschneidung (Abbildung 2C). Dieser Beschneidungsmechanismus ist vollständig auf die kurze kritische Periode im frühen Leben beschränkt 8,10. In der Regel verwenden wir heute eine 24-stündige Odorstoffexposition, um die synaptische Beschneidung von VM7-Glomeruli und die daraus resultierende Abnahme des Innervationsvolumens im juvenilen Drosophila-Gehirn zu beurteilen. Eine 24-stündige Exposition (0-1 dpe) gegenüber der Odorierungsmittelkontrolle (Mineralöl) hält die normale, dichte Or42a-mCD8::GFP-Innervation (grün) in den synaptischen Glomeruli VM7 (weiße gestrichelte Kreise) in beiden Antennenlappen der Gehirnhemisphäre aufrecht (Abbildung 2D, links). Im auffälligen Gegensatz dazu führt eine 24-stündige Exposition (0-1 dpe) mit 25 % EB-Odorant, gelöst im Mineralöl, zu einem starken Rückschnitt der Or42a-mCD8::GFP-Innervation (grün) und einem Verlust des synaptischen glomerulären Volumens (Abbildung 2D, rechts). Diese Ergebnisse sind sowohl visuell offensichtlich als auch durchweg klar. Eines der größten Attribute dieses Odorant-Experience-Protokolls ist die Klarheit der bildgebenden Ergebnisse des Gehirns, die sich auch hervorragend für eine einfache Quantifizierung der Innervationsfluoreszenzintensität und des Volumens eignen.
Der Hauptvorteil dieses Odorant-Erfahrungsprotokolls ist die Möglichkeit, es für die Untersuchung der zeitlichen Restriktion und der dosisabhängigen Mechanismen des Odoriermittels während des synaptischen Pruning in kritischen Perioden zu nutzen. Für die EB-getriebene Eliminierung von Or42a-Neuronensynapsen im VM7-Glomerulus ist der Umbaumechanismus hauptsächlich auf das frühe Jugendtier (0-2 dpe) beschränkt, wobei kein nachweisbares erfahrungsabhängiges synaptisches Pruning bei Reife (7-9 dpe) nachweisbar ist, mit Ausnahme einer geringfügigen Modulation bei den höchsten EB-Expositionsniveaus8. Eine solche zeitliche Beschränkung definiert eine kritische Periode, und das Verständnis dieses Zeitmechanismus ist ein wichtiges Ziel. Ein weiteres Merkmal dieses Protokolls ist, dass das erfahrungsabhängige synaptische Pruning EB-dosisabhängig ist (Abbildung 3). Die zeitgesteuerte Exposition gegenüber dem Odorierungsmittel control (Mineralöl) mit 0 % EB-Odorant führt zu einer normalen Innervation des synaptischen Glomerulus VM7 in einem Or42a-Neuron, das von einem unbehandelten Tier nicht zu unterscheiden ist. Die Berechnung des 3-dimensionalen Volumens der Innervation des Or42a-Neurons zeigt eine für ein normales juveniles Gehirn typische Größe (2260 μm3; Abbildung 3A, links). Repräsentative Ergebnisse zeigen, dass eine Erhöhung der EB-Geruchsstoffkonzentration zu einer zunehmend stärkeren Beschneidung der synaptischen Glomeruli führt. Zum Beispiel führt eine 24-stündige Exposition (0-1 dpe) gegenüber 15 % EB-Odorstoff zu einem deutlichen und konsistenten Innervationsverlust (Abbildung 3A, Mitte). Die Quantifizierung des 3D-Innervationsvolumens zeigt eine auffällige Reduktion im Vergleich zu Fahrzeugkontrollen (760 μm3 vs. 2260 μm3). Eine 24-stündige Exposition (0-1 dpe) gegenüber 25 % EB-Geruchsstoff führt zu einem noch stärkeren Innervationsverlust (281 μm3; Abbildung 3A, rechts). Repräsentative Quantifizierungen für diesen Bereich der EB-Odorantenkonzentrationen zeigen konsistente Ergebnisse für die Fluoreszenzintensität (Abbildung 3B) und das Innervationsvolumen (Abbildung 3C). Diese Dosisabhängigkeit ermöglicht die Untersuchung der Mittel zur Verhinderung des synaptischen Beschneidens sowie zur Verbesserung des Beschneidungsvermögens mit geringerer Geruchsstoffexposition, um einen erhöhten Umbau der synaptischen Glomeruli zu demonstrieren. Einige frühere Studien haben den gegenteiligen Effekt eines erhöhten glomerulären Volumens unter Verwendung anderer Geruchsstoffe mit diesem Protokoll gezeigt10. Die Exposition gegenüber EB-Odorstoffen in der kritischen Phase führt immer zu einem auffälligen und leicht nachweisbaren synaptischen Glomeruli-Schnitt.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66629/66629fig01.jpg"> Abbildung 1: Flussdiagramm von Studien zur Exposition von Geruchsstoffen im juvenilen Gehirn von Drosophila . (A) Dunkle Puppen (90+ h nach der Pupariation bei 25 °C) werden gesammelt und in Odoriermittelkammern gelegt. Unter Geruchsbedingungen werden 4 Stunden für die Eklosion zugelassen, und dann werden junge Fliegen in ein frisches Fläschchen umgefüllt. (B) Altersangepasste Fliegen werden entweder in die Fahrzeugkontrolle (100 % Mineralöl) oder die Ethylbutyrat (EB; % v/v in Mineralöl) unterteilt. Ein feines Drahtgeflecht (Einschub) ermöglicht den Zugang zum Odormittel. Fliegen werden in der Regel für weitere 20 Stunden exponiert, also insgesamt 24 Stunden Exposition, 0-1 Tag nach der Eklosion (dpe). (C) Fliegen werden präpariert, indem zuerst der Kopf entfernt wird, und dann werden feine Pinzetten verwendet, um das Exoskelett der Kutikula vorsichtig zu entfernen und das jugendliche Gehirn zu isolieren. Das isolierte Gehirn wird von allen umliegenden Geweben und der hervorstehenden Luftröhre befreit. (D) Isolierte Gehirne werden fixiert, blockiert und dann nacheinander in primären und sekundären Antikörpern inkubiert. Die Palette der verwendeten Antikörper umfasst typischerweise eine allgemeine Membransonde zur Darstellung der synaptischen Glomeruli des Antennenlappens und eine spezifische Membransonde für die olfaktorischen sensorischen Neuronen von Or42a. (E) Markierte Gehirne werden in einem Eindeckmedium auf einen Glasobjektträger mit Klebebandabstandshaltern unter einem versiegelten Deckglas gelegt. Die korrekte Ausrichtung des Gehirns (Rückenfläche nach oben) ist entscheidend für eine optimale Abbildung der Antennenlappen. (F) Die Gehirne werden mit einem konfokalen Laser-Scanning-Fluoreszenzmikroskop abgebildet. Alle Proben werden vor der Bildgebung und den anschließenden quantifizierten Analysen auf den Genotyp und die Erfahrungsbedingungen verblindet. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66629/66629fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66629/66629fig02.jpg"> Abbildung 2: Beschneidung der synaptischen Glomeruli in der kritischen Periode. (A) Die olfaktorischen Glomeruli des Antennallappens (AL) sind genau kartiert. Einige repräsentative synaptische Glomeruli sind dargestellt. Die Or42a-Rezeptorklasse der olfaktorischen sensorischen Neuronen (OSN) innerviert spezifisch die VM7-Glomeruli. (B) Or42a-mCD8::GFP-markierte Neuronen (grün) innervieren dicht die gepaarten VM7-Glomeruli auf der linken (L) und rechten (R) Seite des Gehirns, wobei alle synaptischen AL-Glomeruli (magenta) mit N-Cadherin (CadN)-Antikörpern markiert werden. Die Fliegenschnur ist w1118; Or42a-mCD8::GFP/+. (C) Schematische grafische Darstellung der Or42a OSN-Innervation der synaptischen Glomeruli VM7 unter der Vehikelkontrollbedingung (100 % Mineralöl; links) und der Ethylbutyrat-Exposition (% EB v/v in Mineralöl; rechts) während der juvenilen kritischen Phase. Ein erfahrungsabhängiger Innervationsschnitt tritt nur bei einer EB-Exposition im frühen Leben auf, wobei Synapsen eliminiert und Axone verloren gehen, was zu einem reduzierten Innervationsvolumen führt. (D) Repräsentative konfokale Bilder der Or42a OSN-Innervation der gepaarten synaptischen VM7-Glomeruli (gestrichelte weiße Umrisskreise; Or42a-mCD8::GFP, grün) nach der Kontrolle des Ölfahrzeugs (links) und 25 % EB-Exposition (rechts) für 24 h (0-1 dpe). Die Erfahrung mit dem EB-Odorant führt zu einer synaptischen Beschneidung und dem Verlust des Innervationsvolumens. Dieser erfahrungsabhängige Mechanismus ist zeitlich begrenzt und nur innerhalb einer genau definierten olfaktorischen kritischen Periode in den ersten Tagen nach der Eklosion vorübergehend reversibel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66629/66629fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66629/66629fig03.jpg"> Abbildung 3: Quantifizierung der dosisabhängigen Intensität und des Volumens der Innervationsfluoreszenz der synaptischen Gloperuli. (A) Or42a-mCD8::GFP-markierte Innervation in einem synaptischen Glomerulus VM7 (grün), der von 0-1 dpe der Mineralölkontrolle des Odorierungsträgers (0 % EB, links), 15 % EB (Mitte) oder 25 % EB (rechts) ausgesetzt war. Unten: Die gleichen Bilder mit umrandeter glomerulärer Innervation (weiße Kreise) und dem berechneten 3-dimensionalen Innervationsvolumen. Die Vehikelkontrolle weist eine synaptische Glomerulus-Innervation von VM7 durch Or42a-Neuronen auf, die von den unbehandelten Tieren nicht zu unterscheiden ist. Kritische Periodenerfahrungen mit 15 % EB-Geruchsexposition führen zu einer offensichtlichen Beschneidung des synaptischen Glomerulus, in diesem Fall mit einer Abnahme des 3-dimensionalen Innervationsvolumens um 66 %. Die Exposition gegenüber dem höheren Niveau von 25 % EB führt zu einer stärkeren Beschneidung, in diesem Fall mit einem Verlust des synaptischen Glomerulusvolumens von fast 90 %. So kann man sich einen dosisabhängigen Schnitt vorstellen, wenn das Geruchserlebnis zunimmt. (B) Repräsentative Ergebnisse der Or42a-mCD8::GFP-markierten Fluoreszenzintensität in synaptischen VM7-Glomeruli, die von 0-1 dpe an die Kontrolle des Odorierungsmittels (Öl, grün), 15 % EB (Mitte, orange) oder 25 % EB (rechts, schwarz) exponiert wurden. (C) Repräsentative Ergebnisse der 3-dimensionalen Innervationsvolumina von VM7-Glomeruli unter den gleichen Bedingungen unter den gleichen Bedingungen der kritischen Periode der Odoriermittelexposition. Die Streudiagramme zeigen alle einzelnen Datenpunkte mit dem Mittelwert ± SEM. Die Signifikanz wird mit p≤0,05 (*), p ≤ 0,01 (**), p ≤ 0,001 (***) und p ≤ 0,0001 (****) angegeben. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66629/66629fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Erfahrungsabhängiger Umbau der synaptischen Konnektivität von olfaktorischen sensorischen Neuronen im juvenilen Gehirn in einer kritischen Phase im frühen Leben

Early-life olfactory sensory experience induces dramatic synaptic glomeruli remodeling in the Drosophila juvenile brain, which is experientially ...

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Forschung

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Neuroscience

Neurowissenschaften

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Das olfaktorische System als Modell zur Axonal Wachstumsmuster und Morphologie Studieren In Vivo

Wir beschreiben ein Immunhistochemie Protokoll, um das Profil Hippocampus-Neuronen Aktivierung nach Exposition gegenüber einer räumlichen Lernaufgabe in einem Maus-Modell gekennzeichnet durch kognitive Defizite der Neuroentwicklungs Ursprung zu studieren. Dieses Protokoll kann sowohl genetische oder pharmakologische Mausmodellen, gekennzeichnet durch kognitive Defizite angewendet werden.

Immunhistochemische Visualisierung von Hippocampus-Aktivität nach Spatial Learning in einem Mausmodell für neurologische Entwicklungsstörungen

Die Identifizierung von Molekülen und Signalwegen, die die synaptische Plastizität und das Gedächtnis steuern, ist immer noch eine große Herausforderung in den Neurowissenschaften. Hier wird ein Arbeitsablauf beschrieben, der sich mit der relativen Quantifizierung von synaptischen Proteinen befasst, die angeblich an der molekularen Reorganisation von Synapsen während des Lernens und der Gedächtniskonsolidierung in einem auditorischen Lernparadigma beteiligt sind.

Hohe Auflösung Quantitative Synaptische Proteome Profilieren von Maus Hirnregionen Nach Auditory Diskriminierung Lernen

Hier trainieren wir Mäuse auf eine assoziative Lernaufgabe Geruch Diskriminierung zu testen. Dieses Protokoll ermöglicht auch Studien zu lernen-induzierten strukturellen Veränderungen im Gehirn.

Eine objektive und reproduzierbare Test der olfaktorischen Lern- und Diskriminierung bei Mäusen

Dies ist ein Protokoll zur akuten Scheibenpräparation von erwachsenen und alternden Maus Hippocampi, die Vorteile der transkardialen Perfusion und Schneiden schneiden mit eiskalten NMDG-aCSF nutzt, um hypoxische Schäden am Gewebe zu reduzieren. Die resultierenden Scheiben bleiben über viele Stunden gesund und eignen sich für Langzeit-Patch-Clamp- und Field-Recordings.

Minimierung der Hypoxie in Hippocampal Scheiben von erwachsenen und alternden Mäusen

Das hier vorgestellte Protokoll liefert Informationen zur simultanen Elektroenzephalografie (EEG) und Verhaltensbeurteilung in Echtzeit. Wir haben alle Schritte, die mit diesem Protokoll verbunden sind, als attraktive Lösung für Forscher in vielen Bereichen der Neurowissenschaften diskutiert, insbesondere in Lern- und Gedächtnisbereichen.

Simultane Überwachung der drahtlosen Elektrophysiologie und des Gedächtnisverhaltenstests als Werkzeug zur Untersuchung der Neurogenese des Hippocampus

Dieses Protokoll beschreibt das Dissektionsverfahren, den Kulturzustand und die Live-Bildgebung eines Antennen-Hirn-Explantationssystems zur Untersuchung der olfaktorischen Schaltkreisanordnung.

Ein Explantationssystem für Zeitraffer-Bildgebungsstudien der olfaktorischen Schaltkreismontage bei Drosophila

Entdecken Sie die Rolle von Gliazellen bei der erfahrungsabhängigen synaptischen Ummodellierung in Drosophila. Diese Methode nutzt kontrollierte olfaktorische Reize und konfokale Bildgebung zur Analyse neuronaler Plastizität während kritischer Entwicklungsphasen.

Erfahrungsabhängiger Umbau der synaptischen Konnektivität von olfaktorischen sensorischen Neuronen im juvenilen Gehirn in einer kritischen Phase im frühen Leben (Video) | JoVE Journal

Erfahrungsabhängiger Umbau der synaptischen Konnektivität von olfaktorischen sensorischen Neuronen im juvenilen Gehirn in einer kritischen Phase im frühen Leben

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