Name: Quantifizierung der pulmonalen mikrovaskulären Dichte bei Mäusen über Läppchen hinweg (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Erfahren Sie die Quantifizierung der pulmonalen mikrovaskulären Dichte in Mäusen über Läppchen hinweg mit Isolectin B4-Färbung und ImageJ-Analyse. Diese Methode ermöglicht präzise Messungen altersbedingter Veränderungen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Beurteilung der pulmonalen Mikrovaskulatur mit Isolektin-B4-Färbung bei Mäusen

<ol><li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-2+promotes+angiogenesis+through+a+srsf1%2Fsrsf3%2Fsrpk1-dependent+axis+that+controls+vegfr1+splicing+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Fgf-2 promotes angiogenesis through a srsf1/srsf3/srpk1-dependent axis that controls vegfr1 splicing in endothelial cells.</a> BMC Biol. 19 (1), 173(2021).</li>
<li>Schneider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lung%3A+Physiology%2C+disease%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The aging lung: Physiology, disease, and immunity.</a> Cell. 184 (8), 1990-2019 (2021).</li>
<li>Rafii, S., Butler, J. M., Ding, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiocrine+functions+of+organ-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiocrine functions of organ-specific endothelial cells.</a> Nature. 529 (7586), 316-325 (2016).</li>
<li>Lipskaia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+telomerase+in+p21-positive+cells+counteracts+capillaries+rarefaction+in+aging+mice+lung%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Induction of telomerase in p21-positive cells counteracts capillaries rarefaction in aging mice lung.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Hoshino, M., Takahashi, M., Aoike, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%2C+basic+fibroblast+growth+factor%2C+and+angiogenin+immunoreactivity+in+asthmatic+airways+and+its+relationship+to+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and angiogenin immunoreactivity in asthmatic airways and its relationship to angiogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 107 (2), 295-301 (2001).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+endothelialitis%2C+thrombosis%2C+and+angiogenesis+in+covid-19%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular endothelialitis, thrombosis, and angiogenesis in covid-19.</a> New Engl J Med. 383 (2), 120-128 (2020).</li>
<li>Wertheim, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+pulmonary+microvascular+endothelial+cells+ex+vivo%3A+Implications+for+pulmonary+arterial+hypertension%2C+and+a+caution+on+the+use+of+commercial+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolating pulmonary microvascular endothelial cells ex vivo: Implications for pulmonary arterial hypertension, and a caution on the use of commercial biomaterials.</a> PLoS One. 14 (2), e0211909(2019).</li>
<li>Thomas, S. M., Bednarek, J., Janssen, W. J., Hume, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air-inflation+of+murine+lungs+with+vascular+perfusion-fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation.</a> J Vis Exp. (168), e62215(2021).</li>
<li>Ramasamy, S. K., Kusumbe, A. P., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tissue+morphogenesis+by+endothelial+cell-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tissue morphogenesis by endothelial cell-derived signals.</a> Trends Cell Biol. 25 (3), 148-157 (2015).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Corliss, B. A., Mathews, C., Doty, R., Rohde, G., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+label%2C+image%2C+and+analyze+the+complex+structural+architectures+of+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Methods to label, image, and analyze the complex structural architectures of microvascular networks.</a> Microcirculation. 26 (5), e12520(2019).</li>
<li>Phillips, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+evaluating+the+murine+pulmonary+vasculature+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A method for evaluating the murine pulmonary vasculature using micro-computed tomography.</a> J Surg Res. 207, 115-122 (2017).</li>
<li>Chadwick, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+network+extraction+and+analysis+of+mouse+pulmonary+vasculature+via+x-ray+micro-computed+tomographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Vessel network extraction and analysis of mouse pulmonary vasculature via x-ray micro-computed tomographic imaging.</a> PLoS Comput Biol. 17 (4), e1008930(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4% Paraformaldehyd</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td>Gewebefixiermittel</td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-phenylindol</td><td>MCE</td><td>HY-D0814</td><td>Nukleinfarbstoffe</td></tr><tr><td>Alexa-647 Fluor konjugiertes Isolektin B4</td><td>Thermo</td><td>I32450</td><td>Bindungsmikrogefäße</td></tr><tr><td>Anti-Fluoreszenz-Tablettenversiegelung</td><td>Abcam</td><td>AB104135</td><td>Probenfixierung</td></tr><tr><td>Antigen Reparaturflüssigkeit</td><td>Biosharp</td><td>BL151A</td><td>Reparatur von antigenen Stellen</td></tr><tr><td>Biopsiekassette</td><td>ActivFlo</td><td>39LC-500-1</td><td>Fixierung und Positionierung von Gewebeproben</td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin</td><td>Sigma</td><td>B2064-50G</td><td>Versiegelungslösung</td></tr><tr><td>Kühlplatte</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia H&nbsp;</td><td>Einfrieren von Proben</td></tr><tr><td>Elektrischer Trockenofen mit konstanter Temperatur</td><td>Taisite</td><td>101-0AB</td><td>Hochtemperatur-Reparatur-Einweg-Mikrotomklinge</td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>14035838383</td><td>Schneiden von Gewebeproben zur Vorbereitung von Schnitten</td></tr><tr><td>Einbetten von Formen</td><td>Shitai</td><td>26155166627</td><td>Fixieren von Gewebeproben</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Kelong</td><td>CAS 64-17-5</td><td>Gewebe-Dehydratisierungslösung</td></tr><tr><td>Erhitztes Paraffin Embedding Station</td><td>Leica</td><td>EG1150</td><td>Einbetten von Proben in Paraffin</td></tr><tr><td>HistoCore Wasserbad</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td>Glätten und Fixieren von Gewebeproben</td></tr><tr><td>ImageJ (Fidschi)&nbsp;</td><td>NIH</td><td>1.54f</td><td>Quantitatives Werkzeug</td></tr><tr><td>Immunhistochemie Stifte</td><td>Biosharp</td><td>BC004</td><td>Wasserblocker</td></tr><tr><td>Medizinische Pinzette</td><td>Shanghai Medizinische Geräte</td><td>N/A</td><td>Greifen, Manipulieren oder Bewegen von Gewebeproben</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Ts2</td><td>Bildgebungsgerät</td></tr><tr><td>Montagemedien</td><td>Jiangyuan</td><td>Geschmacksneutral</td><td>Fixieren und Konservieren Gewebeschnitte</td></tr><tr><td>Paraffinwachs</td><td>SCHLEDEN</td><td>80200-0014</td><td>Fixierung der Gewebestruktur</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td>Waschpuffer</td></tr><tr><td>Pentobarbital-Natrium</td><td>Peking Chemisches Reagenz Unternehmen</td><td>Q/H82-F158-2002</td><td>Anästhetikum</td></tr><tr><td>Rotationsmikrotom</td><td>Biobase</td><td>Bk-2258</td><td>Vorbereitung von Schnitten</td></tr><tr><td>Sterile Schere</td><td>Shanghai Medical Ausrüstung</td><td>N/A</td><td>Segmentierung von Gewebeproben Chirurgisches</td></tr><tr><td>Skalpell</td><td>Shanghai Medical Equipment</td><td>N/A</td><td>Schneiden von Gewebeproben</td></tr><tr><td>Triton&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td>Permeabilisierungslösung</td></tr><tr><td>Waschfreier Objektträger</td><td>PLATINUM PRO</td><td>PRO-04</td><td>Fixierproben zum Färben</td></tr><tr><td>von Xylol</td><td>SUM</td><td>XK13-011-00031</td><td>Lösung zum Entwachsen von Gewebe</td></tr></tbody></table>

quantifizierung der pulmonalen mikrovaskulären dichte bei mäusen über läppchen hinweg

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

Um zwischen den Läsionen in den Hauptbronchien und den kleinen Atemwegsästen zu unterscheiden, ist es wichtig, dass die kontinuierliche Struktur der Läsionen in diesen beiden Arten von Atemwegen beobachtet wird. Dies kann erreicht werden, indem die in Abbildung 1 beschriebenen Verfahren zum Schneiden und Einbetten befolgt werden. Aufgrund der zahlreichen Lungenlappen bei Mäusen, die in verschiedene Richtungen ausgerichtet sind und eine netzartige Struktur besitzen, sind sie im Vergleich zu a...

Quantifizierung der pulmonalen mikrovaskulären Dichte bei Mäusen über Läppchen hinweg

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

quantifying-pulmonary-microvascular-density-in-mice-across-lobules

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine spezifische und schnelle Protokoll gleichzeitig zu untersuchen Funktion der rechten Herzkammer, Lungenentzündung, und die Immunantwort als Lernwerkzeug beschrieben. Video und Figuren beschreiben Physiologie und Mikrodissektion Techniken in einer organisierten Team-Ansatz, anpassungsfähig an für kleine bis große Studien verwendet werden soll.

Rechtsventrikulären systolischen Druck Messungen in Kombination mit Harvest of Lung and Immune Gewebeproben in Mäuse

Die endotheliale Glykokalyx / endothelial Oberflächenschicht ist ideal studiert mit Intravitalmikroskopie. Intravitalmikroskopie ist technisch anspruchsvoll in einem sich bewegenden Organ wie der Lunge. Wir zeigen, wie die gleichzeitige Hellfeld und Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden, um Endotheloberfläche Schichtdicke in einem frei beweglichen...

In vivo Messung der Maus Pulmonary Endothelial Surface Layer

Hypoxische Lungenvasokonstriktion (HPV) ist ein wichtiges physiologisches Phänomen, durch das bei alveolarer Hypoxie-Lungenperfusion auf die Beatmung abgestimmt wird. Das wichtigste Gefäßsegment, das zu HPV beiträgt, ist die Intra-Acinar-Arterie. Hier beschreiben wir unser Protokoll zur Analyse von HPV von murinen Lungengefäßen mit Durchmessern von 20-100 m.

Videomorphometrische Analyse der hypoxischen Lungenvasokonstriktion der intrapulmonalen Arterien mit Murine Precision Cut Lung Slices

Die isolierten durchbluteten Lungenpräparat macht es möglich, Mikrogefäßnetzwerken auf der Lungenoberfläche zu visualisieren. Hier beschreiben wir einen Ansatz zur Durchlässigkeit der einzelnen Mikrogefäße in isolierten Lungen quantifizieren mit Echtzeit-Fluoreszenz-Bildgebung.

Quantifizierung der Mikrogefäßdurchlässigkeit im Einzel isolierten Blutdurchbluteten Lungen Rat Vorbereitung

Wir beschreiben ein Mittel, um schnell und einfach die Lungendiffusionskapazität bei Mäusen zu messen und zu zeigen, dass sie ausreichend empfindlich auf Phänotypänderungen bei mehreren häufigen Lungenpathologien reagiert.  Diese Metrik bringt somit eine direkte translationale Relevanz für die Mausmodelle, da die Diffusionskapazität auch beim Menschen leicht gemessen werden kann.

Phänotypisierung Maus Lungenfunktion In-vivo- Mit der Lungendiffusionskapazität

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur einfachen und zuverlässigen Messung der Lungendruck-Volumen-Kurve bei Mäusen und zeigen, dass es ausreichend empfindlich ist, um phänotypische parenchymale Veränderungen bei zwei häufigen Lungenpathologien, Lungenfibrose und Emphysem, zu erkennen. Diese Metrik bietet ein Mittel, um die strukturellen Veränderungen der Lunge mit der Entwicklung der Pathologie zu quantifizieren.

Die Messung der Druck-Volumen-Kurve in der Mäuselunge

Die interne Lungenoberfläche (ISA) ist ein kritisches Kriterium für die Beurteilung der Lungenmorphologie und der Physiologie bei Lungenkrankheiten und der verletzungsinduzierten alveolären Regeneration. Wir beschreiben hier eine standardisierte Methode, die die Messvorspannung für ISA sowohl in der Lungenpneumonektomie als auch in den Prothesenimplantationsmausmodellen minimieren kann.

Eine standardisierte Methode zur Messung der inneren Lungenoberfläche über Maus Pneumonektomie und Prothesenimplantation

Die intratracheale (IT) Verabreichung von Versuchsmitteln bei Mäusen führt oft zu einer asymmetrischen Abgabe in die distale Lunge.  In diesem Bericht beschreiben wir einen direkten intrabronchialen (IB) Ansatz, um jede Lunge bei lebenden Mäusen nicht operativ zu nulaten.  Dieser Ansatz kann verwendet werden, um Wirkstoffe selektiv in eine Lunge zu verabreichen, oder kann angepasst werden, um die symmetrische Wirkstoffabgabe in beide Lungen zu verbessern.

Direkte intrabronchiale Verabreichung zur Verbesserung der selektiven Agentenablagerung innerhalb der Mauslunge

Wir präsentieren eine recht einfache und empfindliche Methode zur genauen Quantifizierung der Gallengangsdichte in der Mausleber. Diese Methode kann bei der Bestimmung der Auswirkungen von genetischen und ökologischen Modifikatoren und der Wirksamkeit potenzieller Therapien in Mausmodellen von Gallenerkrankungen helfen.

Bestimmung der Gallengangsdichte in der Mausleber

Das Ziel dieser Technik ist die ex vivo Visualisierung von pulmonalen arteriellen Netzwerken von frühpostnatalen und erwachsenen Mäusen durch Lungeninflation und Injektion einer radio-opaque polymerbasierten Verbindung über die Lungenarterie. Mögliche Anwendungen für gegossenes Gewebe werden ebenfalls diskutiert.

Vaskuläres Gießen von Erwachsenen und frühpostnatalen Mauslungen für Micro-CT Imaging

Erfahren Sie die Quantifizierung der pulmonalen mikrovaskulären Dichte in Mäusen über Läppchen hinweg mit Isolectin B4-Färbung und ImageJ-Analyse. Diese Methode ermöglicht präzise Messungen altersbedingter Veränderungen.

Quantifizierung der pulmonalen mikrovaskulären Dichte bei Mäusen über Läppchen hinweg

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