Name: Isolierung und Kryokonservierung von hochlebensfähigen mononukleären Zellen des peripheren Blutes des Menschen aus Vollblut: Ein Leitfaden für Einsteiger (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Lernen Sie die Isolierung und Kryokonservierung hochlebensfähiger mononukleärer Zellen aus menschlichem Vollblut. Dieses Protokoll ermöglicht zuverlässige PBMC-Gewinnung für immunologische und zellbiologische Studien.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 &Mikro; L Spitzen</td><td>Gilson</td><td>F174501</td><td>Ungefähr 3 Spitzen pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>benötigt 15 ml Röhrchen</td><td>Biopioneeer</td><td>CNT-15</td><td>Zur Aufbewahrung von Lösungen 2/3 2 pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>benötigt 2 mL Kryoröhrchen</td><td>Globe Scientific</td><td>3012</td><td>Ungefähr 40 Kryoröhrchen pro Patient/Behandlungszustand für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>20 & micro; L Spitzen</td><td>Gilson</td><td>F174201</td><td>Zur Verwendung bei der Zellzählung; das benötigte Volumen hängt von der verwendeten Methode der Zellzählung ab. 1 Spitze wird pro 1 ml nicht gepoolter gefrorener PBMCs benötigt, die aufgetaut werden</td></tr><tr><td>sollen 50 ml konisches Röhrchen</td><td>CEM Corporation</td><td>50-187-7683</td><td>2 werden pro Patient / Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection benötigt 3 werden pro 1 ml nicht gepoolte gefrorene PBMCs benötigt, die aufgetaut werden</td></tr><tr><td>sollen CD14-Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>325621</td><td></td></tr><tr><td>CD16 Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>360723</td><td></td></tr><tr><td>CD19 Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>363007</td><td></td></tr><tr><td>CD3 Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>300405</td><td></td></tr><tr><td>CD56 Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>318303</td><td></td></tr><tr><td>CD66b Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>305103</td><td></td></tr><tr><td>Zellsieb</td><td>Biopioneeer</td><td>DGN258367</td><td>1 benötigter pro 1 ml nicht gepoolter gefrorener PBMCs, die aufgetaut werden</td></tr><tr><td>sollen CPT Mononukleäres Zellvorbereitungsröhrchen</td><td>BD Biosciences</td><td>362753</td><td>6 benötigte Röhrchen pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>Cryo Freezer Box</td><td>Southern Labware</td><td>SB2CC-81</td><td>Fasst 81 Röhrchen 1 pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>Cryotube Rack Fisherbrand</td><td></td><td>05-669-45</td><td>Fasst bis zu 50 Kryoröhrchen</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td>Benötigt ca. 2,5 ml pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>DNase/RNasefreies destilliertes Wasser</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td> Ca<td>. 2 mL pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection Benötigt ca. 9 mL pro 1 ml gefrorener PBMCs, die aufgetaut</td></tr> <tr><td>werden sollenEDTA-Röhrchen</td><td>BD Biosciences</td><td>366643</td><td>1 Röhrchen pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>benötigt Flavopiridol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3055-5MG</td><td></td></tr><tr><td>HLA-DR Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>307609</td><td></td></tr><tr><td>Humanserum Albumin</td><td>GeminiBio</td><td>800-120</td><td>Ungefähr 25 ml pro Patient oder Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection erforderlich</td></tr><tr><td>Human Trustain FcX</td><td>Biolegend</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W292912-1KG-K</td><td>Zur Verwendung in Mr. Frosty</td></tr><tr><td>Etikettendrucker</td><td>Phomemo</td><td>M110-WH</td><td></td></tr><tr><td>Lebendtot Fleck</td><td>Biolegend</td><td>423105</td><td></td></tr><tr><td>Mr. Frosty</td><td>Thermo Scientific</td><td>5100-0001</td><td>Fasst bis zu 18 Röhrchen. 2 Mr. Frostys pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>Multidispense Pipette</td><td>Brandtech</td><td>705110</td><td></td></tr><tr><td>Multidispense Pipettenspitzen</td><td>Brandtech</td><td>705744</td><td>Ungefähr 3 Spitzen pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>P1000 Pipette</td><td>Gilson</td><td>F144059M</td><td></td></tr><tr><td>P20 Pipette</td><td>Gilson</td><td>F144056M</td><td>Zur Verwendung bei der Zellzählung; das benötigte Volumen hängt von der verwendeten Methode der Zellzählung ab.</td></tr><tr><td>Druckeretiketten</td><td>Phomemo</td><td>PM-M110-3020</td><td>Benötigt werden ca. 45 Etiketten pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection Benötigt ca. 5 Etiketten pro 1 ml nicht gepoolter gefrorener PBMCs, die aufgetaut werden</td></tr><tr><td>müssen RNasefreies EDTA (0,5 m)</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td>Ungefähr 40 & Mikro; L benötigt pro 1 ml gefrorener PBMCs, die aufgetaut werden</td></tr><tr><td>sollen RNase-freies PBS (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>AM9625</td><td>Ungefähr 1 mL pro 1 ml gefrorener PBMCs, die aufgetaut werden sollen</td></tr><tr><td>RNasin</td><td>Promega</td><td>N2111</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td>Ungefähr 80 mL pro Patient oder Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>Transferpipetten</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-7M</td><td>Ungefähr 5 pro Patient/Behandlungsbedingung für PBMC/Plasma/Buffy Coat Collection</td></tr><tr><td>Tube Holder</td><td>Endicott-Seymour</td><td>14-781-15</td><td>Hält bis zu 80 CPT/EDTA-Röhrchen</td></tr></tbody></table>

isolierung und kryokonservierung von hochlebensfähigen mononukleären zellen des peripheren blutes des menschen aus vollblut: ein leitfaden für einsteiger

Isolation and Cryopreservation of Highly Viable Human Peripheral Blood Mononuclear Cells From Whole Blood: A Guide for Beginners

Nach der PBMC-Entnahme und Kryokonservierung wurde die Lebensfähigkeit von aufgetauten PBMCs, Monozyten und Lymphozyten aus 56 einzigartigen Proben mittels Durchflusszytometrie unter Verwendung von Reagenzien, die in Tabelle 4 aufgeführt sind, gemäß den Anweisungen des Herstellers (Abbildung 2A-F) bewertet. Es wurde eine mittlere ± SD-Viabilität von PBMCs, Monozyten und Lymphozyten von 94 ± 4,0 %, 98 ± 1,1 % bzw. 93 ± 5,6 % erreicht (Abb...

Isolierung und Kryokonservierung von hochlebensfähigen mononukleären Zellen des peripheren Blutes des Menschen aus Vollblut: Ein Leitfaden für Einsteiger

Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are commonly used in biomedical research on the immune system and its response to disease and pathogens. This ...

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Forschung

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Medizin

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von Monozyten aus menschlichem Vollblut durch immunomagnetische negative Trennung. Die isolierten Monozyten können für weitere nachgelagerte Analysen verwendet werden.

Isolierung von Monozyten aus Vollblut durch immunomagnetische Negativselektion

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes, PBMCs, die Monozyten und Lymphozyten enthalten, aus einem menschlichen Buffy-Coat durch Dichtegradientenzentrifugation. Die isolierten PBMCs können für weitere Analysen verwendet werden.

Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes aus menschlichen Buffy Coats

Wir skizzieren eine Methodik für die Verarbeitung von Vollblut, um eine Vielzahl von Komponenten für die weitere Analyse zu erhalten. Wir haben ein optimiertes Protokoll optimiert, das eine schnelle gleichzeitige Verarbeitung von Vollblutproben mit hohem Durchsatz in einer nicht-klinischen Umgebung ermöglicht.

Schnelle Fraktionierung und Isolierung von Vollblutkomponenten in Proben aus einer Gemeinschaft basierende Einstellung Erhalten

Pluripotenten Stammzellen (iPS) Quelle eines patientenspezifischen Geweben für die klinische Anwendung und Grundlagenforschung. Hier präsentieren wir ein detailliertes Protokoll für die menschliche periphere mononukleäre Blutzellen (PBMNC) von gefrorenen Buffy Coats in virale freien iPSCs mit nicht-integrierenden episomalen Plasmiden erhalten neu zu programmieren.

Erzeugung von induzierten pluripotenten Stammzellen aus Gefrorene Buffy Coats mit Non-Integration episomalen Plasmiden

Hier zeigen wir, wie Monozyten durch magnetische Kügelchentrennung aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes nach Dichtegradientenzentrifugation von humanem antikoaguliertem Blut isoliert werden. Nach einer 5-tägigen Inkubation werden die menschlichen Monozyten in unreife dendritische Zellen differenziert und sind bereit für experimentelle Verfahren in einer nicht-klinischen Umgebung.

Herstellung von menschlichen Monozyten abgeleiteten Dendritischen Zellen aus Vollblut

Dieses Protokoll beschreibt die klinisch implementierbare Vorbereitung von hochwertigen PBMC- und Plasma-Bioproben am klinischen Studienort, die für die translationale Biomarkeranalyse verwendet werden können.

Herstellung von peripheren mononukleären Blutzellpellets und Plasma aus einer einzigen Blutentnahme an klinischen Studienstellen für die Biomarkeranalyse

Wir präsentieren ein einfaches Protokoll für die Isolierung von peripheren mononukleären Blutzellen aus Vollblut, das von Patienten mit diagnostiziertem Sézary-Syndrom gewonnen wurde, gefolgt von der Auswahl von CD4+ T-Zellen, ihrer Stimulation mit Phorbol12-Myristat13-Acetat und A23187-Ionophor und der Vorbereitung von RNA für die transkriptomische Profilerstellung.

Isolierung menschlicher mononukleärer Blutzellen und CD4+ T-Zellen von Patienten mit Sézary-Syndrom für transkriptomisches Profiling

Isolierte mononukleäre Zellen des peripheren Blutes können für die Analyse von Immunfunktionen und -störungen, Stoffwechselerkrankungen oder mitochondrialen Funktionen verwendet werden. In dieser Arbeit beschreiben wir eine standardisierte Methode zur Herstellung von PBMCs aus Vollblut und der anschließenden Kryokonservierung. Die Kryokonservierung macht diese Zeit und diesen Ort unabhängig.

Kryokonservierung und bioenergetische Bewertung von mononukleären Zellen des menschlichen peripheren Blutes

Hier stellen wir ein optimiertes Protokoll für den Zytokinese-Block-Mikronukleus-Assay an kryokonservierten Vollblutproben vor. Diese optimierte Methode der Kryokonservierung von Vollblut für die Mikronukleusanalyse ist eine zuverlässige Technik für groß angelegte Proben und multizentrische Studien und kann auch für andere blutbezogene Assays verwendet werden.

Der Mikronukleus-Assay an kryokonserviertem Vollblut

Dieses Protokoll beschreibt eine automatisierungskompatible Methode mit hohem Durchsatz zur Isolierung von mononukleären Zellen des menschlichen peripheren Blutes für Biobanking und andere Zwecke.

Isolierung von mononukleären Zellen des humanen peripheren Blutes aus Buffy Coats durch immunmagnetische Hochdurchsatz-Bead-Trennung

Lernen Sie die Isolierung und Kryokonservierung hochlebensfähiger mononukleärer Zellen aus menschlichem Vollblut. Dieses Protokoll ermöglicht zuverlässige PBMC-Gewinnung für immunologische und zellbiologische Studien.

Isolierung und Kryokonservierung von hochlebensfähigen mononukleären Zellen des peripheren Blutes des Menschen aus Vollblut: Ein Leitfaden für Einsteiger (Video) | JoVE Journal

Isolierung und Kryokonservierung von hochlebensfähigen mononukleären Zellen des peripheren Blutes des Menschen aus Vollblut: Ein Leitfaden für Einsteiger

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