Name: Enterische Gliakultur bei Pferden und Anwendung zur Untersuchung eines neuronalen Entzündungsmechanismus bei Pferdekoliken (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Erfahren Sie die Isolation enterischer Gliazellen aus dem Pferdedarm zur Untersuchung entzündlicher Mechanismen bei Koliken. Diese Methode ermöglicht neue Erkenntnisse über postoperative Komplikationen und Darmbarrierefunktion.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Untersuchung enterischer Glia-Epithel-Wechselwirkungen bei kolikbedingten Entzündungen

<ol><li>Tinker, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+equine+colic+incidence+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Prospective study of equine colic incidence and mortality.</a> Equine Vet J. 29 (6), 448-453 (1997).</li>
<li>Morton, A. J., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+and+postoperative+factors+influencing+short-term+survival+of+horses+following+small+intestinal+resection%3A+92+cases+%281994-2001%29%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Surgical and postoperative factors influencing short-term survival of horses following small intestinal resection: 92 cases (1994-2001).</a> Equine Vet J. 34 (5), 450-454 (2002).</li>
<li>French, N. P., Smith, J., Edwards, G. B., Proudman, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+surgical+colic%3A+risk+factors+for+postoperative+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Equine surgical colic: risk factors for postoperative complications.</a> Equine Vet J. 34 (5), 444-449 (2002).</li>
<li>Lisowski, Z. M., Lefevre, L., Mair, T. S., Clark, E. L., Hudson, N. P. H., Hume, D. A., Pirie, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+quantitative+real-time+PCR+to+determine+the+local+inflammatory+response+in+the+intestinal+mucosa+and+muscularis+of+horses+undergoing+small+intestinal+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Use of quantitative real-time PCR to determine the local inflammatory response in the intestinal mucosa and muscularis of horses undergoing small intestinal resection.</a> Equine Vet J. 54 (1), 52-62 (2022).</li>
<li>Sheats, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+review+of+equine+SIRS%2C+sepsis%2C+and+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">A comparative review of equine SIRS, sepsis, and neutrophils.</a> Front Vet Sci. 6, 69(2019).</li>
<li>Mazzotta, E., Villalobos-Hernandez, E. C., Fiorda-Diaz, J., Harzman, A., Christofi, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+and+postoperative+gastrointestinal+tract+dysfunction%3A+pathogenic+mechanisms+and+novel+treatment+strategies+beyond+colorectal+enhanced+recovery+after+surgery+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharm%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus and postoperative gastrointestinal tract dysfunction: pathogenic mechanisms and novel treatment strategies beyond colorectal enhanced recovery after surgery protocols.</a> Front Pharm. 11, 583422(2020).</li>
<li>Stoffels, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+involves+interleukin-1+receptor+signaling+in+enteric+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus involves interleukin-1 receptor signaling in enteric glia.</a> Gastroenterology. 146 (1), 176-187 (2014).</li>
<li>Yu, Y. B., Li, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cells+and+their+role+in+the+intestinal+epithelial+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cells and their role in the intestinal epithelial barrier.</a> World J Gastroenterol. 20 (32), 11273-11280 (2014).</li>
<li>Savidge, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia+regulate+intestinal+barrier+function+and+inflammation+via+release+of+S-nitrosoglutathione%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Enteric glia regulate intestinal barrier function and inflammation via release of S-nitrosoglutathione.</a> Gastroenterology. 132 (4), 1344-1358 (2007).</li>
<li>Stewart, A. S., Freund, J. M., Gonzalez, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+three-dimensional+culture+of+equine+intestinal+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Advanced three-dimensional culture of equine intestinal epithelial stem cells.</a> Equine Vet J. 50 (2), 241-248 (2018).</li>
<li>Hellman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+equine+enteroids+and+enteroid-derived+2D+monolayers+that+are+responsive+to+microbial+mimics%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Generation of equine enteroids and enteroid-derived 2D monolayers that are responsive to microbial mimics.</a> Vet Res. 52 (1), 108(2021).</li>
<li>Al-Sadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+modulation+of+intestinal+epithelial+tight+junction+permeability+is+mediated+by+JNK+pathway+activation+of+claudin-2+gene%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 modulation of intestinal epithelial tight junction permeability is mediated by JNK pathway activation of claudin-2 gene.</a> PLoS One. 9 (3), e85345(2014).</li>
<li>Ochoa-Cortes, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cells%3A+A+new+frontier+in+neurogastroenterology+and+clinical+target+for+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cells: A new frontier in neurogastroenterology and clinical target for inflammatory bowel diseases.</a> Inflamm Bowel Dis. 22 (2), 433-449 (2016).</li>
<li>Ziegler, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cell+network+function+is+required+for+epithelial+barrier+restitution+following+intestinal+ischemic+injury+in+the+early+postnatal+period%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cell network function is required for epithelial barrier restitution following intestinal ischemic injury in the early postnatal period.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 326 (3), G228-G246 (2024).</li>
<li>Grubišić, V., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia%3A+the+most+alimentary+of+all+glia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enteric glia: the most alimentary of all glia.</a> J Physiol. 595 (2), 557-570 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES Puffer</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>10 mM HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>15630-106</td><td></td></tr><tr><td>2 mM GlutaMAX</td><td>Life Technologies</td><td>25050-061</td><td></td></tr><tr><td>4' 6-Diaminidino-2-phenylindol</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Life Technologies</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Alpha-Aktin-Antikörper für die glatte Muskulatur</td><td>Abcam</td><td>7817</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma</td><td>AA9529</td><td>4,4 g/ml, Stammaliquote, Endkonzentration 1,1 & Mikro; g/mL</td></tr><tr><td>Antimikotikum 1x</td><td>Gibco</td><td>15240-096</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Sigma</td><td>AA3311</td><td></td></tr><tr><td>BSA 50 mg/ml Stammlösung</td><td>Sigma</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>CaCL2</td><td>ACROS Organiics</td><td>206791000</td><td>Bestandteil von Equine Ringer ' s Brühe 1: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie mit entionisiertem Wasser auf 1 l. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Lager 2 zu vervollständigen " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Sigma</td><td>9891</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12 Medien</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Esel Anti-Kaninchen IgG Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>21207</td><td></td></tr><tr><td>EVOM EndOhm Doppelelektrode TEER-Messkammer</td><td>World Precision Instruments</td><td>EVM-EL-03-01</td><td></td></tr><tr><td>EVOM Handbuch für TEER-Messung</td><td>World Precision Instruments</td><td>EVM-MT-03-01</td><td></td></tr><tr><td>G5</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin Lösung</td><td>Sigma</td><td>G1272</td><td>Endkonzentration 20 & Mikro; g/mL</td></tr><tr><td>GFAP-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>4674</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgG Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>28175</td><td></td></tr><tr><td>IL-1&beta; ELISA</td><td>Thermo Fisher</td><td>ESIL1B</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>P330-500</td><td>Komponente des Pferderingers s Brühe 1: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie mit entionisiertem Wasser auf 1 l. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Lager 2 zu vervollständigen " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>L-Glutamin-Lösung</td><td>Corning</td><td>25-00-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Bioscience</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Thermo Fisher</td><td>M33-500</td><td>Bestandteil von Equine Ringer' s Brühe 1: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie mit entionisiertem Wasser auf 1 l. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Lager 2 zu vervollständigen " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP332-1</td><td>Komponente des Pferderingers s Brühe 2: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie auf 1 l mit entionisiertem Wasser. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Bestand 1 zur Vervollständigung " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>S271-10</td><td>Komponente des Pferderingers s Brühe 1: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie mit entionisiertem Wasser auf 1 l. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Lager 2 zu vervollständigen " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP329-500</td><td>Komponente des Pferderingers s Brühe 2: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie auf 1 l mit entionisiertem Wasser. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Bestand 1 zur Vervollständigung " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Thermo Fisher</td><td>S637-212</td><td>Komponente von Equine Ringer' s Brühe 2: Kombinieren Sie sie mit anderen Zutaten, geben Sie dann 100 ml dieser Brühe in einen Messzylinder und verdünnen Sie sie auf 1 l mit entionisiertem Wasser. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 mit 5 % CO2, Kombinieren Sie mit Equine Ringer" s Bestand 1 zur Vervollständigung " Klingelton" s Lösung".</td></tr><tr><td>Pen/Streptokokken-Lösung</td><td>Gemini</td><td>400-109</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin</td><td>Sigma</td><td>P2636</td><td>0,5 mg/ml in 1x Boratpuffer</td></tr><tr><td>Prismensoftware GraphPad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protease</td><td>Sigma</td><td>P4630</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonatlösung</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td>7,5%ige Stammlösung</td></tr></tbody></table>

enterische gliakultur bei pferden und anwendung zur untersuchung eines neuronalen entzündungsmechanismus bei pferdekoliken

Equine Enteric Glial Culture and Application to the Study of a Neural Inflammatory Mechanism in Equine Colic

Die Mikrodissektion des equinen Jejunums in die submuköse Schicht (Abbildung 1) mit weiterem enzymatischem und mechanischem Verdau könnte lebensfähige Zellkulturen der enterischen Gliazellen des Pferdes erzeugen. Die Zellen zeigten einen Pleomorphismus mit einer Dominanz spindelförmiger Zellen, die mit den enterischen Gliazellen anderer Spezies übereinstimmt (Abbildung 2A). Die Kulturen waren positiv für den selektiven Gliamarker, das saure Gliafibrillenprotein (GFAP), mit geringer Fibroblastenkontamination (alpha SMA, Abbildung 2B). In einigen Fällen wurde die Mikrodissektion der submukösen Schichten nicht hoch genug kontrolliert, und die Kulturen waren mit hohen Prozentsätzen von Fibroblasten kontaminiert, die durch Immunfluoreszenz des Fibroblastenmarkers Aktin der glatten Muskulatur beobachtet wurden (Abbildung 3).
Als nächstes wurde als Beispiel für die Nützlichkeit der enterischen Gliakultur von Pferden der Einfluss von IL-1β-exponierten enterischen Gliazellen auf die Funktion der intestinalen Epithelbarriere bewertet. Die basolaterale Exposition gegenüber Medien aus submukösen enterischen Gliakulturen von Pferden, die 24 h lang mit 10 ng und 25 ng IL-1β kontaminiert wurden, erhöhte die Permeabilität signifikant (p = 0,05 bzw. 0,04, Mittelwert der Kontrollmedien = 0,9, Mittelwert der glialen 10 ng IL-1β-Gruppe = 0,8, 95%-Konfidenzintervall = -0,2 bis 0,02, Mittelwert der glialen 25 ng IL-1β-Gruppe = 0,8, 95 %-Konfidenzintervall = -0,1995 bis 0,01060, n = 3-4) (Abbildung 4A). Die Exposition von equinen epithelialen Monolayern gegenüber basolateralem 10-25 ng equinem IL-6, einem inflammatorischen Zytokin, das nachweislich sowohl von enterischen Gliazellen produziert wird, die IL-1β ausgesetzt sind, als auch eine erhöhte Enterozytenpermeabilität in Nagetiermodelleninduziert 12, erhöhte jedoch nicht signifikant die Permeabilität der equinen Enterozyten-Monolayer (Abbildung 4B)
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig01.jpg"> Abbildung 1: Isolierung der enterischen Gliazellen aus dem equinen Jejunum durch Mikrodissektion und enzymatischen und mechanischen Verdau. (A) Das Jejunum wurde entlang der antimesenterialen Grenze durchtrennt und mit der Schleimhautseite nach oben fixiert. (B) Die Darmzotten wurden mikroskopisch sichtbar gemacht und durch sanftes Schaben entfernt, bis die dünne Lamina propria sichtbar war. (C) Die Schicht der Lamina propria wurde dann entfernt, bis die glatten Muskelfasern gerade noch durch die durchscheinende Submukosa sichtbar waren. (D) Die Submukosa wurde gezeltet und von der Muskelschicht zurückgeschält, wobei bei Bedarf Schnitte an den fibrösen Markierungen vorgenommen wurden. Die Bilder wurden mit einem 10-fach-Dissektionsmikroskop (B,C) aufgenommen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig02.jpg"> Abbildung 2: Bildgebung der submukösen enterischen Gliakulturen von Pferden. (A) Die sternförmige (Pfeile), fusiforme (offene Pfeilspitze) und ganglionäre (geschlossene Pfeilspitze) Morphologie der enterischen Gliazellen von Pferden wurde mittels Phasenkontrastmikroskopie untersucht. (B) Die Reinheit der Kulturen wurde durch Färbung auf GFAP und auf den Fibroblastenmarker Aktin der glatten Muskulatur bestimmt. Skalenbalken = 100 mm (A), 400 mm (B). Abkürzungen: GFAP = saures gliales fibrilläres Protein; DAPI = 4',6-diamidino-2-phenylindol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig03.jpg"> Abbildung 3: Bildgebung von erfolglosen submukösen enterischen Gliakulturen von Pferden. Die Reinheit der Kulturen wurde durch Färbung auf GFAP (rot) und auf den Fibroblastenmarker Aktin der glatten Muskulatur (grün) bewertet, was einen hohen Prozentsatz der Fibroblastenkontamination zeigt. Die gelbe Pfeilspitze steht für GFAP und die weiße Pfeilspitze für Aktin der glatten Muskulatur. Maßstabsstange = 400 mm. Abkürzung: GFAP = gliales fibrilläres saures Protein. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig04.jpg"> Abbildung 4: TEER der epithelialen Monoschicht des Pferdes nach Exposition von inflammatorischen Zytokinen und entzündlichen Gliaprodukten. (A) Basolaterale Exposition gegenüber Medien aus der submukösen enterischen Gliakultur des Pferdes, die 24 h lang mit 10 ng und 25 ng IL-1β exponiert wurde, erhöhte die Permeabilität signifikant (*p = 0,05 bzw. 0,04, n = 3-4). (B) Die akute Exposition der Enterozyten-Monoschicht bei Pferden gegenüber basolateralen 25 ng IL-1β und 10-25 ng IL-6 bei Pferden erhöhte die Permeabilität der epithelialen Monoschicht bei Pferden nicht signifikant (n = 2-4). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Tabelle 1: Reagenzien für Isolierung und Kultur. Die folgenden Reagenzien wurden verwendet, um Medien für die Isolierung von enterischen Gliazellen bei Pferden, enterische Gliakulturen und intestinale epitheliale Stammzellkulturen bei Pferden zu formulieren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244_Table%201_rev.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>

Enterische Gliakultur bei Pferden und Anwendung zur Untersuchung eines neuronalen Entzündungsmechanismus bei Pferdekoliken

Inflammatory postoperative conditions of equine colic (acute abdomen) contribute not only to increased client cost, patient discomfort, and ...

equine-enteric-glial-culture-application-to-study-neural-inflammatory

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Wir stellen ein neues Verfahren für die Pflege der menschlichen Darmschleimhaut in Kultur und Überwachung der Reaktion auf verschiedene Arten von Stimuli über mindestens 24 Stunden. Mit unserer Methode wird die Polarität des Gewebes aufrechterhalten wird, so dass für eine physiologische Stimulation über die apikale Route.

Eine neue Methode für die Kultur und polarisierte Stimulation der menschlichen Darmschleimhaut Explantate

Dieses Video zeigt eine Methode zur Isolierung enterischer Gliazellen aus der Submukosa und der Lamina propria des Mausdarms. Es werden die Schritte beschrieben, die bei der Extraktion von Submukosa- und Lamina propria-Gewebe, der Isolierung der enterischen Gliazellen und der Kultivierung der Zellen auf einer beschichteten Well-Platte zur Etablierung einer enterischen Gliazellkultur erforderlich sind.

Isolierung enterischer Gliazellen aus der Submukosa und der Lamina propria einer Maus

Wir demonstrieren ein Zellkulturprotokoll für die direkte Untersuchung von neuronalen und glialen Komponenten des enterischen Nervensystems. Eine Neuron/Glia-Mischkultur auf Deckgläsern wird aus dem myenterischen Plexus einer adulten Maus hergestellt und bietet die Möglichkeit, die Funktion einzelner Neuronen und Gliazellen elektrophysiologisch, immunhistochemisch usw. zu untersuchen.

Ein<em&gt; In-vitro</em&gt; Vorbereitung von isolierten Neuronen und Glia Enteric vom Plexus myentericus der erwachsenen Maus

Neuronale Plastizität ist eine zunehmend erkannt, aber unzureichend verstanden Funktion des Magen-Darm (GI-Trakt). Hier im Beispiel der menschlichen Bauchspeicheldrüse, stellen wir einen in vitro-Assay Neuroplastizität für die Untersuchung der neuronalen Plastizität im GI-Trakt sowohl morphologischen und funktionellen Niveau.

Simulation von Bauchspeicheldrüsenneuroplastizität:<em&gt; In-vitro-</em&gt; Zwei-Neuron-Plastizität Assay

Globoidzellen sind ein definierendes pathologisches Merkmal der Krabbe-Krankheit, einer Leukodystrophie, für die es derzeit keine wirksame Langzeittherapie gibt. Wir haben ein Zellkulturmodell entwickelt, um die angeborene Biologie und das pathogene Potenzial aktivierter Mikroglia und ihre Umwandlung in Globoidzellen zu untersuchen.

Ein In-vitro- Modell für die Untersuchung der zellulären Pathophysiologie in Globoidzell- Leukodystrophie

Das enterische Nervensystem (ENS) ist ein Netzwerk von Neuronen und Gliazellen in der Darmwand, das die Darmreflexe steuert. Dieses Protokoll beschreibt Verfahren zur Aufzeichnung der Aktivität von enterischen Neuronen und Gliazellen in Lebendpräparaten von ENS unter Verwendung von Ca2+-Bildgebung.

In Situ Ca 2+ Imaging des enterischen Nervensystems

Das enterische Nervensystem wird von Neuralleistenzellen gebildet, die sich vermehren, wandern und den Darm besiedeln. Neuralleistenzellen differenzieren sich in Neuronen mit Markern, die spezifisch für ihren Neurotransmitter-Phänotyp sind. Dieses Protokoll beschreibt eine Technik zum Präparieren, Fixieren und Immunfärben des embryonalen Magen-Darm-Trakts der Maus, um die Expression von Neurotransmittern des enterischen Nervensystems sichtbar zu machen.

Immunfärbung zu Murine enterische Nervensystem Entwicklung visualisieren

Dieser Artikel beschreibt eine Videobildgebungstechnik und hochauflösende raumzeitliche Kartierung, um Veränderungen in der neuronalen Regulation der Dickdarmmotilität bei erwachsenen Mäusen zu identifizieren. Subtile Auswirkungen auf die gastrointestinale Funktion (GI) können mit diesem Ansatz in isolierten Gewebepräparaten nachgewiesen werden, um unser Verständnis von GI-Erkrankungen zu verbessern.

Video Imaging und Raum-Zeit-Karten zur Analyse Gastrointestinale Motilität bei Mäusen

Anormale sensorische Funktion zugrunde liegt, viszerale Schmerzen und andere Symptome von funktionellen und entzündlichen Darmerkrankungen. Ein Protokoll für die elektrophysiologische Aufzeichnung der Kolon afferenten Nerven in eine ex Vivo Ratte Colorectum Vorbereitung wird hier vorgestellt.

In-vitro- Charakterisierung der elektrophysiologischen Eigenschaften des Kolon afferenten Fasern in Ratten

Hier beschreiben wir die Isolation der magensaftresistenten Gliazellen aus Darm-Submukosa mit sequentiellen EDTA Inkubationen chelatkomplex zweiwertigen kationen und dann Inkubation in nicht-enzymatische Zelle-Recovery-Lösung. Beschichtung der daraus resultierenden Zellsuspension auf Poly-D-Lysin und Laminin führt zu einer hoch angereicherten Kultur der submucosal Gliazellen für Funktionsanalyse.

Isolierung der magensaftresistenten Gliazellen aus der Submukosa und Lamina Propria der Erwachsenen Maus

Erfahren Sie die Isolation enterischer Gliazellen aus dem Pferdedarm zur Untersuchung entzündlicher Mechanismen bei Koliken. Diese Methode ermöglicht neue Erkenntnisse über postoperative Komplikationen und Darmbarrierefunktion.

Enterische Gliakultur bei Pferden und Anwendung zur Untersuchung eines neuronalen Entzündungsmechanismus bei Pferdekoliken

Weitere Videos entdecken