Name: Überwachung von Elektroporations-induzierten Veränderungen der Aktionspotentialbildung in gentechnisch veränderten Tet-On-Spiking-HEK-Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-06T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: Erfahren Sie, wie Elektroporation Aktionspotenziale in gentechnisch veränderten Tet-On-Spiking-HEK-Zellen beeinflusst. Optische Überwachung ermöglicht präzise Analyse der Membranpermeabilität und Zellerregbarkeit für klinische Anwendungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Bewertung der Elektroporationseffekte auf gentechnisch veränderte Spiking-HEK-Zellen

<ol><li>Kotnik, T., Rems, L., Tarek, M., Miklavčič, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+electroporation+and+electropermeabilization%3A+Mechanisms+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Membrane electroporation and electropermeabilization: Mechanisms and models.</a> Ann Rev Biophys. 48 (1), 63-91 (2019).</li>
<li>Yarmush, M. L., Golberg, A., Serša, G., Kotnik, T., Miklavčič, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation-based+technologies+for+medicine%3A+principles%2C+applications%2C+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Electroporation-based technologies for medicine: principles, applications, and challenges.</a> Ann Rev Biomed Eng. 16, 295-320 (2014).</li>
<li>Kotnik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation-based+applications+in+biotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Electroporation-based applications in biotechnology.</a> Trend Biotechnol. 33 (8), 480-488 (2015).</li>
<li>Mahnič-Kalamiza, S., Vorobiev, E., Miklavčič, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+in+food+processing+and+biorefinery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Memb+Biol%22%5BJournal%5D)">Electroporation in food processing and biorefinery.</a> J Memb Biol. 247 (12), 1279-1304 (2014).</li>
<li>Reddy, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+field+or+conventional+thermal+ablation+for+paroxysmal+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulsed field or conventional thermal ablation for paroxysmal atrial fibrillation.</a> New Engl J Med. 389 (18), 1660-1671 (2023).</li>
<li>Cvetkoska, A., Maček-Lebar, A., Trdina, P., Miklavčič, D., Reberšek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+contractions+and+pain+sensation+accompanying+high-frequency+electroporation+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Muscle contractions and pain sensation accompanying high-frequency electroporation pulses.</a> Sci Rep. 12 (1), 8019(2022).</li>
<li>Tung, L., Tovar, O., Neunlist, M., Jain, S. K., O'neill, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+strong+electrical+shock+on+cardiac+muscle+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+New+York+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of strong electrical shock on cardiac muscle tissue.</a> Ann New York Acad Sci. 720 (1), 160-175 (1994).</li>
<li>Batista Napotnik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+HEK+cells+as+a+valuable+tool+for+studying+electroporation+in+excitable+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered HEK cells as a valuable tool for studying electroporation in excitable cells.</a> Sci Rep. 14 (1), 720(2024).</li>
<li>McNamara, H. M., Zhang, H., Werley, C. A., Cohen, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optically+controlled+oscillators+in+an+engineered+bioelectric+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+X%22%5BJournal%5D)">Optically controlled oscillators in an engineered bioelectric tissue.</a> Phys Rev X. 6 (3), 031001(2016).</li>
<li>Tian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video-based+pooled+screening+yields+improved+far-red+genetically+encoded+voltage+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Video-based pooled screening yields improved far-red genetically encoded voltage indicators.</a> Nat Methods. 20 (7), 1082-1094 (2023).</li>
<li>Sweeney, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+cell+membrane+permeability+induced+by+monopolar+and+high-frequency+bipolar+bursts+of+electrical+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembranes%22%5BJournal%5D)">Quantification of cell membrane permeability induced by monopolar and high-frequency bipolar bursts of electrical pulses.</a> Biochim Biophys Acta Biomembranes. 1858 (11), 2689-2698 (2016).</li>
<li>Pakhomov, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+plasma+membrane+permeabilization+in+mammalian+cells+by+nanosecond+pulsed+electric+field+%28nsPEF%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectromagnetics%22%5BJournal%5D)">Long-lasting plasma membrane permeabilization in mammalian cells by nanosecond pulsed electric field (nsPEF).</a> Bioelectromagnetics. 28 (8), 655-663 (2007).</li>
<li>Lee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+ratiometric+optical+mapping+enables+high-resolution+cardiac+electrophysiology+in+pig+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo ratiometric optical mapping enables high-resolution cardiac electrophysiology in pig models.</a> Cardiovasc Res. 115 (11), 1659-1671 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 mL Röhrchen</td><td>Ratiolab&nbsp;</td><td>5615000</td><td></td></tr><tr><td>2-Well Nunc Lab-Tek II Chambered #1.5 Deutsches Deckglassystem</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>155379</tr><tr><td>ADP305 Differenzspannungssonde</td><td>Teledyne LeCroy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AP015 Stromzange</td><td>Teledyne LeCroy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>A1113903</tr><tr><td>CO2-Inkubator&nbsp;</td><td>PHCbi&nbsp;</td><td>MCO -230AICUV</td><td></td></tr><tr><td>Doxycyclin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>D9891</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifed Eagle" s Mittelhohes Glukosewachstumsmedium</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>ElektroFluor630 (Di-4-ANEQ(F)PTEA)</td><td>Potentiometrische Sonden</td><td>31795</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10131035</tr><tr><td>Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>Laminar-Flow-Haube</td><td>Iskra Pio&nbsp;</td><td>MC 15-2</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Mathworks</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicillin&ndash; Streptomycin</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>P07681</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysinhydrobromid&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>P9155-5MG&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Impulsgenerator&nbsp;</td><td>Sonderanfertigungen</td><td></td><td>siehe Referenz11</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>A1113803</tr><tr><td>T25 25 cm & sup2; Gewebekulturflasche</td><td>TPP&nbsp;</td><td>90026</td><td></td></tr><tr><td>HEK-Zellen mit Tet-on-Spiking</td> American <td>Type Culture Collection ATCC</td><td>CRL-3479</td><td></td></tr><tr><td>Thunder Imager Lebendzellensystem für die Fluoreszenzmikroskopie</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>WavePro 7300A Oszilloskop</td><td>Teledyne LeCroy</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Überwachung von elektroporations-induzierten veränderungen der aktionspotentialbildung in gentechnisch veränderten tet-on-spiking-hek-zellen

Monitoring Electroporation-Induced Changes in Action Potential Generation in Genetically Engineered Tet-On Spiking HEK cells

Veränderungen des TMV in erregbaren Zellen in vitro , die durch elektrische Pulse ausgelöst werden, können mit diesem Protokoll optisch überwacht werden, und die Fluoreszenzsignale können analysiert werden, um ihre relevanten Parameter zu extrahieren.
Der Versuchsaufbau ist in Abbildung 1A dargestellt. Ein typisches Signal von 100 μs elektrischem Impuls, das in Experimenten verwendet wird, ist in Abbildung 1B dargestellt. Zellen in den Kammern, die unter das Mikroskop gelegt werden, sehen typischerweise aus wie die Zellen in Abbildung 1C (Hellfeldbild) und Abbildung 1D (Fluoreszenzbild). Wir führen ein Experiment durch, bei dem alle 2 Minuten ein elektrischer Impuls mit steigender Spannung an dieselben Zellen angelegt wird. Beachten Sie, dass die Interpulszeit von 2 Minuten möglicherweise nicht lang genug ist, um eine vollständige Wiederversiegelung und Wiederherstellung der Zellmembranen zu ermöglichen, insbesondere bei der Verwendung von Impulsen mit der höchsten Amplitude, die mit einer ausgeprägten Elektroporation verbunden sind. Somit sind einige kumulative Effekte der Impulse zu erwarten. Um diese kumulativen Effekte zu vermeiden, kann die Interpulsverzögerung verlängert werden, jedoch auf Kosten der Reduzierung der Anzahl der getesteten Pulsamplituden und um zu vermeiden, dass die Zellen zu lange am Mikroskop bleiben.
Nachdem Sie Fluoreszenzbilder in Experimenten aufgenommen haben, analysieren Sie sie mit der benutzerdefinierten MATLAB-Anwendung. Bestimmen Sie zunächst die Pixelschwellenwerte (Abbildung 2A). Durch Einstellen des unteren Schwellenwerts erhalten wir ein klares Bild der Membranen um die Zellen herum (in violett), und durch Einstellen des oberen Schwellenwerts entfernen wir das Signal von Ablagerungen (grün). Die Anwendung bestimmt dann die durchschnittliche Fluoreszenzintensität aller Schwellenpixel für jeden abgegebenen aufeinanderfolgenden Impuls, um ein zeitabhängiges Signal für die relative Änderung der Fluoreszenz F/F0 zu erhalten. Dieses Signal wird für das Farbstoff-Photobleaching korrigiert, indem die Steigung der linearen Abnahme von F subtrahiert wird, die aus der Kontroll-Zeitrafferaufzeichnung bestimmt wurde, bei der kein Impuls angelegt wurde (Abbildung 2B). Nach der Korrektur des Signals werden die Parameter der Reaktionen in Form einer In-App-Tabelle und eines Diagramms des korrigierten Fluoreszenzsignals extrahiert (Abbildung 2C). In seltenen Fällen erkennt der Algorithmus einen offensichtlichen Peak nicht oder erkennt störende Rauschsignale als falsch positive Ergebnisse. In diesen Fällen hat der Benutzer die Möglichkeit, den entsprechenden Punkt im Fluoreszenzsignal manuell als Peak auszuwählen oder den detektierten falschen Peak zu entfernen (Abbildung 2D-Entfernung eines kleinen Peaks, der anomal detektiert wurde, bevor der elektrische Impuls angelegt wurde).
Mit der MATLAB-Anwendung können wir Bilder von TMV-Reaktionen auf elektrische Pulse sowohl in erregbaren S-HEK- (Abbildung 3A) als auch in nicht-erregbaren NS-HEK-Zellen (Abbildung 3B) erhalten. Die folgenden Ansprechparameter werden extrahiert (Tabelle 1): Anzahl der Peaks (NoPeaks), durchschnittliche Peak-to-Peak-Zeit (wenn mehr als ein Peak erkannt wird, MPPT), maximales Ansprechen (MR), Zeit bis zum ersten Peak (TtFP) und Zeit vom Peak bis zu 25 %, 50 %, 75 % bzw. 90 % Wiederfindung (T25, T50, T75, T90). Diese Parameter ermöglichen die Bewertung der Reaktionen auf verschiedene elektrische Impulse (z.B. Bestimmung der Anzahl der Peaks, die durch elektrische Impulse unterschiedlicher E ausgelöst werden, Abbildung 3C) und des Zusammenspiels zwischen Anregung und Elektroporation.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67257/67257fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Der Aufbau, die Wellenform und die S-HEK-Zellen. (A) Das Bild der Kammer auf dem Mikroskoptisch. (B) Beispiel für die Wellenform eines Impulses, die in der Studie verwendet wurde (Spannung (U) über die Zeit). (C, D) Das Bild der S-HEK-Zellen ((C): Hellfeld, (D): Fluoreszenz), Maßstabsbalken: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67257/67257fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67257/67257fig02v2.jpg"> 
Abbildung 2: Anwendung der Datenanalyse. (A) Das Bild der Anwendungsschnittstelle - Schwellenwerte. (B) Das Diagramm des rohen und korrigierten Signals der Fluoreszenzänderung. (C) Das Bild der Anwendungsschnittstelle - extrahierte Daten. (D) Manuelle Korrektur der Peak-Detektion (Entfernung eines kleinen Peaks, der vor dem Anlegen des elektrischen Impulses anomal detektiert wurde, markiert mit einem roten Pfeil). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67257/67257fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67257/67257fig03v2.jpg"> 
Abbildung 3: Repräsentative Ergebnisse. (A, B) Auslösen von Änderungen des TMV in (A) erregbarem S-HEK und (B) nicht erregbarem NS-HEK mit 100 μs elektrischen Pulsen unterschiedlicher Amplitude, Ergebnisse repräsentativer Experimente. Aus Gründen der Übersichtlichkeit werden nur die Reaktionen auf ausgewählte Impulse in der angewendeten Impulssequenz angezeigt. (C) Die Parameter der TMV-Antworten, die durch die 100-μs-Impulse unterschiedlicher Amplituden ausgelöst werden: Das Beispiel zeigt die Anzahl der Peaks. Die Ergebnisse werden als Durchschnitt ± SE ausgedrückt, Anzahl der Versuche: N = 13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67257/67257fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Index</td>
			<td>E-Stärke (V/cm)</td>
			<td>Keine Spitzen (-)</td>
			<td>MPPT (ms)</td>
			<td>HERR (-)</td>
			<td>TtFP (ms)</td>
			<td>T25 (ms)</td>
			<td>T50 (ms)</td>
			<td>Nr. T75 (ms)</td>
			<td>T90 (ms)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>126</td>
			<td>9</td>
			<td>224</td>
			<td>0.104</td>
			<td>360</td>
			<td>72</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>150</td>
			<td>6</td>
			<td>354</td>
			<td>0.097</td>
			<td>108</td>
			<td>72</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>176</td>
			<td>2</td>
			<td>144</td>
			<td>0.089</td>
			<td>36</td>
			<td>72</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>200</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.075</td>
			<td>0</td>
			<td>108</td>
			<td>144</td>
			<td>180</td>
			<td>252</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6</td>
			<td>250</td>
			<td>2</td>
			<td>396</td>
			<td>0.064</td>
			<td>0</td>
			<td>108</td>
			<td>216</td>
			<td>432</td>
			<td>2052</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7</td>
			<td>300</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.059</td>
			<td>0</td>
			<td>180</td>
			<td>1188</td>
			<td>2448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8</td>
			<td>350</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.053</td>
			<td>0</td>
			<td>1008</td>
			<td>2340</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9</td>
			<td>400</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>0.047</td>
			<td>0</td>
			<td>1512</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 1: Parameter der TMV-Antworten, die durch die 100-μs-Impulse unterschiedlicher Amplituden ausgelöst werden.

Überwachung von Elektroporations-induzierten Veränderungen der Aktionspotentialbildung in gentechnisch veränderten Tet-On-Spiking-HEK-Zellen

Excitable cells such as&#160;neuronal and muscle cells can be primary targets in rapidly emerging electroporation-based treatments. However, they can be ...

monitoring-electroporation-induced-changes-action-potential

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Einzel-Zell-Elektroporation (SCE) ist eine spezialisierte Technik, die Abgabe von DNA oder andere Makromoleküle in einzelne Zellen innerhalb intakten Gewebe, auch in vivo Präparate. Hier haben wir ausführlich das Verfahren für die SCE von einem fluoreszierenden Farbstoff-oder Plasmid-DNA in die Neuronen im intakten Gehirn des Xenopus laevis Kaulquappen.

Single Cell Elektroporation in vivo innerhalb der intakten sich entwickelnde Gehirn

Wir werden zeigen, wie man die Wirkung einer einzelnen Punktmutation auf die Funktion eines Ionenkanals zu studieren.

Mutagenese und funktionale Analyse von Ionenkanälen heterolog in Säugerzellen exprimierten

Optimierte Transfektion Strategie für Expression und elektrophysiologische Ableitung von rekombinantem Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T-Zellen

Quelle: Keener, D. G., et al. Einzelzell-Elektroporation über verschiedene organotypische Schnittkulturen von erregenden und klassenspezifischen inhibitorischen Neuronen des Hippocampus der Maus. J. Vis. Exp. (2020).Dieses Video zeigt den Prozess der Einzelzell-Elektroporation, um Plasmid-DNA in Neuronen in hippokampalen Schnittkulturen von Mäusen einzuführen. Das Verfahren umfasst eine präzise Pipettenpositionierung, Druckanpassungen und Elektroporationsimpulse, um die neuronale Membran...

Genexpression durch Einzelzell-Elektroporation in hippokampalen Schnittkulturen der Maus

In diesem Video zeigen embryonale Nierenzellkulturen, die lichtabhängige Ionenkanalproteine exprimieren, die mit einem fluoreszierenden Reporter fusioniert sind, die Wirkung von Licht auf die Ionenbewegung. Die Ganzzell-Patch-Klemme wird verwendet, um die Bewegung von Ionen zu überwachen.

Optogenetische Elektrophysiologie Erfassung von Zellen mit lichtabhängigen Ionenkanälen

Diese Präsentation demonstriert eine Methode, bei der die Elektroporation von adhärenten, kultivierten Zellen zur Untersuchung der interzellulären, junktionalen Kommunikation verwendet wird, während die Zellen auf einem Objektträger wachsen, der mit leitfähigem und transparentem Indium-Zinnoxid beschichtet ist.

Ein Funktionstest für Gap Junction-Prüfung; Elektroporation von adhärenten Zellen auf Indium-Zinn-Oxid

Elektroporation wurde verwendet, um gereinigte bakterielle Virulenzeffektorproteine direkt in lebende eukaryotische Zellen einzubringen. Die Proteinlokalisation wurde durch konfokale Immunfluoreszenzmikroskopie überwacht. Diese Methode ermöglicht Studien zum Transport, zur Funktion und zu Protein-Protein-Wechselwirkungen mit aktiven exogenen Proteinen, wodurch die Notwendigkeit einer heterologen Expression in eukaryotischen Zellen vermieden wird.

Elektroporation von Functional bakterielle Effektoren in Säugerzellen

Es wird ein Verfahren zur Abbildung von Änderungen des Membranpotentials unter Verwendung genetisch kodierter Spannungsindikatoren beschrieben.

Imaging Membrane Potential mit zwei Arten von genetisch kodierten Fluorescent Spannungssensoren

Dieses Protokoll beschreibt die Mikrofabrikationstechniken, die erforderlich sind, um ein mikrofluidisches Lab-on-a-Chip-Elektroporationsgerät zu bauen. Der Versuchsaufbau führt kontrollierte Transfektionen auf Einzelzellebene in einem kontinuierlichen Fluss durch und kann mit populationsbasierter Kontrolle auf höhere Durchsätze erweitert werden. Es wird eine Analyse bereitgestellt, die die Fähigkeit zeigt, den Grad der Permeabilisierung der Zellmembran in Echtzeit elektrisch zu überwachen.

Herstellung und Betrieb eines kontinuierlichen Durchfluss-Mikroelektroporationssystems mit Permeabilisierungsdetektion

Hier stellen wir ein reproduzierbares In-vitro-Elektroporationsprotokoll für die genetische Manipulation von primären Kleinhirn-Granulazellvorläufern (GCPs) vor, das kostengünstig, effizient und lebensfähig ist. Darüber hinaus demonstriert dieses Protokoll auch eine einfache Methode für die molekulare Untersuchung primärer Cilium-abhängiger Hedgehog-Signalwege in primären GCP-Zellen.

Effiziente und kostengünstige Elektroporationsmethode zur Untersuchung primärer Cilium-abhängiger Signalwege im Granulatzellvorläufer

Die Elektroporation mit porösen Substraten (PSEP) kombiniert eine konsistente Abgabe mit hohem Durchsatz und einer hohen Zellviabilität. Die Einführung von transepithelialen elektrischen Impedanzmessungen (TEEI) gibt Einblick in die Zwischenprozesse von PSEP und ermöglicht eine markierungsfreie Verabreichung. In diesem Artikel wird eine Methode zur gleichzeitigen Durchführung von PSEP-Verabreichungsexperimenten und TEEI-Messanalysen erläutert.

Poröse substratbasierte Elektroporation mit transepithelialer elektrischer Impedanzüberwachung

Erfahren Sie, wie Elektroporation Aktionspotenziale in gentechnisch veränderten Tet-On-Spiking-HEK-Zellen beeinflusst. Optische Überwachung ermöglicht präzise Analyse der Membranpermeabilität und Zellerregbarkeit für klinische Anwendungen.

Überwachung von Elektroporations-induzierten Veränderungen der Aktionspotentialbildung in gentechnisch veränderten Tet-On-Spiking-HEK-Zellen (Video) | JoVE Journal

Überwachung von Elektroporations-induzierten Veränderungen der Aktionspotentialbildung in gentechnisch veränderten Tet-On-Spiking-HEK-Zellen

Weitere Videos entdecken