Name: İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kimerik Antijen Reseptörü İfade Eden Doğal Öldürücü Hücrelerdeki Gelişmeler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Keşfedin iPSC kaynaklı CAR NK hücreleri üretme protokolünü, kanser immünoterapisinde ölçeklenebilirlik ve antitümör aktiviteyi artırmak için. CRISPR-Cas9 ve transposon tabanlı yöntemler kullanılarak geliştirilmiştir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>aAPC&nbsp;</td><td>Dekan A. Lee laboratuvarı&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>a-MEM kültür ortamı&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>Cat#12634</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-DYKDDDDK (BAYRAK Etiketi)</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Kedi # 637308</td><td></td></tr><tr><td>APC-anti-insan TRA-1-81 &nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>17-8883-42&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD16</td><td>BD Biyolojik Bilimler&nbsp;</td><td>Kedi # 302015</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD43 & nbsp;</td><td>BD Biyobilimler</td><td>Kedi # 560198&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD45 ve nbsp;</td><td>BD Biyobilimler</td><td>Kedi # 555485&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>APC-GPC3</td><td>BD Biyolojik Bilimler&nbsp;</td><td>Kedi # DB100B</td><td></td></tr><tr><td>APC-NKG2D & nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi# 558071&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CellEvent Caspase-3/7 Yeşil Tespit Reaktifi&nbsp;</td><td>Termo balıkçı&nbsp;</td><td>Cat#C10423</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Menekşe Hücre Proliferasyon Kiti&nbsp;</td><td>Termo balıkçı&nbsp;</td><td>Kedi # C34571</td><td>Hücre izleme floresan boya&nbsp;</td></tr><tr><td>CryoStor çözümü&nbsp;</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>https://www.stemcell.com/products/cryostor-cs10.html</td><td>Kriyoprezervasyon ortamı</td></tr><tr><td>CTS NK Xpander</td><td>Gibco</td><td>A5019001</td><td></td></tr><tr><td>CTS NK-Xpander Orta Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td>Cat#A5019001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz, GlutaMAX Takviyesi, piruvat</td><td>Gibco</td><td>10569010</td><td></td></tr><tr><td>EasySep İnsan NK Hücre Zenginleştirme Kiti&nbsp;</td><td>Kök Hücre Teknolojileri A.Ş.</td><td>Kedi # 19055</td><td></td></tr><tr><td>Etanolamin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9508</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>Cat# 10437010</td><td></td></tr><tr><td>FITC-CD94&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi # 555888</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Takviyesi</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>GolgiPlug&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#555029</td><td></td></tr><tr><td>GolgiStop&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi # 554724</td><td></td></tr><tr><td>Jambon'un F-12 Besin Karışımı, GlutaMAX Takviyesi</td><td>Gibco</td><td>31765035</td><td></td></tr><tr><td>At serumu&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>Kedi # 16050130</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu&nbsp;</td><td>AB Sigma-Aldrich</td><td>Cat#BP2525100</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Kök Hücre NucleofectorTM Kiti&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>Kedi # VPH-5012</td><td></td></tr><tr><td>İnsan: HePG2 hücreleri&nbsp;</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>Kedi # HB-8065</td><td></td></tr><tr><td>İnsan: HePG2-td-domates-luc hücreleri&nbsp;</td><td>Dan S. Kaufman lab</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>İnsan: iPS hücreleri&nbsp;</td><td>Dan S. Kaufman laboratuvarı&nbsp;</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>İnsan: SNU-449 hücreleri&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>Kedi # CRL-2234</td><td></td></tr><tr><td>İnsan: SNU-449-td-domates-luc hücreleri&nbsp;</td><td>Dan S. Kaufman lab</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>IncuCyte Caspase-3/7 Yeşil Apoptoz Testi&nbsp;</td><td>Essenbioscience&nbsp;</td><td>Kedi # 4440</td><td></td></tr><tr><td>L-Askorbik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>MP Biyomedikal&nbsp; İnsan Serumu, Tip AB</td><td>MP Biyomedikal</td><td>ICN2938249</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR plus</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp;</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>NovoExpress yazılımı&nbsp;</td><td>ACEA Biyolojik Bilimler&nbsp;</td><td></td><td></td>https://www.agilent.com/en/product/research-flow-cytometry/flow-cytometry-software/novocyte-novoexpress-software-1320805</tr><tr><td>PE / Cy7 anti-insan SSEA-4 Antikoru &nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>330420</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD16&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#560995&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD226</td><td>BD Biyobilimleri&nbsp;</td><td>Kedi # 559789</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD34 ve nbsp;</td><td>BD Biyobilimler</td><td>Kedi # 555822&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi# 555483&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD94&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#555888&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-cy7-CD56&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>Kedi# 318318&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-FAS Ligandı&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#564261&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp30</td><td>BD Biyobilimler</td><td>Kedi # 558407</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp44&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#558563&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp46</td><td>BD Biyolojik Bilimler&nbsp;</td><td>Kedi # 331908</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp46&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#557991&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Periferik kan buffy ceket&nbsp;</td><td>San Diego Kan Bankası (https://www. sandiegobloodbank.org/)&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>PE-TRAIL&nbsp;</td><td>BD Biyobilimler & nbsp;</td><td>Kedi#565499&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>pKT2-mCAG-IRES-GFP-ZEO&nbsp;</td><td>Branden Moriarity laboratuvarı&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>pMAX-GFP plazmid</td><td>Lonza</td><td>N/A</td><td>GFP pozitif kontrol&nbsp;</td></tr><tr><td>Prizma 9</td><td>Graphpad&nbsp;</td><td>Sürüm 9</td><td></td></tr><tr><td>pSpCas9&nbsp;</td><td>GenScript</td><td>PX165</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lizis Tamponu (10x)</td><td>Biolegend</td><td>Cat#420301</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan bFGF basic&nbsp;</td><td>Ar-Ge D Sistemleri&nbsp;</td><td>Kedi # 4114-TC</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan BMP-4 & nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 120-05</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan FLT-3 Ligandı&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 300-19</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan IL-15&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 200-15</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan IL-2&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan IL-3&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 200-03</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan IL-7 & nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 200-07</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan Nodal Proteini R</td><td>& D Sistemleri&nbsp;</td><td>Kedi # 3218-ND-025</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan SCF&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 300-07</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan TGF-&beta; 1</td><td>PeproTech</td><td>Cat#100-21</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan VEGF&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>Cat # 100-20</td><td></td></tr><tr><td>RPMI1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum selenit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>214485</td><td></td></tr><tr><td>STEMdiff APEL 2 Orta</td><td>Kök Hücre Teknolojileri, Inc.&nbsp;</td><td>5270</td><td>EB oluşum ortamı</td></tr><tr><td>STEMdiff APEL2 Orta&nbsp;</td><td>Kök Hücre Teknolojileri A.Ş.</td><td>Kedi # 05270</td><td></td></tr><tr><td>Süper piggyBac Transpozaz ekspresyon vektörü</td><td>SBI</td><td>Cat#PB210PA-1</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX AADvanced Ölü Hücre Leke Kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>S10274, S10349</td><td>Ölü hücre boyama solüsyon kiti</td></tr> <tr><td>ve beta;-merkaptoetanol</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kimerik antijen reseptörü İfade eden doğal Öldürücü hücrelerdeki gelişmeler

Advances in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Chimeric Antigen Receptor-Expressing Natural Killer Cells

Anti-GPC3-CAR iPSC'den türetilen NK hücrelerinin farklılaşması ve genişlemesinin şematik diyagramı Şematik diyagram, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) türetilen anti-GPC3-CAR mühendislik NK hücrelerinin in vitro farklılaşmasını ve GPC3 CAR yapısını taşıyan piggyBac vektörünün şematik bir temsilini göstermektedir. Başlangıçta, modifiye edilmemiş iPSC'ler, GPC3 CAR'ı (kimerik antijen reseptörü) kodlayan bir piggyBac vektörü ile transfekte edilir. Transfeksiyonu takiben, bu G...

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kimerik Antijen Reseptörü İfade Eden Doğal Öldürücü Hücrelerdeki Gelişmeler

Natural killer (NK) cells are innate immune cells that play a crucial role in the body's defense against tumors and viral infections. The generation of ...

advances-human-induced-pluripotent-stem-cell-derived-chimeric-antigen

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada yapay antijen sunan hücreler (AAPC) kullanarak toplu T hücre popülasyonlarının insan NKT hücreleri aktive ve genişletilmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. CD1d bazlı AAPC kullanılması, fonksiyonel NKT hücrelerinin yüksek sayılar için bir standart bir yöntem sağlar.

Yapay Antijen Hücre (AAPC) Aracılı Aktivasyon ve Doğal Öldürücü T hücreleri genişletilmesi Presenting

Bu videoda, tümör antijenine özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretimi için bir teknik gösterilmektedir. Transgenik RNA taşıyan retroviral vektörler, T hücresi sağkalımını ve proliferasyonunu teşvik etmek için interlökin-2 ile takviye edilmiş bir ortamda dalak hücreleri ile karıştırılır. Karışım daha sonra rekombinant insan fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir plakaya aktarılır ve virüsün hücre ile füzyonunu kolaylaştırmak için santrifüjlenir, bu da RNA'nın...

Tümöre özgü kimerik antijen reseptör T hücreleri oluşturmak için bir ex vivo teknik

Basit ve güvenilir bir yöntem, örneğin, farklı NK hücresi alt-gruplar içinde degranülasyonu, sitokin ve kemokin üretimi gibi NK hücresi fonksiyonlarının bir dizi analiz için tarif edilmektedir.

Akış NK Hücre Fonksiyonları İzleme Testi Sitometri tabanlı

Sıvı ve katı tümör hücrelerini hedefleyen kimerik antijen reseptör T hücrelerinin gücünü değerlendirmek için kantitatif gerçek zamanlı in vitro sitoz ispat sistemini tanımlıyoruz. Bu protokol diğer bağışıklık etki hücreleri değerlendirmek için uzatılabilir, yanı sıra kombinasyon tedavileri.

Katı ve Hematolojik Kanser Hücrelerini Hedefleyen İmhimik Antijen Reseptör T Hücreleri Için Gerçek Zamanlı Potens Tsay

Burada, antitümör T hücre etkinlik fenotipik ve fonksiyonel analiz için izin veren bir tüp bebek ortak kültür yöntemi yinelemeli olarak meydan tümör hedefli T hücreleri, açıklayın.

Vitro tümör hücre Rechallenge içinde akıllı Chimeric antijen reseptör T hücre antitümör işlevi değerlendirilmesi için

Burada, CAR-T hücrelerini değiştirmek için CRISPR Cas Teknolojisini kullanarak birincil insan T hücrelerinde gen düzenleme protokolü sunuyoruz.

İnsan CRISPR-Engineered CAR-T Hücrelerinin Üretimi

Burada, periferik kan doğal öldürücü (PBNK), karaciğer dokularından NK hücreleri ve periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) veya kordon kanından (CB) türetilen kimerik antijen reseptörü (CAR)-NK hücrelerini genişletmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu protokol, genişlemiş NK hücrelerinin optimize edilmiş saflığına ek olarak, 221-mIL-21 besleyici hücreler kullanılarak NK ve CAR-NK hücrelerinin genişlemesini göstermektedir.

Doğal Öldürücü (NK) ve Membran Bound-IL-21-Modifiye B Hücre Hattı Kullanarak CAR-NK Hücre Genleşme Yöntemi

Mevcut protokol, hafif sitotoksisiteye sahip CD3-/CD45+CD56+ hücrelerinin, hem 3D hem de 2D kültür koşulları altında insan genişlemiş potansiyel kök hücrelerinden (hEPSC'ler) nasıl ayırt edileceğini göstermektedir. Bu, karmaşık mikro çevrenin tahrip edilmeden rutin fenotipik doğrulamaya izin verir.

İnsan Genişletilmiş Potansiyel Kök Hücrelerden Doğal Öldürücü Hücrelerin Üretilmesi

Bu protokol, insan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücreleri (CAR Treg'ler) oluşturmak ve test etmek için kolaylaştırılmış bir iş akışı sağlar.

İnsan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücrelerinin üretimi

Viral olmayan Uyuyan Güzel transpozon sistemini kullanarak mantar patojenlerini hedef alan kimerik antijen reseptörü-doğal öldürücü (CAR-NK) hücreleri üretmek için bir transfeksiyon protokolünün ana hatlarını çiziyoruz. Antijene özgü aktivasyonu değerlendirmek için, tasarlanmış hücreleri Aspergillus fumigatus germ tüpleri ile birlikte kültürledik ve IFN-γ sekresyonunu ölçtük.

Viral Olmayan Uyuyan Güzel Transpozon Sistemini Kullanarak Mantar Enfeksiyonlarını Hedefleyen Mühendislik Kimerik Antijen Reseptörü-Doğal Öldürücü Hücreler

Bu protokol, canlı hücre görüntüleme ve akış sitometrisi kullanılarak insan doğal katil hücrelerinin doğal, kimerik antijen reseptörü aracılı ve antikor bağımlı sitotoksisitesinin tutarlı ölçümü için standartlaştırılmış bir in vitro iş akışı sağlar.

Canlı hücre görüntüleme ve akış sitometrisi kullanarak kimerik antijen reseptörleri ve terapötik antikorlarla potantize edilen NK-hücre sitotoksisitesinin nicelendirilmesi

Keşfedin iPSC kaynaklı CAR NK hücreleri üretme protokolünü, kanser immünoterapisinde ölçeklenebilirlik ve antitümör aktiviteyi artırmak için. CRISPR-Cas9 ve transposon tabanlı yöntemler kullanılarak geliştirilmiştir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kimerik Antijen Reseptörü İfade Eden Doğal Öldürücü Hücrelerdeki Gelişmeler

Daha fazla video keşfet