Name: Hochauflösende Respirometrie in einer kleinvolumigen Kammer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Erfahren Sie hochauflösende Respirometrie mit einer 0,5-mL-Kammer für mitochondriale Funktionsanalysen. Diese Methode ermöglicht präzise Sauerstoffverbrauchsmessungen bei reduziertem Probenbedarf.

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Für die Studie an menschlichen Blutplättchen gaben acht Freiwillige eine schriftliche Einverständniserklärung zur Teilnahme an der Studie ab, die von der schwedischen Ethikprüfungsbehörde (Nr. 2013/181) genehmigt wurde. Zwei humane Hautfibroblasten-Zelllinien von männlichen Neugeborenen wurden von ATCC gekauft und gemäß der ethischen Genehmigung des Gesundheitsministeriums der Tschechischen Republik verwendet (Projekt: AZV MZ CR NU22-07-00474). Die Verfahren mit Mäusen wurden in Übereinstimmung mit dem österreichischen Tierversuchsgesetz und in Übereinstimmung mit dem Europäischen Übereinkommen zum Schutz der für Versuche und andere wissenschaftliche Zwecke verwendeten Wirbeltiere (Tierversuchsgesetz 2012; Richtlinie 2010/63/EU; BMWFM-66.011/0128-WF/V/3b/2016). Das 3R-Prinzip wurde angewendet, um die Anzahl der Versuchstiere zu minimieren.
1. Kalibrierung des Volumens
<ol>
	<li>Montieren Sie die Kammern mit kleinem Volumen (sV) oder die Kammern mit klassischem Volumen (cV) auf den Oroboros (Abbildung 1A,B; Tabelle 1).</li>
	<li>Schalten Sie die Oroboros ein und verbinden Sie sich mit DatLab.</li>
	<li>Trocknen Sie die Kammern.</li>
	<li>Pipettieren Sie 0,54 mL H2O in das sV (0,50 mL effektives Versuchsvolumen plus 0,04 mL Kapillartotvolumen) oder 2,07 mL H2O in das cV (2,00 mL effektives Volumen plus 0,07 mL Kapillartotvolumen). HINWEIS: Um Flüssigkeitsverluste zwischen der Oberseite des Glaszylinders und dem Kammerhalter aus Polyoxymethylen (POM) zu vermeiden, führen Sie die Pipettenspitze tief genug ein, um die Wand der Glaskammer zu berühren.</li>
	<li>Schalten Sie die Rührwerke ein.</li>
	<li>Befeuchten Sie vor dem Schließen der Kammer die O-Ringe der Stopfen, während Sie ihre Kapillaren trocken halten. Lösen Sie die Volumenkalibrierringe und setzen Sie die Stopfen nach unten ein, bis Flüssigkeit die Stopfenkapillare füllt und ein kleiner Tropfen in den Behälter am oberen Ende der Kapillare gelangt (Tabelle 1).</li>
	<li>Die Volumenkalibrierringe werden festgezogen, um ihre Position so zu fixieren, dass das kalibrierte Volumen durch aufeinanderfolgendes Einsetzen der Stopfen erhalten wird.</li>
</ol>
2. Allgemeine Einstellung von Oroboros
<ol>
	<li>Starten Sie die DatLab-Software .</li>
	<li>Die Versuchstemperatur (37 °C) und die Rührdrehzahl sind auf 550 U/min (9,2 Hz bzw. Umdrehungen pro s) in der Kammer sV bzw. 750 U/min (12,5 Hz) in der Kammer cV einzustellen. Das Intervall für die Datenabtastung wird auf 2 s mit einer Glättung von über 80 s (40 Datenpunkte) bei instrumentellen O2 Hintergrundtests oder 40 s (20 Datenpunkte) für die Respirometrie festgelegt. HINWEIS: Die Magnetrührstäbchen (AlNiCo beschichtet mit Polyvinylidendifluorid [PVDF]; Tabelle 1) werden durch ein gepulstes rotierendes Magnetfeld mit 3,5 mT Feldstärke auf Höhe des Rührers in der Kammer bewegt.</li>
	<li>Die Luftkalibrierung28 in MiR05 oder in demselben Inkubationsmedium durchführen, das in nachfolgenden Experimenten verwendet wurde.</li>
	<li>Führen Sie gelegentlich Null-Sauerstoff-Kalibrierungen durch, aber nie unmittelbar vor Beginn der Experimente.<ol>
		<li>Bereiten Sie eine frische Na-Dithionit-Stammlösung vor,indem Sie O2-Zero-Pulver in 50 mM Phosphatpuffer (pH 8,0) auf eine Konzentration von 2,5 mM bzw. 10 mM für dies-V - bzw.c-V-Kammern auflösen.</li>
		<li>Titrieren Sie Na-Dithionit im Überschuss, um das Rohsignal R0 oder den Nullstrom [μA] bei O2 -Konzentration 0 μM14,28 zu erhalten.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Instrumenteller O2 -Hintergrundtest
<ol>
	<li>Kammer sV
	<ol>
		<li>Schließen Sie nach der Luftkalibrierung die Kammer. Das Sauerstoffsignal wird ca. 60 min lang überwacht, bis die O2 -Konzentration von der Luftsättigung auf etwa 150 μM abnimmt. Auf dem Diagramm sind vier Markierungen J°1 bis J°4 anzusetzen: "O2 Steigung negativ". HINWEIS: Führen Sie diesen instrumentellen O2 -Hintergrundtest jeden Tag durch, bevor Sie mit einem Experiment beginnen.</li>
		<li>OPTIONAL: Titrieren Sie mit einer Hamilton-Spritze den gemäß Schritt 2.4.1 hergestellten Na-Dithionit, um eineO2-Konzentration von 100 μM zu erreichen (Abbildung 1C). HINWEIS: In einem anderen Protokoll wird Na-Dithionit mit Hilfe der Titrationsinjektions-Mikropumpe (TIP2k; Ergänzende Abbildung 1 und ergänzende Abbildung 2) zum Vergleich mit einem Standardverfahren zur Bestimmung des instrumentellen Hintergrund-O2-Flusses28.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kammer cV
	<ol>
		<li>Nach der Luftkalibrierung schließen Sie die Kammer, warten auf die Stabilisierung der Neigung O2 und setzen die Markierung J°1 auf dem Diagramm 'O2 Neigung neg.'28. Mit einer Hamilton-Spritze wird der nach Schritt 2.4.1 hergestellte Na-Dithionit titriert. in Schritten von 0,7 μL, um dem Sauerstoffregime der Kammer sV zu entsprechen und dieO2-Konzentration auf 150 μM zu senken.</li>
		<li>Fügen Sie einen weiteren Na-Dithionit-Titrationsschritt (ca. 7 μL) hinzu, um dieO2-Konzentration auf 100 μM zu senken (Abbildung 1D).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Instrumentelle O2 Hintergrunddatenanalyse<ol>
		<li>Berechnen Sie die instrumentelleØ 2-Hintergrundsteigung in DatLab28. Wählen Sie Flux/Slope aus dem oberen Menü.</li>
		<li>Öffnen Sie das Fenster O2 Hintergrundkorrektur . Wählen Sie Active File als Quelle für den O2-Hintergrund und wählen Sie die J°-Markierungen aus, die für die Berechnung der linearen Regression verwendet werden sollen. Wenden Sie die Hintergrundkorrektur O2 an.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67442/67442fig1v2.jpg"> 
Abbildung 1: Kammern mit kleinem Volumen (sV) und klassischem Volumen (cV) und instrumenteller O2 -Hintergrundtest. a) Kammer sv. (B) Kammer cV. (C) Repräsentative Spuren von negativen Steigungs- und J°1-Markierungen, sV (0,5 mL; grün) und cV (2,0 mL; blau). (D) Entsprechende Sauerstoffkonzentration und R1-Markierungen. Drei manuelle Na-Dithionit-Titrationen (ca. 0,7 μL, 10 mM Stamm; cV) und abschließende 7,0 μl Titration von 2,5 mM bzw. 10 mM Stamm in der sV und cV Kammer. Durch Titrationen verursachte Spikes wurden eliminiert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67442/67442fig1v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
4. Zugabe der Probe zu den Oroboro-Kammern
HINWEIS: Die Probe kann auf zwei Arten in die Kammer gegeben werden: partieller Volumenersatz (Thrombozyten und Fibroblasten in der vorliegenden Studie) oder vollständiger Volumenersatz (isolierte Mitochondrien in der vorliegenden Studie).
<ol>
	<li>Teilweiser Austausch von Volumes<ol>
		<li>Entfernen Sie den vollständig eingesetzten Stopfen. Pipettieren und verwerfen Sie ein Volumen Vaus MiR05. Vout ist 60-70 μl für Blutplättchen und 80-150 μl für Fibroblasten, berechnet nach den Zellkonzentrationen in der Stammzellsuspension.</li>
		<li>Äquivalent zu Vout pipettieren Sie das gleiche Volumen VJ.i der Stammzellsuspension (mit bekannter Zellkonzentration) in die Kammer (Abbildung 2).</li>
		<li>Berechnen Sie die experimentelle Zellkonzentration im tatsächlichen Volumen V' (0,54 mL und 2,07 mL), das größer ist als das effektive experimentelle Volumen V (0,5 mL und 2,0 mL). HINWEIS: Die Konzentrationen der Stammzellensuspension und der experimentellen Zellkonzentration sollten so geplant werden, dass Volumina von VJ.i = Vout erhalten werden, die mit einem kleinen Titrationsfehler kompatibel sind. In den Experimenten mit Blutplättchen wurde ein Prototyp-Stopfen für die Kammer sV mit einem Kapillartotvolumen von 0,05 mL verwendet.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Vollständiger Austausch des Volumes<ol>
		<li>Das gesamte Medium wird aus der Kammer abgesaugt und durch mindestens 0,54 ml oder 2,07 ml isolierte Mitochondrien-Stammlösung bei der experimentellen Probenkonzentration in den sV bzw. cV Kammern ersetzt.</li>
		<li>Schließen Sie die Kammer und saugen Sie die überschüssige mitochondriale Stammlösung aus dem Stopfengefäß ab. HINWEIS: Ein vollständiger Volumenersatz schließt jegliche Variabilität der mitochondrialen Konzentration aus, die durch Titration in die geschlossene Kammer durch die Stopfenkapillare mit einer Hamilton-Spritze auftreten kann. Das letztgenannte Verfahren ist anwendbar auf Proben mit kleinem Durchmesser, die in konzentrierten Stammsuspensionen (z. B. isolierte Mitochondrien) hergestellt wurden; Es setzt fragile Zellen jedoch einer möglichen Schädigung der Plasmamembranen durch Scherkräfte aus, die auf die 51 mm lange Nadel der Hamilton-Spritze (0,41 mm Innendurchmesser) ausgeübt werden. Dies wird vermieden, indem der Stopfen entfernt und die Probe durch teilweisen oder vollständigen Volumenaustausch in die Kammer pipettiert wird. Es wurden drei Arten von mitochondrialen Präparaten untersucht. Die Probenvorbereitungen sind in der Zusatzdatei 1 1,26,29,30 beschrieben.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Lebende Zellen: menschliche Blutplättchen<ol>
		<li>Die Kryofläschchen mit den Blutplättchen in ein Wasserbad bei 37 °C geben und den Inhalt auftauen, bis nur noch wenig Eis übrig bleibt.</li>
		<li>Öffnen Sie die Kryoröhrchen und geben Sie langsam 1 mL vorgewärmtes Medium (DPBS + 10 mM EGTA, 37 °C) in Tropfen hinzu.</li>
		<li>Mischen Sie die Blutplättchen vorsichtig und geben Sie sie in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen mit einem Gesamtvolumen von 10 mL vorgewärmtem Medium (DPBS + 10 mM EGTA, 37 °C). Bei 1000 g für 10 min bei Raumtemperatur (RT) mit einem Ausschwingrotor zentrifugieren (Beschleunigung 6, Bremse 2).</li>
		<li>Resuspendieren Sie die Blutplättchen in 0,25 ml DPBS + 10 mM EGTA (RT) und fügen Sie sie durch teilweisen Volumenaustausch bis zu einer anfänglichen experimentellen Zellkonzentration von 157 · 106 bis 210 · 106 x·mL-1 in der 0,5-ml-Kammer und ab 164 · 106 bis 220 · 106 x·mL-1 in der 2,0-ml-Kammer (siehe31 für Details zur Elementareinheit x). ANMERKUNG: Ein Oroboros war mit den Kammern sV und cV in den Positionen A bzw. B ausgestattet, die parallel zu einem anderen Oroboros mit den Kammern sv und cV in den Positionen B bzw. A verwendet wurden.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Permeabilisierte Zellen: humane Fibroblasten<ol>
		<li>Geben Sie die Zellen durch teilweisen Volumenaustausch auf eine nominale Zellkonzentration von 0,75 · 106 x·mL-1 in beiden Kammertypen und berechnen Sie die tatsächliche Konzentration (Schritt 4.1.3). HINWEIS: Es wurden verschiedene Oroboros-Instrumente parallel verwendet, die jeweils mit den Kammern sv oder cV ausgestattet waren.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Isolierte Mitochondrien: Mausherz<ol>
		<li>Fügen Sie 15 μl mitochondriale Suspension zu 5985 μl mitochondrialem Atmungsmedium (MiR05) hinzu, was zu einer mitochondrialen Proteinkonzentration zwischen 0,013 und 0,026 mg∙mL-1 führt.</li>
		<li>Geben Sie die mitochondriale Suspension durch vollständigen Volumenaustausch in die Oroboros-Kammern. ANMERKUNG: Ein Oroboros war mit den Kammern sV und cV in den Positionen A bzw. B ausgestattet, die parallel zu einem anderen Oroboros mit den Kammern sV und cV in den Positionen B bzw. A verwendet wurden.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67442/67442fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Zugabe der Zellsuspension durch partiellen Volumenersatz. (A) Zugabe in der 0,5-ml-Kammer sV und (B) in der 2,0-ml-Kammer cV. (1) Geschlossene Kammer mit Volumina des Atmungsmediums V und gefüllter Stopfenkapillare Vstc zur Messung des instrumentellen Hintergrundflusses O2 J O2°. (2) Stopfen entfernt, Vstc in die Kammer abgelassen, so dass ein Gesamtvolumen V' = V+Vstc entsteht. (3) Teilweise Entfernung des Mediums Vout = -V J.i. In der Kammer verbleibt ein Volumen V''= V'+Vaus. (4) Pipettieren einer Teilprobe mit dem Volumen V J.i der respirometrischen Stammzellensuspension in die Kammer, was zu einem Gesamtvolumen V# = V+Vstc der verdünnten Zellsuspension führt. (5) Geschlossene Kammer mit gefüllter Stopfenkapillare (Totvolumen Vstc) zur Messung des volumenspezifischen O2 -Flusses JV,O 2 in einem Versuchsvolumen V. Diese Abbildung wurde gegenüber Abbildung 2A in Zellzahl und Normalisierung in HRR41 modifiziert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67442/67442fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
5. SUIT-Protokolle
<ol>
	<li>Die Stammlösungen der in der Ergänzenden Tabelle 1 aufgeführten Chemikalien werden in die Kammern mit Hamilton-Mikrospritzen titriert, wobei die Titrationsvolumina so angepasst werden, dass in den Kammern sV und cV die gleichen experimentellen Konzentrationen erreicht werden (siehe Abbildungslegenden in den Abbildungen 6, 8, 10).</li>
	<li>Wählen Sie das Protokoll SUIT-003_D01832,33 (für Thrombozyten in der vorliegenden Studie).</li>
	<li>Wählen Sie die Protokolle SUIT-001_D004 4,15,34,35 und SUIT-002_D007 4,15,35,36 (für Fibroblasten in der vorliegenden Studie).</li>
	<li>Wählen Sie das Protokoll SUIT-002_D005 4,15,35,37 (für isolierte Mitochondrien in der vorliegenden Studie).</li>
</ol>
6. SUIT-Datenanalyse
<ol>
	<li>Setzen Sie in DatLab Markierungen , um Schnitte ausgewählter Diagramme zu definieren.</li>
	<li>Wählen Sie Flux/Slope im oberen Menü. Öffnen Sie das Fenster Flux/Slope . Wenden Sie die Titrationsvolumenkorrektur für die Verdünnung suspendierter Proben durch jede Titration im SUIT-Protokoll an.</li>
	<li>Wählen Sie im oberen Menü Markierungen aus. Öffnen Sie die Markierungsstatistik , um den Median der markierten Datenpunkte anzuzeigen, die durch Subtraktion des Restsauerstoffverbrauchs (ROX) basiskorrigiert wurden.</li>
	<li>Berechnen Sie den Schnittpunkt und die Steigung zwischen den gepaarten Ergebnissen, die in den Kammern sV und cV erhalten wurden, durch invertierte Regressionsanalyse25,28 unter Verwendung einer Tabellenkalkulation.</li>
	<li>Vergleichen Sie die Atemfrequenzen im rox-Zustand (minimaleO2-Flüsse) in den Kammern sV und cV durch einen gepaarten Student's t-Test mit der Software jamovi 2.3.1338. HINWEIS: Da die beiden Kammern in einem Oroboro-Gerät funktional unabhängig sind (mit Ausnahme der Temperatur- und DatLab-Aufzeichnungsintervalle), können Messungen in jeder Kammer separat betrachtet werden, ähnlich wie bei der Verwendung verschiedener Instrumente. Die Endergebnisse können als Mediane oder Durchschnittswerte mehrerer Kammern mit Informationen über ihre Variabilität angegeben werden.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Erforschung von Kammervolumina für die mitochondriale hochauflösende Respirometrie

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Anaconda3</td><td>Anaconda Software Distribution</td><td>https://www.anaconda.com/</td> <td>Software</td></tr><tr><td>ADP</td><td>Merck, Deutschland</td><td>117105</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotika-Antimykotika 100x</td><td>Biosera, Frankreich</td><td>XC-A4110</td><td>VORSICHT H317 Kann allergische Hautreaktionen hervorrufen</td></tr><tr><td>Antimycin A</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>A8674</td><td>VORSICHT H300&nbsp; Lebensgefahr beim Verschlucken, H400 kurzfristige (akute) Gefahr für das Wasser</td></tr><tr><td>Ascorbat</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>&nbsp; A 2383</td><td></td></tr><tr><td>BSA fettsäurefrei</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>A 6003</td><td>Rinderserumalbumin</td></tr><tr><td>CaCO3</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>C 4830</td> CCCP Sigma-Aldrich, USA C2759 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Carbonylcyanid m-Chlorphenylhydrazon VORSICHT H301 + H311 + H331 Giftig bei Verschlucken, Hautkontakt oder Einatmen</td></tr><tr><td>Countess Automatisierter Zellzähler</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>AMQAX100</td><td></td></tr><tr><td>Cytochrom c</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>C7752</td><td></td></tr><tr><td>DatLab&nbsp;</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>Version 7.4</td><td>Software zur Datenerfassung und -analyse</td></tr><tr><td>DatLab&nbsp;</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>Version 8.1</td><td>Software zur Datenerfassung und -analyse</td></tr><tr><td>DC Protein Assay</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>5000112</td><td>Protein Assay Kit; VORSICHT H314 Verursacht schwere Verbrennungen der Haut und schwere Augenschäden</td></tr><tr><td>Digitonin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>D5628</td><td>VORSICHT H301 Giftig bei Verschlucken</td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>D 0632</td><td>VORSICHT H318 Verursacht schwere Augenschäden</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Pan Biotech, Deutschland</td><td>P04-05551</td><td>Dulbecco' s modifizierter Eagle" s Medium</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>D2650</td><td>Dimethylsulfoxid</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Lonza Bioscience, Schweiz</td><td>LONBE17-512F</td><td>Calciumfreies Dulbecco' s phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>E 4378</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>A5256701</td><td>fötales Rinderserum</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>&nbsp; G7528</td><td></td></tr><tr><td>Glutamat</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>G1626</td><td></td></tr><tr><td>Glycerophosphat</td><td>Santa Cruz Biotechnologie</td><td>sc-215789</td><td></td></tr><tr><td>Heraeus Multifuge 3s Large</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>HM3S</td><td>Zentrifuge</td></tr><tr><td>Hettich Rotina 380R&nbsp;</td><td>Andreas Hettich GmbH & Co. KG, Deutschland</td><td>1701</td><td>Zentrifuge</td></tr><tr><td>Imidazol</td><td>Honeywell Fluka, Österreich</td><td>56750</td><td>VORSICHT H302 Gesundheitsschädlich bei Verschlucken, H314 Verursacht schwere Hautverbrennungen und Augenschäden, H360D Kann das Kind im Mutterleib schädigen</td></tr><tr><td>jamovi&nbsp;</td><td>Die jamovi Projekt</td><td>Version 2.3.13</td><td>Software</td></tr><tr><td>K+-MES</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>M 8250</td><td></td></tr><tr><td>Leucosep Rohr&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Österreich</td><td>Z642843-300EA</td><td>Zentrifugenröhrchen mit Polyethylen-Barriere</td></tr><tr><td>Malat</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>M1000</td><td>VORSICHT H319 Verursacht schwere Augenreizungen.</td></tr><tr><td>Mannitol</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>M 4125</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>Scharlau, Spanien</td><td>MA 0036</td><td></td></tr><tr><td>MiR05-Kit</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>60101-01</td><td>mitochondriales Atmungsmedium</td></tr><tr><td>Mischer&nbsp;</td><td>Swelab Instruments, Schweden</td><td>440S</td><td>Schaukeltisch</td></tr><tr><td>Mr. Frosty Gefrierbehälter</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>5100-0001</td><td>Gefrierbehälter</td></tr><tr><td>Oroboros Oroboros</td><td>Instruments, Österreich</td><td></td><td>, der NextGen-O2k und der O2k werden gemeinsam mit dem Begriff " angesprochen. Oroboros'</td></tr><tr><td>Oroboros Chamber cV</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>23100-01</td><td>klassische Volumenkammer</td></tr><tr><td>Oroboros Chamber sV</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>33100-01</td><td>kleine Volumenkammer</td></tr><tr><td>Oroboros TIP2k-Modul</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>11100-03</td><td>Titrations-Injektion microPump</td></tr><tr><td>O2-Zero Pulver</td><td>Oroboros Instruments, Österreich</td><td>26600-02</td><td>&nbsp; Na-Dithionit VORSICHT H251 Selbsterhitzung: kann Feuer fangen, H302 Gesundheitsschädlich bei Verschlucken, H319 Verursacht schwere Augenreizungen</td></tr><tr><td>Octanoylcarnitin</td><td>Biotrend - APExBIO Technology, Germany</td><td>B6371</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>O4876</td><td></td></tr><tr><td>Phosphocreatin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>P 7936</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvat</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>P2256</td><td>VORSICHT H317 Kann allergische Hautreaktionen hervorrufen</td></tr><tr><td>Rotenon</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>R8875</td><td>VORSICHT H300 Lebensgefahr bei Verschlucken Fibroblasten-Zelllinien</td></tr><tr><td>in der Haut</td><td>&nbsp; ATCC, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumazid</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>S2002</td><td>VORSICHT H300 + H310 + H330 Lebensgefahr bei Verschlucken, Hautkontakt oder Einatmen</td></tr><tr><td>Subtilisin A</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>P 5380</td><td>VORSICHT H318 - Verursacht schwere Augenschäden, H334 - Kann bei Einatmen Allergie- oder Asthmasymptome oder Atembeschwerden verursachen</td></tr><tr><td>Succinat</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>S2378</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>S 7903</td><td></td></tr><tr><td>Swelab Alfa Blutkörperchenzähler&nbsp;</td><td>Boule Diagnostics AB, Schweden</td><td>1420041</td><td></td></tr><tr><td>Taurin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>T 0625</td><td></td></tr><tr><td>Tecan Infinite TM F200</td><td>Tecan, Schweiz</td><td></td><td>Spektralphotometer</td></tr><tr><td>TMPD</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>T3134</td><td>N,N,N',N'-Tetramethyl-p-phenylendiamin dihydrochlorid VORSICHT H315 Verursacht Hautreizungen, H319 Verursacht schwere Augenreizungen</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>T4799</td><td>ACHTUNG H334 Kann bei Einatmen Allergien, Asthmasymptome oder Atembeschwerden verursachen</td></tr><tr><td>Vacuette</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Österreich</td><td>15452520</td><td></td></tr></tbody></table>

hochauflösende respirometrie in einer kleinvolumigen kammer

High-Resolution Respirometry in a Small-Volume Chamber

Hochauflösende Respirometrie in einer kleinvolumigen Kammer

Investigating respiratory fluxes is decisive for understanding the complex interplay between metabolic processes. Studies of cells and tissues with ...

high-resolution-respirometry-in-a-small-volume-chamber

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hochauflösende Respirometrie verwendet mitochondrialen Sauerstoffverbrauch zu bestimmen. Dies ist eine einfache Technik mitochondrialen Atmungskette Komplexe '(I-IV) Atmungsraten, maximale mitochondrialen Elektronentransportsystemkapazität und mitochondrialen Außenmembran Integrität zu bestimmen.

Hochauflösende Respirationstest zur Beurteilung mitochondrialen Funktion in permeabilisierten und Intakte Zellen

Hier wird eine Quadrizeps-Muskelprobe von einem anästhesierten Schwein entnommen und Mitochondrien werden durch differentielle Zentrifugation isoliert. Anschließend werden die Atemfrequenzen der mitochondrialen Atmungskettenkomplexe I, II und IV mittels hochauflösender Respirometrie bestimmt.

Isolation of Intact Mitochondria von Skeletal Muscle durch differentielle Zentrifugation für hochauflösende Messungen Respirationstest

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Wirkung der Glukose-vermittelte Änderungen an mitochondrialen Atmung im Beisein von Naturstoffe auf intakt 832/13 Beta-Zellen mit Hilfe hochauflösender Respirometrie messen.

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Dieses Protokoll beschreibt Calorespirometry, die direkte und gleichzeitige Messung der Wärmeableitung und Atmung, sorgt für eine nicht-invasive Ansatz um den Energiestoffwechsel zu beurteilen. Diese Technik wird verwendet, um den Beitrag von aeroben und anaeroben Wege zur energetischen Nutzung durch die Überwachung des gesamten zellulären Energiefluss zu bewerten.

Calorespirometry: Eine starke, nicht-invasive Ansatz zur zellulären Energiestoffwechsel untersuchen

Dieses Protokoll stellt den Aufbau und die Verwendung eines vereinfachten Ganzkörperplethysmographie-Geräts vor, um das Fortschreiten bakterieller Atemwegserkrankungen nicht-invasiv zu überwachen.

Vereinfachte Ganzkörperplethysmographie zur Charakterisierung der Lungenfunktion bei respiratorischer Melioidose

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Dieses Protokoll beschreibt den Aufbau und Betrieb eines Mikro-Respirometrie-Systems, mit dem die physiologischen Merkmale des Korallenholobionten untersucht werden können.

Physiologische Charakterisierung des Korallenholobionten mit einem neuen Mikro-Respirometrie-Tool

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Hochauflösende Respirometrie zur Beurteilung der Mitochondrienfunktion in menschlichen Spermien

Hier beschreiben wir eine umfassende Methode zur Messung der mitochondrialen oxidativen Phosphorylierung in frischen permeabilisierten Skelettmuskelfasern aus menschlichen oder Mausmuskeln. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Quantifizierung der mitochondrialen Atmung und die Beurteilung der Brennstoffpräferenz und der metabolischen Flexibilität unter Beibehaltung bestehender mitochondrialer Netzwerke und der Membranintegrität.

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In diesem Video-Beitrag beschreiben wir eine neue Methode erlaubt den Bau von Geruchsrezeptoren Gradienten mit stabilen und kontrollierbaren Geometrien. Wir haben kurz zeigen, wie diese Gradienten zu Bildschirm kann für olfaktorische Mängel (vollständiger oder teilweiser Anosmie) verwendet werden und auf subtilere Funktionen der Chemotaxis Verhalten zu studieren.

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Erfahren Sie hochauflösende Respirometrie mit einer 0,5-mL-Kammer für mitochondriale Funktionsanalysen. Diese Methode ermöglicht präzise Sauerstoffverbrauchsmessungen bei reduziertem Probenbedarf.

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