Digitale Planimetrie zur Beurteilung der Wundverschlusskinetik in einem Mausmodell

Unsere Forschung konzentriert sich auf eine Standardisierung der makroskopischen Wundmessung unter Verwendung einer kontrollierten Bildgebung, die durch die Sicherstellung von Konsistenz und Lichtposition und -abstand oder Protokollen eingerichtet wird, um die Variabilität zu minimieren und die Aktualität der wundnahen Messung in präklinischen Modellen zu verbessern. Wir beheben die fehlende Standardisierung bei mikroskopischen Wundmessungen. Den derzeitigen Methoden fehlen oft Kontrollbedingungen, was zu inkonsistenten Daten führt.

Unser Protokoll bietet unser anwendbares Setup, das eine gleichmäßige Beleuchtung, Positionierung und Entfernung gewährleistet, die Wahrscheinlichkeit reduziert und die Reproduzierbarkeit verbessert. Unser Protokoll eliminiert häufige Quellen für Messverzerrungen, indem es die Bildgebungsbedingungen standardisiert. Im Gegensatz zu manuellen Methoden gewährleistet es die Konsistenz zwischen den Experimenten, ermöglicht genaue Vergleiche und reduziert die Variabilität bei der Flächen- und Umfangsmessung von Wunden.

Unser Ergebnis ermöglicht präzisere und reproduzierbare Wundmessdaten, indem es eine standardisierte Methodik bereitstellt. Dies ist die Grundlage für die Evaluation therapeutischer Interventionen und der präklinischen Wundforschung. Befestigen Sie zunächst ein geschlitztes Aluminiumprofil im inneren Bereich der Seitenkante des Daches.

Platzieren Sie zwei rechteckige Aluminiumplatten mit Polyethylen-Zentren in die Nuten der Dachprofile, um das Durchgleiten beider Profile zu ermöglichen. Montieren Sie eine 20 Zentimeter große RGB-LED-Leuchtstoffröhre in einem 45-Grad-Winkel mit doppelseitigem Klebeband an der Unterkante des ersten Panels. Montieren Sie dann eine rechteckige Schaumstoffplatte mit einem zentralen kreisförmigen Ausschnitt von 7,82 Zentimetern auf jeder Dachplatte, um die Installation des Kameraobjektivs zu ermöglichen.

Für den Bodenaufbau schneiden Sie zunächst Quadrate mit Seitenlängen von 2,54 Zentimetern aus jeder Ecke der 40 mal 40 Zentimeter großen weißen Schaumstoffplatte zu. Dieser Schritt stellt sicher, dass die Schaumstoffplatte richtig in die Bodenflächenprofile passt. Legen Sie nach dem Beschneiden der Ecken die Schaumstoffplatte auf die Bodenflächenprofile.

Befestigen Sie Klettverschlüsse an den Aluminiumprofilen A und B, um die internen Elemente der Fotokabine einfach zu manipulieren. Ein fester Kleber befestigt auf einer Seite einen Zentimeter vom Rand entfernt zwei Quadrate aus Schaumpappe und positioniert diese an der Vorder- und Rückwand. Kleben Sie mit Silikon zwei Paneele an die Seiten C und D, um die linke und rechte Seitenwand zu bilden.

Platzieren Sie eine 3D-gedruckte Maske 11,5 Zentimeter vom Rand eines vorgeschnittenen, 40 x 28 Zentimeter großen Rechtecks aus weißer Schaumstoffplatte, um die Mäuse unter Inhalationsnarkose zu halten. Kleben Sie es dann in die Mitte der Referenzbasis. Befestigen Sie den 3D-gedruckten Linealblock einen Zentimeter von der linken Seite der Mausbasis entfernt, um das Messreferenzelement für die digitale Bildverarbeitung aufzunehmen.

Befestigen Sie dann ein 15 Zentimeter langes Graduiertlineal aus Edelstahl an dem Linealblock und installieren Sie die komplette Referenzbasis in der Kabine für die Bildskalierung. Nachdem Sie die Maus betäubt haben, verwenden Sie einen sterilen Fünf-Millimeter-Biopsiestanzer, um mit kreisenden Bewegungen Druck auszuüben, um einen epidermalen Schnitt auf Höhe des Schulterblatts zu erstellen. Entfernen Sie die Klappe mit einer gezackten Pinzette und schneiden Sie sie mit einer Irisspitze.

Legen Sie mit einer Juwelierzange einen kreisförmigen Hautfilm mit einem Durchmesser von einem Zentimeter über die Wunde, um eine Kontamination und Kontraktion zu verhindern. Um Bilder der Wunden aufzunehmen, positionieren Sie die Referenzbasis in der Mitte des Bodens der Fotokabine. Positionieren Sie dann die betäubte Maus in Bauchlage auf der Mausplattform.

Installieren Sie die Vorderwand der Fotokabine und nehmen Sie makroskopische Bilder auf. Um das erstellte Backup-Image in imagej zu öffnen, navigieren Sie zu Datei, Öffnen und Suchen. Klicken Sie dann auf Öffnen.

Maximieren Sie nun das Bild, wählen Sie das gerade Linienwerkzeug aus und zoomen Sie dann mit der Plus-Taste auf das Lineal neben der Maus. Zeichnen Sie eine 10 Millimeter große gerade Linie auf das Linealbild. Gehen Sie zu Analysieren und Maßstab festlegen.

Geben Sie 10 als bekannte Entfernung ein. Legen Sie die Längeneinheit auf Millimeter fest und klicken Sie auf OK. Wählen Sie anschließend mit dem Rechteckwerkzeug den Bereich um die Wunde mit einer Breite und Höhe von 150 aus und notieren Sie die X- und Y-Werte.

Klicken Sie dann mit der rechten Maustaste auf das Rechteck und wählen Sie Duplizieren. Benennen Sie das duplizierte Bild und drücken Sie die Eingabetaste. Drücken Sie im neuen Bild zweimal das Pluszeichen, um es zu vergrößern.

Um das Bild in Farbkanäle zu unterteilen, navigieren Sie zu Bild, Text und RGB-Stapel. Klicken Sie im roten Kanalbild mit der rechten Maustaste auf das Bild, wählen Sie Duplizieren und drücken Sie im Duplikatfenster auf OK. Klicken Sie dann auf das Bild des roten Kanals, wählen Sie das Bild aus, passen Sie es an und klicken Sie auf den Schwellenwert, um es zu segmentieren.

Wählen Sie Standard aus, und klicken Sie auf Anwenden, um den Schwellenwert anzuwenden. Korrigieren Sie den Bereich of Interest oder ROI, um eine vollständige Wundabdeckung zu gewährleisten und Segmentierungsverzerrungen zu vermeiden. Um den Umfang des Interessenbereichs zu definieren, wählen Sie Bearbeiten aus, gehen Sie dann zur Auswahl und wählen Sie Auswahl erstellen.

Wählen Sie danach Bearbeiten, dann Auswahl und klicken Sie auf Zum Manager hinzufügen, um ihn zum ROI-Manager hinzuzufügen. Um die Segmentierung zu validieren, öffnen Sie das ROI-Manager-Fenster und wählen Sie den ROI aus, den Sie überprüfen möchten. Klicken Sie auf Mehr, Übersetzen, geben Sie die aufgezeichneten X- und Y-Werte ein und drücken Sie OK.

Maximieren Sie das Originalbild und wählen Sie dann den ROI im ROI-Manager aus. Verwenden Sie die Pfeiltasten, um den ROI anzupassen, bis er mit der Wunde ausgerichtet ist. Sobald die Segmentierung bestätigt ist, erhalten Sie die Wundmessungen, indem Sie Analysieren und Messen auswählen.

Der Prozentsatz des Wundverschlusses stieg am zweiten Tag aufgrund von Entzündungsprozessen zunächst auf 138,04 %, bevor er abnahm und in Richtung Reparatur- und Konsolidierungsphasen fortschreitet, wobei nach dem siebten Tag ein konsistenter Verschluss beobachtet wurde. Die Retraktionsdistanz der Wundkante nahm zunächst während der Entzündungsphase zu, begann aber nach dem dritten Tag abzunehmen, wie die Gilman-Gleichung zeigt, die auf eine allmähliche Wundkontraktion hinweist.