Name: Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Lernen Sie die Kryosektion und Immunfärbung der Mausnetzhaut für die Augenheilkunde. Diese Methode ermöglicht präzise Analysen von Photorezeptoren und unterstützt die Erforschung retinaler Degenerationen.

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<ol><li>Tokuyasu, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunochemistry+on+ultrathin+frozen+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Immunochemistry on ultrathin frozen sections.</a> Histochem J. 12 (4), 381-403 (1980).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A., Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+tissue+antigens+and+antibodies+get+along%3A+Revisiting+the+technical+aspects+of+immunohistochemistry--the+red%2C+brown%2C+and+blue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">When tissue antigens and antibodies get along: Revisiting the technical aspects of immunohistochemistry--the red, brown, and blue technique.</a> Vet Pathol. 51 (1), 42-87 (2014).</li>
<li>Usukura, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryosectioning+technique+for+the+observation+of+intracellular+structures+and+immunocytochemistry+of+tissues+in+atomic+force+microscopy+%28AFM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A cryosectioning technique for the observation of intracellular structures and immunocytochemistry of tissues in atomic force microscopy (AFM).</a> Sci Rep. 7 (1), 6462(2017).</li>
<li>Park, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+organization+of+rhodopsin+in+rod+photoreceptor+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Supramolecular organization of rhodopsin in rod photoreceptor cell membranes.</a> Pflugers Arch. 473 (9), 1361-1376 (2021).</li>
<li>Boonstra, H., Oosterhuis, J. W., Oosterhuis, A. M., Fleuren, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+tissue+shrinkage+by+formaldehyde+fixation%2C+paraffin+wax+embedding%2C+section+cutting+and+mounting%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch+A+Pathol+Anat+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Cervical tissue shrinkage by formaldehyde fixation, paraffin wax embedding, section cutting and mounting.</a> Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 402 (2), 195-201 (1983).</li>
<li>Stradleigh, T. W., Ishida, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+strategies+for+retinal+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Fixation strategies for retinal immunohistochemistry.</a> Prog Retin Eye Res. 48, 181-202 (2015).</li>
<li>Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+basics+of+routine+formaldehyde+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Pathol%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.</a> J Oral Maxillofac Pathol. 16 (3), 400-405 (2012).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+preparation+of+mouse+retinal+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Histochem%22%5BJournal%5D)">An improved method for preparation of mouse retinal cryosections.</a> Eur J Histochem. 64 (3), 3154(2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+protocol+for+the+preparation+of+mouse+retinal+cryosections+for+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">A quick protocol for the preparation of mouse retinal cryosections for immunohistochemistry.</a> Open Biol. 11 (7), 210076(2021).</li>
<li>Szel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+topographic+separation+of+two+spectral+classes+of+cones+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Unique topographic separation of two spectral classes of cones in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 325 (3), 327-342 (1992).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>-80 Grad C Gefrierschrank</td><td>Haier</td><td>DW-86L626</td><td></td></tr><tr><td>Adhäsionsmikroskop Objektträger</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Alexa488-Ziege Anti-Kaninchen</td><td>Proteintech</td><td>SA00006-2</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Maus</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>Kryosektion Mikrotom</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kryostat</td><td>LEICA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4083S</td><td></td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>ZEISS</td><td>3943030830</td><td></td></tr><tr><td>Eselsserum</td><td>Solarbio</td><td>S9100</td><td></td></tr><tr><td>Einbettungsformen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1841</td><td></td></tr><tr><td>Feine Präparierschere</td><td>RWD</td><td>S13001-10</td><td></td></tr><tr><td>Feine Pinzette</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluormount wässriges Eindeckmedium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4680</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Shanghai Yuejin</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1049330500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1048771000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FIS-06666</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Lasermikroskop</td><td>ZEISS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopabdeckung Glas</td><td>CITOTEST</td><td>80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1065860500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1091371003</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. Compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Pap Pen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z672548</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-PDE6B</td><td>Proteintech</td><td>22063-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Shaker</td><td>SCILOGEX</td><td>8042210200</td><td></td></tr><tr><td>Federschere</td><td>RWD</td><td>S11036-08</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>BioFroxx</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>Sekundenkleber</td><td>Deli</td><td>7147S</td><td></td></tr><tr><td>Tennissaite (1,24 mm)</td><td>Gosen</td><td>TS761</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Macklin</td><td>T831042</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>IT9100</td><td></td></tr></tbody></table>

kryosektion und immunfärbung der netzhaut der maus

Cryosectioning and Immunostaining of Mouse Retina

Gemäß dem oben beschriebenen Protokoll wurden die Augen von 1 Monat alten Wildtyp-Mäusen mit C57Bl/6J in 4 % PFA fixiert. Die fixierten Proben wurden dann in eine OCT eingebettet und kryosektioniert. Die Schnitte wurden mit einem Anti-PDE6B-Antikörper immungefärbt und mit DAPI gegengefärbt, um die Zellkerne zu markieren. PDE6B ist ein Phototransduktionsprotein, das spezifisch in Stäbchen-Photorezeptorzellen exprimiertwird 4. Im Vergleich zu herkömmlichen Protokollen verbessert dieses Protokoll sow...

Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus

Tissue sectioning and immunohistochemistry are essential techniques in histological and pathological studies of retinal diseases using animal models. ...

cryosectioning-and-immunostaining-of-mouse-retina

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Neugeborenen Mausretina bietet eine gut charakterisiert physiologisches Modell der Angiogenese, die Untersuchungen der Rolle der verschiedenen Gene oder Medikamente, die Angiogenese modulieren in eine...

Ganze Berge Immunfluoreszenzfärbung der Neonatal Maus Retina zu untersuchen Angiogenese<em&gt; In vivo</em

Die Postembedding-Immunogold-Methode ist eine der effektivsten Methoden, um hochauflösende Analysen der subzellulären Lokalisation spezifischer Moleküle zu liefern. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur quantitativen Analyse von Glutamatrezeptoren an retinalen Bandsynapsen.

Hochauflösende Quantitative Immungold-Analyse von Membranrezeptoren auf der Netzhaut Ribbon Synapsen

Wir führen drei verschiedene Gewebe Vorbereitung Techniken für immunhistochemische Visualisierung der Ratte retinalen mikrovaskuläre perizyten, d. h. Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone Isolierung des vaskulären-Netzes.

Netzhaut Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone isoliert Gefäßsystem Vorbereitungen für immunhistochemische Visualisierung von Mikrovaskulären Perizyten

Dieser Bericht beschreibt umfassende Methoden zur Vorbereitung von gefrorenen Mausnetzteilen für die Immunhistochemie (IHC).  Die beschriebenen Methoden umfassen die Zerlegung des okularen posterioren Bechers, die Paraformaldehydfixierung, die Einbettung in die Medien der optimalen Schnitttemperatur (OCT) und die Gewebeorientierung, die Schnitt- und Immunfärbung.

Vorbereitung von Maus-Retinal-Cryo-Sektionen für die Immunhistochemie

Hier stellen wir ein Protokoll zur Anpassung der CLARITY-Methode des Hirngewebes für ganzklächige Netzhäute vor, um die Qualität der immunhistochemischen Standardfärbung und hochauflösenden Bildgebung von Netzhautneuronen und ihren subzellulären Strukturen zu verbessern.

Immunfärbung von Whole-Mount-Netzhäuten mit der CLARITY Tissue Clearing Methode

Dieses Protokoll stellt zwei Techniken vor, um die subzellulären Kompartimente von murinen Stäbchen-Photorezeptoren für die Proteinanalyse zu isolieren. Die erste Methode verwendet lebendes Netzhaut- und Zellulosefilterpapier, um die äußeren Segmente der Stäbchen zu trennen, während die zweite Methode lyophilisierte Netzhaut und Klebeband verwendet, um die inneren und äußeren Segmentschichten der Stäbchen abzuziehen.

Zwei Peeling-Methoden zur Isolierung von Photorezeptor-Zellkompartimenten in der Netzhaut der Maus zur Proteinanalyse

Hier wird ein detailliertes immunhistochemisches Protokoll vorgestellt, um funktionell relevante Caspasen in komplexen Geweben zu identifizieren, zu validieren und gezielt anzugehen.

Quantifizierung von immungefärbtem Caspase-9 im Netzhautgewebe

Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Isolierung der Netzhaut der gesamten Maus und zur Durchführung einer Immunfärbung zur Markierung aller retinalen Ganglienzellen (RGCs). Dem Prozess folgt die Bildgebung und automatische Zählung von RGCs mit KI-basierter Software, die eine einfache, schnelle und genaue Methode zur Quantifizierung von RGCs in der gesamten Netzhaut der Maus bietet.

Immunfärbung und automatische Zählung von retinalen Ganglienzellen der Maus

Die Perizyten in retinalen Gefäßen wurden durch Immunfluoreszenzfärbung mit Thrombozyten-abgeleiteten Wachstumsfaktor-Rezeptoren β nach retroorbitaler Injektion von fluoreszierendem Tomatenlektin untersucht. Die markierte Netzhaut wurde weiter mit der Gewebereinigungsmethode behandelt und als Ganzes montiert, um die dreidimensionalen Ansichten der Perizyten, die das retinale Gefäßsystem umgeben, unter einem konfokalen Mikroskop zu visualisieren.

3D-Visualisierung von retinalen vaskulären Perizyten bei Mäusen durch Immunfärbung 

Die Netzhaut weist eine komplexe räumliche Organisation über ihre laminare Struktur auf. Moderne räumliche Transkriptomik- und Sequenzierungstechniken erfordern Gewebeschnitte mit einer Dicke von &lt; 20 μm, was ihre Anwendbarkeit in der Netzhautforschung einschränkt. Diese frisch gefrorene Kryosektionsmethode erzeugt dünne Gesichtsabschnitte der Netzhaut von Mäusen unter Beibehaltung planarer räumlicher Beziehungen und ermöglicht so eine umfassende molekulare Kartierung über Laminae hinweg.

En face Kryosektion der Netzhaut der Maus für die hochdimensionale räumliche molekulare Analyse

Lernen Sie die Kryosektion und Immunfärbung der Mausnetzhaut für die Augenheilkunde. Diese Methode ermöglicht präzise Analysen von Photorezeptoren und unterstützt die Erforschung retinaler Degenerationen.

Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus

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