Name: Verwendung von In-vivo-Assemblierung für den hocheffizienten Plasmidbau (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Erfahren Sie die In-vivo-Assemblierung für hocheffizientes DNA-Klonieren in E. coli. Diese kostengünstige Methode erreicht bis zu 99 % Klonierungseffizienz ohne spezialisierte Enzyme.

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<ol><li>Bertero, A., Brown, S., Vallier, L. Methods of cloning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBertero%2C+A+%22Basic+Science+Methods+for+Clinical+Researchers%22">Basic Science Methods for Clinical Researchers</a>. Chapter 2, Academic Press. 19-39 (2017).</li>
<li>Garcia-Nafria, J., Watson, J. F., Greger, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IVA+cloning%3A+A+single-tube+universal+cloning+system+exploiting+bacterial+in+vivo+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">IVA cloning: A single-tube universal cloning system exploiting bacterial in vivo assembly.</a> Sci Rep. 6, 27459(2016).</li>
<li>Bubeck, P., Winkler, M., Bautsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+cloning+by+homologous+recombination+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid cloning by homologous recombination in vivo.</a> Nucleic Acids Res. 21 (15), 3601-3602 (1993).</li>
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<li>Stukenberg, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Marburg+Collection%3A+A+Golden+Gate+DNA+assembly+framework+for+synthetic+biology+applications+in+Vibrio+natriegens%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">The Marburg Collection: A Golden Gate DNA assembly framework for synthetic biology applications in Vibrio natriegens.</a> ACS Synth Biol. 10 (8), 1904-1919 (2021).</li>
<li>Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+cloning%3A+a+laboratory+manual%22">Molecular cloning: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1989).</li>
<li>Engler, C., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Golden+Gate+cloning%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Golden Gate cloning.</a> Methods Mol Biol. 1116, 119-131 (2014).</li>
<li>Ma, H., Kunes, S., Schatz, P. J., Botstein, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmid+construction+by+homologous+recombination+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Plasmid construction by homologous recombination in yeast.</a> Gene. 58 (2-3), 201-216 (1987).</li>
<li>Cao, P., Wang, L., Zhou, G., Wang, Y., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+assembly+of+multiple+DNA+fragments+through+direct+transformation+of+PCR+products+into+E.+coli+and+Lactobacillus%5BTitle%5D)+AND+%22Plasmid%22%5BJournal%5D)">Rapid assembly of multiple DNA fragments through direct transformation of PCR products into E. coli and Lactobacillus.</a> Plasmid. 76, 40-46 (2014).</li>
<li>Conley, E. C., Saunders, V. A., Saunders, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+and+rearrangement+of+plasmid+DNA+during+transformation+of+Escherichia+coli+with+linear+plasmid+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Deletion and rearrangement of plasmid DNA during transformation of Escherichia coli with linear plasmid molecules.</a> Nucleic Acids Res. 14 (22), 8905-8917 (1986).</li>
<li>Conley, E. C., Saunders, V. A., Jackson, V., Saunders, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+intramolecular+recyclization+and+deletion+formation+following+transformation+of+Escherichia+coli+with+linearized+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanism of intramolecular recyclization and deletion formation following transformation of Escherichia coli with linearized plasmid DNA.</a> Nucleic Acids Res. 14 (22), 8919-8932 (1986).</li>
<li>Sung, W. L., Zahab, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-specific+recombination+directed+by+single-stranded+crossover+linkers%3A+specific+deletion+of+the+amino-terminal+region+of+the+beta-galactosidase+gene+in+pUC+plasmids%5BTitle%5D)+AND+%22DNA%22%5BJournal%5D)">Site-specific recombination directed by single-stranded crossover linkers: specific deletion of the amino-terminal region of the beta-galactosidase gene in pUC plasmids.</a> DNA. 6 (4), 373-379 (1987).</li>
<li>Mandecki, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligonucleotide-directed+double-strand+break+repair+in+plasmids+of+Escherichia+coli%3A+a+method+for+site-specific+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Oligonucleotide-directed double-strand break repair in plasmids of Escherichia coli: a method for site-specific mutagenesis.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 83 (19), 7177-7181 (1986).</li>
<li>Jones, D. H., Howard, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+method+for+recombination+and+site-specific+mutagenesis+by+placing+homologous+ends+on+DNA+using+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">A rapid method for recombination and site-specific mutagenesis by placing homologous ends on DNA using polymerase chain reaction.</a> Biotechniques. 10 (1), 62-66 (1991).</li>
<li>Kostylev, M., Otwell, A. E., Richardson, R. E., Suzuki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+should+be+simple%3A+Escherichia+coli+DH5alpha-mediated+assembly+of+multiple+DNA+fragments+with+short+end+homologies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cloning should be simple: Escherichia coli DH5alpha-mediated assembly of multiple DNA fragments with short end homologies.</a> PLoS One. 10 (9), e0137466(2015).</li>
<li>Chen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+plasmid+cloning+with+a+universal+MCS+design+and+bacterial+in+vivo+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Simplified plasmid cloning with a universal MCS design and bacterial in vivo assembly.</a> BMC Biotechnol. 21 (1), 24(2021).</li>
<li>Braun, H. G., Kanwal, N., Rivera Lopez, L. F., Thomassin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+plasmid+series+for+rapid+sub-cloning+and+use+in+various+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Generation of a plasmid series for rapid sub-cloning and use in various Enterobacteriaceae.</a> J Biosci Bioeng. 138 (6), 478-487 (2024).</li>
<li>Kibbe, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OligoCalc%3A+an+online+oligonucleotide+properties+calculator%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">OligoCalc: an online oligonucleotide properties calculator.</a> Nucleic Acids Res. 35 (Web Server issue), W43-W46 (2007).</li>
<li>Wallace, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybridization+of+synthetic+oligodeoxyribonucleotides+to+phi+chi+174+DNA%3A+the+effect+of+single+base+pair+mismatch%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Hybridization of synthetic oligodeoxyribonucleotides to phi chi 174 DNA: the effect of single base pair mismatch.</a> Nucleic Acids Res. 6 (11), 3543-3557 (1979).</li>
<li>Bzymek, M., Lovett, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instability+of+repetitive+DNA+sequences%3A+The+role+of+replication+in+multiple+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Instability of repetitive DNA sequences: The role of replication in multiple mechanisms.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98 (15), 8319-8325 (2001).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. -Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J Vis Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inoue+method+for+preparation+and+transformation+of+competent+E.+coli%3A+%26%2334%3Bultra-competent%26%2334%3B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">The inoue method for preparation and transformation of competent E. coli: &#34;ultra-competent&#34; cells.</a> CSH Protoc. 2006 (1), (2006).</li>
<li>Froger, A., Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+plasmid+DNA+into+E.+coli+using+the+heat+shock+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transformation of plasmid DNA into E. coli using the heat shock method.</a> J Vis Exp. (6), e253(2007).</li>
<li>Fürste, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+of+the+plasmid+RP4+primase+region+in+a+multi-host-range+tacP+expression+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning of the plasmid RP4 primase region in a multi-host-range tacP expression vector.</a> Gene. 48 (1), 119-131 (1986).</li>
<li>Bäumler, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+new+iron+regulated+locus+of+Salmonella+typhi%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Identification of a new iron regulated locus of Salmonella typhi.</a> Gene. 183 (1-2), 207-213 (1996).</li>
<li>Godiska, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linear+plasmid+vector+for+cloning+of+repetitive+or+unstable+sequences+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Linear plasmid vector for cloning of repetitive or unstable sequences in Escherichia coli.</a> Nucleic Acids Res. 38 (6), e88(2010).</li>
<li>Watson, J. F., Garcia-Nafria, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+DNA+assembly+using+common+laboratory+bacteria%3A+A+re-emerging+tool+to+simplify+molecular+cloning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">In vivo DNA assembly using common laboratory bacteria: A re-emerging tool to simplify molecular cloning.</a> J Biol Chem. 294 (42), 15271-15281 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 kb Plus DNA-Leiter</td><td>FroggaBio</td><td>DM015-R500</td><td>DNA-Molekulargewichtsmarker</td></tr><tr><td>AccuReady M Einkanal 0,5-10 & Mikro; L</td><td>Bulldog Bio</td><td>BPP020</td><td>Pipetten zum Umfüllen von Flüssigkeit</td></tr><tr><td>AccuReady M Einkanal-Pipettierset</td><td>Bulldog Bio</td><td>BPK100</td><td>Pipetten zum Umfüllen von flüssigem</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BioShop Canada</td><td>AGR003.1</td><td>Verfestigungsmittel für Wachstumsmedium</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Biobasic</td><td>D0012</td><td>Herstellung von Agarose-Gelen für die DNA-Elektrophorese</td></tr><tr><td>Biometra TOne&nbsp;</td><td>Analytikjena</td><td>846-2-070-301</td><td>Thermocycler-Kappen</td></tr><tr><td>für Glaskulturröhrchen</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-957-91</td><td>Wiederverwendbare Kappen für Glaskulturröhrchen</td></tr><tr><td>DNA-Primer</td><td>Integrierte DNA-Technologien N</td><td>/A</td><td>Binden und amplifizieren Sie Template-DNA in der PCR-Reaktion</td></tr><tr><td>DpnI&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>R0176S</td><td>Spaltung methylierter Template-DNA nach PCR-Amplifikation</td></tr><tr><td>EcoRI</td><td>New England Biolabs</td><td>R3101L</td><td>Restriktionsenzym, wird mit entsprechendem Puffer geliefert</td></tr><tr><td>Eppendorf-Mikroröhrchen 1,5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>Mikroröhrchen, 1,5 mL, konischer Boden, PP, aufgesetzte Schieberkappe, geformte Graduierungen und mattierte Schreibfläche</td></tr><tr><td>Ethidiumbromid</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAL0748203</td><td>DNA-Visualisierungs-/Interkalationsmittel, toxisch</td></tr><tr><td>EZ-10 Spin Column Plasmid DNA Miniprep Kit</td><td>Biobasic</td><td>BS614</td><td>Isolierung von Plasmid-DNA aus Bakterienkulturen</td></tr><tr><td>über Nacht GelDoc Go-Gel System</td><td>Bio-Rad</td><td>12009077</td><td>Imaging DNA-Gele Glaskulturröhrchen</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>14-925E</td><td>Glaskulturröhrchen</td></tr><tr><td>myGel Mini-Elektrophorese-System</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z742288</td><td>System für die Gelelektrophorese</td></tr><tr><td>NanoDrop One</td><td>Thermo</td><td>Fisher ND-ONE-W</td><td>Bestimmung der DNA-Konzentration</td></tr><tr><td>PCR Reinigung für die DNA-Sequenzierung</td><td>Biobasic</td><td>BT5100</td><td>Reinigung PCR-Produkte &nbsp;</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>Sarstedt</td><td>82.1473.011</td><td>Petrischale 92 x 16 mm, PS, transparent, mit Belüftungsnocken</td></tr><tr><td>Pipettenspitze, 1000 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>70.305</td><td>Pipettenspitzen für 100-1000 &micro; L</td></tr><tr><td>Pipettenspitze, 2,5 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3010.265</td><td>Pipettenspitzen für bis zu 2,5 & Mikro; L</td></tr><tr><td>Pipettenspitze, 20 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3020.200</td><td>Pipettenspitzen für bis zu 20 & Mikro; L</td></tr><tr><td>Pipettenspitze, 200 & Mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3030.020</td><td>Pipettenspitzen für 1-200 &micro; L</td></tr><tr><td>Salz (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-10</td><td>Bestandteil des bakteriellen Wachstumsmediums (10 g/L)</td></tr><tr><td>Einzelne 0,2 mL PCR-Röhrchen mit flachem</td><td>Verschluss FroggaBio</td><td>TF-1000</td><td>PCR Röhrchen</td></tr><tr><td>Trypton (bakteriologisch)</td><td>BioShop Canada</td><td>TRP402.5</td><td>Bestandteil des bakteriellen Wachstumsmediums (10 g/L)</td></tr><tr><td>VeriFi DNA-Polymerase</td><td>PCR Biosystems</td><td>PB10.42-01</td><td>High Fidelity Polymerase, der PCR-Puffer, der Mg2+ und dNTPs enthält, wird mit purchase</td></tr><tr><td>Xba I</td><td>New England Biolabs</td><td>R0145S</td><td>Restriktionsenzym geliefert, wird mit entsprechendem Puffer</td></tr><tr><td>geliefert Hefeextrakt</td><td>BioShop Canada</td><td>YEX401.205</td><td>Bestandteil des bakteriellen Wachstumsmediums (5 g/L)</td></tr></tbody></table>

verwendung von in-vivo-assemblierung für den hocheffizienten plasmidbau

Use of In Vivo Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

Als Beispiel für die Verwendung von IVA folgten wir in diesem Manuskript dem bereitgestellten IVA-Workflow, um den offenen mCherry-Leserahmen in die multiple Klonierungsstelle des Plasmids pSU19 zu klonen, um ein Plasmid zu erzeugen, das mit pSU19mCherry identisch ist (Abbildung 3)17. Die für IVA geeigneten Primer wurden auf der Grundlage der Protokollschritte 1.1 und 1.2 entwickelt. Anschließend wurde ein Plasmidisolationskit verwendet, um pSU19 und pSU18mCherry zu i...

Verwendung von In-vivo-Assemblierung für den hocheffizienten Plasmidbau

In vivo assembly (IVA) is a molecular cloning method that uses intrinsic enzymes present in bacteria that promote intermolecular recombination of DNA ...

use-of-in-vivo-assembly-for-high-efficiency-plasmid-construction

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Eine schnelle und effiziente Methode, um Fremd-DNA von Interesse in vorgefertigte Akzeptor Stämme, sogenannte Landing-Pad-Stämme, die Integration beschrieben wird. Das Verfahren erlaubt eine ortsspezifische Integration eines DNA-Kassette in die gentechnisch Landeplatz Ort einer gegebenen Dehnung, durch Konjugation und Expression des ΦC31 Integrase.

Site-spezifische bakterielle Chromosom Engineering: ΦC31 Integrase vermittelte Cassette Exchange (IMCE)

Quelle: Tomás, J. M., et al. Generierung von Nullmutanten zur Aufklärung der Rolle bakterieller Glykosyltransferasen bei der bakteriellen Motilität. J. Vis. Exp. (2022).Dieses Video zeigt die initiatorabhängige Amplifikation eines Suizidplasmids in E. coli. Das Plasmid, das ein Antibiotikaresistenzgen trägt, repliziert sich nur in Gegenwart eines Initiatorproteins, das vom Wirt kodiert wird. Nach der Elektroporation und Inkubation in Rückgewinnungsmedium wird das Gemisch auf antibiotikahaltigen...

Amplifikation eines Suizidplasmids in einem bakteriellen Wirt

Gen-Targeting-Methoden können verwendet werden, um transgene Mäuse mit Knockout-, Knock-in- und getaggten Allelen zu erzeugen.  Hier beschreiben wir eine verbesserte Methode der Rekombination in E. coli, die wir als "Subklonierung plus Insertion" bezeichnen und die zur schnellen Generierung benutzerdefinierter Gen-Targeting-Vektoren verwendet werden kann.

Subklonierung Plus-Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Verfahren zur schnellen Bau der Gene Targeting Vektoren

Die Synthese von benutzerdefinierten Plasmiden ist arbeits- und zeitaufwendig. Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung der Gibson-Assemblierungsklonierung, um den Aufwand und die Dauer des individuellen DNA-Klonierungsverfahrens zu reduzieren. Das beschriebene Protokoll produziert auch zuverlässige getaggte Proteinkonstrukte für die Expression von Säugetieren zu ähnlichen Kosten wie die traditionelle Cut-and-Paste-DNA-Klonierung.

Erzeugung von Plasmid-Vektoren, die FLAG-markierten Proteine ​​Nach der Verordnung der Menschen Elongation Factor-1α Promoter Mit Gibson Assembly

Zinkfingerdomänen sind eigen zellpermeablen und fähig zur Vermittlung Proteinabgabe in einem weiten Bereich von Säugetierzelltypen. Hier wird eine detaillierte Schritt-für-Schritt-Protokoll zur Durchführung Zinkfinger-Technologie für die intrazelluläre Proteinabgabe dargestellt.

Direkter Protein Lieferung Säugerzellen mit Zellpermeable Cys<sub&gt; 2</sub&gt; -His<sub&gt; 2</sub&gt; Zink-Finger-Domains

Hier präsentieren wir die Chimären-Assemblierung durch Plasmid-Wiedergewinnung und Restriktionsenzym-Insertion (CAPRRESI), ein Protokoll, das auf der Insertion von Restriktionsenzymstellen in Synonym-DNA-Sequenzen und funktionelle Plasmid-Recovery basiert. Dieses Protokoll ist eine schnelle und kostengünstige Methode zum Fixieren von Protein-kodierenden Genen.

CAPRRESI: Chimären Assembly durch Plasmid Recovery und Restriktion Enzym Site Insertion

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um produzieren große Mengen an rekombinanten RNA in Escherichia coli Co zum Ausdruck bringen, eine Chimäre RNA, die die RNA in ein Viroid-Gerüst und eine Pflanze enthält tRNA-Ligase. Das Hauptprodukt ist ein kreisförmigen Molekül, das erleichtert die Reinigung zur Homogenität.

Großtechnische Produktion von rekombinanten RNAs auf einem kreisförmigen Gerüst mit einem Viroid-abgeleitete System bei Escherichia coli

Das Ziel dieses Protokolls ist es, eine detaillierte, schrittweise Anleitung für die Montage von Multi-Gen-Konstrukten mit dem modularen Klonsystem auf Basis des Golden Gate Klonens bereitzustellen. Es gibt auch Empfehlungen zu kritischen Schritten, um eine optimale Montage auf der Grundlage unserer Erfahrungen zu gewährleisten.

Schnelle Montage von Multi-Gen-Konstrukten mit modularem Golden Gate Klonen

In diesem Artikel wird ein Schritt-für-Schritt-Protokoll vorgestellt, das zeigt, wie Modular Cloning (MoClo) für die Klonierung von polycistronischen Operonen angepasst werden kann.

Standardisierte modulare Assemblierung von polycistronischen Operons mit modularem Klonieren (MoClo) unter Verwendung des In-Cloning-Toolkits

Die aktuelle Studie beschreibt einen Workflow für die Nanoporensequenzierung von Plasmiden, wenn die chromosomale Sequenz bereits bekannt oder von Interesse ist. Ein anfänglicher Plasmid-DNA-Anreicherungsschritt sorgt für eine optimale Plasmidsequenztiefe und maximiert die Anzahl der pro Flusszelle sequenzierbaren Proben.

Langlesen-Plasmid-Sequenzierung und -Montage mit Workflows auf Basis von Nanoporensequenzierungen

Erfahren Sie die In-vivo-Assemblierung für hocheffizientes DNA-Klonieren in E. coli. Diese kostengünstige Methode erreicht bis zu 99 % Klonierungseffizienz ohne spezialisierte Enzyme.

Verwendung von In-vivo-Assemblierung für den hocheffizienten Plasmidbau

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