Name: Genomweiter CRISPR-Screen zur Entschlüsselung strahlenempfindlicher und strahlenresistenter Gene (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Erfahren Sie, wie ein genomweiter CRISPR-Screen strahlenempfindliche und strahlenresistente Gene in Lungenkrebszellen identifiziert. Diese Methode nutzt CRISPR/Cas9 für präzise genetische Modifikationen.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>150 mm Zell- und Gewebekulturschale</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>715011</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>35 mm Zell- und Gewebekulturschale</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>706011</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>A549 Zelllinie</td><td>ATCC-</td><td></td><td>-</td></tr><tr><td>Zellzählkit-8</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0041</td><td>Für Zellviabilitätsassay</td></tr><tr><td>CO2unabhängiges Medium</td><td>PHCbi</td><td>MCO-50AIC</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Countess 3 FL automatisierter Zellzähler</td><td>Themo Scientific</td><td>AMQAF2001</td><td>Für die Zellzählung</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>10099141</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskopie</td><td>LEICA</td><td>ebq 100-04</td><td>Für Fluoreszenzmikroskop</td></tr><tr><td>Genomweite lentivirale CRISPR-Bibliothek</td><td>Shanghai OBiO Technology Co., Ltd.</td><td>H5070</td><td>Für lentivirale Infektionen</td></tr><tr><td>MiniAmp plus PCR</td><td>Themo Scientific</td><td>C37835</td><td>Für PCR-Amplifikation</td></tr><tr><td>NEST-Zellkulturplatten, 12-Well-Wuxi</td><td>NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>712002</td><td></td>Zellkultur-NEST-Zellkulturplatten</tr><tr><td>, 6-Well-Wuxi</td><td>NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>703002</td><td></td>Zellkultur-NEST-Zellkulturplatten</tr><tr><td>, 96-Well-Wuxi</td><td>NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>701001</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>C10010500BT</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>PCR Forward Primer (AATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCG)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Für die PCR-Amplifikation</td></tr><tr><td>PCR-Reverse-Primer (GATGTGCGCTCTGCCCACTGACGGGCA)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Für die PCR-Amplifikation</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0351</td><td>Für lentivirale Infektionen</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>MCE</td><td>HY-K1057</td><td>Für die Selektion nach lentiviraler Infektion</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Zellkulturmedium</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>TIANGENamp genomisches DNA-Kit</td><td>Beijing TIANGEN Biotech Co.,Ltd.</td><td>DP304</td><td>Für die genomische DNA-Extraktion</td></tr><tr><td>Röntgen-Pulverdiffraktometer</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Für die Strahlentherapie</td></tr></tbody></table>

genomweiter crispr-screen zur entschlüsselung strahlenempfindlicher und strahlenresistenter gene

Genome-Wide CRISPR Screen for Unveiling Radiosensitive and Radioresistant Genes

Lungenkrebs mit der führenden Sterblichkeitsrate stellt eine sehr aggressive und weit verbreitete medizinische Erkrankung dar. Am Beispiel der Lungenkrebszelllinie A549 für die Durchführung eines genomweiten CRISPR-Screenings mit Strahlung als Screening-Bedingung ist der schematische Arbeitsablauf in Abbildung 1 dargestellt. Zunächst soll die Empfindlichkeit von A549-Zellen gegenüber unterschiedlichen Strahlendosen durch Klonbildung und CCK8-Experimente untersucht werden (<strong class="xfig...

Genomweiter CRISPR-Screen zur Entschlüsselung strahlenempfindlicher und strahlenresistenter Gene

The CRISPR-Cas9 system has been harnessed and repurposed into a powerful genome editing tool. By leveraging this technology, researchers can precisely ...

genome-wide-crispr-screen-for-unveiling-radiosensitive-radioresistant

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Dieses Video beschreibt eine Screening-Methode zur Identifizierung transgener Drosophila-Fliegen, deren Genom mit CRISPR-Cas9 modifiziert wurde. CRISPR-Cas9 ist ein leistungsstarkes Genom-Editing-Tool, das die Art und Weise, wie Wissenschaftler das Genom eines Organismus manipulieren können, revolutioniert hat. Im Beispielprotokoll werden wir sehen, wie CRISPR-generierte Mutanten identifiziert werden können, bei denen eine Insertion einer Transaktivierungssequenz das erste Exon des...

Screening auf genomische Modifikationen: Eine Methode zur Identifizierung von CRISPR-generierten Mutanten in Drosophila

Die Genotypisierung hier beschriebene Technik, die Paare fluoreszierende Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Gelelektrophorese Kapillare ermöglicht eine Hochdurchsatz-Genotypisierung von Nuklease-vermittelte knockout-Klone. Es umgeht die von anderen Genotypisierung Techniken konfrontiert Einschränkungen und kostengünstiger als Sequenzierungsverfahren ist.

Mit Hilfe eines Fluoreszenz-PCR-Kapillar-Gel-Elektrophorese-Technik CRISPR zum Genotyp / Cas9 vermittelte Knock-out Mutanten in einem Hochdurchsatz-Format

Jüngste Fortschritte in der Fähigkeit, somatische Zelllinien genetisch zu manipulieren, haben großes Potenzial für grundlegende und angewandte Forschung. Hier präsentieren wir zwei Ansätze für CRISPR / Cas9-produzierte Knockout-Produktion und Screening in Säugetierzelllinien, mit und ohne Verwendung von selektierbaren Markern.

Selektionsabhängige und unabhängige Erzeugung von CRISPR / Cas9-vermittelten Gen-Knockouts in Säugetierzellen

Eine CRISPR/SgRNA-Bibliothek wurde zur Vernehmung Protein-kodierenden Gene angewandt. Die Machbarkeit einer SgRNA Bibliothek um die Funktion einer CTCF Grenze in Genregulation zu entdecken bleibt jedoch unerforscht. Hier beschreiben wir eine HOX Loci spezifische SgRNA Bibliothek um die Funktion von CTCF Grenzen in HOX Loci zu erhellen.

HOX Loci Focused CRISPR/SgRNA Bibliothek Screening identifizieren kritische CTCF Grenzen

Die CRISPR-Cas9-Technologie bietet eine effiziente Methode, um das Säugetiergenom in jedem Zelltyp präzise zu bearbeiten, und stellt ein neuartiges Mittel zur Durchführung genomweiter genetischer Screens dar. Ein detailliertes Protokoll, in dem die Schritte erläutert werden, die für die erfolgreiche Durchführung von gepoolten genomweiten CRISPR-Cas9-Bildschirmen erforderlich sind, finden Sie hier.

Gepoolte CRISPR-basierte genetische Screens in Säugetierzellen

Dieses Manuskript beschreibt einen zellbasierten Screening-Ansatz im Genommaßstab zur Identifizierung extrazellulärer Rezeptor-Ligand-Wechselwirkungen.

Identifizierung von Zelloberflächenrezeptoren mit Genom-Scale CRISPR/Cas9 Genetic Screens

Hier beschreiben wir eine schnelle und direkte in vivo CRISPR/Cas9 Screening-Methodik mit Ultraschall-geführten in utero embryonalen lentiviralen Injektionen, um gleichzeitig die Funktionen mehrerer Gene in der Haut und Mundhöhle von immunkompetenten Mäusen zu bewerten.

In Vivo CRISPR/Cas9 Screening zur gleichzeitigen Bewertung der Genfunktion in Maushaut und Oralhöhle

Ein wesentliches Hindernis für Technologien wie CRISPR sind die Off-Target-Ereignisse, die lebenswichtige Gene stören können. "Circularization for In Vitro Reporting of Cleavage Effects by Sequencing" (CIRCLE-seq) ist eine Technik zur Identifizierung unbeabsichtigter Spaltstellen. Diese Methode bildet die genomweite Aktivität von CRISPR-Cas9 mit hoher Sensitivität und ohne Verzerrung ab.

CIRCLE-Seq zur Abfrage von Off-Target-Gen-Editing

Der Artikel beschreibt ein Protokoll für die Anwendung eines in vitro Modells zur Erschöpfung zur Vervollständigung eines genomweiten CRISPR-Knockout-Screenings in gesunden chimären Antigenrezeptor-T-Zellen von Spendern.

Durchführung eines genomweiten In-vitro-CRISPR-Knockout-Screenings in chimären Antigenrezeptor-T-Zellen

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das die CRISPR/Cas9-Technologie mit dem Cell Counting Kit-8 (CCK-8) Assay integriert, um Kandidatengene zu identifizieren, die für die abnormale proliferative Kapazität von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen entscheidend sind.

Bewertung abnormer wachstumsbezogener Gene von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen durch Kombination der CRISPR/Cas9-Technologie mit der Zellzählung

Erfahren Sie, wie ein genomweiter CRISPR-Screen strahlenempfindliche und strahlenresistente Gene in Lungenkrebszellen identifiziert. Diese Methode nutzt CRISPR/Cas9 für präzise genetische Modifikationen.

Genomweiter CRISPR-Screen zur Entschlüsselung strahlenempfindlicher und strahlenresistenter Gene

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