Name: Umfassende Analyse von prokoagulanzien Thrombozyten, die Merkmale von Nekrose, Apoptose und Thrombozytenaktivierung aufweisen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Erfahren Sie die Analyse prokoagulanter Thrombozyten mit Merkmalen von Nekrose, Apoptose und Aktivierung. Diese Methode ermöglicht die Identifizierung neuer Biomarker und therapeutischer Ziele für Thromboseforschung.

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<ol><li>Munnix, I., Cosemans, J., Auger, J., Heemskerk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+response+heterogeneity+in+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet response heterogeneity in thrombus formation.</a> Thromb Haemost. 102 (12), 1149-1156 (2009).</li>
<li>Heemskerk, J. W. M., Mattheij, N. J. A., Cosemans, J. M. E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-based+coagulation%3A+Different+populations%2C+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet-based coagulation: Different populations, different functions.</a> J Thromb Haemost. 11 (1), 2-16 (2013).</li>
<li>Podoplelova, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coagulation+factors+bound+to+procoagulant+platelets+concentrate+in+cap+structures+to+promote+clotting%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Coagulation factors bound to procoagulant platelets concentrate in cap structures to promote clotting.</a> Blood. 128 (13), 1745-1755 (2016).</li>
<li>Mann, K. G., Butenas, S., Brummel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+of+thrombin+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamics of thrombin formation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (1), 17-25 (2003).</li>
<li>Jackson, S. P., Schoenwaelder, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+Are+they+necrotic%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: Are they necrotic.</a> Blood. 116 (12), 2011-2018 (2010).</li>
<li>Hua Vivien Mun Yee, V. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets+and+the+pathways+leading+to+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets and the pathways leading to cell death.</a> Semin Thromb Hemost. 41 (04), 405-412 (2015).</li>
<li>Dale, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated-platelets%3A+An+emerging+component+of+the+procoagulant+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Coated-platelets: An emerging component of the procoagulant response.</a> J Thromb Haemost. 3 (10), 2185-2192 (2005).</li>
<li>Vulliamy, P., Armstrong, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+in+hemostasis%2C+thrombosis%2C+and+inflammation+after+major+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Platelets in hemostasis, thrombosis, and inflammation after major trauma.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 44 (3), 545-557 (2024).</li>
<li>Vulliamy, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+H4+induces+platelet+ballooning+and+microparticle+release+during+trauma+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Histone H4 induces platelet ballooning and microparticle release during trauma hemorrhage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (35), 17444-17449 (2019).</li>
<li>Aliotta, A., Bertaggia Calderara, D., Zermatten, M. G., Marchetti, M., Alberio, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombocytopathies%3A+Not+just+aggregation+defects-the+clinical+relevance+of+procoagulant+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Thrombocytopathies: Not just aggregation defects-the clinical relevance of procoagulant platelets.</a> J Clin Med. 10 (5), 894(2021).</li>
<li>Kirkpatrick, A. C., Vincent, A. S., Dale, G. L., Prodan, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+predict+stroke+at+30+days+following+TIA%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Coated platelets predict stroke at 30 days following TIA.</a> Neurology. 89 (2), 125-128 (2017).</li>
<li>Kirkpatrick, A. C., Tafur, A. J., Vincent, A. S., Dale, G. L., Prodan, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+improve+prediction+of+stroke+and+transient+ischemic+attack+in+asymptomatic+internal+carotid+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Coated platelets improve prediction of stroke and transient ischemic attack in asymptomatic internal carotid artery stenosis.</a> Stroke. 45 (10), 2995-3001 (2014).</li>
<li>Suzuki, J., Umeda, M., Sims, P. J., Nagata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium-dependent+phospholipid+scrambling+by+TMEM16F%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Calcium-dependent phospholipid scrambling by TMEM16F.</a> Nature. 468 (7325), 834-838 (2010).</li>
<li>Prodan, C. I., Vincent, A. S., Dale, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelet+levels+correlate+with+bleed+volume+in+patients+with+spontaneous+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Coated platelet levels correlate with bleed volume in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 41 (6), 1301-1303 (2010).</li>
<li>Josefsson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+report+on+markers+to+distinguish+procoagulant+platelets+from+apoptotic+platelets%3A+Communication+from+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Consensus report on markers to distinguish procoagulant platelets from apoptotic platelets: Communication from the Scientific and Standardization Committee of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 21 (8), 2291-2299 (2023).</li>
<li>Kulkarni, P. P., Sonkar, V. K., Gautam, D., Dash, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPK+inhibition+protects+against+arterial+thrombosis+while+sparing+hemostasis+through+differential+modulation+of+platelet+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">AMPK inhibition protects against arterial thrombosis while sparing hemostasis through differential modulation of platelet responses.</a> Thromb Res. 196, 175-185 (2020).</li>
<li>Ekhlak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necroptosis+executioner+MLKL+plays+pivotal+roles+in+agonist-induced+platelet+prothrombotic+responses+and+lytic+cell+death+in+a+temporal+order%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Necroptosis executioner MLKL plays pivotal roles in agonist-induced platelet prothrombotic responses and lytic cell death in a temporal order.</a> Cell Death Differ. 30 (8), 1886-1899 (2023).</li>
<li>Kholmukhamedov, A., Janecke, R., Choo, H. -J., Jobe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+calcium+uniporter+regulates+procoagulant+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial calcium uniporter regulates procoagulant platelet formation.</a> J Thromb Haemost. 16 (11), 2315-2321 (2018).</li>
<li>Choo, H. -J., Saafir, T. B., Mkumba, L., Wagner, M. B., Jobe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+calcium+and+reactive+oxygen+species+regulate+agonist-initiated+platelet+phosphatidylserine+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial calcium and reactive oxygen species regulate agonist-initiated platelet phosphatidylserine exposure.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (12), 2946-2955 (2012).</li>
<li>Jobe, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+the+mitochondrial+permeability+transition+pore+and+cyclophilin+D+in+platelet+activation+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Critical role for the mitochondrial permeability transition pore and cyclophilin D in platelet activation and thrombosis.</a> Blood. 111 (3), 1257-1265 (2008).</li>
<li>Leytin, V., Allen, D. J., Mykhaylov, S., Lyubimov, E., Freedman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin-triggered+platelet+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombin-triggered platelet apoptosis.</a> J Thromb Haemost. 4 (12), 2656-2663 (2006).</li>
<li>Lopez, J. J., Salido, G. M., Pariente, J. A., Rosado, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin+induces+activation+and+translocation+of+Bid%2C+Bax+and+Bak+to+the+mitochondria+in+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombin induces activation and translocation of Bid, Bax and Bak to the mitochondria in human platelets.</a> J Thromb Haemost. 6 (10), 1780-1788 (2008).</li>
<li>Wolf, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+functions+in+a+caspase-independent+manner+to+promote+apoptosis-like+events+during+platelet+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Calpain functions in a caspase-independent manner to promote apoptosis-like events during platelet activation.</a> Blood. 94 (5), 1683-1692 (1999).</li>
<li>Kim, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+dysfunction+and+disintegration+of+thrombin-stimulated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Fatal dysfunction and disintegration of thrombin-stimulated platelets.</a> Haematologica. 104 (9), 1866-1878 (2019).</li>
<li>Schoenwaelder, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+pathways+regulate+platelet+phosphatidylserine+exposure+and+procoagulant+function%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Two distinct pathways regulate platelet phosphatidylserine exposure and procoagulant function.</a> Blood. 114 (3), 663-666 (2009).</li>
<li>Abbasian, N., Millington-Burgess, S. L., Chabra, S., Malcor, J. -D., Harper, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramaximal+calcium+signaling+triggers+procoagulant+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Supramaximal calcium signaling triggers procoagulant platelet formation.</a> Blood Adv. 4 (1), 154-164 (2020).</li>
<li>Le, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inner+activation+gate+controls+TMEM16F+phospholipid+scrambling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling.</a> Nat Commun. 10 (1), 1846(2019).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TMEM16F+forms+a+Ca2%2B-activated+cation+channel+required+for+lipid+scrambling+in+platelets+during+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">TMEM16F forms a Ca2+-activated cation channel required for lipid scrambling in platelets during blood coagulation.</a> Cell. 151 (1), 111-122 (2012).</li>
<li>Mattheij, N. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+mechanism+of+integrin+closure+in+procoagulant+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dual mechanism of integrin closure in procoagulant platelets.</a> J Biol Chem. 288 (19), 13325-13336 (2013).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrially+mediated+integrin+%CE%B1iIb%CE%B23+protein+inactivation+limits+thrombus+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitochondrially mediated integrin αiIbβ3 protein inactivation limits thrombus growth.</a> J Biol Chem. 288 (42), 30672-30681 (2013).</li>
<li>van Kruchten, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+TMEM16F-dependent+and+TMEM16F-independent+pathways+contribute+to+phosphatidylserine+exposure+in+platelet+apoptosis+and+platelet+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Both TMEM16F-dependent and TMEM16F-independent pathways contribute to phosphatidylserine exposure in platelet apoptosis and platelet activation.</a> Blood. 121 (10), 1850-1857 (2013).</li>
<li>Goelz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+express+adaptor+proteins+of+the+extrinsic+apoptosis+pathway+and+can+activate+caspase-8%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Platelets express adaptor proteins of the extrinsic apoptosis pathway and can activate caspase-8.</a> PLOS ONE. 16 (1), e0244848(2021).</li>
<li>Shlomovitz, I., Speir, M., Gerlic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flipping+the+dogma+-+phosphatidylserine+in+non-apoptotic+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Flipping the dogma - phosphatidylserine in non-apoptotic cell death.</a> Cell Commun Signal. 17 (1), 139(2019).</li>
<li>Nadine, J. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+function+in+platelet-dependent+fibrin+formation+via+integrin+%CE%B1IIb%CE%B23+and+transglutaminase+factor+XIII%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Coated platelets function in platelet-dependent fibrin formation via integrin αIIbβ3 and transglutaminase factor XIII.</a> Haematologica. 101 (4), 427-436 (2016).</li>
<li>Michelson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+by+thrombin+can+be+directly+measured+in+whole+blood+through+the+use+of+the+peptide+GPRP+and+flow+cytometry%3A+Methods+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagul+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Platelet activation by thrombin can be directly measured in whole blood through the use of the peptide GPRP and flow cytometry: Methods and clinical applications.</a> Blood Coagul Fibrinolysis. 5 (1), 121-131 (1994).</li>
<li>Taylor, M. R., Couto, J. R., Scallan, C. D., Ceriani, R. L., Peterson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactadherin+%28formerly+BA46%29%2C+a+membrane-associated+glycoprotein+expressed+in+human+milk+and+breast+carcinomas%2C+promotes+Arg-Gly-Asp+%28RGD%29-dependent+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lactadherin (formerly BA46), a membrane-associated glycoprotein expressed in human milk and breast carcinomas, promotes Arg-Gly-Asp (RGD)-dependent cell adhesion.</a> DNA Cell Biol. 16 (7), 861-869 (1997).</li>
<li>Andersen, M. H., Graversen, H., Fedosov, S. N., Petersen, T. E., Rasmussen, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+analyses+of+two+cellular+binding+domains+of+bovine+lactadherin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Functional analyses of two cellular binding domains of bovine lactadherin.</a> Biochemistry. 39 (20), 6200-6206 (2000).</li>
<li>Tan, C. W., Bourcy, M., Pasalic, L., Chen, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+assessment+of+procoagulant+platelets+using+a+dithiol-reactive+probe+functional+disulfide+bonds%3A+Methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry assessment of procoagulant platelets using a dithiol-reactive probe functional disulfide bonds: Methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1967, 305-321 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Saure Citrat-Dextrose-Lösung (ACD) (für 1000 mL)</td><td></td><td></td><td>Tri-Natriumcitrat- &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 22 g Zitronensäure-&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 8 g Dextrose-&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 24,5 g Wasser-&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Make-up-Volumen auf 1000 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Proteinmarkierungskit</td><td>Invitrogen</td><td>A10235</td><td></td></tr><tr><td>APC Maus Anti-Human CD62P</td><td>BD Pharmingen</td><td>550888</td><td></td></tr><tr><td>Rinder Prothrombin</td><td>Prolytix</td><td>BCP-1010</td><td></td></tr><tr><td>Puffer A (Thrombozytenpräparation)</td><td></td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; M.W&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Konz. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Für 100 mL 10X Lösung HEPES&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 238.30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 4.766 g NaCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 58.44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 134 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 7,83 g KCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 74.55&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2,9 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 216,19 mg MgCl2&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203.30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203,30 mg NaH2PO4 &nbsp; &nbsp; 156.01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 0,34 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 53,04 mg NaHCO3&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 84 01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 12 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1,01 g Wasser auf 100 mL nach Einstellung des pH-Werts auf 6,2 Verdünnen Sie die 10X-Lösung 1:10 (v/v) mit Milli Q Wasser kurz vor der Thrombozytenvorbereitung, um die 1X-Lösung zu erhalten, die mit folgenden Mitteln ergänzt werden muss &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Konz. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Für 1 ml 1X Lösung EGTA &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Addieren Sie 10 &mu; L (1:100 v/v) 100 mM EGTA&nbsp; Glukose &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 5 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Addieren Sie 5 &mu; L (1:200 V/V) 1 M Glukose PGE1 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 3 &mu; M &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Addieren Sie 3 &mu; L (1:333 v/v) 1 mM PGE1-Lösung</td></tr><tr><td>Puffer B (Thrombozytenvorbereitung)</td><td></td><td></td><td> &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; M.W&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Konz. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Für 100 mL 10X Lösung HEPES&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 238.30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 4.766 g NaCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 58.44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 134 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 7,83 g KCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 74.55&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2,9 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 216,19 mg MgCl2&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203.30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203,30 mg NaH2PO4 &nbsp; &nbsp; 156.01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 0,34 Mio. M&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 53,04 mg NaHCO3&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 84 01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 12 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1,01 g Wasser auf 100 mL nach Einstellung des pH-Werts auf 7,4 Verdünnen Sie die 10-fache Lösung 1:10 (v/v) mit Milli Q Wasser kurz vor der Thrombozytenvorbereitung, um die 1-fache Lösung zu erhalten, die mit den folgenden Mitteln ergänzt werden muss &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Konz. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Für 1 ml 1X Lösung Glukose &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 5 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Addieren Sie 5 &mu; L (1:200 V/V) 1 M Glukose&nbsp;</td></tr><tr><td>CaCl2 (0,5 m) (für 50 ml)</td><td></td><td></td><td>Molekulargewicht von CaCl2.2H2O = 147,02 3,675 g CaCl2.2H2O in 50 ml Milli Q Wasser lösen</td></tr><tr><td>CellEvent Caspase-3/7 Detektionsreagenzien Green</td><td>Invitrogen</td><td>C10423</td><td>Reagenz zum Apoptosenachweis</td></tr><tr><td>Convulxin</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>ALX-350-100</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0,5 M; pH 8) (für 100 mL)</td><td></td><td></td><td>Molekulargewicht von EDTA Na2.2H2 O: 372,24 g Wiegen Sie 18,612 g und suspendieren Sie es in 50 ml Milli Q Wasser und überprüfen Sie den pH-Wert (pH~4) Fügen Sie langsam 10N NaOH unter Rühren hinzu und überwachen Sie den pH-Wert. EDTA beginnt bei etwa pH 7 zu löslich und ist bei pH 8, vollständig löslich. Füllen Sie das Volumen auf 100 ml mit Milli Q Wasser auf.</td></tr><tr><td>EGTA (100 mM; pH 7,4) (für 100 mL)</td><td></td><td></td><td>Molekulargewicht: 380,4 3,804 g EGTA in 50 ml Milli Q Wasser geben und pH-Wert (pH~3) 10 N NaOH tropfenweise unter Rühren zugeben und den pH-Wert überwachen EGTA wird bei pH 7,0 (ca.) löslich pH-Wert auf 7,4 einstellen Das Volumen mit Milli Q Wasser</td></tr> <tr><td>auf 100 ml auffüllenFITC Maus Anti-Human PAC-1</td><td>BD</td><td>340507</td><td></td></tr><tr><td>FITC-IETD-FMK Caspase 8 (aktiv) Färbekit</td><td>Abcam</td><td>ab65614</td><td></td></tr><tr><td>Mitotracker Rot CMXRos (Mitochindrien-Markierungsfarbstoff)</td><td>Invitrogen</td><td>M7512</td><td>Stock= 1 mM (50 &micro; g gelöst in 90 & Mikro; l DMSO) Unterbestand= 100 &micro; M (10 &micro; l Lager + 90 & Mikro; l DMSO) Arbeitskonzentration = 500 nM (0,5 &μ; L in 100 & Mikro; l)</td></tr><tr><td>PE Annexin V</td><td>BD Pharmingen</td><td>560930</td><td></td></tr><tr><td>Prostaglandin E1</td><td>Sigma</td><td>P5515</td><td>Bestand= 20 mM (1 mg gelöst in 141 & Mikro; L DMSO) Unterbestand= 1 mM (10 & micro; l Lager + 190 &micro; L DMSO) Arbeitskonzentration= 3 &Mikro; M (3 &Mikro; L in 1 mL)</td></tr><tr><td>Rhod-2 AM</td><td>Invitrogen</td><td>R1244</td><td>Stock= 5 mM (1 mg gelöst in 178 & Mikro; L DMSO) Unterlager= 100 & Mikro; M (10 &micro; L Lager + 90 & Mikro; L DMSO) Arbeitskonzentration= 500 nM (0,5 &μ; L in 100 & Mikro; L)</td></tr><tr><td>Thrombin aus humanem Plasma</td><td>Sigma</td><td>T7572</td><td></td></tr></tbody></table>

umfassende analyse von prokoagulanzien thrombozyten, die merkmale von nekrose, apoptose und thrombozytenaktivierung aufweisen

Comprehensive Analysis of Procoagulant Platelets Exhibiting Features of Necrosis, Apoptosis and Platelet Activation

Ein Teil der aktivierten Blutplättchen wird zu einem "Prokoagulationsmittel" mit einer charakteristischen Erhöhung der Oberflächenexpression von Phosphatidylserin (PS) und P-Selektin, was sie von "apoptotischen" Blutplättchen unterscheidet, die nur für die PS-Exposition positiv sind, sowie von "proaggregatorischen" Blutplättchen, die positiv für die P-Selektin-Expression sind. Wir fanden heraus, dass Thrombin einen dosisabhängigen Anstieg des Anteils der Prokoagulanzienthrombozyten induziert, die sowohl für die P-Selekti...

Umfassende Analyse von prokoagulanzien Thrombozyten, die Merkmale von Nekrose, Apoptose und Thrombozytenaktivierung aufweisen

Platelets circulating in the bloodstream are relatively quiescent but become "activated" upon encountering stimulants or "agonists" at the site of blood ...

comprehensive-analysis-procoagulant-platelets-exhibiting-features

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Hier berichten wir über eine experimentelle Technik der Fluoreszenz-Intravitalmikroskopie um heterotypische Thrombozyten-Neutrophilen-Interaktionen auf dem aktivierten Endothel während der vaskulären Entzündungen und Thrombusbildung in lebenden Mäusen sichtbar zu machen. Diese mikroskopische Technik wird wertvoll sein, um die molekularen Mechanismen der vaskulären Erkrankungen zu studieren und pharmakologische Mittel unter pathophysiologischen Bedingungen zu testen.

Real-time Imaging der heterotypische Platelet-Neutrophilen-Interaktionen auf aktiviertem Endothel Während Vascular Entzündung und Thrombusbildung in lebenden Mäusen

Diese Arbeit beschreibt eine Fluoreszenzmikroskopie-basierte Methode für die Untersuchung von Thrombozytenadhäsion, -ausbreitung und -sekretion unter Strömung. Diese vielseitige Plattform ermöglicht die Untersuchung der Thrombozytenfunktion für die mechanistische Forschung auf Thrombose und Hämostase.

Live-Zelle Bildgebung von Platelet Degranulation und Sekretion unter Flow

Die Bildung von prokoagulanzien Blutplättchen wurde mit einem erhöhten Thromboserisiko korreliert. Hier wird ein präzises Protokoll zur Isolierung von gewaschenen Blutplättchen aus menschlichem Blut vorgestellt, das dazu bestimmt ist, die Exposition von Phosphatidylserin und Mikrovesikelfreisetzung zu quantifizieren, die charakteristische Merkmale von Prokoagulanzienthrombozyten sind.

Charakterisierung von Prokoagulanzien-Thrombozyten durch Messung der Phosphatidylserin-Exposition und der Mikrovesikelfreisetzung aus humanen gereinigten Blutplättchen

Die Thrombozytenfunktion unter Fluss kann beurteilt und eine simulierte hämostatische Wiederbelebung mit einem mikrofluidischen Gerät modelliert werden, das in der Trauma- und Transfusionsmedizin Anwendung findet.

Mikrofluidik zur Beurteilung der Thrombozytenfunktion

Die Mehrfarben-Durchflusszytometrie für Blutplättchen kann neue Thrombozyten-Subtypen innerhalb klassischer Thrombozyten-Subpopulationen identifizieren, wie z. B. ruhende, aggregierte, prokoagulanzielle und apoptotische Thrombozyten. Dies ermöglicht den Vergleich verschiedener Subpopulationsmuster, die durch verschiedene Thrombozytenagonisten induziert werden. Hier wird ein Verfahren zur Etablierung eines mehrfarbigen Durchflusszytometrie-Panels ausführlich beschrieben.

Analyse von Thrombozyten-Subpopulationen durch Mehrfarben-Durchflusszytometrie

Diese Arbeit beschreibt einen mikrofluidischen Assay, der Scherspannung nutzt, um die Thrombusbildung im Blut auszulösen, und charakterisiert den Thrombus anhand mehrerer Auswertungsdimensionen. Der Test kann die prothrombotische Tendenz von Blutproben messen und ist daher nützlich für die Krankheitsdiagnose, Arzneimittelentwicklung sowie grundlegende mechanistische Studien im Zusammenhang mit Thrombose.

Thrombusprofiling-Assay: Eine auf Mikrofluidik basierende Plattform zur umfassenden Charakterisierung biomechanischer Thrombogenese

Eine Brust-Onkologie-Datenbank wurde entwickelt, um als eine umfassende Quelle für klinische Daten und Laborwerte für die Zwecke der translationalen Forschung dienen. Die Datenbank wird translationalen Krebsforschung in der Thoracic Oncology Research Program dienen. Diese Datenbank ist anpassungsfähig zu anderen Krebs-Modelle, sowie andere Erkrankungen des Menschen.

Generation umfassender Thoracic Oncology Database - Tool für Translational Research

Ziel Beurteilung der physiologischen Mechanismen, die Rede-Unterstützung sind nötig, um dem Ausbruch der Krankheit und die Progression bei Personen mit ALS zu überwachen und die Behandlung Effekte in klinischen Studien zu quantifizieren. In diesem Video stellen wir Ihnen eine umfassende, Instrumentierung-basiertes Protokoll für die Quantifizierung Rede Motorleistung in klinischen Populationen.

Ein Protokoll für eine umfassende Beurteilung der bulbären Dysfunction in Amyotrophe Lateralsklerose (ALS)

Eine Echtzeit-Elektrische Impedanz basierte Technik zur Invasion von Endothelzellen Monolayer von Krebs Zellen zu messen

RNA-Interferenz (RNAi) besitzt viele Vorteile gegenüber der Gen-Knockout und wurde allgemein als ein Werkzeug in der Gen-funktionelle Studien verwendet. Die Erfindung des DNA-Vektor-basierte RNAi-Technologie hat langfristig und induzierbare Gen Knockdown möglich gemacht haben, und erhöhte auch die Machbarkeit von...

DNA-Vektor-basierte RNA-Interferenz, um Genfunktionen in Cancer Study

Erfahren Sie die Analyse prokoagulanter Thrombozyten mit Merkmalen von Nekrose, Apoptose und Aktivierung. Diese Methode ermöglicht die Identifizierung neuer Biomarker und therapeutischer Ziele für Thromboseforschung.

Umfassende Analyse von prokoagulanzien Thrombozyten, die Merkmale von Nekrose, Apoptose und Thrombozytenaktivierung aufweisen

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