Name: Optimierung der Isolierung und Reinigung von murinen glomerulären Mesangialzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: Lernen Sie die optimierte Isolierung und Kultivierung muriner Mesangialzellen mittels Kollagenase-Verdauung für Nierenforschung. Diese Methode ermöglicht mehrere Passagen und liefert robuste Zellen für Studien zu Nierenerkrankungen.

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<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 &Mikro; m Zellsieb</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Petrischale</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>15 mm Zellkulturschale mit Glasboden</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus vorgefärbter Proteinmarker</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 mM L-Glutamin</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyd</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 & Mikro; m Zellsieb</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petrischale</td><td>Sorfa</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75% Alkohol</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>96 Well Zellkulturplatten, TC-behandelt</td><td>Servicebio</td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotika (10 &mu; g/mL Ceftriaxon plus 100 μ; g/mL Gentamicin)</td><td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (Bicinchoninsäure) Protein Assay Kit</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting Kit-8</td><td>Oriscience</td><td>CB101</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>FV-3000</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td></td><td>Sigma D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle's Ausgewogene Salzlösung (1x EBSS)&nbsp;</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzzellanalysator</td><td>Mira FL&nbsp;</td><td>Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluormount-Medien</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Insulin, Transferrin, Selenlösung 100x (ITS -G)</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Inverses Fluoreszenzmikroskop</td><td>Olympus</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>Lysepuffer</td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>One-Step PAGE Preparation Kit (10%)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>One-Step PAGE Preparation Kit (7,5%)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE Anti-Maus CD140b Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Kunststoff-Zellstößel</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase-Inhibitor-Cocktail</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>PVDF-Membran</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinantes Humaninsulin</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE Probenladepuffer (5x)</td><td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>Speziell angepasstes Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (D-Valin anstelle von L-Valin)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Typ I Kollagenase</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; CB140</td><td></td></tr></tbody></table>

optimierung der isolierung und reinigung von murinen glomerulären mesangialzellen

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

In dieser Studie wurde ein optimiertes Protokoll für die Isolierung von murinen MCs und die ex vivo Zellkultur entwickelt. Unseres Wissens gibt es keine Standardmethode zur Validierung primärer MCs ex vivo. Früheren Veröffentlichungen zufolge sind MCs durch die Expression von αSMA, Vimentin und Fibronektingekennzeichnet 3,14,15. Die Western-Blot-Analyse wurde verwendet, um die Expressionsniveaus von MCs zu best...

Optimierung der Isolierung und Reinigung von murinen glomerulären Mesangialzellen

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

optimizing-isolation-purification-murine-glomerular-mesangial

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Bericht beschreiben wir eine Methode zur Isolierung und Kultivierung der Progenitorzellen Nische aus der embryonalen Maus-Niere, die verwendet werden, um Signalwege Regulierspindel / Vorläuferzellen des sich entwickelnden Nieren untersucht werden können. Diese kultivierten Zellen sind sehr zugänglich kleines Molekül und rekombinante Protein Behandlung und allem auch auf virale Transduktion, die einer effizienten Handhabung von Kandidaten Wege ermöglicht.

Isolierung und Kultivierung von Zellen aus dem Nephrogene Zone der embryonalen Maus Niere

Dieses Video beschreibt die Methode zur Isolierung intakter Glomeruli aus Mausnieren. Die so erhaltenen verkapselten und entkapselten Glomeruli können weiterhin zur Kultivierung von parietalen Epithelzellauswüchsen aus der Mausniere verwendet werden.

Glomeruli-Isolierung: Eine Technik zur Gewinnung intakter Glomeruli aus der Murine

In diesem Video demonstrieren wir die Schritte zur Isolierung und Reinigung von tubulären Nierenepithelzellen für eine breite Palette von molekularbiologischen und Zellkulturstudien.

Isolierung von Nierenzellen an der Maus: Eine Technik zur Isolierung und Erzeugung einer Primärkultur von tubulären Nierenepithelzellen

Techniken, die zuverlässig und effizient für die Isolierung von Nierenimmunzellen sind, werden für nachgelagerte Anwendungen benötigt. Dies erfordert die Markierung einer kleinen Anzahl von Nierenimmunzellen mit Oberflächenantikörpern. Im Folgenden beschreiben wir eine prägnante Methode zur Isolierung von Immunzellen der Niere, mit der dieses Ziel scheinbar erreicht wird.

Zuverlässig und High Efficiency Extraktion von Nieren-Immunzellen

Ein Protokoll für die Isolierung von primären Mikroglia aus murine Gehirn wird vorgestellt. Diese Technik hilft bei der Förderung des gegenwärtigen Verständnis von neurologischen Erkrankungen. Dichte-Gradienten-Zentrifugierung und magnetische Trennung werden kombiniert, um genügend Ertrag einer hochreinen Probe zu produzieren. Darüber hinaus erläutern wir die Schritte zur Charakterisierung der Mikroglia.

Charakterisierung und Isolierung der Maus primären Mikroglia durch Dichte-Gradienten-Zentrifugierung

Das Hauptaugenmerk dieses Protokolls ist es, tragfähige primäre Glomeruli Kulturen mit minimalen Verunreinigungen für den Einsatz in einer Vielzahl von downstream-Anwendungen effizient zu isolieren. Die isolierten Glomeruli können strukturellen Beziehungen zwischen Komponente Zelltypen zu behalten und kultivierten ex Vivo für kurze Zeit.

Eine effiziente Methode der Absiebung, intakten Glomeruli von Erwachsenen Ratte Niere zu isolieren

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Kennzeichnung der glomerulären Zelle Oberflächenproteine mit Biotin murinen in Vivo . Dieses Protokoll enthält Informationen zur Maus Nieren durchspülen, Glomeruli zu isolieren und endogenen Immunopräzipitation des Proteins des Interesses durchführen.

Isolierung der Glomeruli und In Vivo Kennzeichnung der glomerulären Zelle Oberflächenproteine

Wir haben ein Protokoll optimiert, um murine Herzpericyten für die Grundlagenforschung und die Erforschung ihres biologischen und therapeutischen Potenzials zu isolieren und zu reinigen.

Isolierung und Reinigung von murinen Herzperizyten

Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Kultivierung und Analyse glomerulären parietalen Epithelzellauswüchsen von verkapselten Glomeruli, die aus der Mausniere isoliert sind. Diese Methode kann verwendet werden, um Wege zu untersuchen, die an der Proliferation und Migration von parietalen Epithelzellen beteiligt sind.

Glomeruläres Outgrowth als Ex-Vivo-Assay zur Analyse von Pfaden, die an der Parietalepithel Cell Activation beteiligt sind

Der Artikel beschreibt die Methode zur Isolierung bedingt immortalisierter glomerulärer Endothelzellen aus den Nieren transgener Mäuse, die das thermolabile Affenvirus 40 exprimieren, und photoaktivierbaren Mitochondrien, PhAMexcised. Wir beschreiben das Verfahren zur Glomeruli-Isolierung aus ganzen Nieren mittels Perlen, Verdauungsschritten, Aussaat und Kultivierung von GECs-CD31-positiv.

Isolierung von bedingt immortalisierten glomerulären Maus-Endothelzellen mit fluoreszierenden Mitochondrien

Lernen Sie die optimierte Isolierung und Kultivierung muriner Mesangialzellen mittels Kollagenase-Verdauung für Nierenforschung. Diese Methode ermöglicht mehrere Passagen und liefert robuste Zellen für Studien zu Nierenerkrankungen.

Optimierung der Isolierung und Reinigung von murinen glomerulären Mesangialzellen

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