Name: Bestimmung der mitochondrialen Morphologie in lebenden Zellen mittels konfokaler Mikroskopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Erfahren Sie die Analyse der mitochondrialen Morphologie in lebenden SH-SY5Y-Zellen mittels konfokaler Mikroskopie und MitoTracker-Färbung. Diese kostengünstige Methode ermöglicht die Untersuchung von Arzneimittelwirkungen bei neurodegenerativen Erkrankungen.

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<ol><li>von der Malsburg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+mechanism+of+mitochondrial+membrane+remodelling+by+human+OPA1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural mechanism of mitochondrial membrane remodelling by human OPA1.</a> Nature. 620 (7976), 1101-1108 (2023).</li>
<li>Giacomello, M., Pyakurel, A., Glytsou, C., Scorrano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biology+of+mitochondrial+membrane+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The cell biology of mitochondrial membrane dynamics.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (4), 204-224 (2020).</li>
<li>Kalia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+mitochondrial+receptor+binding+and+constriction+by+DRP1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of mitochondrial receptor binding and constriction by DRP1.</a> Nature. 558 (7710), 401-405 (2018).</li>
<li>Cao, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MFN1+structures+reveal+nucleotide-triggered+dimerization+critical+for+mitochondrial+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MFN1 structures reveal nucleotide-triggered dimerization critical for mitochondrial fusion.</a> Nature. 542 (7641), 372-376 (2017).</li>
<li>Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+and+its+involvement+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics and its involvement in disease.</a> Annu Rev Pathol. 15, 235-259 (2020).</li>
<li>Solaini, G., Sgarbi, G., Lenaz, G., Baracca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+mitochondrial+membrane+potential+in+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Evaluating mitochondrial membrane potential in cells.</a> Biosci Rep. 27 (1-3), 11-21 (2007).</li>
<li>Gan, Z., Audi, S. H., Bongard, R. D., Gauthier, K. M., Merker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+mitochondrial+and+plasma+membrane+potentials+in+intact+pulmonary+arterial+endothelial+cells+based+on+extracellular+disposition+of+rhodamine+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol-Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantifying mitochondrial and plasma membrane potentials in intact pulmonary arterial endothelial cells based on extracellular disposition of rhodamine dyes.</a> Am J Physiol-Lung Cell Mol Physiol. 300 (5), L762-L772 (2011).</li>
<li>Zhong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roflupram+exerts+neuroprotection+via+activation+of+CREB%2FPGC-1%CE%B1+signalling+in+experimental+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Roflupram exerts neuroprotection via activation of CREB/PGC-1α signalling in experimental models of Parkinson's disease.</a> Br J Pharmacol. 177 (10), 2333-2350 (2020).</li>
<li>Xu, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitofusin-2+mediates+cannabidiol-induced+neuroprotection+against+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mitofusin-2 mediates cannabidiol-induced neuroprotection against cerebral ischemia in rats.</a> Acta Pharmacol Sin. 44 (3), 499-512 (2023).</li>
<li>Hu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRDM16+exerts+critical+role+in+myocardial+metabolism+and+energetics+in+type+2+diabetes+induced+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">PRDM16 exerts critical role in myocardial metabolism and energetics in type 2 diabetes induced cardiomyopathy.</a> Metabolism. 146, 155658(2023).</li>
<li>Reichardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-binding+protein-A+promotes+kidney+ischemia%2Freperfusion+injury+and+participates+in+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">DNA-binding protein-A promotes kidney ischemia/reperfusion injury and participates in mitochondrial function.</a> Kidney Int. 106 (2), 241-257 (2024).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+classification+of+mitochondrial+shapes+reflects+stress+and+redox+state%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Computational classification of mitochondrial shapes reflects stress and redox state.</a> Cell Death Dis. 4 (1), e461(2013).</li>
<li>Valente, A. J., Maddalena, L. A., Robb, E. L., Moradi, F., Stuart, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+imagej+macro+tool+for+analyzing+mitochondrial+network+morphology+in+mammalian+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">A simple imagej macro tool for analyzing mitochondrial network morphology in mammalian cell culture.</a> Acta Histochem. 119 (3), 315-326 (2017).</li>
<li>Hemel, I., Engelen, B., Luber, N., Gerards, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hitchhiker%27s+guide+to+mitochondrial+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">A hitchhiker's guide to mitochondrial quantification.</a> Mitochondrion. 59, 216-224 (2021).</li>
<li>Vowinckel, J., Hartl, J., Butler, R., Ralser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitoloc%3A+A+method+for+the+simultaneous+quantification+of+mitochondrial+network+morphology+and+membrane+potential+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">Mitoloc: A method for the simultaneous quantification of mitochondrial network morphology and membrane potential in single cells.</a> Mitochondrion. 24, 77-86 (2015).</li>
<li>Dagda, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+PINK1+function+promotes+mitophagy+through+effects+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Loss of PINK1 function promotes mitophagy through effects on oxidative stress and mitochondrial fission.</a> J Biol Chem. 284 (20), 13843-13855 (2009).</li>
<li>Przedborski, S., Tieu, K., Perier, C., Vila, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP+as+a+mitochondrial+neurotoxic+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerg+Biomembr%22%5BJournal%5D)">MPTP as a mitochondrial neurotoxic model of Parkinson's disease.</a> J Bioenerg Biomembr. 36 (4), 375-379 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Methyl-4-phenylpyridiniumiodid (MPP+)</td><td>Macklin</td><td>M875357</td><td>Wird verwendet, um oxidativen Stress zu induzieren</td></tr><tr><td>Konfokale Schale</td><td>NEST</td><td>801001</td><td>Wird verwendet, um die Zellen zu kultivieren</td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>C2</td><td>Wird zum Aufnehmen von Bildern verwendet</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modifiziertes Eagle Medium/Nährstoff-Gemisch F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11320033</td><td>Wird verwendet, um Zellen mit Nährstoffen zu versorgen</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td><td>Beyotime</td><td>ST038</td><td>Wird verwendet, um die Mitotracker-Sonde aufzulösen</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A3161001C</td><td>Wird verwendet, um Zellen mit Nährstoffen zu versorgen</td></tr><tr><td>BildJ</td><td>Nationale Gesundheitsinstitute</td><td>BildJ</td><td>Wird zur Analyse der mitochondrialen Morphologie verwendet</td></tr><tr><td>MitoTracker Red CMXRos</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M7512</td><td>Wird verwendet, um Mitochondrien zu visualisieren</td></tr><tr><td>Phosphatpuffer-Kochsalzlösung (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C10010500BT</td><td>Wird verwendet, um die Zellen auf konfokalen Schalen zu waschen</td></tr><tr><td>SH-SY5Y Zelle</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td>Wird verwendet, um den Arbeitsablauf bei der Analyse der mitochondrialen Morphologie zu demonstrieren</td></tr><tr><td>TI-SH-U Tischadapter</td><td>Nikon</td><td>MEC59110</td><td>Wird zur Sicherung von Proben verwendet</td></tr></tbody></table>

bestimmung der mitochondrialen morphologie in lebenden zellen mittels konfokaler mikroskopie

Determination of Mitochondrial Morphology in Live Cells Using Confocal Microscopy

Dieses Protokoll beschreibt ein detailliertes, schrittweises Verfahren für die mitochondriale morphologische Analyse durch drei voneinander abhängige Optimierungsmodule: Standardisierung von Probenvorbereitungsprotokollen, systematische Optimierung optischer Parameter für die konfokale Mikroskopie und Richtlinien für die computergestützte Bildverarbeitung. Ein optimales Probenvorbereitungsprotokoll ist entscheidend für die Gewinnung zuverlässiger mitochondrialer Bildgebungsdaten. Die systematische Auswertung der MitoTrac...

Bestimmung der mitochondrialen Morphologie in lebenden Zellen mittels konfokaler Mikroskopie

The dynamic balance of mitochondrial fusion and fission directly contributes to mitochondrial homeostasis, which influences numerous cellular functions in ...

determination-mitochondrial-morphology-live-cells-using-confocal

Research

Forschung

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Neuroscience

Neurowissenschaften

Mitochondrien-Fusion wurde durch das Verfolgen der Äquilibrierung von photokonvertiertem Matrix-bezogenen GFP über die mitochondriale Netzes über die Zeit gemessen. Bisher konnte nur eine Zelle zu einer Stunde lange kinetische Analyse bei einer Zeit unterworfen werden. Wir präsentieren eine Methode, die misst gleichzeitig mehrere Zellen und beschleunigt so den Prozess der Datensammlung.

Der schnellere, Hohe Auflösung, MTPA-GFP-basierte Mitochondriale Fusion Assay Acquiring Kinetische Daten mehrerer Zellen parallel mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie

Fibroblasten von Patienten mit Mutationen in der Parkinson-Krankheit verursachenden Gene stellen ein leicht...

Die Verwendung von primären humanen Fibroblasten zur Überwachung Mitochondriale Phänotypen auf dem Gebiet der Parkinson-Krankheit

Quelle: Kennedy, L. H., et. al. Visualisierung und Live-Bildgebung von Oligodendrozyten-Organellen in organotypischen Hirnschnitten mittels Adeno-assoziierter Virus- und Konfokalmikroskopie. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Bildgebung von Oligodendrozyten-Mitochondrien in organotypischen Schnitten des Gehirns von Mäusen. Die Scheibe wird in eine Badekammer mit kontinuierlicher Flüssigkeitszirkulation und kontrollierter Temperatur gelegt. Nach dem Einstellen verschiedener Parameter des...

Konfokale Bildgebung der mitochondrialen Bewegung in Oligodendrozyten in organotypischen Hirnschnittkulturen

Mitochondria kann das elektrochemische Potential über ihre innere Membran (Δ &amp; psi; m) verwenden , Calcium (Ca 2+) zu maskieren, so dass sie cytosolischen Ca 2+ zu formen innerhalb der Zelle signalisiert. Wir beschreiben ein Verfahren zum gleichzeitigen Messen Mitochondrien Ca 2+ -Aufnahme und ΔΨ m in lebenden Zellen Fluoreszenzfarbstoffe und konfokale Mikroskopie.

Simultane Messung von Mitochondriale Calcium und mitochondrialen Membranpotentials in lebenden Zellen durch Fluoreszenzmikroskopie

Dieser Artikel erklärt, wie man simulationsüberwachtes maschinelles Lernen zur Analyse der Mitochondrienmorphologie in fluoreszenzmikroskopischen Bildern fixierter Zellen einsetzt.

Analyse der mitochondrialen Morphologie durch simuliertes überwachtes Lernen

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Analyse von Veränderungen der mitochondrialen Dichte und der longitudinalen Verteilung mittels Live-Skelettmuskel-Bildgebung unter Verwendung konfokaler Mikroskopie für das mitochondriale Netzwerkscanning vor.

Analyse der mitochondrialen Dichte und Längsverteilung in lebenden Skelettmuskelfasern von Ratten mittels konfokaler Mikroskopie

Dieses Protokoll bietet einen standardisierten Ansatz für die Abbildung der mitochondrialen Morphologie in mehreren Geweben von C. elegans während des Alterns.

Bildgebung und Quantifizierung der mitochondrialen Morphologie bei C. elegans während des Alterns

Hier beschreiben wir den mitochondrial event localizer (MEL), ein ImageJ-Plugin, das bei der Quantifizierung der 3-dimensionalen Veränderungen der mitochondrialen Spaltung und Fusionsaktivität im Laufe der Zeit nützlich ist. Wir beschreiben auch eine Bildverarbeitungspipeline, die für die Bereinigung von Schliffbildern vor der Analyse in ImageJ nützlich ist.

Verständnis der Veränderungen in der mitochondrialen Morphologie durch dynamische und dreidimensionale Fluoreszenzmikroskopische Aufnahmen

Wir demonstrieren die Anwendung der Fluoreszenz-Indikator, TMRM, in kortikalen Neuronen, die relativen Veränderungen in TMRM Fluoreszenzintensität vor und nach der Anwendung eines bestimmten Stimulus zu bestimmen. Wir zeigen auch die Anwendung der Fluoreszenz-Sonde...

Bestimmung des mitochondrialen Membranpotentials und Reactive Oxygen Species in Live Rat kortikalen Neuronen

In diesem Video, beschreiben wir eine Methode für Live Cell Imaging asymmetrisch geteilt Sinnesorgan Vorläuferzellen und epidermalen Zellen in...

Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Erfahren Sie die Analyse der mitochondrialen Morphologie in lebenden SH-SY5Y-Zellen mittels konfokaler Mikroskopie und MitoTracker-Färbung. Diese kostengünstige Methode ermöglicht die Untersuchung von Arzneimittelwirkungen bei neurodegenerativen Erkrankungen.

Bestimmung der mitochondrialen Morphologie in lebenden Zellen mittels konfokaler Mikroskopie

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